菌落总数测定

国标菌落总数检测方法引言：菌落总数是指在一定的培养条件下，菌落形成的数量。

菌落总数检测是食品微生物检验中的一个重要指标，用于评估食品中微生物的污染程度和卫生质量。

本文将介绍国标菌落总数检测方法的步骤和原理。

一、国标菌落总数检测方法的步骤国标菌落总数检测方法主要包括样品制备、平板计数和结果计算三个步骤。

1. 样品制备需要准备好待测样品。

样品通常是食品、水或其他物质，可以是液体或固体。

将样品称取一定的量，然后按照一定的比例与适量的生理盐水进行稀释，以降低样品中菌落的数量，使其适合于后续的菌落计数。

2. 平板计数将制备好的样品溶液均匀地倒入已经凝固的琼脂平板中，然后用无菌铲子或无菌玻璃棒将溶液均匀涂抹在琼脂平板表面。

待琼脂凝固后，将平板倒置放置在恒温培养箱中，以利于菌落的生长。

根据不同的样品特点和需求，可以选择适当的培养温度和时间。

3. 结果计算在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。

在菌落形成后，使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。

计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。

最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。

二、国标菌落总数检测方法的原理国标菌落总数检测方法基于微生物在适宜的培养条件下形成可见的菌落的特性进行。

其原理主要包括稀释平板法和菌落计数法。

1. 稀释平板法稀释平板法是菌落总数检测的一种常用方法。

通过将样品与一定量的生理盐水进行稀释，使菌落的数量适于计数。

然后将稀释好的样品均匀涂抹在琼脂平板上，使菌落在琼脂上生长形成可见的菌落。

根据样品的稀释倍数和计数得到的菌落数量，计算出菌落总数。

2. 菌落计数法菌落计数法是国标菌落总数检测方法的关键步骤。

在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。

然后使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。

计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。

最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。

三、国标菌落总数检测方法的应用国标菌落总数检测方法广泛应用于食品、饮用水、药品、化妆品等领域。

食品安全菌落总数测定菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。

菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。

菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

菌落总数检验工作中会遇到各种实验平板的菌落计数工作，如倾注法平板，螺旋接种平板，3M菌落总数测试纸片，滤膜法平板等。

因此要高效准确的进行各类平板的菌落计数并保存所有实验数据和图片，必须要求采用的自动计数仪器支持各类平板的自动分析。

迅数菌落分析仪器采用了菌落放大图象拍摄，高分辨率的1000万像素CCD数字成像技术和Colonfast 菌落智能识别技术。

在菌落自动计数方面，仪器可以快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、空气沉降法平板、螺旋接种平板、3M纸片的菌落自动计数和浓度计算，这个功能可以促进我们食品卫生检验中“菌落总数”测定项目的自动化；自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒，最小可以分辨的菌落直径可达 0.01mm；可构建专用计数模板以适应复杂实验室环境，计数误差控制在10%以内。

“迅数”是采用最多的菌落仪品牌。

食品行业适用标准：GBT 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验菌落总数测定需要进行菌落计数的行业有：疾病控制，卫生检验中心检验检疫局质量技术监督局大学：食品科学与工程微生物发酵免疫医学检验公共卫生科学院，研究机构环境监测部门自来水公司制药企业：生物制药，化学制药，抗生素企业化妆品企业食品企业：饮料、饮用水、乳品、保健食品、糕点糖果、膨化食品、食品添加剂、粮食及其制品、酒类、调味品、微生态、保健食品消毒剂、消毒器械：消毒剂；消毒器械；生物指示剂；化学指示剂；灭菌包装物一次性使用医疗用品：输注类；导管类；诊断、治疗器具类；透析器具类；麻醉器具类；手术巾、敷料类；护理器材类卫生用品：卫生巾；尿布；皮肤、粘膜卫生用品；隐形眼睛护理用品；其他的一次性卫生用品●大肠菌群计数传统的大肠菌群最可能数(MPN)法必须经过：初发酵实验，复发酵证实试验。

菌落总数测定菌落总数测定一、设备和材料250ML 锥形瓶3个 100ML烧杯1个250ML 量筒1个 1000ML烧杯1个15*150mm试管3个 1ML刻度吸管4个培养皿7个玻璃棒1个洗耳球剪刀1把药匙2个均质器天平（感量0.1g ）电炉酒精灯二、实验准备1、平板计数琼脂的配制用天平称取11.75g 培养基于锥形瓶中加入500ML 蒸馏水加热煮沸至完全溶解高温灭菌备用2、生理盐水取4.25g 氯化钠于大烧杯中加入500ML 蒸馏水溶解取225ML 生理盐水于锥形瓶中分别取9ML 生理盐水于3只小试管中将分装好的生理盐水进行高温灭菌3、灭菌：将均质杯、100ML 烧杯、刻度吸管、剪刀、洗耳球高温灭菌备用三、取样在提交的产品中随机抽取三箱，从每箱中随机抽取未打开包装的产品1袋~3袋，抽取不低于250g 的样品作为微生物指标检验试样。

四、检验程序五、操作步骤1、称取25g 样品，放人盛有225m 生理盐水的无菌均质杯内，800or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。

2、用1ml 无菌吸管吸取1:10 样品匀液1ml ，沿管壁缓缓注人9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。

3、换一只新的1ml 无菌吸管吸取1:100样品匀液1ml ，沿管壁缓缓注人9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:1000 的样品匀液。

4、将三个连续稀释梯度的样品原液在进行10倍递增稀释时，吸取1ml 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

同时，分别吸取1 ml生理盐水加入两个无菌平皿内作空白对照。

5、及时将15-20 ml冷却至46℃的平析计数琼脂培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

6、待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48±2小时。

菌落总数测定菌落总数测定一、茵落总数的概念和测定意义菌落(colony)是指细菌在固体培养基上发育而形成的能被肉眼所识别的生长物，它是由数以万计的相同细菌聚集而成的，故又有细菌集落之称。

菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，、所含能于某种周体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。

菌落总数主要是作为判定食品被细菌污染程度的标记，也可以应用这一方法观察食一中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态．以便对被检样品进行卫生学评价时提供科学依据．二、茵落总数测定的几项说明1．菌落总数的测定。

是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。

由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或ml检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。

2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。

3．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、PH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。

因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。

但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。

菌落总数的测定标准一、采样方案1.1 采样对象：本标准适用于各类食品、药品、化妆品等产品。

1.2 采样量：根据产品类型及实际需要，一般采样量为10-50g（mL）。

1.3 采样方法：用无菌采样器随机取样，然后将样品混匀，制成1:10的稀释液。

二、培养基2.1 选择培养基：使用国家规定的标准培养基，如营养琼脂、孟加拉红培养基等。

2.2 培养基配制：按照培养基说明书进行配制，加入适量添加剂以满足实验要求。

三、培养温度3.1 培养温度：菌落总数培养温度为36℃±1℃。

3.2 恒温培养：培养过程中需保持恒温，不得超过±2℃。

四、培养时间4.1 培养时间：菌落总数培养时间为48小时±2小时。

4.2 时间记录：记录每个平皿的培养时间，以获得准确的菌落计数。

五、结果报告5.1 计数方法：使用菌落计数器对各稀释度平皿进行计数，并记录每个稀释度的平均菌落数。

5.2 结果报告：根据平均菌落数计算出每克（mL）样品中的菌落总数，并按照规定格式填写结果报告。

六、精度要求6.1 重复精度：同一稀释度同一平皿的菌落数偏差不得超过10%。

6.2 仪器精度：菌落计数器的精度应符合国家相关标准要求。

七、空白对照7.1 空白培养基：取适量空白培养基放入恒温培养箱中，观察其是否受到污染。

7.2 空白样品：取适量空白样品（如无菌水）进行实验，观察其是否受到污染。

八、重复试验8.1 重复次数：同一批次样品至少进行两次独立实验，以验证实验结果的可靠性。

8.2 异常情况处理：如出现异常数据或不符合要求的数据，应重新进行实验或采用备用样品进行实验。

菌落总数测定菌落总数测定⼀、茵落总数的概念和测定意义菌落(colony)是指细菌在固体培养基上发育⽽形成的能被⾁眼所识别的⽣长物，它是由数以万计的相同细菌聚集⽽成的，故⼜有细菌集落之称。

菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表⾯积(clni)内，、所含能于某种周体培养基上，在⼀定条件下培养后所⽣成的细菌集落的总数。

菌落总数主要是作为判定⾷品被细菌污染程度的标记，也可以应⽤这⼀⽅法观察⾷⼀中细菌的性质以及细菌在⾷品中繁殖的动态．以便对被检样品进⾏卫⽣学评价时提供科学依据．⼆、茵落总数测定的⼏项说明1．菌落总数的测定。

是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成⼀个可见的单独菌落的假定为基础的。

由于检验中采⽤37℃于有氧条件下培养(空⽓中含氧约20％)，因⽽并不能测出每g或ml检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不⽣长，有特殊营养要求的⼀些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括⼀群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。

2．鉴于⾷品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因⽽在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，⽽应以单位重量、容量或表⾯积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。

3．每种细菌都有它⼀定的⽣理特性，培养时，应⽤不同的营养条件及其他⽣理条件(如温度、培养时间、PH、需氧性质等)去满⾜其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。

因此，要得到较全⾯的细菌菌落总数，应将检样接种到⼏种不同的⾮选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧⽓供应等。

但国家颁发的⾷品卫⽣标准对不同⾷品的菌落总数的规定，都是根据⽤普通营养琼脂进⾏需氧培养所得的结果确定的，因此在⾷品的⼀般卫⽣学评价中并不要⽤⼏种不同的⾮选择性培养基培养。

菌落总数的测定一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。

当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。

菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。

按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。

因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。

菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。

基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。

国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。

检验方法参见：GB4789.2-94《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。

菌落总数测定的步骤以菌落总数测定的步骤为标题，写一篇文章：菌落总数测定是微生物学实验中常用的方法之一，用于确定水样、食品样品或其他物质中的微生物菌落数。

下面将详细介绍菌落总数测定的步骤。

一、准备工作在进行菌落总数测定之前，首先需要准备好所需的实验材料和设备。

这些包括培养基、平板、培养皿、移液器、恒温培养箱、显微镜等。

二、样品处理1. 从待测样品中取一定量，如10毫升。

2. 将样品加入到含有适当培养基的培养皿中。

3. 使用移液器将样品均匀涂布在培养基表面。

三、培养条件1. 将涂有样品的培养皿放入恒温培养箱中。

2. 设置适当的温度和培养时间。

四、计数菌落1. 取出培养皿，使用显微镜观察培养基表面的菌落。

2. 通过目测或使用计数板等工具，对菌落进行计数。

五、计算菌落总数1. 根据所使用的培养皿和所涂布的样品量，计算菌落形成的单位。

2. 将计数结果乘以单位，得到菌落总数。

六、结果分析通过菌落总数测定，可以得到待测样品中的微生物菌落数。

根据菌落总数的大小，可以初步判断待测样品是否符合微生物质量标准。

需要注意的是，在进行菌落总数测定时，应注意以下几点：1. 实验操作要严格遵守无菌操作的要求，以避免外界微生物的污染。

2. 培养基的选择要根据待测样品的特性，以确保菌落的生长和形成。

3. 培养条件的控制要准确，包括温度、湿度、氧气浓度等。

4. 在计数菌落时，要注意避免重复计数同一个菌落，以保证结果的准确性。

菌落总数测定是微生物学中常用的定量方法之一，它可以快速、准确地确定待测样品中微生物菌落的数量。

通过合理的实验步骤和操作，可以得到可靠的结果，并为食品、水质等领域的微生物质量控制提供参考依据。