生物发光毒性测试分析.pdf
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浅谈生物发光技术用于污染毒性测试的进展
浅谈生物发光技术用于污染毒性测试的进展作者：卢桂芳来源：《中国科技纵横》2010年第21期摘要:本文介绍了发光菌的发光机理和毒性测试的发展历史,并采用淡水发光菌的生物发光技术在污染物的毒性研究测试方面的应用及其特点作了分析。
关键词:发光菌;毒性测试;Q67淡水发光菌1前言目前,针对普遍采用的发光菌毒性测试采用海水发光菌存在的问题,建立了以青海湖菌为生物种的测试方法体系;针对环境样品毒性测试中基体干扰等问题,发展了利用半渗透抽样技术作为有机毒污染物样品富集和前处理手段的方法;同时将生物毒性测试技术作为用于水处理过程中毒性变化规律研究和环境风险评价。
所取得的主要进展包括:(1)建立了基于新型淡水发菌(Vibrio-qinghaiensis sp,Nov—Q67)的发光菌急性测试体系。
系统研究PH、菌密度、反应时间、离子强度及天然水体中几种主要离子对测试的影响,通过对比研究法,考察了Q67和Vinto fisheri-T3对重金属、农药和氯酚等典型污染物毒性测试的结果,Q67测试天然水体急性毒性和水处理厂过程毒性变化规律,通过研究认为与T3相比,所研制的Q67淡水发光菌测试体系对淡水水体和水处理过程急性毒性测试具有明显的优势。
(2)将半渗透膜技术(triolein-SPMD)作为水样中有机组分的富集技术,分别针对洋河和城市污水生物处理过程中有毒有机污染物毒性变化进行发光菌急性毒性检验。
(3)应用生物毒性测试方法对自来水厂和北京官厅水库/永定河水体的致变进行了分析测试,并和同期进行的化学分析结果进行了比较。
通过具体案例研究,提出生物毒性测试技术作为化学监测的一种补充手段,在评价水体污染环境风险和工艺过程优势方面具有重要的应用价值。
早期采用的生物毒性测试手段主要是单指标生物毒性实验,即将一种生物暴露于两个或更多浓度剃度的有毒物质中,保持其他条件恒定,以观察生物效应(死亡或抑制;生理改变;行为改变等)。
这种实验能够较准确的反映某种化合物对某一特定生物产生的特定的毒性作用。
DB44T 1946-2016 生物毒性水质自动在线监测仪技术要求 发光细菌法.pdf
2016-12-02 发布
2017-03-02 实施
广东省环境保护厅
发布
广东省质量技术监督局
DB44/ T 1946—2016
目次
前 言 .............................................................................. II 1 适用范围 ........................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 仪器组成、测量原理、测量指标及范围 ................................................. 2 5 性能指标及测量方法 ................................................................. 3 6 技术要求 ........................................................................... 5 7 操作说明书 ......................................................................... 6
HJ/T 212
污染源在线自动监控（监测）系统数据传输标准
发光细菌法测生物毒性
主要任务1.对常用钻井液材料进行生物毒性分析，遴选出符合环保要求的材料。
2.通过进行生物毒性分析，对不符合环保要求的钻井液材料，如果是必备材料而且目前又找不到相同功能的替代品，则研制新型的符合环保要求的替代品材料。
3.在遴选出的钻井液材料中，择优选用价格性能比较好的材料，通过室内钻井液性能综合试验研究，研制出一种钻井液性能优良，能保证钻探施工顺利进行，符合环境保护要求的新型钻井液体系。
4.现场试验两口井，通过实践检验其钻井液综合性能，整理试验数据，编写研究报告。
一、完成了符合环保要求的钻井液材料的遴选1．生物毒性测定方法的选择（1）糠虾生物试验法（2）微毒性分析法（3）发光细菌法通过对发光细菌法与糠虾法试验结果对比，我们发现发光细菌法的EC50值与糠虾生物试验法的LC50值之间具有一定的相关性：EC50值总是小于LC50值，实验结果见表1。
这说明相同数值的EC50值和LC50值相比，EC50值比LC50值对环境的毒性污染更小，更安全可靠。
表1 四种钻井液体系的EC 50值与LC 50值比较因此本项目采用发光细菌法，测定钻井液单剂及体系的生物毒性，用EC50(相对发光率50%时)来表征被测物的生物毒性，EC50值越大，表明被测物的生物毒性越小；EC50值越小，表明被测物的生物毒性越大。
我们参照糠虾法的排放标准，以EC50＞30000ppm 作为钻井液单剂及体系允许排放的标准。
并参照糠虾生物毒性试验法的生物毒性分级标准，将生物毒性等级划分为六个等级(表2)，以此作为本项目的环境可接受性评价方法和标准。
表2 生物毒性等级分类2．常用钻井液材料的生物毒性评价按发光细菌法对常用钻井液材料进行毒性评价，结果见表3表3 常用钻井液材料生物毒性结果二、完成环保型高效润滑剂的研制和应用在地质调查金刚石取心钻探中，因转速较高，要求钻井液具有良好的润滑性；在石油天然气钻探中，定向井、水平井和深井所占的比例日益增加，钻井液的润滑性成为关键指标之一，因此，钻井液用润滑剂成为一种重要的常用的钻井液材料，其市场需求量日益增加，在钻井液化学处理剂中呈大幅度增长趋势，而目前的润滑剂仍在使用有毒性的矿物油材料（如柴油等）作基础原料，必然会被日益严格的环境保护要求所限制。
发光菌的生物毒性测试方法
结果与数据处理
Байду номын сангаас1 相对发光度的平均值
相对发光度（%）=Hgcl2管或样品管发光量/CK管发光量 再求相对发光度平均值 2 建立并检验HgCl2浓度与其相对发光度均值的相关关系 先求出线性回归方程，再在一定的P值条件下查表进行r检测， 验证相关方程成立，然后做出两者的关系曲线，按照同样的方 法检测样品浓度与其相对发光度均值的相关性。
发光菌的生物毒性测试 方法
实验原理
1 发光菌的发光机理 细菌生物发光反应是由分子氧作用，胞内荧光酶催化， 将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为 FMN 及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长 为450-490nm处的蓝绿光。 2 实验原理 当发光细菌接触有毒污染物时,细菌新陈代谢则受到影 响,发光强度减弱或熄灭,发光细菌发光强度变化可用发 光检测仪测定出来。在一定浓度范围内,有毒物浓度大 小与发光细菌光强度变化成一定比例关系,因此可通过 发光细菌来监测环境中的有毒污染物。发光细菌应用最 多的是明亮发光杆菌,可以监测各种水体,对气体中可溶 性有毒物质,可先通过吸收、溶解在溶液中,再来观察其 对发光细菌的影响。
仪器介绍
DXY-2型生物毒性测试仪是基于毒性物质对 特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设 计的，它通过测定发光细菌发光度的变化， 量度被测环境样品中由重金属和其它有机 污染物所造成的急性生物毒性。
实验步骤
1 仪器的预热15min和调零 2 试管排列和滴加3%Nacl及样液
取出含有0.5g发光细菌冻干粉的安瓿瓶和 Nacl溶液，将安瓿瓶置于含有冰块的保温 3 细菌冻干菌剂复苏 瓶中，注入Nacl溶液混匀，2min后菌即复 取2ml测试管加2mlNacl3%溶液，10μ L复苏 苏发光 发光菌液，颠倒摇匀，测试发光量，倍率 4仪器检验复苏发光细菌冻干粉质量 调至X2，发光量高于600mv，此冻干粉可 用 发光菌液复苏满15min，用10μ L微量注射 器准确吸取10μ L复苏菌液，逐一加入各管 5 给各测试液加复苏菌液 摇匀（精确计时，记录到秒） 拔出样品室的盖子（红指示灯亮），将待 测样品液比色管放入，盖好盖子，抓住盖 子顺时针旋转（此时只绿指示灯亮）约16 读数 2s读数，抓住盖子顺时针旋转至原处（只 红指示灯亮）向上拔出盖子，取出样品。
发光细菌法测定so2气体生物毒性的研究
菌悬浮液中通入不同浓度的 ＳＯ ２ 标气ꎬ 然后分别测定
菌液发光强度ꎬ 以发光抑制率表征气体的生物综合毒
性ꎮ 通过优化实验条件ꎬ 建立了系统的气体生物综合
毒性测试方法ꎮ 实验结果表明ꎬ 可以通过优化曝气设
备的精密性来提高监测的灵敏度和精密度ꎬ 具有较好
的应用前景ꎮ
１４２９ｍｇ / ｍ３ ) ＳＯ ２ 标准气体ꎬ 纯净空气做填充气ꎻ
ＳＯ ２ 标气浓度 分 别 设 置 为 ２８ ６、 ５７ １、 ８５ ７、 １１４ ３、
( 河北省生态环境监测中心ꎬ 河北 石家庄 ０５００３７)
摘 要: 建立了发光细菌法测定气体生物综合毒性的实验方法ꎮ 以淡水发光细菌青海弧细菌 Ｑ６７ 作为测试菌剂ꎬ
利用水质毒性分析仪监测不同浓度 ＳＯ２ 曝气条件下青海弧细菌 Ｑ６７ 的发光值ꎬ 以揭示 ＳＯ２ 气体的生物毒性ꎬ 并对
传统曝气条件进行了优化ꎮ 实验结果表明ꎬ 青海弧菌发光抑制率和 ＳＯ２ 浓度具有显著的相关性ꎬ 可定量测定空气
依次测定不同曝气时间梯度的发光菌液发光值ꎬ 从而
选择合适的曝气时间ꎮ
１ ３ ５ 标准曲线绘制
按照 １ ３ ３ 方 法 依 次 测 定 曝 入 系 列 ＳＯ ２ 标 气
(１ ３ １) 的发光菌液发光值ꎬ 并计算标准曲线的线性
回归方程ꎮ
１ ３ ６ 计算发光抑制率公式
Ｅ ＝ ( Ｉ － Ｉ / Ｉ ０ ) × １００％
用ꎮ
发光值也越高ꎬ 增大了实验误差ꎬ 综合考虑以上 ２ 方
溶解后的冻干粉溶液置于室温下复苏 １０ｍｉｎ 后备
１ ３ ３ 曝气
取 ２ 组干净的 ５ｍＬ 测试管ꎬ 分别加入 ２ｍＬ 渗透
敏度越高ꎬ 详见图 １ꎮ 但是ꎬ 曝气时间越长空白菌液
发光细菌法急性毒性的测定
发光细菌法急性毒性的测定大连理工大学环境与生命学院1978年美国Beckman 公司即推出功能完备的生物发光光度计“Microtox”，自此，这一急性毒性测试技术在世界范围内迅速推广。
因此人们也将发光菌毒性测试称为Microtox 测试。
简介发光菌毒性测试是20世纪70年代后兴起的一种微生物监测环境污染及检测污染物毒性的新方法。
采用现代光电检测手段(生物发光光度计)的发光菌生物毒性实验是毒理学中生物测定的方法之一。
该方法快速、简便、灵敏、廉价,在有毒物质的筛选，环境污染生物学评价等方面有重要的意义，因而备受各国有关研究者的关注。
1995年3月，国家环境保护局、国家技术监督局将发光菌毒性测试定为水质监测标准方法(GB/T 15441-1995)。
一、实验目的与内容实验目的1. 掌握发光细菌毒性测试的标准方法；2. 根据发光细菌发光强度的变化判断受试化合物的毒性；3. 初步了解发光细菌毒性测试的影响因素。
实验内容1. 发光细菌的复苏；2. 发光细菌发光强度的测定；3. 受试化合物毒性的计算。
实验原理发光菌的发光现象是其正常的代谢活动, 在一定条件下发光强度是恒定的, 与外来受试物(无机、有机毒物, 抑菌、杀菌物等) 接触后, 其发光强度即有所改变。
变化的大小与受试物的浓度呈相关关系, 同时与该物质的毒性大小有关。
通常认为外来受试物通过下面两个途径抑制细菌发光: (1) 直接抑制参与发光反应的酶类活性; (2) 抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程(如细胞呼吸等)。
毒物的毒性可以用EC50表示, 即发光菌发光强度降低50% 时毒物的浓度。
实验结果显示, 毒物浓度与菌体发光强度呈线性负相关关系。
因而可以根据发光菌发光强度判断毒物毒性大小, 用发光强度表征毒物所在环境的急性毒性。
二、实验材料与方法1. 试剂：氯化汞（分析纯）；氯化钠（化学纯）；蒸馏水。
氯化钠溶液，2.0 g/100 ml (3.0 g/100 ml)，称取2.0 g (3.0 g)氯化钠溶于100ml蒸馏水中，置于2-5℃冰箱备用。
水质 生物毒性的测定 发光细菌快速测定法.pdf
ICS13.060.01Z16DB23黑龙江省地方标准DB23/T2750—2020水质生物毒性的测定发光细菌快速测定法2020-12-16发布2021-01-15实施目 次前言 (II)引言 (III)1范围 (1)2规范性引用文件 (1)3方法原理 (1)4试剂和材料 (1)5仪器设备 (2)6测定 (2)7结果计算与表示 (3)8方法的精密度 (3)附录A（资料性附录）结果判定参考内容 (4)前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。
本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由黑龙江省生态环境厅提出并归口。
本文件参与起草单位：黑龙江省生态环境监测中心。
本文件主要起草人：王鹏杰、曹胜、邢延峰、孟庆庆、李博、胡丽娜、张蕊、杨宏坤、姜景阳、关吉鑫、李经纬、王国梁、李海智、芦旭峰、苏晓慧、于宗灵、柏广宇、李慧。
引 言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》等法律法规，保护和改善生态环境，保障人体健康，制定本文件。
水质生物毒性的测定发光细菌快速测定法1范围本文件规定了水质生物毒性的测定发光细菌快速测定法的方法原理、试剂和材料、仪器设备、测定、结果计算和表示及方法的精密度。
本文件适用于工业废水，纳污水体及实验室条件下可溶性化学物质的水质急性毒性监测。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T15441-1995水质急性毒性的测定发光细菌法3方法原理水样在一定的时间和条件下与发光细菌接触后，发光细菌的发光强度变化与水样中毒性组分总浓度呈负相关关系，通过生物发光光度计测定水样与发光细菌接触一定时间后的发光抑制率来表征水样的急性毒性水平。
发光细菌法急性毒性的测定
发光细菌法急性毒性的测定大连理工大学环境与生命学院1978年美国Beckman 公司即推出功能完备的生物发光光度计“Microtox”，自此，这一急性毒性测试技术在世界范围内迅速推广。
因此人们也将发光菌毒性测试称为Microtox 测试。
简介发光菌毒性测试是20世纪70年代后兴起的一种微生物监测环境污染及检测污染物毒性的新方法。
采用现代光电检测手段(生物发光光度计)的发光菌生物毒性实验是毒理学中生物测定的方法之一。
该方法快速、简便、灵敏、廉价,在有毒物质的筛选，环境污染生物学评价等方面有重要的意义，因而备受各国有关研究者的关注。
1995年3月，国家环境保护局、国家技术监督局将发光菌毒性测试定为水质监测标准方法(GB/T 15441-1995)。
一、实验目的与内容实验目的1. 掌握发光细菌毒性测试的标准方法；2. 根据发光细菌发光强度的变化判断受试化合物的毒性；3. 初步了解发光细菌毒性测试的影响因素。
实验内容1. 发光细菌的复苏；2. 发光细菌发光强度的测定；3. 受试化合物毒性的计算。
实验原理发光菌的发光现象是其正常的代谢活动, 在一定条件下发光强度是恒定的, 与外来受试物(无机、有机毒物, 抑菌、杀菌物等) 接触后, 其发光强度即有所改变。
变化的大小与受试物的浓度呈相关关系, 同时与该物质的毒性大小有关。
通常认为外来受试物通过下面两个途径抑制细菌发光: (1) 直接抑制参与发光反应的酶类活性; (2) 抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程(如细胞呼吸等)。
毒物的毒性可以用EC50表示, 即发光菌发光强度降低50% 时毒物的浓度。
实验结果显示, 毒物浓度与菌体发光强度呈线性负相关关系。
因而可以根据发光菌发光强度判断毒物毒性大小, 用发光强度表征毒物所在环境的急性毒性。
二、实验材料与方法1. 试剂：氯化汞（分析纯）；氯化钠（化学纯）；蒸馏水。
氯化钠溶液，2.0 g/100 ml (3.0 g/100 ml)，称取2.0 g (3.0 g)氯化钠溶于100ml蒸馏水中，置于2-5℃冰箱备用。
发光菌的生物毒性测试方法
精品
仪器介绍
DXY-2型生物毒性测试仪是基于毒性物质对 特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设 计的，它通过测定发光细菌发光度的变化， 量度被测环境样品中由重金属和其它有机 污染物所造成的急性生物毒性。
精品
实验步骤
1 仪器的预热15min和调零
2 试管排列和滴加3%Nacl及样液
取出含有0.5g发光细菌冻干粉的安瓿瓶和
发光强度减弱或熄灭,发光细菌发光强度变化可用发光检
测仪测定出来。在一定浓度范围内,有毒物浓度大小与发
光细菌光强度变化成一定比例关系,因此可通过发光细菌
来监测环境中的有毒污染物。发光细菌应用最多的是明
亮发光杆菌,可以监测各种水体,对气体中可溶性有毒物
质,可先通过吸收、溶解在溶液中,再来观察其对发光细
菌的影响。
3 细菌冻干菌剂复苏 Nacl溶液，将安瓿瓶置于含有冰块的保温
瓶中，注入Nacl溶液混匀，2min后菌即复
苏取发2m光l测试管加2mlNacl3%溶液，10μ L
4仪器检验复苏发光细菌冻复倍苏率干发调粉光至质菌X2液，量，发颠光倒量摇高匀于，60测0m试v发，光此量冻，干
粉可用
发光菌液复苏满15min，用10μ L微量注射
发光菌的生物毒性测试 方法
精品
实验原理
1 光菌的发光机理
细菌生物发光反应是由分子氧作用，胞内荧光酶催化， 将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为 FMN 及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长 为450-490nm处的蓝绿光。
2 实验原理
当发光细菌接触有毒污染物时,细菌新陈代谢则受到影响,
1 相对发光度的平均值
相对发光度（%）=Hgcl2管或样品管发光量/CK管发光量 再求相对发光度平均值
基于化学发光测定仪的微生物毒性检测技术研究
基于化学发光测定仪的微生物毒性检测技术研究引言：随着环境污染和食品安全问题的日益严重，微生物毒性检测技术成为保障生态环境和公共健康的重要手段。
化学发光测定仪作为一种高灵敏度、高选择性的检测仪器，已成为微生物毒性检测领域的重要方法。
本文将探讨基于化学发光测定仪的微生物毒性检测技术的研究现状和发展趋势。
一、化学发光测定仪原理及优势化学发光测定仪是一种基于化学反应产生光信号并以光信号强度来测定物质含量的仪器。
其原理是通过特定的底物与产生光信号的酶反应，将化学能转化为光能，从而实现高灵敏度的检测。
与传统的色谱法、质谱法相比，化学发光测定仪具有以下优势：1. 高灵敏度：化学发光反应产生的光信号强度较大，因此能够检测到极低浓度的目标物质。
2. 高选择性：通过选择合适的底物和酶反应，可以实现对目标物质的高选择性检测，避免了其他干扰物质的影响。
3. 快速反应：化学发光反应的反应速度较快，能够在短时间内完成检测过程，提高检测效率。
二、微生物毒性检测技术的研究现状目前，微生物毒性检测技术主要包括细菌毒性检测和水生生物毒性检测两个方面。
其中，基于化学发光测定仪的微生物毒性检测技术已得到广泛应用。
1. 细菌毒性检测：将细菌与待测物质接触后，通过检测细菌产生的毒性表达物质来评估待测物质的毒性。
化学发光测定仪在细菌毒性检测中的应用主要是通过检测细菌的ATP（三磷酸腺苷）释放情况，来评估待测物质对细菌的毒性程度。
通过测定ATP的化学发光信号强度，可以快速、准确地判断待测物质是否具有毒性。
2. 水生生物毒性检测：水生生物毒性检测主要是评估水体中有毒物质对生物的影响程度。
化学发光测定仪在水生生物毒性检测中主要采用酶法和免疫法两种方式。
酶法是通过测定特定酶在水体中的活性变化来判断毒性程度，而免疫法则是通过检测特定抗体与待测物质结合产生的化学发光信号来评估其毒性。
三、基于化学发光测定仪的微生物毒性检测技术的应用案例1. 细菌毒性检测应用案例：研究人员利用化学发光测定仪对不同食品中的细菌毒性进行了评估。
应用生物发光技术评价炼油废水的综合急性毒性
。
该方 法 具 有 取 材 价 廉 简 便 快 还 等 优 点
,
试验 表 明
:
炼 油 废 水具 有 较 强 的 急 性 毒 性特 征
,
,
E几。二 5 5
.
5 了%
。
毒 性等级 n 级 ( 毒 、
。
各 车间 废水 的
比 较 以 催 化 裂 化 和干 溜 废水 毒 性 最 高
是 废水 急 性 毒 性 控制 的 重 点 对象
,
菌种 一接 种 环 杯中
,
。
于盛 有 0 5 m l 培 养基 的 三 角烧
℃ 恒温 振
定 单 因 子 指标 作用 状 况 定
, ,
难 以 反映 多种 污染 物 的 综 合
。
0 置 摇床 2
至 其发 摇培 养 1 4 五
特 别是 对生 物体 的直接 伤害
、 、
以
光 良好
6
.
往 的生 物 监 测 多采 用 鱼 但 测 试 时 间长
、
每 个样 品 设
(% )
个剂量 组
,
,
按 最 终 含样 品 浓 度
18
、
对 此 国内
外 均 有 报道 “ ”
〔约
〔3 〕
。
本文
为
。 ( 对照 )
、
10
、
3 2
、
5 0和 9 0设
。
采 用 该方 法 对 炼 油 废水 的 综 合 急性毒 性进 行 试验 和评 价
。
计
,
分 别加 样 品
稀 释液 和 等量 菌 液
二 溜 铂 重 整 烷 基化 干馏 { 再燕 溜
车I 司
催化 裂化
该方 法 具 有 取 材 价 廉 简 便 快 还 等 优 点
,
试验 表 明
:
炼 油 废 水具 有 较 强 的 急 性 毒 性特 征
,
,
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各 车间 废水 的
比 较 以 催 化 裂 化 和干 溜 废水 毒 性 最 高
是 废水 急 性 毒 性 控制 的 重 点 对象
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于盛 有 0 5 m l 培 养基 的 三 角烧
℃ 恒温 振
定 单 因 子 指标 作用 状 况 定
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难 以 反映 多种 污染 物 的 综 合
。
0 置 摇床 2
至 其发 摇培 养 1 4 五
特 别是 对生 物体 的直接 伤害
、 、
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6
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往 的生 物 监 测 多采 用 鱼 但 测 试 时 间长
、
每 个样 品 设
(% )
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,
按 最 终 含样 品 浓 度
18
、
对 此 国内
外 均 有 报道 “ ”
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〔3 〕
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本文
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10
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3 2
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采 用 该方 法 对 炼 油 废水 的 综 合 急性毒 性进 行 试验 和评 价
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稀 释液 和 等量 菌 液
二 溜 铂 重 整 烷 基化 干馏 { 再燕 溜
车I 司
催化 裂化
毒性试验结果分析报告
毒性试验结果分析报告一、引言毒性试验是评估化学物质、药物或其他潜在有害物质对生物体产生不良影响的重要手段。
通过一系列的实验设计和观察，我们能够获取有关物质毒性的关键信息，为其安全使用和风险评估提供科学依据。
本次毒性试验旨在探究受试物质名称的潜在毒性作用，以下是对试验结果的详细分析。
二、试验材料与方法（一）受试物质描述受试物质的来源、纯度、化学性质等相关信息（二）实验动物选用动物种类及品系，体重范围为体重区间，雌雄各半。
动物在实验前适应环境适应时间，饲养条件符合相关标准。
（三）试验设计1、剂量分组设置高、中、低剂量组和对照组，每组动物数量为具体数量。
2、给药途径采用口服、腹腔注射、皮肤涂抹等给药方式。
3、观察指标在试验期间，对动物的一般状况（如外观、行为、饮食、体重等）、血液生化指标（如肝肾功能指标、血常规等）、组织病理学（如心、肝、脾、肺、肾等脏器的病理变化）进行观察和检测。
（四）试验周期整个试验持续具体时长。
三、试验结果（一）一般状况观察在试验期间，对照组动物表现正常，活动自如，饮食和体重增长正常。
高剂量组动物在给药后具体时间出现不同程度的中毒症状，如精神萎靡、活动减少、毛发粗糙等。
中剂量组动物在给药后期也出现了类似症状，但程度较轻。
低剂量组动物未观察到明显异常。
（二）体重变化对照组动物体重呈正常增长趋势。
高剂量组动物体重在给药后逐渐下降，与对照组相比差异显著（P<005）。
中剂量组动物体重增长缓慢，与对照组相比有一定差异（P<01）。
低剂量组动物体重变化与对照组无明显差异。
（三）血液生化指标高剂量组动物的肝功能指标（如谷丙转氨酶、谷草转氨酶等）显著升高（P<001），肾功能指标（如肌酐、尿素氮等）也有明显变化。
中剂量组动物的部分肝功能指标轻度升高，肾功能指标无明显异常。
低剂量组动物的血液生化指标与对照组相比无显著差异。
（四）组织病理学检查高剂量组动物的心、肝、脾、肺、肾等脏器出现了不同程度的病理损伤，如肝细胞变性坏死、肾小管上皮细胞肿胀等。
生物发光检测法分解共32页文档
45、自己的饭量自己知道。——苏联
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
生物发光检测法分解
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
生物发光检测法分解
1、合法而稳定的权力在使用得当时很 少遇到 抵抗。 ——塞 ·约翰 逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美 德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感 ；权力 不易确 定之处 始终存 在着危 险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金 子可以 拉着它 的鼻子 走。— —莎士 比
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生物发光毒性测试分析
毒性是一项综合的生物学参数，它是衡量样品对活性生物体所产生的影响，不能以化学分析的方法进行测定，一些生物测试方法如鱼类试验、浮游动物试验、藻类试验等则较为复杂，且必须使用高等生物进行试验，从而引起众多的争议。
发光细菌测试使用了具有发光特性的天然或人工遗传改造的微生物，这一方法经研究被证实具有快速、简便的特点，同时有很好的灵敏度和可靠性，发光细菌本身又没有危害性。
发光细菌试验已成为环境样品毒性检测的生物测试技术，被列入了我国国家标准GB/T 15441-1995，德国国家标准(DIN38412)和国际标准(ISO11348)。
发光细菌毒性测试方法是一个我国国家标准和ISO标准认证的，运用发光细菌Vibrio fischeri进行急性毒理测试。
发光细菌闪烁测试（flash test）是一个改良的方法用于测试含有固体和有色的样品。
上述两个系统包括化学发光检测仪（闪烁测试系统的发光仪必需有自动样品注射器），软件程序，试剂冷却/孵育器和冷冻干粉状态的测试用发光细菌。
生物重金属试剂盒是一个革命性地用于分析环境中少量样品的方法。
这些细菌能够特异性地感受到某种特定金属的存在，如来自固体和液体样品中ppb水平的铅、汞、砷和镉。
发光终点测试方法具有很高的灵敏度，快速和高通量进行。
发光细菌毒性测试
此方法是传统和标准的通过发光细菌方法来测试化合物或污水的毒性（GB/T 15441-1995，ISO 113483: 水质）测定水样对Vibrio fischeri <发光细菌测试>的光发射抑制效果。
这个测试方法是建立在此基础之上的――当有毒性的化合物存在时，细菌的发光量会降低。
这个方法非常快速，只需要5－30分钟就可以完成。
标准发光细菌的测试过程是：把样品和细菌混合在一起，经过短暂的孵育，测试发光强度。
检测仪器只需要化学发光仪（如Berthold Detection Systems管式或板式化学发光仪)。
检测系统包括仪器和试剂（冷冻干粉）。
细菌可以常温运送给客户。
生物发光毒性测试产品：
Berthold Detection Systems公司的化学发光仪
Kenreal TM生物毒性试剂盒
制冷恒温孵育器
分析软件
闪烁测试–改良的水样和沉淀物毒性快速测试
生物发光发光细菌广泛应用于测试水样和化学物质的急性毒性。
这个测试方法是标准认证的(EN ISO 11348)，目前已有几种商业化的测试系统。
测试样品与细菌混合孵育15 或 30分钟，在孵育后测试光强度，并与纯的细菌的发光强度比较。
光强度的降低认为是毒性。
这个方法是快速，它对有机污染物的特异性也非常高。
此方法主要的缺点是在大多数的自然样品中存在颜色和混浊会发散光，被认为有毒性。
校正颜色和混浊而引起的效果是费时，不方便和不可靠。
闪烁测试是一个改良的发光细菌生物毒性测试，设计用来测试固体样品。
这方法考虑到了在整个测试过程中的颜色和混浊。
测试以动力学的方式进行，一个可自动加样的化学发光仪能够同时进行加样和测试。
在V. fischeri细菌的闪烁测试中细菌通过自动加样器加到样品中，信号连续记录30秒钟。
在加样后立即收集到最大的信号值（Ipeak），与30秒后的信号值（I30s）相比。
对于大多数的化学物质，特别是有机的，毒性效果（光强度的减弱）在孵育几秒钟后就能观察到了。
然后对于一些化学物质只有在经过较长时间的孵育后才能观察到效果。
因此，在15或30分钟后的动力学数据可以提供可靠的结果。
上述描述的特点使得颜色/混浊校正方法不需要了，方便了在极短时间筛选大多数样品的毒性。
闪烁测试方法使用30秒的接触时间相比于标准方法钟的15到30分钟的接触时间稍降低了灵敏度。
当使用相同的接触时间，标准方法和闪烁方法的灵敏度是一样的。
它们的相关差异在1％以下。
样品测试体积在1ml以下，根据接触时间的长短此方法每小时可以进行40到80个样品的测试。
闪烁测试无毒性和有毒性样品的动力学数据
生物闪烁发光毒性测试产品：
Berthold Detection Systems公司的化学发光仪
Kenreal TM生物毒性试剂盒
制冷恒温孵育器
分析软件
以生物发光为基础的生物传感器检测重金属
通过遗传改造生物体使其能够特异性感受在环境样品中存在的重金属。
这些细菌菌株对“生物利用度”这个词赋予了全新的概念，因为现在测试毒性物质中的亚类毒性浓度成为可能。
相比于标准方法，它是非常快速，每天测试几百个样品成为可能。
目前可以提供测试汞和砷的试剂盒，将来会有更多。
这个方法可以在简单的管式化学发光仪上进行，也可以在板式化学发光仪上进行。
介绍:
• 整体细胞传感器检测来自不同样品（水样、沥出物、沉淀物和土壤样品）的重金属的生
物利用度组分
• 生物利用度表示一种金属可进入生物系统的浓度
• 在测定重金属毒性中的重要因素
• 不等于溶解度
• 用传统的化学方法很难测试，但是用生物传感器容易做到
• 非常灵敏的方法，比传统的毒性测试方法灵敏很多
测试原理：
环境条件下的细菌变化
--> 代谢反应
--> 可测试信号
--> 测读(发光)
-->
无重金属：荧光素酶合成受到抑制，
细菌发出很低的光信号；
有重金属：荧光素酶合成激活，
细菌发出高强度的光信号。
优势：
• 生物发光能够通过化学发光仪进行高灵敏地定量测试，动态范围宽
• 发光可以活体测试，细胞完整无缺
• 微生物生物传感器的一般优势
• 简单操作：传感器生物体以试剂盒形式（冻干）
• 高灵敏度 vs.背景 -> 化学发光仪
• 可以作为一个大量样品的筛选工具
• 相比于传统方法，成本具有很大优势
生物闪烁发光毒性测试产品：
Berthold Detection Systems 公司的化学发光仪
Kenreal TM 生物毒性试剂盒
制冷恒温孵育器
分析软件。