HPLC法测定氯化血红素片剂的含量

HPLC 法测定血再生片中丹参酮Ⅱ A的含量的含量测定的方法。

方法：采用摘要：目的：建立血再生片中丹参酮ⅡA（4.6 mm×250 mm,5 μm），甲醇-水（80∶20）HPLC法，选用色谱柱：资生堂C18为流动相，检测波长为:270 nm，流速为1.0 mL/min，柱温：30℃。

结果：线性范围为A=0.1824—1.2748µgr=0.99999（n=6），平均回收率为96.60％，RSD%=1.54%。

结论：本方法操作简便，灵敏度高，可用于血再生片中含量测定的质量控制。

；高效液相色谱法；含量测定；关键词：血再生片；丹参酮ⅡA血再生片由丹参、当归、熟地黄3味中药制成，收载于卫生部《药品标准中药成方制剂》第八册中。

具有活血补血的功效，用于慢性苯中毒引起的白细胞减少症[1]。

现有质量标准中尚未有定量测定研究，不能很好地控制片剂的质量，进为确保药品质量，本试验选用HPLC法对血再生片中丹参的有效成分丹参酮ⅡA行含量测定，为质量标准的制定提供一定依据。

1.仪器与设备样品：血再生片（生产单位：广州；批号为：190601，190602，190603）；对照品：丹参酮Ⅱ（供含量测定用，生产单位：中国食品药品检定研究院，批号：A110726-201011）；甲醇（色谱纯，生产单位：天津市康科德科技有限公司），水为去离子水；其它试剂均为分析纯。

Agilent1260 Series高效液相色谱仪、ChemStation工作站（Agilent科技有限公司）；MS105DU电子分析天平（美国梅特勒,十万分之一）。

2.方法与结果2.1 色谱条件的选择[2]（4.6 mm×250 mm,5 μm）；流动相：甲醇-水（80：20，色谱柱：资生堂C18V/V）；检测波长：270nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10µL。

2.2 溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备，加甲醇制成每1mL含0.0921mg的溶液。

片剂含量测定的方法片剂含量测定是药品质量控制中的一项重要内容，准确测定片剂的含量对于保障药物疗效和安全性具有重要意义。

现将片剂含量测定的方法进行详细介绍。

实验室中常用的片剂含量测定方法包括荧光分光光度法、高效液相色谱法、紫外分光光度法和重量法。

荧光分光光度法是一种常用的快速含量测定方法。

该方法利用荧光分析仪器对药物中的成分进行测定，通过受激发射和荧光衰减的原理，可以准确测定片剂中的药物含量。

具体操作步骤如下：首先，将待测片剂样品取适量，粉碎并溶解于适量的溶剂中。

然后，将溶液过滤并取适量于荧光分析仪器中，设置合适的激发波长和检测波长。

最后，进行测定并记录荧光强度值，通过标准曲线法计算出样品中的药物含量。

高效液相色谱法是一种常用的精确含量测定方法。

该方法利用高效液相色谱仪器对药物中的成分进行分离和测定，通过样品在柱上的保留时间和峰面积进行定量。

具体操作步骤如下：首先，将待测片剂样品取适量，溶解于适量的溶剂中。

然后，将溶液通过高效液相色谱仪器进行分离，根据不同成分在柱上的分离时间进行定性和定量分析。

最后，通过样品峰面积与标准曲线进行比对，计算出样品中的药物含量。

紫外分光光度法是一种常用的快速含量测定方法。

该方法利用紫外分光光度计对药物中的成分进行测定，通过吸收峰的强度和波长进行定量。

具体操作步骤如下：首先，将待测片剂样品取适量，溶解于适量的溶剂中。

然后，将溶液过滤并取适量于紫外分光光度计中，设置合适的波长进行测定。

最后，通过吸光度值与标准曲线进行比对，计算出样品中的药物含量。

重量法是一种常用且简单的含量测定方法。

该方法通过测量待测片剂的重量与已知浓度药物样品的重量进行比较，计算出样品中的药物含量。

具体操作步骤如下：首先，将待测片剂样品取适量，粉碎并称取固定重量。

然后，取已知浓度的药物样品，称取相同重量。

最后，通过比较不同样品的重量差异，计算出待测片剂中的药物含量。

以上是常用的片剂含量测定方法，不同的方法适用于不同的药物和实验需求。

4、氯化（高铁）血红素的使用工艺与检验方法
一、氯化（高铁）血红素使用工艺
氯化（高铁）血红素是蓝黑色粉末，作为铁类的营养强化剂，在使用过程中，可直接添加至各类食品中或者与其它原料混合后添加。

二、氯化（高铁）血红素检验方法
1、氯化血红素含量的测定
1.1 标准曲线的制备
精密称取经105℃干燥至恒重的对照品约18mg，置100ml量瓶中0.1mol/L 氢氧化钠溶液适量使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置100ml量瓶中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，以溶剂为空白，在384 nm±1nm波长处测定吸收值A，经线性回归，得回归方程。

1.2 结果计算
取待测定含量的氯化（高铁）血红素，精密称取约200mg，预先置已加入
0.1mol/L氢氧化钠溶液的烧杯中搅拌溶解，并微热，然后将溶液移入100ml
量瓶中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液5ml置100ml量瓶中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，以溶剂为空白，在384 nm±1nm波长处测定吸收值A，代入回归方程，求算氯化血红素含量。

1.3 准确度与精密度
本方法测定浓度1.80µg/ml―9.10µg/ml范围内，线性关系好，相关系数在0.9993以上。

本方法经不同浓度加标回收实验，回收率为96.7%，RSD=1.35（n=5）。

重复性实验批内相对标准差（RSD）为1.93%。

抗贫血药物的含量检测1．实验目标（1）练习用比色管配制一定物质的量浓度的溶液，并用目视比色法测定待测溶液某组分的含量。

（2）练习利用滴定管、容量瓶量取、配制一定物质的量浓度的溶液。

（3）灵活运用有关化学计算技能，进行实验结果分析。

2．预习指导（1）实验原理：许多物质本身具有明显的颜色，如KMnO4溶液显紫色，CuSO4溶液显蓝色；有些溶液本身无色，但加入其他试剂后，具有明显的颜色，如Fe3+中加入SCN-（），显红色。

上述溶液颜色的深浅和溶液的浓度有关，在一定条件下，这些溶液的颜色愈深，浓度愈大，故可以通过比较颜色的深浅来测定有色物质的含量，这样的方法叫比色分析法。

比色法具体可分为目视比色法和分光光度法。

目视比色法：比较有色溶液对溶液透过光的强度，如CuSO4溶液透过蓝色光的强度。

分光光度法：比较有色溶液对某一波长光的吸收，如CuSO4溶液对黄色光的吸收强度的比较。

（2）本实验利用反应，通过目视比色法测定含铁物质中的Fe3+的含量。

在制备色阶和待测溶液的过程中，由于Fe3+存在水解的可能，所以应当加入适量盐酸，使溶液的pH<4．5。

如果待测溶液中含有Fe2+化合物，应当加入硝酸使其氧化为Fe3+。

（3）以复方硫酸亚铁片为例，每片药片说明书标示含量（以Fe2+计算）为50 mg，合算铁元素的物质的量约为8．9×10-4 mol，配制成100 mL溶液，其物质的量浓度约为8．9×10-3 mol /L。

色阶溶液的配制应保证其处于色阶范围之内。

（4）色阶溶液浓度的计算：若Fe3+标准溶液的物质的量浓度为c，每次量取该标准溶液的体积为V mL，比色管容积为50 mL，则比色管内标准溶液的物质的量浓度c为：50（5）配制一定物质的量浓度的溶液使用比较精密的分析天平和容量瓶，操作中注意操作规范，以减小操作误差的发生。

使用容量瓶时注意使用玻璃棒引流，以避免溶液的损失，提高实验的准确性。

氯化血红素的制备及含量测定实验目的1、掌握氯化血红素制备的原理。

2、了解血红素的药用价值。

实验原理血红素（heme）是高等动物血的红色素，由原卟啉与Fe2+结合而成，它与珠蛋，另外它还是白结合成血红蛋白。

在体内的主要生理功能是载氧，帮助呼出CO2cty P450、cty c、过氧化酶的辅基。

血红素不溶于水，溶于酸性丙酮及碱性水中，在溶液中易形成聚合物，临床上常用作铁强化剂和抗贫血药及食物中色素添加剂，另外可用于制备原卟啉来治疗癌症。

氯化血红素(hemin)的制备实验室常用酸性丙酮分离提取法，使血球在酸性丙酮中溶血，抽提后再经浓缩、洗涤、结晶得到氯化血红素。

工业上制取氯化血红素常用冰乙酸结晶法，血球用丙酮溶血后，制取血红蛋白，再用冰乙酸提取。

在氯化钠存在下，氯化血红素沉淀析出。

卟啉环系化合物在400nm处有强烈吸收，称Soret带，最大吸收波长对各种卟啉化合物是特征的，但溶剂对最大吸收波长也有影响，采用0.25%碳酸钠作溶剂。

在600nm处有特征吸收峰，光吸收值与氯化血红素浓度的关系符合朗比定律。

实验材料1、器材（1）烧杯 1000ml 1只 500ml 2只 250ml 2只（2）抽滤瓶 500ml 1只（3）布氏漏斗 8cm 1只（4）三颈瓶 500ml 1只（5）电动搅拌机 1台（6）球形冷凝管 30cm 1只（7）温度计 200℃ 1支（8）离心机 1只（9）分液漏斗 500ml 1只（10）小试管 20只2、试剂（1）新鲜猪血 500ml；（2）0.8%柠檬酸三钠 20ml（3）丙酮（4）冰乙酸（5）氯化钠（固体）（6）氯化钾（固体）（7）浓盐酸（8）20%氯化锶（9）0.25%碳酸钠实验方法1、酸性丙酮抽提0.8%柠檬酸三钠抗凝猪血200ml，离心（3000r/min）15min，倾去上层血浆，制得血球，加2-3倍的蒸馏水，充分溶胀后，沸水浴20-30min，纱布过滤，滤渣加入含3%盐酸的丙酮溶液200ml，振摇抽提30min，抽滤，将滤液用旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3-1/4，加入20%氯化锶至终浓度2%，静置15min，离心10min，沉淀用水、95%乙醇、乙醚各洗涤一次，真空干燥后得氯化血红素粗品，称重，计算收率。

片剂中间体含量实验步骤
测试片剂中间体含量的实验步骤如下：
1. 准备所需的实验材料和设备，包括片剂样品、有机溶剂（例如乙醇、甲醇等）、滤纸、电子天平、量筒、移液管等。

2. 将一定量的片剂样品取出，并使用电子天平精确称量其质量。

记录下样品质量。

3. 将称量好的片剂样品放入容器中。

4. 使用一定量的有机溶剂将容器中的片剂样品溶解，使其充分溶解并均匀混合。

可以使用摇床或者超声波处理器协助溶解。

5. 取一定体积的溶液，可以用量筒或移液管等工具，称量溶液的体积，并记录下来。

6. 将取得的溶液通过滤纸过滤，去除其中的固体颗粒。

7. 取一定量的滤过液，可以用量筒或移液管等工具，定量吸取滤过液，称量其质量。

8. 将称量得到的滤过液放入干燥皿中，放置到恒温箱或者烘箱中进行干燥。

干燥的温度和时间根据具体要求进行调节。

9. 将干燥后的皿子和溶液重量称量，并记录下来。

10. 根据所得数据计算片剂样品中间体的含量。

计算公式为：中间体含量（%）=（滤液的质量-空白样品的质量）/片剂样品的质量× 100%。

注意事项：
- 实验过程中要采取适当的措施防止环境污染和交叉污染。

- 操作过程中要保持实验仪器和容器的洁净。

- 实验室操作应严格遵守安全规范，佩戴实验手套、眼镜等个人防护设备。

- 实验结束后，废弃物应正确处理，溶剂可以通过蒸发或其他合适的方式进行处理。

高效液相色谱法测定片剂中的有关物质
高效液相色谱法是一种常用的分离和定量分析技术，可以用于测定片剂中的有关物质。

下面是测定片剂中有关物质的高效液相色谱法的一般步骤：
1. 样品制备：将片剂样品研磨或粉碎，并取适量样品称量到容量瓶中，加入适量的溶剂溶解和稀释，制备成一定浓度的溶液。

2. 色谱柱选择：选择合适的色谱柱，如反相色谱柱、离子交换柱等，根据需要选择合适的柱温和洗脱溶剂。

3. 色谱条件设置：设置适当的流速、波长和柱温等条件。

根据目标物的性质和样品矩阵的特点，选择合适的检测波长和色谱条件，以提高分离效果和检测灵敏度。

4. 样品注射：用自动进样器或手动注射器将制备好的样品注入到色谱柱中。

5. 色谱分离：通过调整洗脱溶剂浓度梯度或使用不同的洗脱溶剂组合，将目标物和其他干扰物逐渐从色谱柱中洗脱出来。

6. 结果分析：根据色谱检测器所得到的响应信号，通过定量分析软件对色谱峰进行峰面积计算，进而根据内标法或外标法进行定量测定。

7. 方法验证：对该方法进行准确性、重复性、线性、灵敏度和选择性等方面的验证，确保测定结果的准确性和可靠性。

需要根据具体的有关物质，选择合适的色谱柱和洗脱溶剂，并进行合适的优化和验证，以确保测定的准确性和可靠性。