发光细菌法测生物毒性

实验一发光细菌的急性毒性评价试验一、实验器材1.菌株明亮发光杆菌（Photobacterium phosphoreum）2.培养基酵母膏0.5%，胰蛋白胨或多聚蛋白胨（Polypetone）0.5%，甘油0.3%，NaCl 3%，Na2HPO4 0.5%, KH2PO4 0.1%，pH6.5。

固体培养基再加琼脂2%。

3.溶液、试剂及待测物质酵母粉，蛋白胨，NaCl（AR），Na2HPO4（AR），KH2PO4（AR），甘油（AR），二甲基亚砜（AR），乙酸乙酯（AR），HCl（1M），去离子水。

4.仪器及其他用品生物毒性测试仪；电热恒温鼓风干燥箱；振荡培养箱；DELTA 320pH计；氮吹仪；镊子，移液枪，三角锥形瓶等。

二、目的要求1.学习了解发光细菌的急性毒性评价试验的基本原理。

2.掌握发光细菌的急性毒性评价试验的操作要领和评价方法。

三、基本原理发光细菌是指在正常的生理条件下能够发射肉眼可见的蓝绿色荧光的细菌，这种可见荧光波长在450-490 nm之间，在黑暗处肉眼可见。

不同种类发光细菌的发光机理是相同的，都是由特异性的荧光酶(LE)，还原性的黄素(FMNH2)，八碳以上长链脂肪醛(RCHO)，氧分子(O2)所参与的复杂反应，大致历程如下：FMNH2+LE→FMNH2·LE+O2→LE·FMNH2·O2+RCH→LE·FMNH2·O2·RCHO→LE+FMN+ H2O+RCOOH+光具体来说，生物发光反应由分子氧作用，胞内荧光酶催化，将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为FMN及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长为407-409 nm处的蓝绿光。

发光细菌法是利用灵敏的光电测量系统测定毒物对发光细菌发光强度的影响。

发光细菌含有荧光素、荧光酶、ATP等发光要素，在有氧条件下通过细胞内生化反应而产生微弱荧光。

当细胞活性升高，处于积极分裂状态时，其ATP含量高，发光强度增强。

１ ２ 仪 器 ．
Ｄ Ｙ一 Ｘ ２型生物 毒性测试仪 （ 中国科学 院南京
土壤 研究 所 ） 。
生物毒性测定仪。相对 于传统 的毒物检 测方法如 Ａ ｓ ， 方法 具有灵 敏 、 ｍｅ 等 该 快速 、 成本 低 等优 点 。 国 内也研制出相关的仪器并制定 了相应 的国家标准。 近年来该方法 已成功应用于某些污染水体和土壤的 生 物毒性 评价 上 Ｊ 。在利用 发光 细菌 对 环境 样 本 进 行生 物毒性 评 价分 析 时 ， 往 采用 样 品 的水 浸 提 往 液或稀释液。由于在 自然环境 中存在的大量有机污 染 物为非 极性 物质 ， 水溶 性差 ， 因此 其水 浸提 液或 稀 江苏Βιβλιοθήκη 业科学２０ ０ ８年第 ５期
－— ２ ５ ．— － ８ － — — － —
发光 细菌法测定有机污染土壤 的生物毒性
吴 向 华
（ 京晓庄 学院生命科学 系， 南 江苏南京 ２ １７ ） １ １ １
摘要 ： 在研究发光细 菌培养 方法 、 同有机溶剂对土壤 中有机毒 物提 取效率 、 不 土壤有机 毒物对发光 细菌 的生 物毒性基础上 ， 用发光细菌法测定 了不同来源石油污染土壤 的生物毒性 。结果表 明 ， 利 发光细菌 的发光强度 与污 染土壤的 Ｄ Ｍ Ｄ Ｏ提取 液浓度呈负相关 ， Ｃ ／ ＭＳ 但土壤 的生物毒性与其 中的污染 石油含量并 不成对应关系 。 关键词 ：土壤 ； 有机污染 ；生物 毒性 ； 测定 ；发光细菌法
释液 往往 不能 完全反 映环 境样 品 的生物 毒性 。尽 管 很多 有机溶 剂 对土壤 中有 机污 染物 具有 很好 的提 取 效果 ， 但是 大多数 有 机 溶 剂本 身对 发 光 细 菌 也具 有 较强 的生物 毒性 ， 很 大 程 度 上 限制 了发 光 细 菌 在 在 环境生 物毒 性检 测上 的应用 。本 研究 首先 筛选 对有 机污染 物具 有较 强浸 提 效 率 、 对 发 光 细 菌无 毒 或 但

2016-12-02 发布
2017-03-02 实施
广东省环境保护厅
发布
广东省质量技术监督局
DB44/ T 1946—2016
目次
前 言 .............................................................................. II 1 适用范围 ........................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 仪器组成、测量原理、测量指标及范围 ................................................. 2 5 性能指标及测量方法 ................................................................. 3 6 技术要求 ........................................................................... 5 7 操作说明书 ......................................................................... 6
HJ/T 212
污染源在线自动监控（监测）系统数据传输标准

Ｋｅ ｒ ｓ ａ ｒ ｕｔｒｌｐ ｏ ｕ ｔ ｓｆｔ ； ｈ ｔｂ ｃｅ ａ ｔｘｃ ； ｅｅｔ ｎ ｔ ｈ ｏｏ ｙ ｙ ｗｏ ｄ ： ｇｉ ｌ ａ ｒｄ ｃｓ ａｅ ｐ ｏｏ ａ ｔｒ ； ｏ ｉｉ ｄ ｔｃ ｏ ｅ ｎ ｌｇ ｃ ｕ ｙ ｉ ｙ ｔ ｉ ｃ
ｌ 生 物 毒 性 检 测 技 术 概 述
结果表明 ： 品 中毒性物质 的浓度 与发光细 菌的相对发 光度 呈现较好的 负相 关性 ， 光细 菌生物 毒性检测 法可 样 发
以作为一种快速的毒性 筛查技 术应用于农产品安全检 测。
关键 词 ： 农产品安全； 发光细菌； 毒性 ； 检测技术
Ａｐ ｌ ａ ｉ ｎ ｏ ｏ ｔ ｘ ｃｔ ｔ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｉ ｒｃ ｌｕ ａ ｏ ｕ ｔ ｐ ｉ ｔ ｆＢｉ － ｏ ｉｉｙ Ｄｅ ｅ ｍ ｎ ｔ ｎ Ａｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌ ｃ ｏ ｏ Ｐｒ ｄ ｃｓ
收 稿 日期 ： ０ １０ ．７ ２ １ －３ ２
光 细 菌 的急 性 毒 性 ， 结果 表明 ， 性 染 料 、 原 性 碱 还
文献标识码 ： Ａ
生 毒 检 技 在 产 检 中应 研 物 性测术农 品测 的用究
卢 俊 荣
（． １ 莆田市质量技术监督局 ，福建 莆田 ３ １０ ； ５ １ ０
２ 莆田市工业产品生产许 可证 审查技 术 中心 ，福 建 莆 田 ３ １０ ． ５ １０）
摘 要 ： 应用发光细菌生物毒性检测技术对农产品的小白菜样品、 罗非鱼样品和大米样品进行生物毒性检测，
性 ， 有毒 物 浓度 越 大 ， 光细 菌 发 光越 弱 或 者 凋 即 发
亡 。所 以 ， 用生物 发 光测 定仪 器检 测发 光 细菌 接 触
毒性 物 质 时 的光 强变 化 ，就可 以推 算 出综 合 毒性

发光细菌法检测水土环境毒性的进展和评价分析摘要：发光细菌法是一种快速、灵敏的生物测试方法，被人们广泛应用在水土环境毒性测试工作中，取得了理想的成绩。

文章在阐述发光细菌法测定原理的基础上，就发光细菌法在水土环境毒性测定中的应用问题进行探究。

关键词：发光细菌法；水土环境；毒性；检测在现代工业的快速发展下，金属开始通过各个途径进入到土壤、水文、大气等生态系统中，这个期间会对系统中的生物体产生不良反应，进而使得整个生态系统遭受到破坏。

为了能够确保工业发展的安全有效，需要相关人员按照规范的标准研究金属生物毒性以及其在生态系统中的潜在危害。

生物毒性是指生物体在毒物的作用下所产生的不良效应，为了能够更为精准的把握这种反应，可以借助生物测试方法，比如发光细菌法来测试生物体中的毒性。

一、发光细菌法的测定原理生物发光是一种普遍的自然现象，在自然环境中，可见光的生物有发光细菌、真菌、放射虫类等。

发光是发光细菌的一种生理过程，在分子氧作用、细胞内荧光酶催化作用下会将还原态的黄素单核苷酸和长链脂肪醛氧化为黄素单核苷酸和长链脂肪酸。

在发生化学反应之后还会释放出波长在450nm到490nm的蓝绿光。

从实际发展情况来看，发光过程很容易受到外界环境的影响，这个期间，能够干扰或者损害细菌呼吸、生理过程的任何因素都会使得细菌的发光强度出现变化。

在有毒有害物质和发光细菌出现接触的时候，发光强度会出现变化，且随着毒性物质浓度的增加，发光也会日渐减弱。

基于这个特点，可以利用发光细菌作为指示微生物，将发光强度的变化作为重要参考指标，在此基础上深入测定环境中有毒有害物质的生物毒性，从而帮助相关人员全面的了解环境中的污染物质。

二、发光细菌法检测水土环境毒性检测使用发光细菌进行毒性测试可以从以下几个方面进行：第一，利用野生型发光细菌来开展毒性测试，细菌发光强度和毒性物质的浓度会呈现出一种反比的关系。

在具体测试分析中会通过发光抑制率来体现水土环境中的毒性大小。

生物发光毒性测试分析毒性是一项综合的生物学参数，它是衡量样品对活性生物体所产生的影响，不能以化学分析的方法进行测定，一些生物测试方法如鱼类试验、浮游动物试验、藻类试验等则较为复杂，且必须使用高等生物进行试验，从而引起众多的争议。

发光细菌测试使用了具有发光特性的天然或人工遗传改造的微生物，这一方法经研究被证实具有快速、简便的特点，同时有很好的灵敏度和可靠性，发光细菌本身又没有危害性。

发光细菌试验已成为环境样品毒性检测的生物测试技术，被列入了我国国家标准GB/T 15441-1995，德国国家标准(DIN38412)和国际标准(ISO11348)。

发光细菌毒性测试方法是一个我国国家标准和ISO标准认证的，运用发光细菌Vibrio fischeri进行急性毒理测试。

发光细菌闪烁测试（flash test）是一个改良的方法用于测试含有固体和有色的样品。

上述两个系统包括化学发光检测仪（闪烁测试系统的发光仪必需有自动样品注射器），软件程序，试剂冷却/孵育器和冷冻干粉状态的测试用发光细菌。

生物重金属试剂盒是一个革命性地用于分析环境中少量样品的方法。

这些细菌能够特异性地感受到某种特定金属的存在，如来自固体和液体样品中ppb水平的铅、汞、砷和镉。

发光终点测试方法具有很高的灵敏度，快速和高通量进行。

发光细菌毒性测试此方法是传统和标准的通过发光细菌方法来测试化合物或污水的毒性（GB/T 15441-1995，ISO 113483: 水质）测定水样对Vibrio fischeri <发光细菌测试>的光发射抑制效果。

这个测试方法是建立在此基础之上的――当有毒性的化合物存在时，细菌的发光量会降低。

这个方法非常快速，只需要5－30分钟就可以完成。

标准发光细菌的测试过程是：把样品和细菌混合在一起，经过短暂的孵育，测试发光强度。

检测仪器只需要化学发光仪（如Berthold Detection Systems管式或板式化学发光仪)。

发光菌的生物毒性测ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 方法
实验原理
1 发光菌的发光机理 细菌生物发光反应是由分子氧作用，胞内荧光酶催化， 将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为 FMN 及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长 为450-490nm处的蓝绿光。 2 实验原理 当发光细菌接触有毒污染物时,细菌新陈代谢则受到影 响,发光强度减弱或熄灭,发光细菌发光强度变化可用发 光检测仪测定出来。在一定浓度范围内,有毒物浓度大 小与发光细菌光强度变化成一定比例关系,因此可通过 发光细菌来监测环境中的有毒污染物。发光细菌应用最 多的是明亮发光杆菌,可以监测各种水体,对气体中可溶 性有毒物质,可先通过吸收、溶解在溶液中,再来观察其 对发光细菌的影响。
结果与数据处理
1 相对发光度的平均值
相对发光度（%）=Hgcl2管或样品管发光量/CK管发光量 再求相对发光度平均值 2 建立并检验HgCl2浓度与其相对发光度均值的相关关系 先求出线性回归方程，再在一定的P值条件下查表进行r检测， 验证相关方程成立，然后做出两者的关系曲线，按照同样的方 法检测样品浓度与其相对发光度均值的相关性。
4仪器检验复苏发光细菌冻干粉质量3细菌冻干菌剂复苏1仪器的预热15min和调零2试管排列和滴加3nacl及样液取出含有05g发光细菌冻干粉的安瓿瓶和nacl溶液将安瓿瓶置于含有冰块的保温瓶中注入nacl溶液混匀2min后菌即复苏发光取2ml测试管加2mlnacl3溶液10l复苏发光菌液颠倒摇匀测试发光量倍率调至x2发光量高于600mv此冻干粉可用5给各测试液加复苏菌液发光菌液复苏满15min用10l微量注射器准确吸取10l复苏菌液逐一加入各管摇匀精确计时记录到秒6读数拔出样品室的盖子红指示灯亮将待测样品液比色管放入盖好盖子抓住盖子顺时针旋转此时只绿指示灯亮约12s读数抓住盖子顺时针旋转至原处只红指示灯亮向上拔出盖子取出样品

进行监测。利用发光菌对污水处理厂的进出水进行持续监测表 明， 经处理 过后的水质毒性有了明显的降低， 还 发现初级沉淀不能有效 的降低污水 的 毒性， 而毒性的去除主要是在生物处理 阶段 。 除此之外 ， 发光菌还能够评估 化合物的毒性并探 讨毒性指标和 化学指标 的联 系。
３ ． ２发 光 菌 应 用 于 大 气 污 染 毒 性 的 监 测 利用发光菌进行大气污染监测早期出现在四 ｆ 一 年 代。 将 火 力 发 电厂 排
概括如下 ： 细 菌中的黄素单核苷酸在细菌荧光酶 的催化 下发生氧化反应而 放 出光子 ， 从而发 出荧光 。 一般此 荧光 的波长 范围在 ４ ２ ０ — ６ ７ ０ ｎ ｍ， 最大 的发
射波长为 ４ ９ ０ ｎ ｍ， 因此 发 光 菌 发 出的 光 呈 现 蓝 绿 色 。这 个 过程 可 以用 以 Ｆ 反应 式 表 示 ： Ｆ ＭＮＨ２ ＋ Ｏ２ ＋ ＲＣＨＯ 细 菌 荧 光 酶 ＲｃｏｏＨ＋ Ｆ Ｍ Ｎ＋ Ｈ２ ０＋ｈ
３ ． ３发光 菌 用 于 土 壤 污 染 毒 性 的监 测 目前 ， 由于大量农药的使用， 我 国各 地 土 壤 都 受 到 了不 同程 度 的 污 染 ， 危 害 十 分 严 重 。因此 近 些 年 有 人 对 发 光 菌 用 于 七壤 污 染 毒 性 监 测 做 了相 关 研 究 。 通 过 将 土 壤 中 的 毒 性 物 质抽 提 到 水 溶 液 中， 再 用 发 光 细 菌进 行 监 测
科 学研 究
礴湾
发光菌在环境毒性检测 中的应用
潘 涛 朱小亮 王 海 燕
（ 江苏新源水 务有限公司 ２ ２ ３ ８ ０ ９ ） 摘 要： 发光细菌法在环境毒性检测 中是一种快速 、 灵敏 、 低成本 的生物检 测方法 ， 受 到人们 的』 泛 重视。本文就发光菌的形态、 生理 、 生态 以及应用 原理 等进 行 了简述 ， 并对发光菌在环境毒性检测中的应用进行 了概述 。 关键 词 ： 发光菌 ； 环境污染 ； 毒 性 监 测

实验目的与内容
一、实验目的
1.掌握发光细菌毒性测试的标准方法； 2.根据发光细菌发光强度的变化判断
受试化合物的毒性； 3.初步了解发光细菌毒性测试的影响因素。
二、实验内容
1.发光细菌的复苏； 2.发光细菌发光强度的测定； 3.受试化合物毒性的计算。
实验目的与内容
发光细菌是一种非致病性的普通细菌，具有发光能力，在正 常条件下经培养后能发出肉眼可见的兰绿色光，这种发光过程 是细菌体内一种新陈代谢反应，是氧化呼吸链上的一个侧支。 发光细菌的发光反应模式图(1)所示。发光细菌发光反应途径可 简单概述为:
3. 仪器： 生物发光光度计，配制2或5 ml测试管，当氯化汞标
准液浓度为0.10 mg/L时，发光细菌的相对发光度为50 ％，其误差不超过10％。2或5 ml 测试样品管，具标准 磨口塞，为制造比色管的玻璃料制作，由专业玻璃仪 器厂制造，分别适用于相应型号的生物放光光度计。 注射器(1 ml)、微量注射器(10 μl)、定量加液瓶(5 ml)、 吸管(2.10、25 ml)、试剂瓶(100 ml)、量桶(100、500 ml)、棕色容量瓶(50、250、1000 ml)、半微量滴定管 (配磨口试液瓶，全套仪器均为棕色，10 ml)等若干。
发光细菌的复苏 从冰箱内取出含有0.5 g 发光细菌冻干粉和氯化钠
溶液, 置于含有冰块的小号保温瓶, 用1 ml注射器吸取 0.5 ml冷的氯化钠2.0 g/100 ml溶液(适用于5ml的测试 管)或1 ml 冷的氯化钠2.5％溶液(适用于2 ml的测试管) 注入冻干粉中, 充分混匀。2 min后菌即复苏发光, 可在 暗室观察, 肉眼可见微光。备用。
简介
采用现代光电检测手段(生物发光光度计)的发光菌生物 毒性实验是毒理学中生物测定的方法之一。 该方法快速、 简便、灵敏、廉价,在有毒物质的筛选, 环境污染生物学评 价等方面有重要的意义, 因而备受各国有关研究者的关注。

ICS13.060.01Z16DB23黑龙江省地方标准DB23/T2750—2020水质生物毒性的测定发光细菌快速测定法2020-12-16发布2021-01-15实施目 次前言 (II)引言 (III)1范围 (1)2规范性引用文件 (1)3方法原理 (1)4试剂和材料 (1)5仪器设备 (2)6测定 (2)7结果计算与表示 (3)8方法的精密度 (3)附录A（资料性附录）结果判定参考内容 (4)前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。

本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由黑龙江省生态环境厅提出并归口。

本文件参与起草单位：黑龙江省生态环境监测中心。

本文件主要起草人：王鹏杰、曹胜、邢延峰、孟庆庆、李博、胡丽娜、张蕊、杨宏坤、姜景阳、关吉鑫、李经纬、王国梁、李海智、芦旭峰、苏晓慧、于宗灵、柏广宇、李慧。

引 言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》等法律法规，保护和改善生态环境，保障人体健康，制定本文件。

水质生物毒性的测定发光细菌快速测定法1范围本文件规定了水质生物毒性的测定发光细菌快速测定法的方法原理、试剂和材料、仪器设备、测定、结果计算和表示及方法的精密度。

本文件适用于工业废水，纳污水体及实验室条件下可溶性化学物质的水质急性毒性监测。

2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T15441-1995水质急性毒性的测定发光细菌法3方法原理水样在一定的时间和条件下与发光细菌接触后，发光细菌的发光强度变化与水样中毒性组分总浓度呈负相关关系，通过生物发光光度计测定水样与发光细菌接触一定时间后的发光抑制率来表征水样的急性毒性水平。

水质综合毒性的测定现场快速监测发光细菌法（试行）二〇二〇年七月目次前言.................................................................................................................................................. i ii1 适用范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 术语和定义 (1)4 方法原理 (1)5 干扰和消除 (2)6 试剂和材料 (2)7 仪器和设备 (3)8 样品采集和处理 (3)9 分析步骤 (3)10 结果计算与表示 (4)11 精密度 (5)12 质量保证和质量控制 (6)前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范水质综合毒性现场快速监测方法，制定本方法。

本方法规定了地表水、地下水、生活污水和工业废水中综合毒性的现场快速监测发光细菌法。

本方法由中国环境监测总站组织制订。

本方法起草单位：中国科学院生态环境研究中心。

本方法验证单位：湖南省生态环境监测中心、云南省环境监测中心站、河南省生态环境监测中心、河北省生态环境监测中心、湖南力合检测技术服务有限公司、湖南长沙生态环境监测中心。

本方法主要起草人：李红岩、张艳芬、于志勇、马梅、饶凯锋、张琳琳、刘勇、吴洁、丁雄。

本方法由中国环境监测总站解释。

水质综合毒性的测定现场快速监测发光细菌法（试行）1 适用范围本方法规定了测定水质综合毒性的现场快速监测发光细菌法。

本方法适用于对地表水、地下水、生活污水和工业废水综合毒性的快速测定。

2 规范性引用文件本方法引用了下列文件或其中的条款。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

ISO 11348-3 水质检测-水样对费氏弧菌发光的抑制效应的测定ISO 5667-16 水质-样品的生物测试指南GB/T 15441 水质急性毒性的测定发光细菌法SN/T 5103 国境口岸饮用水生物毒性发光细菌检测方法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范HJ/T 91.1 污水监测技术规范HJ/T 164 地下水环境监测技术规范HJ 589 突发环境事件应急监测技术规范3 术语和定义3.1 发光细菌luminescent bacteria发光细菌是一类非致病的革兰氏兼性厌氧微生物，在适当条件下能发射出肉眼可见的蓝绿色光，且发光强度与其接触的毒物浓度在一定的浓度范围内有对应关系。

发光细菌毒性检测仪安全操作及保养规程发光细菌毒性检测仪是一种以发光细菌为生物试验材料，用于检测某些物质对于生物细胞的毒性水平的仪器。

由于该仪器涉及到生物实验和电气设备，因此安全操作至关重要。

以下是发光细菌毒性检测仪的安全操作及保养规程。

安全操作规程1. 操作前准备在使用发光细菌毒性检测仪之前，必须进行以下准备：1.检查工作环境，确保仪器周围无明火或易燃性物质；2.检查电气设备正常运转；3.准备消毒剂和放置细菌样品的容器。

2. 实验操作在进行实验操作时，必须按照以下规程：1.佩戴手套和口罩，避免将细菌以及可能存在的有害物质吸入或接触到皮肤；2.使用无菌操作技术，避免污染细菌样品；3.操作时严格按照说明书操作，避免误操作或忽略任何关键步骤；4.操作完成后，立即将所有使用过的工具和材料进行消毒处理。

3. 事故应急在使用发光细菌毒性检测仪时，如遇到以下情况应及时采取应对措施：1.发现有破损的仪器部件，应立即停用并通知维修人员维修；2.发现漏电或其他电气故障，应立即切断电源，并通知专业电工维修；3.发生生物泄漏，应立即采取隔离措施，并采取消毒措施避免细菌扩散；4.发生人身伤害，应立即采取急救措施，并及时通知相关部门协助处理。

保养规程发光细菌毒性检测仪的保养工作也非常重要，以下是相关的保养规程：1.经常检查仪器外观，保持表面清洁；2.定期检查仪器结构件，防止发生机械故障；3.检查电气设备是否正常，需专业人员定期维修；4.维持仪器通风良好，避免室内湿度过高；5.注重生物安全，要经常消毒进行内部清洁。

总结在使用发光细菌毒性检测仪时，安全操作和保养工作都非常重要。

通过严格按照操作规程实施实验操作、及时采取应对措施以避免事故发生，并对设备进行定期保养和维修。

这样才能保证它的正常运转，提高实验精度，并且减少对人体和环境的危害。

发光细菌法急性毒性的测定大连理工大学环境与生命学院1978年美国Beckman 公司即推出功能完备的生物发光光度计“Microtox”，自此，这一急性毒性测试技术在世界范围内迅速推广。

因此人们也将发光菌毒性测试称为Microtox 测试。

简介发光菌毒性测试是20世纪70年代后兴起的一种微生物监测环境污染及检测污染物毒性的新方法。

采用现代光电检测手段(生物发光光度计)的发光菌生物毒性实验是毒理学中生物测定的方法之一。

该方法快速、简便、灵敏、廉价,在有毒物质的筛选，环境污染生物学评价等方面有重要的意义，因而备受各国有关研究者的关注。

1995年3月，国家环境保护局、国家技术监督局将发光菌毒性测试定为水质监测标准方法(GB/T 15441-1995)。

一、实验目的与内容实验目的1. 掌握发光细菌毒性测试的标准方法；2. 根据发光细菌发光强度的变化判断受试化合物的毒性；3. 初步了解发光细菌毒性测试的影响因素。

实验内容1. 发光细菌的复苏；2. 发光细菌发光强度的测定；3. 受试化合物毒性的计算。

实验原理发光菌的发光现象是其正常的代谢活动, 在一定条件下发光强度是恒定的, 与外来受试物(无机、有机毒物, 抑菌、杀菌物等) 接触后, 其发光强度即有所改变。

变化的大小与受试物的浓度呈相关关系, 同时与该物质的毒性大小有关。

通常认为外来受试物通过下面两个途径抑制细菌发光: (1) 直接抑制参与发光反应的酶类活性; (2) 抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程(如细胞呼吸等)。

毒物的毒性可以用EC50表示, 即发光菌发光强度降低50% 时毒物的浓度。

实验结果显示, 毒物浓度与菌体发光强度呈线性负相关关系。

因而可以根据发光菌发光强度判断毒物毒性大小, 用发光强度表征毒物所在环境的急性毒性。

二、实验材料与方法1. 试剂：氯化汞（分析纯）；氯化钠（化学纯）；蒸馏水。

氯化钠溶液，2.0 g/100 ml (3.0 g/100 ml)，称取2.0 g (3.0 g)氯化钠溶于100ml蒸馏水中，置于2-5℃冰箱备用。

LumiFox2000 手持式发光细菌毒性检测仪检测水土环境样品的评价摘要：随着社会的发展，水质生物毒性已经逐步成为评价水质污染的手段之一。

本文主要综述国内外最先进的生物毒性检测技术----发光细菌法；并描述了全球最小巧轻便的生物毒性检测仪----LumiFox 2000的产品原理以及该仪器在实际中的应用。

关键字：发光细菌、样品、应用1生物毒性监测的必要性随着工业的发展，各种化学物质的使用，人们赖以生存的水生生态系统污染日益严重。

突发性水污染事故频频发生，这直接威胁到人民群众的生命安全。

这就要求我们能够快速准确的检测污染物的影响。

如今，理化检测日趋成熟，但是这种经典方法是对特定有毒化学物质实行单个指标控制。

但水的毒性效应是一项综合的生物学参数，环境中往往是由多种污染物同时存在，多种污染物所组成的混合体系产生的毒性是所有组分叠加、拮抗、协同或抑制的综合结果，因此需要有快速、准确评价出各类污染物的综合毒性的方法。

目前水毒性测试生物学方法包括发光细菌法、浮游动物试验、藻类试验、鱼类试验等,除发光细菌法外,其他方法均操作复杂、检测周期长，在实际应用中不方便。

2发光细菌毒性检测的原理发光细菌体内的荧光素酶催化荧光素的氧化作用, 产生生物发光, 化学反应式如下:F M N H 2+ O 2+ R - C O - H →F M N + R -C O O H + H 2O + L i g h t生物发光直接与细胞的活性及代谢状况相关。

毒性物质会改变细胞的状态,包括细胞壁、细胞膜、电子的转移系统、酶及细胞质的结构, 这些变化最终导致生物发光的减弱。

化学毒性物质毒性越强, 抑制代谢作用越强, 发光抑制越明显。

通过检测发光细菌在水样中的发光强度就可以初步检测水中的毒性。

其毒性检测系统对多种不同的简单化合物和混合物的反应敏感，而且对很大范围的毒性物质及广泛类别的化学药剂反应敏感。

3实验仪器朗石公司研制的LumiFox2000手持式发光细菌检测仪朗石公司生产的发光细菌冻干粉及配套试剂4测量的样本工业废水、生活污水、天然水体、土壤、沉积物等。

DB44生物毒性水质自动在线监测仪技术要求发光细菌法Technical Specifications for Automatic/On-line Monitoring of Biological Toxicityin Water Luminescent Bacteria Test（发布稿）广东省环境保护厅广东省质量技术监督局发布2016-12-02发布2017-03-02实施DB44/ T 1946—2016目次前言 (II)1适用范围 (1)2规范性引用文件 (1)3术语和定义 (1)4仪器组成、测量原理、测量指标及范围 (2)5性能指标及测量方法 (3)6技术要求 (5)7操作说明书 (6)IDB44/T 1946—2016II 前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》《中华人民共和国水污染防治法》和《广东省环境保护条例》，规范生物毒性水质自动在线监测仪技术性能，制订本标准。

本标准归口管理单位：广东省环境保护厅。

本标准主要起草单位：广东省经信清洁生产促进中心、深圳市朗石科学仪器有限公司。

本标准参与起草单位：宇星科技发展(深圳)有限公司。

本标准主要起草人：邹耀、陈尧、李苑彬、李劲松、张创荣、严百平、付秋玥、王芬、王胜利、刘玉兵。

本标准由广东省环境保护厅解释。

DB44/T 1946—2016 生物毒性水质自动在线监测仪技术要求发光细菌法1 适用范围本标准规定了生物毒性质自动在线监测仪（发光细菌法）的性能指标、测量方法和技术要求。

本标准适用于对地表水、地下水等水源地中生物毒性水质自动在线监测仪（发光细菌法）的生产、应用选型、性能检验及验收。

2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件或其中的条款。

凡是注明日期的引用文件，仅注明日期的版本适用于本文件。

凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB 4793.1 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求GB/T 13306 标牌GB/T 15441 水质急性毒性的测定发光细菌法HJ/T 212 污染源在线自动监控（监测）系统数据传输标准3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

精品
仪器介绍
DXY-2型生物毒性测试仪是基于毒性物质对 特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设 计的，它通过测定发光细菌发光度的变化， 量度被测环境样品中由重金属和其它有机 污染物所造成的急性生物毒性。
精品
实验步骤
1 仪器的预热15min和调零
2 试管排列和滴加3%Nacl及样液
取出含有0.5g发光细菌冻干粉的安瓿瓶和
发光强度减弱或熄灭,发光细菌发光强度变化可用发光检
测仪测定出来。在一定浓度范围内,有毒物浓度大小与发
光细菌光强度变化成一定比例关系,因此可通过发光细菌
来监测环境中的有毒污染物。发光细菌应用最多的是明
亮发光杆菌,可以监测各种水体,对气体中可溶性有毒物
质,可先通过吸收、溶解在溶液中,再来观察其对发光细
菌的影响。
3 细菌冻干菌剂复苏 Nacl溶液，将安瓿瓶置于含有冰块的保温
瓶中，注入Nacl溶液混匀，2min后菌即复
苏取发2m光l测试管加2mlNacl3%溶液，10μ L
4仪器检验复苏发光细菌冻复倍苏率干发调粉光至质菌X2液，量，发颠光倒量摇高匀于，60测0m试v发，光此量冻，干
粉可用
发光菌液复苏满15min，用10μ L微量注射
发光菌的生物毒性测试 方法
精品
实验原理
1 光菌的发光机理
细菌生物发光反应是由分子氧作用，胞内荧光酶催化， 将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为 FMN 及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长 为450-490nm处的蓝绿光。
2 实验原理
当发光细菌接触有毒污染物时,细菌新陈代谢则受到影响,
1 相对发光度的平均值
相对发光度（%）=Hgcl2管或样品管发光量/CK管发光量 再求相对发光度平均值

发光菌法测定医疗机构废水生物毒性李永亮;李健;李桂莲;于亭亭【摘要】Vibrio Fischeri as spawn, a comprehensive test of the waste water discharged by medical institutions was carried out, combine with the determination of fecal coliform.Monitoring results of fecal flora of waste water conformed to the requirements of the corresponding standard limit, but medical waste water with biological toxicity generated certain biological inhibition rate to photogenic bacterium.%利用费舍尔弧菌为菌种,结合粪大肠菌群的测定,对医疗机构排放的废水进行综合测试.监测结果均符合相应的标准限值要求,但具有一定的生物毒性,对发光菌具有一定的生物抑制率.传染病和结核病医疗机构的废水生物抑制率最高,达44.7％和49.8％;中医医疗机构废水的抑制率最低,为8.1％.实验结果表明,发光菌法可应用于医疗机构废水生物毒性的测定.【期刊名称】《计量学报》【年(卷),期】2017(038)002【总页数】4页(P238-241)【关键词】计量学;废水监测;发光菌;生物毒性;抑制率;粪大肠菌群【作者】李永亮;李健;李桂莲;于亭亭【作者单位】佳木斯市环境保护监测站, 黑龙江佳木斯 154004;佳木斯市环境保护监测站, 黑龙江佳木斯 154004;黑龙江大学环境科学与工程系, 黑龙江哈尔滨150080;齐齐哈尔大学应用化学系, 黑龙江齐齐哈尔 161006【正文语种】中文【中图分类】TB99医疗机构废水不同于一般工业废水，其主要污染物为致病菌。