DA7600实时荧光定量PCR仪确认方案模板
- 格式：doc
- 大小：86.50 KB
- 文档页数：8
下载文档原格式
合集下载
实时荧光定量PCR详细操作步骤
实时荧光定量PCR
组织RNA提取：
一般认为100mg肝组织提取RNA 500ng，100mg肺提取RNA 200ng，脑内的RNA丰度适中，100mg脑组织，提取RNA 5-200ng。
所以一个10mg的海马可匀出RNA约为20ng。
反转录反应
反转录反应参照TaKaRa RT-PCR说明书。
反转录反应条件如下。
37°C 15 min（反转录反应）
85°C 5 sec（反转录酶的失活反应）
Real Time PCR反应
选用脑源神经营养因子（BDNF）为目标基因，核糖体18S rRNA(18S rRNA)做为内参。
1）按下列组份配制PCR反应液（反应液配制请在冰上进行）。
全班40人，分为5组，每组做8管。
4管做BDNF，4管做18S rRNA。
4管BDNF 或者18S rRNA，采用相应的正反PCR引物。
每种基因做两个模板，一个模板采用原液浓度，一个模板采用稀释一倍浓度，体积均为0.5 μl。
2）三步法PCR
首先95°C 作用3 min。
PCR进行35个循环。
步骤温度时间
变性95°C 30 秒
退火58°C 30 秒
延伸72°C 30 秒
融解曲线
温度时间变温速度
95°C 0秒20°C/秒
55°C 15秒20°C/秒
95°C 0秒0.1°C/秒。
EBV+DNA定量检测在诊断儿童EB病毒感染中的临床意义
Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＥＢＶ
ｌｏａｄ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ２０５ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ．Ａｔｙｐｉｃａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｓｈａｐｅｄ
ｔｏ ６ ｙｅａｒｓ
０（２＝１．０２４６．Ｐ＝０．３ １ １ ４）．ＥＢＶ
ｏｌｄ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ
ｃａｓｅｓ
ＤＮＡ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｆｒｏｍ ｌ ｔｏ ３ ｙｅａｒｓ ａｎｄ ｆｒｏｍ ４
ｎｏ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｇｅｓ
ｌｙｌｎｐｈｏｃｙｔｅｓ
ｒａｔｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ＥＢＶ ＤＮＡ—ｎｅｇａｔｉｖｅ
ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ
ｆｅｖｅｒ．ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｘ２：３１．３５５１，Ｐ＜０．Ｏ００１）．④Ｔｈｅ ４２
Ｒｅｓｕｌｔｓ：＠Ｔｈｅ
４２ ｏｕｔ ｏｆ ２０５
ｃａｓｅｓ
ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ＥＢＶ ＤＮＡ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ
ｂｌｏｏｄ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ２０．５％，ａｎｄ ２３ ｍａｌｅｓ ａｎｄ １ ９ ｆｅｍａｌｅｓ，ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ Ｗａｓｈ’ｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
Ｃｈｉｌｄｒｅｎ
目
录
引言……………………………………………………………………………………．１
实时荧光定量PCR检测的数据处理及结果报告PPT课件
基本概念
标准品（Standard） 用来构建标准曲线的已 知浓度的样本。 参比（Reference） 用于对检测结果进行标准 化的被动（Passive）或主动（Active）信号。 如内标和外标即为主动性参比的例子。主动性 参比意味着信号由PCR扩增所致，主动性参比 有其自己的引物和探针。被动性参比则为非 PCR所致，如ROX染料，可以校正荧光信号的 非PCR波动。
基本概念
绝对定量（Absolute quantitation） 绝对定量是使用一系列稀释 的已知浓度的标准品与临床标本同时进行测定，根据系列浓度标 准品的Ct值与起始模板（RNA或cDNA）量之间的线性比例关系， 绘制标准曲线。待测标本的浓度则可根据其测定的Ct值，从标准 曲线或回归方程计算得到原始模板的数量。这种方法是假定所有 的标准品和临床标本有相近的扩增效率。系列稀释标准品的浓度 应包含临床标本的浓度范围，并且在实时PCR仪及检测试剂方法 的准确度和线性范围内。 系列稀释的标准品最好是RNA，也可以是双链DNA片段、单链 DNA或载有靶序列的质粒。标准品必须是纯的，与RNA标准品相 比，DNA有相对较好的稳定性、重复性和敏感性，但其与逆转录 没有关系，不能反映逆转录效率。
基本概念
Ct值（threshold cycle）或CP值（crossing point） Ct或CP值指的是实时监测扩增过程的 荧光信号达到指数扩增时的循环周期数。主要 的计算方式是以扩增过程前3到15个循环的荧 光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值 时的循环数则为阈值循环数（Ct）。有实验证 明Ct值与样本中的原始拷贝数成正比关系。Ct 值是当前实时荧光PCR的主要定量参数。
纵坐标为Ct值横坐标为起始拷贝 数时的数学模型
人乳头瘤病毒型核酸检测标准操作规程(PCR-荧光探针法)_重复
人乳头瘤病毒6,11型核酸检测标准操作规程（PCR－荧光探针法）1.目的：规范人乳头瘤病毒(HPV)6,11型核酸检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围：PCR实验室。
3.职责：3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1《中山大学达安基因股份有限公司人乳头瘤病毒（6,11型）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光法）说明书》4.2《中山大学达安基因股份有限公司DA7600核酸序列检测系统用户手册》5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。
5.2 实验原理：采用一对特异性引物和一条特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测人乳头瘤病毒（HPV）6,11型DNA。
5.3 性能参数：5.3.1 检测下限： 5.0×102基因拷贝/ml。
5.3.2 线性范围：5.0×102～5.0×108基因拷贝/ml。
5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集。
5.4.1 标本类型：泌尿生殖道分泌物棉拭子、生殖道刮片、组织活检标本等。
5.4.1.1 男性尿道分泌物：用细小棉拭子伸入尿道约2～4厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌试管中，密封送检（采集分泌物前2小时禁小便）。
5.4.1.2 女性生殖道分泌物：用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用宫颈刷或无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒后旋动宫颈刷或棉拭子采集宫颈分泌物，将宫颈刷或棉拭子置于无菌试管中，密封送检。
5.4.1.3 女性尿道分泌物：用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌试管中，密封送检。
实时荧光定量PCR技术PPT课件(模板)
Cycle number
Sample
Ck 104
Ck 102 Lg of DNA concentration
qPCR 常用实验方法
A
B
C
简单 成本较低
适用于多重PCR 特异性较好
可进行SNP检测 特异性非常好
SYBR Green I 染料法——原理
SYBR Green I 是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色 激发波长的染料
大多数荧光定模量板PCRD实N验的AC量T值越在1多8-30，之间荧。 光达到 荧rea光lm定阈a量steP值rCmRix的参数循解析环-- C数T值越少，即Ct值越小。
-引物和扩增产物二级结构的预测
乙1v肝标病准人品血ii+液9Lv中稀oHg释B模缓V的冲板绝液对，起定得量标始准浓品iii度与Ct值呈线 性关系。 已知在50%的乳腺肿瘤样本中, ERBB2表达异常, 因此可以作为一个检测标准
待Sta测n样da本rd拷cu贝rv数e （copies/ul标）准=待品测样本浓度5×/样1本0分3 子量×268×.110814 28.64
C-不al要ibr有at连or续: 可4以个用G 带有PCR扩增子的合成的RNA或cDNA寡核苷酸；
输C乙用RHTee入肝Nfa值eol要 病tr-h是eTy查人ne判cRm找血e断NpR的液lAa实Nt蛋中eA验C白Hp成oBo或no功Vtl是r的s与o；l基绝(否N因对的T标标名定C重)准准称量检要品品验参q考PCR体系55××（11引00物45 ）
实验数据 实cD验NA步合骤成：(提两取步H法BVqRDTN-PAC；R)
T9a5q~m1 anS探lop针e法: -—3.—原理
c可D以NA是影含响有q目PC的R基敏因感的度质粒、PCR产物、基因组DNA等。
实时荧光定量PCR仪大型仪器设备购置论证报告材料
实用标准文案
大型仪器设备购置论证报告
仪器设备名称实时荧光定量PCR仪
项目名称生态环境科技平台
项目负责人陈建荣
填表日期2017年4月12日
实验室管理处制
填表说明
1．单价10万元及以上仪器设备的申购均需填写此表，并与
申购计划一起上报有关部门。
2．所在学院（部门）组织3—7人单数技术专家进行论证，并通知项目经费管理、设备管理等部门参加论证。
申请单一来源采购的需3人以上单数非本校专家参加论证；未列入全省统一论证进口产品范围的进口产品需5人以上单数非本校专家参加论证。
3．论证会由专家组组长主持，主要程序为：申购人报告、现场考察、专家质询与讨论、专家组形成论证意见并签名。
4．专家论证同意，经学院（部门）、项目经费管理部门签字并盖章后，报本科教学部（实验室管理处）网上公示一周无异议后实施。
5．此表一式1份（如设备为进口设备，请提交2份）。
乙型肝炎病毒DNA定量检测临界室内质控品的制备与初步应用
乙型肝炎病毒DNA定量检测临界室内质控品的制备与初步应用曹季军;吕心路;许爱萍;杨剑虹;李晓红;王金湖【摘要】目的制备乙型肝炎病毒(HBV)-DNA定量检测的临界室内质控品并评价其在日常工作中的应用价值.方法留取健康体检者血清作为基质,稀释阳性标准品,与临床标本采用实时荧光定量聚合酶链反应一起检测,根据结果计算出x、s、CV 值并在L-J室内质控图上作图,应用Westgard多规则质控判断方法.结果x=3.55×104 copy/mL,s=0.24(对数值),CV=5.27%.结论自制HBV DNA临界质控品结果稳定,具有一定实用价值.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2011(008)022【总页数】2页(P2771-2772)【关键词】乙型肝炎病毒4;荧光定量聚合酶链反应;室内质控品【作者】曹季军;吕心路;许爱萍;杨剑虹;李晓红;王金湖【作者单位】江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400【正文语种】中文长期以来，我国人群一直呈乙型肝炎病毒（HBV）高感染率，约有1.3亿人感染[1]，因此乙型肝炎的诊断和治疗显得格外重要。
随着科学技术的发展和基因检测技术的成熟，HBV DNA的检测在乙型肝炎的诊断、治疗和疗效观察方面发挥了不可替代的作用，尤其是实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术。
但是为了保证检测的质量，必须要有严格室内质量控制措施。
因PCR检测结果为指数增长，目前尚无统一的室内质控品。
本实验室根据自身条件，自行制备了HBV DNA室内质控血清，并进行了初步应用和评价，现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 血清健康体检者血清，要求无黄疸、无溶血、无脂血，丙氨酸氨基转移酶小于40 U/m L，HBV表面抗原阴性，HBV DNA无扩增趋势。
DA7600实时荧光定量PCR仪确认方案模板
D A7600实时荧光定量P C R仪确认方案模板-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN确认文件类别：确认方案编号：部门：质量部页码：共11页，第2页DA7600PCR扩增仪方案与报告版次：新订替代：起草：年月日审阅会签：（确认小组）批准：年月日目录1.概述 (4)2.确认目的 (4)3.确定确认范围 (4)4.确定确认小组成员及职责 (4)确认小组成员及确认小组负责人 (4)人员 (4)评价方法： (4)标准： (5)5.风险评估 (5)评估概述 (5)评估方法 (5)6.确认内容 (9).安装确认 (9)安装信息 (9)仪器放置检查 (9)操作规程等资料确认 (10)运行确认 (10)基本称重功能确认 .................................................. 错误!未定义书签。
校正功能确认 ........................................................ 错误!未定义书签。
性能确认 ................................................................... 错误!未定义书签。
准确度...................................................................... 错误!未定义书签。
天平重现性检查： .................................................. 错误!未定义书签。
四角偏差检查： ...................................................... 错误!未定义书签。
7确认计划安排....................................................... 错误!未定义书签。
实时荧光定量PCR仪大型仪器设备购置论证报告审批稿
实时荧光定量P C R仪大型仪器设备购置论证报
告
YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
大型仪器设备购置论证报告
仪器设备名称实时荧光定量PCR仪
项目名称生态环境科技平台
项目负责人陈建荣
填表日期2017年4月12日
实验室管理处制
填表说明
1．单价10万元及以上仪器设备的申购均需填写此表，并与申购计划一起上报有关部门。
2．所在学院（部门）组织3—7人单数技术专家进行论证，并通知项目经费管理、设备管理等部门参加论证。
申请单一来源采购的需3人以上单数非本校专家参加论证；未列入全省统一论证进口产品范围的进口产品需5人以上单数非本校专家参加论证。
3．论证会由专家组组长主持，主要程序为：申购人报告、现场考察、专家质询与讨论、专家组形成论证意见并签名。
4．专家论证同意，经学院（部门）、项目经费管理部门签字并盖章后，报本科教学部（实验室管理处）网上公示一周无异议后实施。
5．此表一式1份（如设备为进口设备，请提交2份）。
实时荧光定量PCR仪操作流程
实时荧光定量PCR仪操作流程实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）仪是一种常用的分子生物学实验仪器，用于定量检测DNA或RNA样本中的特定序列。
通过对PCR反应进行荧光检测，可以实时监测目标序列的扩增过程，并且具有高灵敏度和高特异性的优势。
下面将介绍实时荧光定量PCR 仪的操作流程，以帮助您正确进行实验。
1. 准备工作在开始实时荧光定量PCR实验之前，需要准备以下实验器材和试剂：（1）实时荧光定量PCR仪：确保仪器已预热至适当的温度；（2）PCR反应管或板：根据实验需要选择适当的规格；（3）PCR试剂盒：包括DNA模板、引物、探针、酶等；（4）DNA/RNA样本：按照实验设计合理稀释或提取，确保样本质量良好；（5）聚合酶链式反应混合液（PCR Mix）：根据试剂盒说明配置混合液。
2. 操作步骤（1）设置PCR仪参数：将需要的实验参数输入PCR仪中，包括扩增阶段的温度、时间和循环次数等。
（2）制备PCR反应体系：按照试剂盒说明书中的配方将PCR Mix、DNA模板、引物和探针等加入PCR反应管或板中。
（3）密封反应管或板：确保反应管或板密封良好，避免样品蒸发或污染。
（4）放入PCR仪：将密封好的PCR反应管或板放入PCR仪中，确保仪器已预热至适当的温度。
（5）运行实验：启动PCR仪，开始实时荧光定量PCR反应。
仪器会根据设置的参数自动进行温度循环和荧光信号监测。
（6）数据分析：实验进行过程中，可以通过PCR仪的软件实时监测扩增曲线和荧光信号，获得相关的实验数据。
（7）结果解读：根据实验目的和结果，对荧光信号和扩增曲线进行分析和解读，获得所需的定量PCR结果。
3. 注意事项（1）实验操作应按照严格的无菌操作要求进行，避免PCR反应受到外部污染。
（2）实时荧光定量PCR仪涉及的试剂和标本具有一定的生物安全风险，应按照相关安全规范进行操作和处理。
（3）准确的数据记录和标注是保证实验结果可靠性的重要环节，务必在实验过程中进行详细记录。
PCR仪确认方案
PCR仪确认方案PCR仪是一种用于扩增DNA片段的仪器，是分子生物学实验室中常用的设备之一、为了确保PCR仪的准确性和可靠性，需要进行PCR仪的确认方案。
下面是一个详细的PCR仪确认方案，包括仪器准备、性能测试和验证步骤。
一、仪器准备1.确定确认PCR仪的固定条件，例如温度范围、时间设置等。
2.准备PCR仪所需的耗材，包括PCR试管、PCR反应物、引物等。
3.清洁PCR仪的工作台面和内部，确保无灰尘和杂质。
二、性能测试1.温度精确度测试a.使用温度计分别测量PCR仪的加热块和冷却块的温度，记录温度值。
b.以设置的温度为目标值，在PCR反应槽中设置温度计，进行温度稳定性测试。
c.比较目标温度和实际温度之间的差异，计算温度偏差。
2.温度一致性测试a.在PCR反应槽中放置数个PCR试管，每个试管中加入相同的反应物。
b.设置PCR仪的温度循环程序，进行温度一致性测试。
c.检查各个PCR试管中的反应物扩增结果，评估PCR仪温度循环的一致性。
3.温度均匀性测试a.在PCR反应槽中设置多个温度计，测量不同位置的温度。
b.运行PCR仪的温度循环程序，观察和记录各个位置的温度。
c.比较各个位置的温度差异，计算温度均匀性。
4.反应时间测试a.在PCR反应槽中放置PCR试管，设置不同的扩增时间。
b.完成PCR反应后，分析PCR试管中的扩增结果，评估PCR仪的反应时间准确性。
三、验证1.重复性验证a.准备相同的PCR反应物和程序，分别在不同的PCR仪上进行PCR扩增。
b.比较各个PCR仪之间的扩增结果，评估其重复性。
2.敏感性验证a.准备不同浓度的DNA样品，分别加入PCR反应槽进行PCR扩增。
b.比较不同浓度DNA样品的扩增结果，评估PCR仪的敏感性和线性范围。
3.特异性验证a.准备包含目标基因和非目标基因的PCR反应槽，进行PCR扩增。
b.检查PCR试管中的扩增产物，确认PCR仪的特异性。
四、记录和分析结果1.记录每个测试项目的结果，包括温度精确度、温度一致性、温度均匀性、反应时间等。
DA7600实时荧光定量PCR仪确认方案模板
确认文件类别：确认方案编号：部门：质量部页码：共11页，第1页DA7600PCR扩增仪方案与报告版次：新订替代：起草：年月日审阅会签：（确认小组）批准：年月日目录1.概述 (3)2.确认目的 (4)3.确定确认范围 (4)4.确定确认小组成员及职责 (4)4.1确认小组成员及确认小组负责人 (4)4.2人员 (5)4.2.1评价方法： (5)4.2.2标准： (5)5.风险评估 (6)5.1评估概述 (6)5.2评估方法 (6)6.确认内容 (10)6.1.安装确认 (10)6.1.1安装信息 (10)6.1.2仪器放置检查 (10)6.1.3操作规程等资料确认 (11)6.2运行确认 (11)6.2.1基本称重功能确认.......................................... 错误!未定义书签。
6.2.2 校正功能确认.............................................. 错误!未定义书签。
6.3性能确认.............................................................. 错误!未定义书签。
6.3.1准确度............................................................... 错误!未定义书签。
6.3.2天平重现性检查：.......................................... 错误!未定义书签。
6.3.3四角偏差检查：.............................................. 错误!未定义书签。
7确认计划安排....................................................... 错误!未定义书签。
9.确认结果评定与结论............................................ 错误!未定义书签。
乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质控品的制备及应用研究
乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质控品的制备及应用研究目的自制乙型肝炎病毒DNA室内质控血清并探讨其在临床标本检验中的应用价值。
方法用检测后的患者标本自制阳性室内质控血清，用实时荧光定量PCR检测血清HBV-DNA，记录2013年1～5月质控结果、标准曲线的斜率、截距、相关系数和相关结果的均值（x）、标准差（s）及变异系数（cv）；结果自制质控物结果对数的累计数据x±2s范围为 4.3～5.34，在该质控的参考值范围内；结论本实验室采用Taqman实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA实验中，质控品稳定性良好，可联合运用多参数同时监测的质控方法进行，能保证为临床提供有效可靠的准确结果。
标签：聚合酶链式反应；室内质控；斜率；截距；相关系数乙型肝炎属于我国高发的流行性疾病。
日前为止，我国慢性乙型肝炎病毒感染者约为1.3亿，其中慢性乙型肝炎患者约5000万例。
HBV DNA定量检测可反映病毒复制水平，主要用于慢性HBV感染的诊断、治疗适应证的选择及抗病毒疗效的判断[1]。
一般当患者肝功波动，转氨酶升高，乙肝病毒复制指标阳性，肝功处于代偿阶段的时候，抗病毒治疗最为合适[2]。
实时荧光定量PCR是目前核酸定量检测较为理想和方便的方法之一，而Taqman探针技术的应用更大大增加了探针的杂交稳定性，使结果更精确、分辨率更高[3]。
但其结果因反应体系、系统误差、检测条件、人员等多种因素影响，易致结果的批内、批间差异较大，因此需要好的质控方法和质控品保证结果的稳定性和可靠性。
我室收集2013年1～5月对自制HBV-DNA阳性质控血清检测的质控结果、标准曲线和相关结果的均值（x）、标准差（s）及变异系数（cv）进行累积数据评价，斜率、截距、相关系数结果分析如下。
1 材料与方法1.1 试剂与仪器仪器为广州中山大学达安基因股份有限公司生产的DA7600荧光定量扩增分析仪，试剂为该公司配套试剂。
1.2 质控血清来源选取日常患者无溶血、无脂血、无黄疸的阳性血清标本（乙肝病毒定量值104～105），收集标本血清20ml，混匀，进行HBV-DNA定量检测，结果为6.93×104，对数值为4.84，在预期范围内。
实时荧光定量 PCR 仪快速操作指南说明书
实时荧光定量PCR仪快速操作指南1.连接电源从包装箱里取出仪器放置在实验台上，拿出电源线和电源适配器，将电源线一端与电源适配器相连，另一端连接至交流220V电源插座（AC85~264V）电源适配器的输出端连接到仪器电源插孔。
接口插入仪器电源插孔，注意插孔方向箭头方向朝上。
打开仪器背面的电源开关开启仪器，仪器自检成功，自动进入到软件界面。
2.样品准备◼准备试剂Q1600实时荧光定量PCR仪使用0.2ml透明离心试管根据试剂要求选用10-100μl合适的加液量。
◼离心操作配置完成试剂样本的试管在放入仪器之前，要用离心机进行离心操作，确保试剂液体处于试管底部，且液体内部不含有气泡。
◼放置样品将反应管按照顺序放入加热孔内。
3.设置程序，运行实验软件操作基本步骤：◼新建实验新建实验，选择运行槽◼基本设置设置实验名称，实验类型，检测项目，选择使用的染料。
◼样本设置设置样品名称，样本ID号，选择样本类型◼程序设置设置需要的反应程序◼保存文件单击保存，保存实验文件◼运行单击运行，运行实验。
4.结果分析◼实验结束，软件自动计算Ct值，根据判定规则自动出结果。
◼如需进行熔解分析和基因分型，在软件分析类型里选择相应的分析功能。
5.结果导出◼导出实验结果单击导出，导出实验数据。
◼结果打印连接配置的热敏打印机，选中要打印的样品孔，单击打印，打印实验结果。
6.关闭仪器◼实验结束，取出反应管◼长按仪器前面板关机按键，关闭仪器◼长时间不使用仪器，请关闭仪器背部左下角电源开关。
PCR确认方案
确认文件江西瑞济生物工程技术股份有限公司类别：确认方案编号：部门：质量部页码：共11页，第1页DA7600PCR扩增仪方案与报告版次：☐新订☐替代：起草：年月日审阅会签：（确认小组）批准：年月日目录1.概述 (3)2.确认目的 (3)3.确定确认范围 (3)4.确定确认小组成员及职责 (3)4.1确认小组成员及确认小组负责人 (3)4.2人员 (3)4.2.1评价方法： (3)4.2.2标准： (4)5.风险评估 (4)5.1评估概述 (4)5.2评估方法 (4)6.确认内容 (7)6.1.安装确认 (7)6.1.1安装信息 (7)6.1.2仪器放置检查 (7)6.1.3操作规程等资料确认 (8)6.2运行确认 (8)6.2.1基本称重功能确认................... 错误！未定义书签。
6.2.2 校正功能确认 ..................... 错误！未定义书签。
6.3性能确认............................. 错误！未定义书签。
6.3.1准确度............................. 错误！未定义书签。
6.3.2天平重现性检查：................... 错误！未定义书签。
6.3.3四角偏差检查：..................... 错误！未定义书签。
7确认计划安排........................... 错误！未定义书签。
9.确认结果评定与结论 .................... 错误！未定义书签。
10.拟订日常监测程序及确认周期............ 错误！未定义书签。
1.概述DA7600实时荧光定量PCR仪，是中山大学达安基因公司推出的具有全自动、实时监测、定量分析的DNA荧光检测系统。
结合半导体致冷器实现PCR扩增过程，并通过高灵敏度的光电系统和高通量光纤导光系统对荧光信号进行实时监测，实现同时对样品的扩增和检测。
丙型肝炎病毒(HCV)核酸定量检测标准操作规程(PCR-荧光探针法)
丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的：规范HCV-RNA（PCR）检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围：HCV-RNA荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。
5.内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法5.2 实验原理：用一对丙型肝炎病毒特异性引物和一条丙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以逆转录液、逆转录酶、PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq 酶）、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，先将RNA逆转录成cDNA，再通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测,从而检测丙型肝炎病毒RNA。
主要用于HCV病毒感染的辅助诊断及其疗效监测的标准。
5.3 性能参数：5.3.1精密度：检测下限为1.0x103copies/ml。
5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108copies/ml。
5.4 标本采集：5.4.1 使用标本类型：血清。
5.4.2 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集，采集后及时分离出血清在2～8℃条件下保存。
用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.4.3 标本保存和运送：分离后的血清在2～8℃条件下保存应不超过72小时，-20℃可保存1个月，要长期保存的需分装后储存于-70℃。
实时荧光定量PCR具体实验步骤
实时荧光定量PCR操作步骤以下实验步骤仅供参考：1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞.室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿.盖紧管盖。
手动剧烈振荡管体15秒后.15到30℃孵育2到3分钟。
4℃下12000rpm离心15分钟。
离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相.中间层以及无色水相上层。
RNA全部被分配于水相中。
水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。
加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA.混匀后15到30℃孵育10分钟后.于4℃下12000rpm 离心10分钟。
此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗移去上清液.每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙O配制）.清洗RNA沉淀。
混匀后.4℃下7000rpm离心5分醇（75%乙醇用DEPCH2钟。
⑤RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液.使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀溶解RNA时.先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次.使其完全溶解.获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测1）紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。
然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后.读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值.测定RNA溶液浓度和纯度。
①浓度测定A260下读值为1表示40 µg RNA/ml。
样品RNA浓度(µg/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 µg/ml。
具体计算如下：RNA溶于40 µl DEPC水中.取5ul.1:100稀释至495µl的TE中.测得A260 = 0.21 RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 µg/ml = 840 µg/ml 或 0.84 µg/µl取5ul用来测量以后.剩余样品RNA为35 µl.剩余RNA总量为：35 µl × 0.84 µg/µl = 29.4 µg②纯度检测RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度.比值范围1.8到2.1。
PCR仪确认方案.doc
PCR仪确认方案TS-52-0001设备编号：有限公司确认立项申请表参加仪器确认人员亳州詹政中药饮片有限公司确认文件目录1.概述2.目的3.范围4.确认小组成员及职责5.方案执行6.内容6.1.文件检查6.2. 安装确认6.3. 运行确认6.4. 性能确认6.5. 确认结论6.6. 再确认7. 参考文件8. 风险评估1．概述PCR仪为化验室常用仪器，为确认该仪器各项性能仍符合要求，制订本方案对该仪器进行确认。
1.1. 仪器概况本台 PCR仪是仪器有限公司生产的可任意控程的梯度温度仪。
最佳的、恒定的升降温速率，大大降低了摸索性试验的工作强度从而提高了试验的效率与质量。
1.2. 仪器用途该仪器用于乌梢蛇、蕲蛇、川贝母等聚合链式反应（简称PCR）。
2.确认目的对该仪器进行安装确认、运行确认及性能确认，以确定仪器是否仍具有良好的升降温性能，是否仍能满足日常分析测试工作的需要。
3.范围适用于 PCR仪的确认。
4.确认小组成员及职责5.方案执行所有的空白记录都要被填写，如果项目不适用，用单线划掉，签名并注明日期。
所有的测试项目都应完成，若未完成应记录，按偏差处理，并说明相关原因和解决的措施。
所有的偏差均要求记录，并用适当的方法评估其影响，并证明采取的纠正措施是可以被接受的。
6.内容6.1.文件检查6.1.1.目的确保与本次确认的相关文件都齐全。
6.1.2.程序6.1.2.1.确定仪器使用说明书等相关原始资料和技术文件齐全。
6.1.2.2.相关人员接受了确认方案及相关操作规程的培训。
6.1.2.3.确认方案中涉及的所有仪器均经过校准，并在有效期内，且有必需的相关证书。
6.1.3.可接受标准根据确认“表1 文件检查记录”的要求，核对相关文件，确保文件完整。
相关人员接受了确认方案及相关操作规程的培训。
6.1.4.原始记录检查记录见“表1.文件检查记录”。
表1 文件检查记录（一）仪器原始资料及操作规程检查检查人：日期：复核人：日期：（二）文件培训检查检查人：日期：复核人：日期：6.2. 具体确认步骤6.2.安装确认6.2.1.目的由于在初始安装K960型PCR仪时，未进行系统的安装确认，故在本次确认中，重新对零配件和仪器的安装条件进行确认，保证各项检查项目结果合格，仪器的安装正确，且能正常运行。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
确认文件
类别：确认方案编号：
部门：质量部页码：共11页，第1页
DA7600PCR扩增仪
方案与报告
版次：新订替代：
起草：年月日
审阅会签：
（确认小组）
批准：年月日
目录
1.概述 (2)
3.确定确认范围 (2)
4.确定确认小组成员及职责 (2)
4.1确认小组成员及确认小组负责人 (2)
4.2人员 (2)
4.2.1评价方法： (3)
4.2.2标准：3
5.风险评估 (3)
5.1评估概述 (3)
5.2评估方法 (3)
6.确认内容 (6)
6.1.安装确认 (6)
6.1.1安装信息 (6)
6.1.2仪器放置检查 (6)
6.1.3操作规程等资料确认 (6)
1.概述
DA7600实时荧光定量PCR仪，是中山大学达安基因公司推出的具有全自动、实时监测、定量分析的DNA荧光检测系统。
结合半导体致冷器实现PCR扩增过程，并通过高灵敏度的光电系统和高通量光纤导光系统对荧光信号进行实时监测，实现同时对样品的扩增和检测。
友好的全中文计算机界面，可满足不同PCR实验的需求。
其反应速度及准确性、操作实用性和使用灵活性均有较好的提高，能满足科研工作者对于定量PCR系统高通量方面的要求，是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。
它主要有一台DA7600和PC计算机及显示器组成。
2.确认目的
通过用HCV荧光PCR检测试剂盒来确认DA7600实时荧光定量PCR仪的扩增和检测体系精密度、线性、准确度等，验证仪器能否正常准确运行，给出可靠的分析结果，以及48孔孔间差异是否在允许范围内。
3.确定确认范围
本方案适用于DA7600实时荧光定量PCR仪运行确认及性能确认。
4.确定确认小组成员及职责
4.1确认小组成员及确认小组负责人
4.2 人员
列出参加DA7600确认的所有人员名单，评价培训情况是否符合操作的要求。
4.2.1评价方法：
查阅培训档案，确认是否对有关操作者进行了相关培训，包括：
1、DA7600实时荧光定量PCR仪操作，维护保养规程
2、《DA7600中文操作说明书》
3、《GBT 27921-2011 风险管理风险评估技术》
4、确认方案实施培训
4.2.2标准：
在本方案实施前，应对方案实施过程中涉及人员进行培训且考核合格，以保证方案顺利实施。
确认人：日期：
复核人：日期：
5.风险评估
5.1评估概述
作为植入性医疗器械生产企业，产品的质量控制至关重要，而检验仪器又作为质量控制必不可少的设备。
因此，为了进一步提高质量部对仪器的管理水平，发现并尽可能消除一些潜在的风险对实验和检验结果造成的威胁，现依据《GBT 27921-2011 风险管理风险评估技术》标准对本仪器进行风险评估，对存在的缺陷及质量风险给出合理分析和防范措施。
5.2评估方法
本方法采用失效模式和影响分析（FMEA)程序.同时风险识别风险管理小组成员使用头脑风暴法，分析了仪器室可能出现的各种偏离正常的偏差，即潜在的失效模式、失效模式可能造成的影响、该影响对检品质量、安全造成的危害以及这些危害的严重程度、危害发生的可能性及可检测性。
（见表一：仪器室潜在失效模式及分析表）说明：严重程度用1－10的数字来表示，其中，1表示对检测数据几乎无影响；2－4表示对检测数据影响较轻微；5－7表示对检测数据产生中等影响；8－10表示会对检测数据造成严重影响
可能性用1-10的数字表示，其中，1表示几乎不可能发生；2-4表示发生的可能性较小；5-7表示发生的可能性为中等，8-10表示发生的可能性很大。
可检测性用1-10的数字表示，其中，1表示完全可以检测出来；2-4表示在一定程度上可以检测；5-7表示检测的可能性较小；8-10表示几乎无法检测。
5
6.确认内容
DA7600实时荧光定量PCR仪确认工作由质量部有关人员参与实施。
6.1.安装确认
6.1.1安装信息
6.1.2仪器放置检查
复核人：日期
6.1.3操作规程等资料确认
复核人：
日期
6.2运行确认
6.2.1 PC 计算机运行环境确认
运行环境确认内容 检查配套计算机能否正常开机运行，是否有中病毒等现象，能否为DA7600运行软件和分析软件提供安装平台和运行平台。
复核人： 日期 6.2.2DA7600运行软件及分析软件的确认
软件确认内容 双击电脑桌面上的DA7600运行软件及分析软件的图标，看应用软件能否打开，能否正常使用。
6.2.3.1. 灵敏度和线性
6.2.3.1.1方法 利用HCV 荧光PCR 检测试剂盒，取12支HCV 反应管，并分别使用HCV 标准参考品（1.0E4,1.0E5，1.0E6，1.0E7）、阴性对照、空白对照，均做复管，按照说明书的操作步骤进行。
6.2.3.1.2 合格标准 （1）空白对照和阴性对照无起跳 （2）标准参考品标准曲线的相关系数R ≥0.98，复管重复性良好。
6.2.3.1.3 数据记录 6.2.3.2 孔间差异
6.2.3.2.1方法：利用HBV 荧光PCR 检测试剂盒，取出48支反应管，每支分别加入相同的模板HBV 标准参考品1.0E4，同时进行实时扩增检测。
6.2.3.2.2合格标准 （1）空白、阳性对照无起跳 （2）每孔相对偏差值不大于8% 4.3.2.3 数据记录 4.3.2.4 数据分析 孔间差计算方法 CTi ×100% (CT1 +CT2 +CT3 +……CTn)/n
7 异常情况处理
在验证的过程中，应严格按照验证方案操作，若出现个别项目不合格，应查明原因后重新进行验证。
如果属于仪器设备原因，则由验证小组和质量部负责人协同处理或联系厂家进行维修，并填写相应记录。
8 验证最终结果分析和评定
评定人：评定时间：
9再验证周期
9.1 在一般情况下每一年验证一次。
9.2 如更更换仪器零部件或重大维修，完成后均要再次验证，以证明更换零部件及维修对仪器的正常使用没有影响。
9.3 再验证启动时，按照完整程序进行。
10 验证批准批准人：批准时间：。