液相色谱_串联质谱法同时测定乳制品中14种雌激素及孕激素残留

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高效液相色谱串联质谱检测化妆品中糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素共22种禁用激素

53《轻工标准与质量》2019年第1期高效液相色谱-串联质谱检测化妆品中糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素共22种禁用激素朱海佩张亮张碧宇（温州市质量技术监督检测院，浙江温州 325000）摘要：建立了化妆品中糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素类共22种大范围禁用激素的电喷雾离子化-高效液相色谱-串联质谱分析方法。

化妆品试样用甲醇超声提取，提取液离心后取上清液加亚铁氰化钾和醋酸锌溶液沉淀大分子杂质，再次离心将上清液以Oasis HLB 固相萃取小柱净化，经Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱（2.1×150mm,2.7μm）反相色谱分离后在多反应监测MRM 模式下进行定性和定量分析。

结果表明，22种激素的检出限为0.1～27.4 μg/kg；该方法样品的平均添加回收率为72.4%～99.7%，相对标准偏差RSD 均小于10%。

关键词：化妆品；激素；电喷雾离子化-高效液相色谱-串联质谱分析法中图分类号：O657.63 TQ658 文献标识码：A DOI：10.19541/ki.issn 1004-4108.2019.01.011短期使用添加激素的化妆品可以防止皮肤老化，有除皱、增加皮肤弹性等作用，但长久使用也会导致色素沉积，皮肤萎缩变薄，甚至具有致癌性。

化妆品中激素物质的检验，对于控制化妆品产品质量安全，保障人们身体健康具有重要意义。

目前化妆品中激素的检测方法中，现行有效的国家标准有：《化妆品安全技术规范》，其中仅提供了雌三醇等七种组分的检测法；GB/T 24800.2—2009《化妆品中四十一种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法》也单是糖皮质激素的检测等。

由于化妆品基质复杂、激素种类繁多，增加了多种不同类别激素净化和检测的难度。

本研究应用电喷雾离子化-高效液相色谱-串联质谱仪建立化妆品中糖皮质激素（曲安西龙、曲安奈德、泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、醋酸泼尼松龙、氢化可的松、可的松、醋酸可的松、醋酸氢化可的松、倍他米松、地塞米松、醋酸地塞米松、丙酸氯倍他索、丙酸倍氯米松）、雌激素（雌二醇、雌三醇、雌酮、己烯雌酚）、雄激素（睾酮、甲基睾丸酮）、孕激素（黄体酮（孕酮））共22种禁用激素的测定分析方法，筛选更优化的前处理方法，实现对各类激素、多组分的快速准确测定。

化妆品中25种激素的检测方法

化妆品中25种激素的检测方法林黎;肖陈贵;欧阳姗;岳振峰;康海宁;葛丽雅;廖菁菁【期刊名称】《长沙理工大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(009)003【摘要】采用液相色谱-串联质谱法对化妆品中25种违禁激素进行了测定,探求了多种激素同时测定的条件.研究结果表明,样品通过饱和氯化钠溶液分散,乙腈从分散液中提取激素类药物,沉淀大分子物质后经固相萃取小柱净化,平均回收率为70.0%～110.0%,相对标准偏差2.1%～18.8%（n=10）,检测低限均为0.02mg/kg.%This study presented a method for determination of hormone residues in cosmetics by LC-MS.The residue of hormone in the test sample are extracted with solvent,purified by HLB cartridge,determined by LC-MS using external standard method.Mean recovery is 70.0%~110.0%,the relative standard deviation is 2.1%~18.8%(n=10),LOD is 0.02 mg/kg.【总页数】6页(P92-97)【作者】林黎;肖陈贵;欧阳姗;岳振峰;康海宁;葛丽雅;廖菁菁【作者单位】深圳市出入境检验检疫局,广东深圳518045;深圳市出入境检验检疫局,广东深圳518045;深圳市出入境检验检疫局,广东深圳518045;深圳市出入境检验检疫局,广东深圳518045;深圳市出入境检验检疫局,广东深圳518045;深圳市出入境检验检疫局,广东深圳518045;深圳市出入境检验检疫局,广东深圳518045【正文语种】中文【中图分类】O652.63【相关文献】1.化妆品非法添加激素检测方法研究进展 [J], 张秋炎;罗辉泰2.化妆品中激素和抗生素的检测方法研究进展 [J], 齐尚忠3.化妆品中性激素的检测方法研究进展 [J], 胡贝;李丽霞;刘红;黄伟;丁晓萍4.高效液相色谱-串联质谱检测化妆品中糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素共22种禁用激素 [J], 朱海佩[1];张亮[1];张碧宇[1]5.化妆品中邻苯二甲酸酯类环境激素检测方法研究 [J], 陈珠灵;黄瑜奎;王桂美;陈飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

液相色谱-串联质谱法测定牛奶中11种光引发剂残留量

Ｔｈｅａｎａｌｙｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｍｏｄｅｏｆｅｌｅｃｔｒｏ— ｓｐｒａｙｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ（ＥＳＩ），ｐｏｓｉｔｉｖｅｉｏｎｓｃａｎ，ａｎｄｍｕｈｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ
（深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心，广东深圳５１８０６７）
摘
要：建立了牛奶中ｌ１种光引发剂残留的定性和定量测定分析方法。样品经Ｃａｒｒｅｚ试剂沉淀蛋白质后，使用乙腈
提取，ＨＬＢ固相萃取柱净化，乙腈洗脱，洗脱液用氮气吹干后用５０％乙腈水溶液定容，采用液相色谱一串联质谱进行测定。
（ＦｏｏｄＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄＱｕａｒａｎｔｉｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒ，
ＳｈｅｎｚｈｅｎＥｘｉｔ —ＥｎｔｒｙＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎ＆ＱｕａｒａｎｔｉｎｅＢｕｒｅａｕ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ５１８０６７，Ｃｈｉｎａ）
江西农业学报
２０１３，２５（７）：９４～９７
ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＪｉａｎｇｘｉ
液相色谱一串联质谱法测定牛奶中１１种光引发剂残留量

生物基质中雌激素的液相色谱-串联质谱定量分析方法研究进展

雌激素含量较低的人群,如年长的男性、儿童和绝经后的女性。磁性固相萃取(MSPE)技术也开始应用于
[ ]
检测生物基质中的雌激素。Xi
ong 等 40 开发了一种 MSPE 方法,采用具有双十八烷基和 2
-氨基乙基3
-氨
基丙基(
C18/NH2-Fe3O4 @ mS
iO2 )官能团的磁性介孔 S
APCI
-MS)上的电离效率不
高 [45]。通过化学衍生可以在类固醇雌激素和酚类异雌激素上增加部分亲脂性基团,从而提高电离效率,
并增强质谱响应信号 [46,47]。
[ ,
]
丹磺酰氯(
Dansy
lCh
l
o
r
i
de,
DNS)是使用率最高的衍生化试剂之一,常用于雌激素的衍生 28 48-50 。该
α-雌二醇和
[
15,
16]
。目前,生物样本雌激素定量检测的的主要方法有酶联免疫
17
β-雌二醇),使得雌激素检测更加困难
[
[
[ ]
17-19]
20-22]
、放射免疫法 (
、气相色谱-质谱法 (
吸附法(
ELISA)
RIA)
GC-MS)23 及液相色谱-质谱法 (
杂食品样品中的痕量化合物进行分析具有良好的可行性和前景。
396
第3期
分析科学学报
第 37 卷
3 化学衍生-LC
-MS 与直接 LC
-MS 雌激素检测方法对比
3.
1 化学衍生与 LC

超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中的14种杀虫剂残留

超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中的14种杀虫剂残留周靓静;吴俐勤;申雪丽【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2017(053)006【摘要】采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定蜂蜜中的14种杀虫剂残留,并对自制的毒死蜱-D10同位素内标的适用性进行筛选.样品经乙腈提取,氨基净化柱净化后,以ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱为分析柱,甲醇-2 mmol·L-1甲酸铵溶液混合液为流动相进行梯度洗脱,质谱中选择电喷雾正离子源和多反应监测模式.经验证毒死蜱、噻螨酮、炔螨特、蝇毒磷、倍硫磷、伏杀硫磷、甲基嘧啶磷、甲基毒死蜱可用毒死蜱-D10作为内标进行定量,吡螨胺、哒螨灵、螺螨酯、乙螨唑、唑螨酯、杀螟硫磷则用基质匹配法定量.14种杀虫剂的线性范围为1.0～200 μg·L-1,检出限(3S/N)为0.01～0.20 μg·kg-1,测定下限(10S/N)为0.03～0.50 μg·kg1.加标回收率在81.9％～129％之间,测定值的相对标准偏差(n=6)不大于11％.【总页数】9页(P627-635)【作者】周靓静;吴俐勤;申雪丽【作者单位】浙江工业大学化学工程学院,杭州310014;浙江省农业科学院农产品质量标准研究所,杭州310021;浙江省农业科学院农产品质量标准研究所,杭州310021;浙江工业大学化学工程学院,杭州310014;浙江省农业科学院农产品质量标准研究所,杭州310021【正文语种】中文【中图分类】O657.63【相关文献】1.高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中9种农药残留 [J], ZHU Zhitong;LIU Han;NING Qianqian;ZHANG Jian;SHEN Weijian;CHEN Huilan;SHEN Chongyu;XIE Wen2.氧化锌QuEChERS/高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中7种林可酰胺类与大环内酯类兽药残留 [J], 杨明;刘坤;王冬梅;胡筱静;卢跃鹏;江小明;涂凤琴;伊鋆;陈丹;王梦颖;许晴;田甜;管卓龙;侯靖;周原3.高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中10种喹诺酮类药物残留 [J], 刘亿婕;高海荣;张聪;游菁菁;王秀云;陈亮;程琳4.固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中残留的酞丁安 [J], 王玉涵;王欣然;李熠;周金慧5.QuEChERS-高效液相色谱/串联质谱法同时测定蜂蜜中9种新烟碱类杀虫剂残留[J], 粟有志;李芳;齐鑫;史秀丽;王振宝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

液相色谱-串联质谱法测定液体乳制品中7种激素残留

液相色谱-串联质谱法测定液体乳制品中7种激素残留万春花;张云伟;黄优生;鄢兵;胡海山;刘廷华;熊文生【期刊名称】《现代科学仪器》【年(卷),期】2016(000)005【摘要】建立了液相色谱-串联四极杆质谱同时测定液体乳制品中雌二醇、雌三醇、雌酮、已烯雌酚、双烯雌酚、己烷雌酚和孕酮7种激素残留的快速测定方法.采用甲醇提取液体乳制品中待测定组分,提取液经离心、C18固相萃取柱净化、甲醇洗脱.在正、负电喷雾离子化多反应监测模式下检测7种激素,采用ZORBAX SB-C18(2.1×100mm,3.5μm)色谱柱,流动相为乙腈-5mmol/L乙酸铵溶液、乙腈-0.1％甲酸溶液,外标法定量.在该优化条件下,7种激素定量限(S/N≥1 0)为1μg/kg ～20μg/kg,方法回收率为77.2％～89.6％,相对标准偏差(RSD)为3.61％～ 8.49％.经测定多种市场上销售的液体乳制品,表明该方法操作简单、测定结果准确,可以用于液体乳制品中多种激素残留的快速测定.【总页数】5页(P83-87)【作者】万春花;张云伟;黄优生;鄢兵;胡海山;刘廷华;熊文生【作者单位】江西省分析测试研究所江西南昌 330029;江西省分析测试研究所江西南昌 330029;江西省分析测试研究所江西南昌 330029;江西省分析测试研究所江西南昌 330029;江西省分析测试研究所江西南昌 330029;江西省分析测试研究所江西南昌 330029;江西省分析测试研究所江西南昌 330029【正文语种】中文【中图分类】O657.63【相关文献】1.超高效液相色谱-串联质谱法测定乳制品中季铵盐类化合物残留 [J], 段国霞;张立佳;吕志勇;莫楠;李慧秀;刘丽君;李翠枝;胡雪2.液相色谱‐串联质谱法测定乳与乳制品中激素残留 [J], 陈雯青;任佳;马颖清3.超高效液相色谱-串联质谱法测定乳制品中咪唑苯脲残留量 [J], 刘友华4.超高效液相色谱-串联质谱法测定乳制品中苯并咪唑类药物及其代谢物的残留量[J], 陈思敏;吴映璇;蓝草;邹游;谢敏玲5.液相色谱-串联质谱法快速测定乳制品中5种激素残留 [J], 张云伟;黄优生;胡海山;鄢兵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

液相色谱-串联质谱法同时测定生鲜孚中四环素类和β-内酰胺类药物残留

抗生素类药物残留的测定方法有微生物法、薄层色
素、阿莫西林、苄青霉素、氨苄青霉素、苯唑西林、氯
唑西林、头孢氨苄、头孢噻呋标准品纯度均＞９７％（ＬａｂｏｒＤｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ公司产品），乙腈（色谱纯，迪马公司）；甲醇（色谱纯，迪马公司）；甲酸（分析纯）。
谱法、酶联免疫法、液相色谱法等，其中液相色谱质谱联用技术以其灵敏度高、多组分同时确证与定量
的特点，越来越被广泛的研究和采用。
本研究即采用液相色谱质谱联用技术同时测定
（中国农业科学院饲料研究所。北京１０００８１）
摘要：试验旨在建立了反相液相色谱一串联质谱法同时测定生鲜乳中四环素类和Ｂ一内酰胺类药物残留的方
法，可用于生鲜乳中四环素、金霉素、土霉素和强力霉素等４种四环素类和阿莫西林、苄青霉素、氨苄青霉素、苯唑西林、氯唑西林、头孢氨苄、头孢噻呋等７种一内酰胺类药物残留的同时测定。结果表明：ｌ１种化合物溶液浓度在１－８０ｇ／Ｌ有较好的线性关系，＞０．９９，方法的检出限在０．１— １Ｉｘｇ／Ｌ。苄青霉素的回收率较低，只有６０％左

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水、沉积物和生物样品中57种全-多氟化合物

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水、沉积物和生物样品中57种全-多氟化合物超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水、沉积物和生物样品中57种全/多氟化合物概要：全/多氟化合物（PFASs）是一类广泛存在于环境及生物体中的污染物，由于其高毒性、高生物蓄积性和长半衰期，对生态环境和人类健康造成潜在风险。

因此，对于这些化合物的快速、准确测定方法的发展至关重要。

本研究旨在开发一种超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）方法，以同时测定水、沉积物和生物样品中57种全/多氟化合物。

引言：全/多氟化合物是一类人工合成的有机污染物，由于其独特的物化特性，被广泛应用于防潮、阻燃、润滑等领域。

然而，由于全/多氟化合物的持久性、生物蓄积性和毒性，它们已成为全球环境污染的重要问题。

目前已经发现的全/多氟化合物超过3,000种，其中包括全氟烷基磺酸盐（PFASs）、全氟烷基胺盐（PFASAs）等。

这些化合物具有高度稳定性和生物传播性，即使在环境中存在很低的浓度，也可能对生态环境和人类健康产生潜在风险。

现有的全/多氟化合物分析方法主要包括气相色谱-质谱法（GC-MS）和液相色谱-质谱法（LC-MS）。

然而，由于PFASs的高亲水性和复杂的基质干扰，传统的液相色谱-质谱方法在样品净化和分离上存在一定的局限性。

因此，开发一种高效准确的测定方法具有重要意义。

方法：本研究选取了57种典型的全/多氟化合物作为目标分析物，包括全氟烷基磺酸盐、全氟烷基胺盐等。

样品净化采用固相萃取（SPE）方法，利用氟化硅固相胶囊柱对样品进行预处理。

色谱分析采用UPLC-MS/MS系统，为了提高色谱分离效果，选择C18色谱柱。

质谱采用电喷雾离子源（ESI）和正离子模式。

结果与讨论：经过方法优化，我们成功开发了一种UPLC-MS/MS方法，可以同时测定水、沉积物和生物样品中的57种全/多氟化合物。

该方法具有高灵敏度、高选择性和较低的方法检出限。

在水样中，该方法的平均回收率在70%-110%之间，相对标准偏差低于15%。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定化妆品中14种禁用着色剂

高效液相色谱-串联质谱法同时测定化妆品中14种禁用着色剂姜子波;任国杰;毛希琴;李春玲;张国翠;王灵芝【摘要】采用液相色谱-质谱联用法建立了同时测定化妆品中14种禁用着色剂(吖啶黄、酸性紫49、溶剂红49、溶剂蓝35、氯化四甲基副玫瑰苯胺、氯化五甲基副玫瑰苯胺、氯化六甲基副玫瑰苯胺、颜料橙5、颜料红53、苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、罗丹明B、分散黄3)的分析方法.待测样品经四氢呋喃分散,并对目标物进行提取后,用含有醋酸铵的甲醇-水混合溶液将基质析出,提取液离心过滤后,以10 mmol/L醋酸铵-乙腈作为流动相在Agilent poroshell 120 EC-C18(2.7μm,3.0mm×50mm)色谱柱上梯度洗脱进行分离,以色谱峰的峰面积用标准曲线外标法进行定量.在优化条件下,各目标物的线性范围为0.01～1.0 μg/mL,相关系数均大于0.999.14种禁用着色剂的定量下限为0.05～0.5μg/g.在低、中、高3个加标水平下,各目标物的回收率为85.4％～ 106.3％,相对标准偏差(RSD)均低于10％.方法准确、简便、灵敏、可靠,可用于化妆品中此14种禁用着色剂的定量测定.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2016(035)007【总页数】7页(P792-798)【关键词】化妆品;禁用着色剂;高效液相色谱-串联质谱法【作者】姜子波;任国杰;毛希琴;李春玲;张国翠;王灵芝【作者单位】大连市产品质量检测研究院,辽宁大连116630;大连市产品质量检测研究院,辽宁大连116630;大连市食品检验所,辽宁大连116630;大连市产品质量检测研究院,辽宁大连116630;大连市产品质量检测研究院,辽宁大连116630;大连市产品质量检测研究院,辽宁大连116630【正文语种】中文【中图分类】O657.63;TQ047.2着色剂是化妆品中起赋色及美化作用的重要原料，因此着色剂原料的质量对于化妆品的产品质量至关重要。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定化妆品中31种性激素

研究报告香料香精化妆品FLA VOUR FRAGRANCE COSMETICS 2021年2月第1期Feb. 2021, No.126广东省药品检验所，广东广州　510663………………………………………………李　静　周智明#高效液相色谱-串联质谱法同时测定化妆品中31种性激素采用高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS ），在多反应监测（MRM ）模式下，建立了同时测定化妆品中31种性激素的快速检测方法。

样品经饱和氯化钠溶液或正己烷分散后，用乙腈提取，亚铁氰化钾和醋酸锌沉淀大分子基质，采用LC-MS/MS ，选择ESI 离子源，使用CAPCELL CORE C18柱（2.1 mm × 100 mm × 2.7 μm ），以质量分数0.2%甲酸溶液-乙腈（ESI +）和质量分数0.2%氨水溶液-乙腈（ESI －）为流动相，流速0.3 mL/min ，柱温30 ℃，梯度洗脱，在多反应监测模式下进行定性定量分析。

结果发现：该方法中各组分的平均回收率为80.3% ~ 119.0%，相对标准偏差为0.6% ~ 8.4%。

方法检出限为0.2 ~ 1.0 μg/g ，在0.05 ~ 2.0 μg/mL 线性范围内，相关系数大于0.99。

该方法灵敏度高，专属性强，适用于化妆品中31种性激素的检测分析。

高效液相色谱-串联质谱法　化妆品　性激素　多反应监测Simultaneous Determination of 31 Sex Hormones in Cosmetics by High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry LI Jing ZHOU Zhiming #(Guangdong Institute for Drug Control, Guangzhou 510663, Guangdong, China)Abstract ： A rapid method for simultaneous determination of 31 sex hormones in cosmetics was established by using LC-MS/MS with the multi reaction monitoring (MRM) mode. After the sample was dispersed in saturated sodium chloride solution or n -hexane, it was extracted by acetonitrile, then, the macromolecules from matrix were precipitated with potassium ferrocyanide and zinc acetate, the chromatography was performed by LC-MS/MS method with ESI ion source, using a CAPCELL CORE C18 analysis column (2.1 mm × 100 mm × 2.7 μm) under gradient elution of 0.2% (mass fraction) formicacid solution acetonitrile(ESI +) and 0.2% (mass fraction) ammonia solution acetonitrile(ESI －) as mobile phase ，flow rate 0.3 mL/min, column temperature 30 ℃. The qualitative and quantitative analysis was carried out under the multi reaction monitoring mode. The results showed that the recoveries were between 80.3% and 119.0%，the RSDs ranged from 0.6% to 8.4%, the detection limits were 0.2-1.0 μg/g. In the linear range of 0.05-2.0 μg/mL, the correlation coefﬁcient was greater than 0.99. This method has high sensitivity and speciﬁcity, and it is suitable for the detection and analysis of 31 kinds of sex hormones in cosmetics.Keywords ：high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry cosmetics sex hormones multi reaction monitoring作者简介李静（1989—），女，本科学历，药师，从事药品和化妆品的质量研究。

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第 31 卷第 11 期 2012 年 11 月
分析试验室
Vol. 31． No． 11
30 ℃ ；流速： 0. 3 mL / min；进样量： 5 μL；流动相： A B 为乙腈；梯度洗脱程为 0. 2% （ V / V）甲酸水溶液， 55% ～ 58% B ； 2 ～ 4 min， B ； 4. 0 ～ 5. 0 序： 0 ～ 2 min， min， 58% ～ 90% B ； 5. 0 ～ 5. 1 min， 90% ～ 55% B ，保持 3 min。 C18 柱负离子模式：色谱柱： ZORBAX Extend（ 100 mm × 2. 1 mm， 3. 5 μm ）；柱温： 30 ℃ ；流速： 0. 3 mL / min；进样量： 10 μL；流动相： A 为 0. 1% （ V / V）氨水， B 为乙腈；梯度洗脱程序： 0 ～ 1. 0 min， 30% B ； 1. 0 ～ 1. 1 min， 30% ～ 42% B ； 1. 01 ～ 5. 0 min， 42% ～ 50% B ； 5. 0 ～ 5. 1 min， 50% ～ 30% B ，保持 3 min。 1. 5. 2 质谱条件电喷雾离子源（ ESI ）；正离子或负离子扫描模式；多反应监测（ MRM ）采集方
中图分类号： O657. 63 文献标识码： A 文章编号： 1000-0720 （ 2012 ） 11-076-06
近年来，奶粉安全事件频发，人们对婴幼儿奶粉中雌激素和孕激素是否超标的问题极为关切。我国农业部 176 号公告明确规定，禁止饲料和动物饮用水中添加己烯雌酚、雌二醇等雌性激素，炔诺醇、左炔诺孕酮、炔诺酮等孕激素，并在 235 号公告规定了己烯雌酚、醋酸甲羟孕酮等外源性激素物质在动物性食品中的最高残留限量为不得检出。尽管如此，不法养殖户为了提高奶牛产奶量而滥用雌因而建立一种同激素或孕激素的行为仍可能存在，时测定奶粉中雌激素和孕激素的方法就显得尤为重要。用于食品中激素残留检测的方法主要有气相 2 ］ MS）［1，质谱法（ GC及液相色谱质谱法（ LC色谱MS）
Chinese Journal of Analysis Laboratory 2012 － 11
第 31 卷第 11 期 2012 年 11 月
分析试验室
Vol. 31． No． 11
液相色谱 - 串联质谱法同时测定乳制品中 14 种雌激素及孕激素残留
Chinese Journal of Analysis Laboratory 2012 － 11
Tab． 1 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 * 定量子离子孕激素雌激素激素 E1 17 β － E2 E3 HES DES DIE 17 α － EE2 EB P 17 α － OHP MP CA MA MPA 表 1 14 种激素的质谱采集参数 Mass spectrometric acquisition parameters of 14 hormones 保留时间 t / min 5． 11 4． 26 1． 63 5． 91 5． 39 5． 52 4． 84 7． 03 4． 33 2． 19 2． 91 4． 33 4． 01 4． 44 离子化模式 ESI － ESI － ESI － ESI － ESI － ESI － ESI － ESI + ESI + ESI + ESI + ESI + ESI + ESI + 母离子 m/z 269． 1 271． 2 287． 2 269． 1 267． 1 265． 1 295． 4 377． 2 315． 2 331． 2 345． 5 405． 2 385． 2 387． 3 子离子 m/z 159． 0 ， 143． 0 * 183． 1 ， 145． 1
式；干燥气温度： 350 ℃ ；干燥气流量： 10. 0 L / min ；雾化气压力： 275. 8 kPa ；毛细管电压： 5 000 V ；分辨率： MS1 和 MS2 均为单位分辨率。各个化合物的质谱采集参数见表 1 。 1. 5. 3 测定方法在正、负离子模式的测定条件下，分别将样品溶液和基质匹配混合标准溶液注入液相色谱串联四极杆质谱仪进行测定，以基质匹配混合标准溶液中待测物的保留时间和两对质谱监测离子对为依据进行定性，以定量离子对的峰面积计算样品中相应待测物的含量。 2 结果与讨论 2. 1 质谱条件的优化雌激素类（除苯甲酸雌二醇）含有酚羟基适合 — 77 —
* 罗辉泰，黄晓兰，吴惠勤，钟巧莉，朱志鑫，黄
芳，林晓珊，邓
欣，马叶芬
（中国广州分析测试中心，广东省分析测试技术公共实验室，广州 510070 ）摘要：建立了乳制品中 8 种雌激素及 6 种孕激素残留的液相色谱串联质谱 ( LCMS / MS) 同时测定方法。奶粉样品用水溶解后加甲醇提取 ( 液态奶直接加甲醇提取) ，提取液加乙腈饱和正己烷除脂及亲水亲脂平衡固相萃取柱净化后， C18 色谱柱分离，采用 ZORBAX Extend分别在电喷雾正、负离子模式下以多反应监测( MRM) 方式测定。正离子模式下的流动相为 0. 2% 甲酸水溶液乙腈，负离 14 种激素在相应的浓度范围子模式下的流动相为 0. 1% 氨水乙腈。结果表明，内相关系数均大于 0. 99 ，方法的平均回收率为 61. 6% ～ 125. 1% ，相对标准偏差 ( RSDs) 为 1. 9% ～ 20% ， S / N = 3 ) 和定量限 ( LOQ， S / N = 10 ) 分别检出限( LOD，为 0. 1 ～ 1. 5 μg / kg 及 0. 3 ～ 5. 0 μg / kg。关键词：液相色谱串联质谱; 固相萃取; 雌激素; 孕激素; 液态奶; 婴幼儿奶粉; 乳制品
［3 ～ 10 ］
留检测的首选方法。［11 ， 12］，目前，尽管已有激素多残留检测标准，不适用于基质复或者涉及种类较杂的婴幼儿配方奶粉等乳制品，但检测对象为动物源性食品少
［12］［11］
，无法满足检测需要；文献报道的方法大多［1 ， 4 ～ 6］［3］只涉及部分雌激素或孕激素，而常用的外源性雌激素苯甲酸雌二醇因其性质特殊，较难同时测定，本文在现有文献和标准的基础上，通过优化样品前处理条件及色谱质谱条件，建立了正负离子模式分别测定奶粉中包一次同时提取、括苯甲酸雌二醇在内的 14 种雌激素和孕激素的可为液态奶及婴方法。方法涉及激素种类较全提供解决方案。 1 1. 1 实验部分仪器与试剂 1200 SL Series RRLC /6410B Triple Quard MS
。GCMS 具有较高的灵敏度和极佳的分
离效果，但甾体类激素不易挥发，样品需经繁琐的。 LCMS 衍生化处理因样品处理较为简单，具有高选择性、高灵敏度、高通量的优势而成为激素残
1221 ；修订日期： 20120229 收稿日期： 2011mail： luohuitai@ gmail． com 作者简介：罗辉泰（ 1986 －），男，助理工程师； E-
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Chinese Journal of Analysis Laboratory 2012 － 11 快速高效液相色谱 / 串联四极杆质谱联用仪（美国安捷伦公司）； AS 3120 超声波发生器（功率 250W，频率 33kHz）；离心机；水浴式氮吹浓缩仪；快速混匀器。 14 种标准品：雌酮（ Estrone， E1 ）， 17 β 雌二醇（ 17 β Estradiol， 17 β E2 ）， E3 ），雌三醇（ Estriol，己烷雌酚（ Hexoestrol， HES ），己烯雌酚（ Diethylstilbestrol，DES ），双烯雌酚（ Dienestrol， DIE ），17 α Ethynylestradiol，17 α 炔雌醇（ 17 α EE2 ）， EB ），苯甲酸雌二醇（ Estradiol benzoate，孕酮（ Progesterone， P ）， 17 α 羟孕酮（ 17 α Hydroxyprogesterone， 17 α OHP ），甲羟孕酮（ Medroxyprogesterone， MP ），醋酸氯地孕酮（ Chloromadinone 17acetate， CA ），醋酸甲地孕酮（ Megestrol 17acetate，MA ），醋酸甲羟孕酮（ Medroxyprogesterone 17acetate，MPA ），纯度大于 96. 8% 。乙腈（色谱纯）； HyperSep Retain PEP SPE 小 3 mL）；甲醇、柱（ 60 mg，甲酸、氨水（分析纯）；实验用水为二次蒸馏水。 1. 2 标准溶液的配制以乙腈为溶剂分别配制质量浓度为 1 000 mg / L的标准储备溶液，置棕色刻度管中，于－ 18℃ 冰箱中保存。将上述储备液用乙腈逐级稀释成孕激素为 1 mg / L 和雌激素为 5 mg / L 的标准溶液，用于优化质谱参数。根据各化合物的灵敏度，分别准确移取不同体积各个化合物储备液于 100 mL 容量瓶，用乙腈配制成混合标准中间液，再以 30% 乙腈水溶液逐级稀释为混合标准工作溶液。 1. 3 1. 3. 1 样品前处理提取奶粉：称取奶粉试样 5. 0 g （精确到 0. 01 g），置 50 mL 带螺旋盖的聚丙烯离心管中，加入 5 mL 水溶解混匀，超声提取 10 min，加入 20 mL 甲醇，在快速混匀器上充分涡旋混匀 1 min，超声 10 min， 4000 r / min 10 min ，以的转速离心待净化。液态奶：取 5 mL 样品，置 50 mL 带螺旋盖的聚丙烯离心管中，加入 20 mL 甲醇，在快速混匀器上充分涡旋混匀 1 min，超声 10 min，以 4000 r / min 的转速离心 10 min，待净化。 1. 3. 2 净化移取 5 mL 上清液至 25 mL 刻度试加入 3 mL 乙腈饱和的正己烷，振摇 1 min，静管中，置分层，去除上层正己烷，重复操作一次。加 15 mL 水稀释、混匀，加到事先已依次用 3 mL 甲醇和 6 mL 水活化好的 SPE 小柱中，上样完毕用 20% 甲醇水 3 mL 淋洗，流干后，用 5 mL 甲醇洗脱，整个过程均保持重力自流，收集的洗脱液于 50℃ 水浴氮涡旋吹至干。加入 1. 0 mL 30% 乙腈水溶液复溶，溶解，过 0. 22 μm 滤膜，待上机分析。 1. 4 基质匹配混合标准溶液的配制取空白基质样品，按 1. 3 节的样品处理方法处理，浓缩至干后，加入 1. 2 节中的混合标准工作溶涡旋混匀，过 0. 22 μm 滤膜，液 1. 0 mL 复溶，即得。 1. 5 1. 5. 1 LCMS / MS 测定色谱条件正离子模式：色谱柱： ZORBAX ExtendC18 柱（ 100 mm × 2. 1 mm， 3. 5 μm ）；柱温：