ThermoScientificGeneJET胶回收和DNA净化微型试剂盒
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产品信息Thermo Scientific GeneJET质粒小提试剂盒#K0502, #K0503批号有效期/fermentas分析证书根据本说明书第6页的提纯方法,使用Thermo Scientific GeneJET质粒小提试剂盒从大肠杆菌E.coli中提取pUC19 DNA 。
所提取DNA的质量已通过各种方法得到检测,包括DNA 纯度和浓度的分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳检测、Thermo Scientific快速限制性内切酶酶切检测以及自动测序检测。
质量授权人:Jurgita Zilinskiene目录页码试剂盒组成 (4)贮存和稳定性 (4)产品介绍 (4)基本原理 (4)重要提示 (5)缓冲液准备 (5)细菌培养 (5)提纯方法 (6)问题解决方案 (7)安全信息 (8)参考文献 (9)试剂盒组成贮存和稳定性GeneJET ™质粒小提试剂盒可在室温下(15-25℃)贮存12个月。
若需更长时间贮存,建议将试剂盒贮存于4℃条件下。
若贮存过程中缓冲液里出现沉淀物质,使用前需在37℃条件下进行重新溶解。
重悬液加入RNase A 后,在4℃条件下能使用6个月。
产品介绍GeneJET 质粒小提试剂盒旨在从重组大肠杆菌E.coli 中小规模的、快速的、高效的提取高质量的质粒DNA 。
试剂盒使用了基于硅膜技术的离心柱。
每一个GeneJET 离心柱可回收多达20 µg 质粒DNA 。
同时试剂盒能用于任何大小质粒和粘粒的高效纯化。
实际的质粒产量以及最优的细菌培养体积取决于质粒的拷贝数和所用的培养基。
基本原理细菌细胞经过重悬,加入SDS 碱性裂解液后,细胞释放出质粒DNA 。
中和得到的裂解液,便形成适合质粒DNA 结合到离心柱硅膜的条件。
通过离心除去细胞碎片和SDS 沉淀物,将含有质粒DNA 的上清加入离心柱。
结合于膜上的DNA 通过漂洗以除去污染物,最后使用少量的洗脱液(10 mM Tris-HCl ,pH 8.5)将膜上的质粒DNA 洗脱出来。
天根切胶回收说明书
天根切胶回收试剂盒说明书
一、产品简介
天根切胶回收试剂盒是一种高效的DNA片段回收试剂盒,能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段。
该试剂盒采用独特的吸附技术,能够有效地去除凝胶中的杂质,纯化DNA片段。
回收的DNA片段可用于后续的克隆、测序、PCR等实验。
二、产品特点
1. 高效回收:能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段,回收率高达90%以上。
2. 纯度高:能够有效去除凝胶中的杂质,纯化DNA片段,提高后续实验的准确性和可靠性。
3. 操作简便:采用独特的吸附技术,无需使用有机溶剂,简化了操作步骤。
4. 稳定性好:试剂盒中的成分稳定,便于长期保存和使用。
三、使用方法
1. 准备凝胶和电泳缓冲液:将凝胶和电泳缓冲液按照要求准备妥当。
2. 切胶:按照实验要求将凝胶切成适当大小的胶块。
3. 洗涤:将切好的胶块放入离心管中,加入适量的洗涤液,充分混匀,洗涤去除凝胶中的杂质。
4. 吸附:将洗涤后的胶块放入吸附柱中,按照说明书要求进行吸附操作。
5. 洗脱:将吸附后的DNA片段进行洗脱,收集洗脱液。
6. 检测:对回收的DNA片段进行检测,如琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测。
四、注意事项
1. 使用前请仔细阅读本说明书,确保按照说明书要求正确操作。
2. 本试剂盒仅供实验室使用,请勿用于食品、药品等领域。
3. 使用过程中请注意安全,避免直接接触眼睛、皮肤和衣物等。
如不慎接触到皮肤或眼睛,请立即用清水冲洗,并及时就医。
4. 本试剂盒中的试剂和耗材均为一次性使用,用后请及时处理废弃物。
爱思进胶回收说明书
爱思进胶回收试剂盒的使用说明书如下:
1. 制备琼脂糖凝胶电泳:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据Marker 判断PCR产物的大小是否符合要求。
2. 切胶:切下包含目的片段的凝胶,尽量切去上下两端的凝胶,以减少非特异性产物的影响。
3. 胶的融化:将切下的凝胶放入一个离心管中,加入适量的胶融化液,使凝胶完全溶解。
4. 洗涤:将凝胶溶液加入一个离心柱中,离心柱的管底会有一个膜,可以吸附凝胶中的DNA片段。
然后加入洗涤液,将离心柱离心,去除残留的胶融化液。
5. 洗脱:加入适量的洗脱液,离心柱离心,将DNA从膜上洗脱下来。
6. 检测:取洗脱液进行电泳检测,观察电泳结果是否包含目的片段。
以上是爱思进胶回收试剂盒的使用说明书的大致步骤,由于不同版本的产品可能存在差异,因此建议在使用前仔细阅读说明书或咨询专业人士。
北京四正柏生物科技有限公司网站: 客服热线:400-7060-959技术支持:DNA 凝胶回收试剂盒产品编号规格MDN3066-5050次MDN3066-100100次保存条件及效期:常温运输和保存,保质期一年。
产品描述:本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA 反应体系中(如PCR 反应)回收DNA 片段。
试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅胶膜和独特的溶胶体系,或DNA 反应体系中回收的单链、双链及环状DNA ,回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。
得到的DNA 可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。
产品组分:使用方法:1.凝胶回收:切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶(100mg 左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入一干净的1.5ml 塑料离心管(自备)中,用移液枪头捣碎,按重量比为1:3到1:5的比例加入通用溶胶液(100mg 琼脂糖凝胶需要加入300μl-500μl 通用溶胶液)。
PCR 产物回收:直接在PCR 反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液,混匀,然后跳过第2步、直接从第3步做起。
如果PCR 反应中使用了石蜡,需要预先去除。
2.50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟),其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
如果片段长度在300bp 成份50次包装100次包装通用溶胶液25ml 50ml 吸附柱活化液25ml 50ml 通用洗柱液50ml 100ml 离心吸附柱50套100套DNA 洗脱液10ml 10ml 说明书1份1份以下,建议不要加热,以免DNA变性,影响回收率。
3.在等待期间,活化离心吸附柱。
在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液,套上收集管后室温放置2分钟,然后12,000rpm离心2分钟,倒弃穿透液,再将吸附柱套上收集管后待用。
活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4.在上柱前,在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇(对100mg胶块,加50uL),快速振荡10秒混匀。
RevertAid第一链cDNA Synthesis试剂盒#K1621, #K1622分析证明书质量控制#K1621Lot采用100 fg对照GAPDH RNA和对照引物进行RT-PCR反应,通过在1%琼脂糖上进行凝胶电泳和溴化乙锭染色显示得到足够量的496 bp的产物质量认证人:Jurgita Zilinskiene目录页码试剂盒组成 (2)存储条件 (2)产品说明 (2)注意事项 (3)操作步骤 (6)RT-PCR (6)合成cDNA用于克隆………..………………………………………7 实验对照……………………………………………………………….8 问题分析与解决 (10)** 一个单位的RiboLockRNase酶抑制剂抑制5ng RNA酶A 50%的活性。
存储条件试剂盒中所有组分应存储在-20°C。
对照用RNA可存储于-70°C以便长期使用。
产品说明RevertAid第一链cDNA合成试剂盒以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。
本试剂盒使用RevertAid M-MuLV反转录酶,它的RNA酶H的活性与AMV反转录酶相比较低。
该反转录酶可耐受42-50°C温度,合成的cDNA片段长度达13kb。
试剂盒中含有RiboLock 重组RNA酶抑制剂,防止RNA降解,可耐受55°C高温。
试剂盒同时含有oligo(dT)18和随机六聚体引物。
随机六聚体引物与模板非特异性地结合,以总RNA中任何RNA为模板合成cDNA。
oligo(dT)18选择性和RNA 3’po ly(A)配对结合,只以有poly(A)尾巴的mRNA为模板合成cDNA。
使用本试剂盒也可采用序列特异性引物。
合成的第一链cDNA能直接用作PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验,比如将标记好的第一链cDNA 作为杂交实验中的探针或者用于微阵列分析。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理首先,将含有目标DNA片段的琼脂糖凝胶切割出来。
这可以通过电泳将DNA片段从DNA混合物中分离出来,然后在紫外灯下观察到DNA片段的迁移带。
然后,将切割的琼脂糖凝胶用试剂盒提供的缓冲液进行均质化处理。
均质化后的琼脂糖凝胶中含有目标DNA片段。
接下来,使用离心机将均质化后的琼脂糖凝胶离心。
离心的目的是将琼脂糖凝胶上的DNA片段分离出来。
DNA片段会沉积到离心管底部的沉淀中。
上清液中则只含有琼脂糖凝胶、缓冲液和其他杂质。
然后,将离心管中的上清液去除。
去除上清液的目的是除去琼脂糖凝胶的残余和其他杂质,以便纯化DNA片段。
最后,向离心管中加入酶切缓冲液和蛋白酶。
酶切缓冲液包含酶切DNA片段所需的盐和缓冲成分,以及一些防止核酸降解的物质。
蛋白酶则会降解琼脂糖和与其结合的蛋白质。
在将酶切缓冲液和蛋白酶加入后,离心管需要在适当的温度下进行酶切反应。
酶切反应的目的是分解凝胶中的琼脂糖和与其结合的蛋白质,从而释放出目标DNA片段。
在酶切反应完成后,离心管需要再次进行离心,以将琼脂糖和其他残留物沉淀到离心管底部。
上清液中则含有纯化后的DNA片段。
最后,将离心管中的上清液转移至干燥消化DNA纯化膜(试剂盒中提供),并根据试剂盒的说明进行后续的DNA回收操作。
根据不同试剂盒的要求,DNA可以通过洗涤、低温离心或其他方法进行最终的回收。
总的来说,胶回收DNA试剂盒的原理是通过离心法和蛋白酶酶解法将凝胶上的目标DNA片段回收,以获得纯化后的DNA样品。
这一方法简单有效,可以应用于分子生物学和生物医学研究中的DNA分析和操作。
胶回收目的基因一、平衡柱子1.取一个新的Hibind DNA结合柱装在收集管中,吸取合适体积的Buffer GPS 平衡缓冲液(具体见下表)至柱子中;小量提取200ul中量提取1ml大量提取3ml2.室温放置3-5min。
3.室温下,12,000转离心2min或3,000转离心5min。
4.倒弃收集管中滤液,将Hibind DNA柱子重新装在收集管中;加入700ul(Minicolum),4ml(Midi column)或10ml(Maxicolumn)灭菌水至柱子中。
5.室温下,按上述条件离心;6.倒弃收集管中滤液,将Hibind DNA柱子重新装在收集管中;这就是已经平衡好的柱子,按试剂盒说明书进行操作。
该流程处理过的柱子,可室温放置1-2周。
二、胶回收目的基因1.琼脂凝胶电泳回收DNA目的片段时,使用新鲜的TBE电泳缓冲液,重复使用影响PH值和回收产量。
2.小心切除目的片段。
3.将目的片段称重后放入1.5ml离心管中,凝胶重为0.1g,其体积可视为100ul,添加与等体积的绑定缓冲区(XP2)。
孵化混合物在55 - 60摄氏度7分钟或直到凝胶完全融化。
混合摇动或倒置管每2 - 3分钟。
离心管收集所有液体到试管底部。
注意:pH值影响完全溶凝胶后的凝胶/绑定缓冲混合物。
DNA产量将明显降低pH值>8时。
如果混合物的颜色变成橙色或红色,加上5ul 5m的醋酸钠;pH值为5.2时,将pH值下降。
调整后, 凝胶/绑定缓冲区混合物的颜色是淡黄色。
4.将Hibind DNA结合柱装在合适的收集管中(2ml);5.向HiBind®DNA结合柱加入700ul的DNA/agarose solution(DNA /琼脂糖溶液),在室温10,000转离心1min;6.倒弃收集管中的废液,HiBind®DNA结合柱容量超过700ul,可以收集25ug左右的DNA,如量多可分开回收。
7.向HiBind®DNA结合柱中加入300ul Binding Buffer(XP2),在室温10,000转离心1min;8.向HiBind®DNA结合柱中加入700ulSPW,在室温放置1-2min,再10,000转离心1min;倒弃废液;注:spw使用前加入无水乙醇。
保存和稳定性:试剂盒要保存在室温下(15-25度)。
建议将纯化柱保存在4度,可储存多于一年。
任何在保存过程中产生的沉淀都可以在37度恒温中溶解,然后在使用之前冷却至室温。
说明书The GeneJET™Gel Extraction Kit,设计的目的是从在TAE 或者TBE缓冲液里电泳的标准或者低熔点的琼脂糖凝胶中,高效快速回收纯化DNA片段。
这个试剂盒以便利的旋转层析柱的基础上,应用了基于二氧化硅薄膜的专利技术。
试剂盒可以用于纯化20-25bp大小的DNA片段。
在100bp–10kb DNA 片段大小范围内,回收率提高到95%。
每个GeneJET 纯化柱可纯化高达25μg DNA,可用高达1克的琼脂糖凝胶。
整个过程只用15分钟,分离的DNA片段将用于普遍的下游应用,包括连接反应,限制性设计,PCR,测序和分子标记。
原理:目的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后分割,将其置于微型离心管中,用Binding Buffer 溶解后上柱,Binding Buffer中的促溶剂可以溶解琼脂糖,变性蛋白质,促进DNA结合到层析柱的硅膜上。
另一点方便的是,Binding Buffer中含有颜色指示剂,可以检测DNA结合最好时的溶液PH,杂质经过简单的清洗步骤就可以去除。
纯化的DNA用Elution Buffer 从层析柱中洗脱出来,回收的DNA可用于下游应用。
重要的注意事项:2、加入乙醇后,在盒子的复选框中标记,以注明完成的步骤。
3、每次用之前,检验Binding Buffer是否生成沉淀。
假如有沉淀,将溶液置于37度使其溶解,然后冷却至25度。
4、用Binding Buffer时要带手套,因为里面含有刺激性物质。
5、当提取的DNA直接用于测序时,不能使用重复利用的电泳缓冲液。
额外的材料和需要的设备:96-100%乙醇异丙醇3 M醋酸钠,PH5.2(可能不用)微型离心机1.5或2毫升微型离心管加热器或水浴锅开始前多注意事项:1、开始操作前阅读注意事项。
PCR或酶切产物凝胶回收试剂盒说明书
【试剂盒简介】
本试剂盒将可以特异结合DNA的高性能磁性复合微球与独特的溶液系统有机结合在一起,适合从各种电泳凝胶(TAE或TBE)中提取线性DNA(70 bp-10 Kb),回收率在60-90%以上,本试剂盒还可从凝胶中回收质粒。
纯化后的线性DNA保持完整的生物活性,适用于多种用途,如:连接、体外转录、PCR、测序、Southern 杂交、微注射等分子生物学研究。
本试剂盒结合自动化设备,可以实现DNA琼脂糖凝胶回收的高通量、自动化提取。
【试剂盒组成】
Cat. No. YR03009-01YR03009-02YR03009-03
制备次数 50次100次200次
Lysis-Binding Buffer 20mL40mL120mL
Wash Buffer W1 70mL140mL400mL
Magnetic beads 1mL2mL4mL
Elution Buffer 2.5mL5mL10mL
使用说明书1份1份1份
【贮藏与有效期】
所有试剂室温保存,有效期为一年。
【操作步骤】请与我公司联系。
【经销商】深圳市易瑞生物技术有限公司
Shenzhen Bioeasy Biotechnologies Co., Ltd.
地址:深圳市宝安区西乡街道桃花源科技创新园11号研发中心邮编:518102
电话:**************************传真:*************
电子邮件:********************公司主页:。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理胶回收DNA试剂盒是一种常用的分子生物学实验工具,用于从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的方法。
其原理主要基于琼脂糖凝胶电泳的分离特性和DNA与硅胶膜亲和吸附的原理。
下面将详细介绍胶回收DNA试剂盒的原理和方法。
1.原理:1.1琼脂糖凝胶电泳分离:首先,将DNA样品与琼脂糖混合并加热使其溶解后,将混合物加入琼脂糖凝胶槽中,随后进行电泳。
由于琼脂糖具有分子筛的特性,DNA分子根据大小被分离在凝胶中的不同位置。
1.2硅胶膜吸附:电泳结束后,将琼脂糖凝胶取出,然后将硅胶膜放置在凝胶表面,使其与DNA分子接触。
由于硅胶膜具有强烈的亲和吸附性,它能够有效地吸附DNA分子。
1.3洗脱纯化:在硅胶膜上吸附的DNA分子可以通过洗脱的方式从硅胶膜上释放出来。
一般情况下,通过使用适当的缓冲液可以将DNA洗脱出来,得到纯化的DNA样品。
2.方法:2.1样品制备:将待分离和纯化的DNA样品进行适当的制备处理,如酶切产生的片段、PCR扩增产生的产物等。
根据需要,可以使用酶切缓冲液、PCR停止液等添加剂来优化样品的制备。
2.2琼脂糖电泳:将样品加入琼脂糖凝胶槽中,通过电泳操作进行DNA分离。
根据需要,使用适当的电泳缓冲液和电泳条件来获得所需的分离效果。
2.3硅胶膜吸附:电泳结束后,取出琼脂糖凝胶,将硅胶膜放置在凝胶表面,使其与DNA分子接触。
根据实验要求,可以根据需要对硅胶膜进行预处理,如加热、孵育等。
2.4洗脱纯化:通过使用适当的洗脱缓冲液,将硅胶膜上吸附的DNA 洗脱出来。
通常,洗脱缓冲液中包含盐和其他成分,以提高DNA的纯度和回收率。
2.5最终保存:将洗脱的DNA样品进行适当的保存和处理。
根据实验需求,可以进行浓缩、冻干或直接用于后续实验。
总结:胶回收DNA试剂盒通过利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA,并利用硅胶膜的亲和吸附性,实现了从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的目的。
这种方法简便易行,能够在短时间内获得高质量的DNA样品,广泛应用于分子生物学研究和实验室应用中。
凝胶DNA 回收试剂盒说明书产品组成凝胶DNA回收试剂盒Cat. No. 5次样品200100550次制备2001050250次制备2001250核酸纯化柱2 ml离心管1.5 ml离心管Buffer GBuffer WSBuffer WG(浓缩液)Buffer TE说明书5个5个5个3 ml3 ml2.4 ml0.5 ml1份50个50个50个30 ml30 ml24 ml5 ml1份50个×550个×550个×5150 ml150 ml72 ml ×225 ml1份产品储存与有效期产品如果储存于室温(15~25℃),可在两年内保持使用性能无明显变化;如果将产品储存于2~8℃,可延长产品的有效期至两年以上。
技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部:e-mail: *******************,电话:400-0099-857。
产品介绍本试剂盒采用了柱纯化的原理,适合从多至400mg琼脂糖凝胶中回收DNA (70bp-10kb),回收率为70~85%。
溶胶试剂为不含碘化钠的温和溶解液,确保回收的DNA 保持片断完整性和高生物学活性,回收的DNA可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
用户需自备的试剂与物品1.无水乙醇2.1.5ml离心管、移液器及吸头3.一次性手套、纸巾及防护用品4.台式小量离心机(可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子)使用前准备1)如果离心机有制冷功能,请将温度设置到25℃。
2)根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WG中加入无水乙醇,并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。
3)将水浴锅的温度设置为50°C。
4)可能需要使用3 M 醋酸钠(pH 5.0)及异丙醇。
操作步骤1)在紫外灯下将含有DNA片段的琼脂糖凝胶切下,转移到一个自备的1.5 ml 离心管中。
* 尽量减少多余的凝胶体积,可缩短溶胶时间。
DNA凝胶回收试剂盒50TCat#:GV-GX-50本试剂盒可从各种浓度琼脂糖凝胶中回收DNA片段,不含盐、蛋白质、RNA等杂质。
500bp以上片段,回收率80%以上,200bp~500bp回收率70%以上,100bp~200bp回收率60%。
可回收单链、双链DNA 片段以及环状质粒DNA。
本试剂盒采用一种独特的平衡液处理吸附膜,该试剂能够激活硅基质膜,改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性,专一吸附DNA的作用,同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
1试剂盒组成、储存、稳定性成分规格注意事项Buffer GA60mlBuffer BL12mlWash buffer13ml使用前加入52ml无水乙醇Elution4ml离心柱50个单个最大吸附量20μg1.5ml离心管50个说明书1份Buffer GA:溶胶液。
室温密闭贮存。
若出现沉淀,应于65℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer BL:平衡液,平衡液的加入能够激活硅基质膜,改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性,专一吸附DNA的作用,同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
Wash buffer:去盐液。
使用前,第一次使用前根据瓶上指定的体积加入无水乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。
Elution:10mM Tris-HCl,pH8.0。
室温密闭贮存。
二、注意事项1:将洗脱液或双蒸水加热至65℃,有利于提高洗脱效率2:DNA呈酸性,建议在10mM Tris-HCl,pH8.0洗脱液中保存3:用平衡液处理过的柱子最好当天使用,放置时间过长会影响效果4:在步骤1中,将凝胶切成细小的碎块可大大缩短溶胶时间(线型DNA长时间暴露在高温条件下易水解),从而提高回收率。
勿将含有DNA的凝胶长时间暴露在紫外灯下,减少紫外线对DNA造成的损伤。
三、实验前试剂准备Wash buffer第一次使用前加入52ml无水乙醇。
DNA的凝胶回收一、琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法介绍:1.柱回收试剂盒:可谓目前最简单快速的回收方法,只需要将电泳凝胶中的产物条带切下,用溶解Buffer彻底溶解,上包埋有纯化填料的纯化柱,离心,再洗涤一次,离心后用洗脱缓冲液洗脱。
全程不过10多分钟,得到的产物溶液可以直接用于后继实验。
这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果,也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。
但是这个方法不适合用于大片段的回收。
2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒:这个方法比前面的方法更为灵活,可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量,使得实验不受限于柱子的载量,也不会造成浪费。
前面的操作步骤和上者一样,将电泳凝胶的条带切下,B uffer溶解,(区别在于这里)加入纯化填料吸附混合,快速离心沉淀去上清,洗涤沉淀后,干燥沉淀,最后用洗脱液纯化介质中吸附的片段释放出来,离心,取上清,就是回收的产物。
这个方法适合各种不同大小的片段,特别是大片段的回收,但是操作就较前者复杂一些,涉及到多次离心沉淀和取上清,有可能会误吸了微量的沉淀;另外干燥的程度也有点技巧,干过了不好洗脱,没干透又影响结果。
后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上,这种柱子不带纯化填料,只有一层过滤膜,离心过滤后,填料在柱子里,溶液被甩掉,这样就避免了上述的问题。
3.低熔点琼脂糖:传统手工操作方法之一,低熔点琼脂糖制备凝胶,电泳后切割目的条带,在TE溶液中65度保温融化,用传统的酚氯仿抽提,乙醇沉淀。
这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂,由于乙醇沉淀需时较长,而且低熔点琼脂糖价格较高现在用的人已经不多了,除非用于大片段的回收。
4.透析带电洗脱法。
切下的条带放在充满TAE的透析带中再电泳一段时间,让DNA走出凝胶,走向溶液中,再反向电泳一会儿,将附在透析带上的DNA赶回溶液中,取溶液部分,再用TAE洗洗袋子,合并溶液后传统方法酚抽沉淀,那块胶通常还要再染色看看残留。
保存和稳定性:试剂盒要保存在室温下(15-25度)。
建议将纯化柱保存在4度,可储存多于一年。
任何在保存过程中产生的沉淀都可以在37度恒温中溶解,然后在使用之前冷却至室温。
说明书The GeneJET™ Gel Extraction Kit,设计的目的是从在TAE 或者TBE缓冲液里电泳的标准或者低熔点的琼脂糖凝胶中,高效快速回收纯化DNA片段。
这个试剂盒以便利的旋转层析柱的基础上,应用了基于二氧化硅薄膜的专利技术。
试剂盒可以用于纯化20-25bp 大小的DNA片段。
在100bp–10kb DNA 片段大小范围内,回收率提高到95%。
每个GeneJET 纯化柱可纯化高达25μg DNA,可用高达1克的琼脂糖凝胶。
整个过程只用15分钟,分离的DNA片段将用于普遍的下游应用,包括连接反应,限制性设计,PCR,测序和分子标记。
)原理:目的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后分割,将其置于微型离心管中,用Binding Buffer 溶解后上柱,Binding Buffer中的促溶剂可以溶解琼脂糖,变性蛋白质,促进DNA结合到层析柱的硅膜上。
另一点方便的是,Binding Buffer中含有颜色指示剂,可以检测DNA结合最好时的溶液PH,杂质经过简单的清洗步骤就可以去除。
纯化的DNA用Elution Buffer 从层析柱中洗脱出来,回收的DNA可用于下游应用。
重要的注意事项:2、加入乙醇后,在盒子的复选框中标记,以注明完成的步骤。
3、每次用之前,检验Binding Buffer是否生成沉淀。
假如有沉淀,将溶液置于37度使其溶解,然后冷却至25度。
4、用Binding Buffer时要带手套,因为里面含有刺激性物质。
5、当提取的DNA直接用于测序时,不能使用重复利用的电泳缓冲液。
~额外的材料和需要的设备:96-100%乙醇异丙醇3 M醋酸钠,(可能不用)微型离心机或2毫升微型离心管加热器或水浴锅开始前多注意事项:1、开始操作前阅读注意事项。
凝胶DNA回收试剂盒使用说明一、试剂盒组成1.碱性ELUTION缓冲液:用于回收DNA片段。
2.DNA绑定胶柱:用于吸附DNA片段。
3.洗涤缓冲液:用于去除琼脂糖凝胶残渣和其他杂质。
4.电子式试剂盒设备:用于快速洗脱DNA片段。
二、凝胶DNA回收试剂盒使用步骤1.准备工作:a.将碱性ELUTION缓冲液加热至65℃,并保存在试剂盒中。
b.手套和面具是使用过程中必需的,以确保实验环境的干净。
c.严格遵守实验室的安全操作规程。
2.凝胶切割:a. 切割需回收的DNA片段:将琼脂糖凝胶切割为片段大小约为50-5000 bp的目标DNA。
b.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入微量离心管中,注意不要弄混不同大小的DNA片段。
c.记录每个DNA片段的位置和大小。
3.DNA回收:a.将切割好的琼脂糖凝胶片段放入DNA绑定胶柱中。
b.将绑定胶柱放入收集管中,通过离心将DNA片段吸附到胶柱上。
c.倒掉废液,并使用洗涤缓冲液洗脱胶柱上的残驻琼脂糖凝胶和其他杂质。
重复此步骤1-2次以确保彻底洗脱。
4.DNA洗脱:a.将洗柱放回空的收集管中。
b.加入预热的碱性ELUTION缓冲液(65℃),封闭试管盖,并放入电子式试剂盒设备中。
c.按照设备操作说明进行启动,并设置相应的洗脱温度和时间。
d.在洗脱完成后,将洗脱液转移到新的离心管中。
可以使用适当的方法(如乙醇沉淀或其他纯化方法)进一步纯化DNA。
5.质量检测:a.使用电泳进行质量检测,以确认回收的DNA片段大小和纯度。
b.如果需要,可以定量将DNA溶液保存在冰箱中以备后续实验使用。
三、注意事项1.使用前确保熟悉试剂盒的组成和使用步骤。
2.使用过程中务必佩戴手套和面具,确保操作环境的洁净。
3.严格按照试剂盒的说明进行操作,并遵循实验室的安全操作规程。
4.需要注意的是,琼脂糖凝胶切割和回收过程极易受到外源DNA污染,因此要确保实验环境的洁净,并尽量避免不必要的接触。
5.回收的DNA片段应尽快进行下一步的实验处理,以避免DNA降解和污染。