胰腺干细胞及其分离培养

胰腺干细胞治疗糖尿病鼠的实验研究摘要：本文以胰腺干细胞为试验材料，对细胞的表达特征、生长特性、体内外分化能力进行了较为系统的鉴定，以进一步完善其生物学特性的检测，同时将其体外定向分化为胰岛样细胞团并植入糖尿病大鼠模型体内，观察其能否改善糖尿病症状，旨在为糖尿病的临床治疗研究提供一株背景清楚的种子细胞。

关键词：胰腺干细胞糖尿病鼠实验研究【中图分类号】r4 【文献标识码】a 【文章编号】1008-1879（2012）12-0028-02胰腺干细胞具有特定的分化潜能，在医学和生物学上能够表现出全能性、多能性。

现阶段，胰腺干细胞的研究虽尚处于早期阶段，但是它却以迅猛的速度发展着，经过多年的分离培养与研究，胰腺干细胞已成为一种有广阔前景的实验及治疗源细胞。

糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上主要表现为高血糖。

1 资料与方法在实验中分别选取三组生理状况相同的大鼠，标为a、b和c三组。

a为正常对照组、b为患糖尿病组、c为干预对照组，每组九只大鼠。

实验分为3个阶段，分别于造模后的第3、7、14、21天时（摸索中四个时间是血糖变化的四个时相），采用光化学血糖监测仪，每组随机抽取三只大鼠，采鼠尾静脉取血、测血糖、c-肽水平测定。

1.1 研究方法。

胰岛干细胞的转分化研究，在现在的有关胰腺干细胞治疗糖尿病的医学研究中，医学研究人员通过一些特殊的分化（转分化）就可以很简单的得到降低血糖的有关细胞的分泌细胞（胰岛素分泌细胞），该类特殊的分化转具体指的是两种毫无关联的组织细胞在特定的条件下经过特定的技术进行由一种组织细胞到另一种组织细胞分化的过程。

最开始的研究表明，成体的胰腺干细胞的分化的能力是最差的，然而就现在的研究看来，胰腺干细胞的分化具有扩散性。

一些医学研究者的研究实验中，首先从大鼠的胰腺中分离出胰岛分泌细胞，接着在体外进行长时间的细胞培养，在培养的过程中增加适量的化学剂就能转分化出中间源细胞，这样就可以分化成为胰岛b细胞。

1.cell line（细胞系）：原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系。

2.Contact inhibition（接触抑制）：当一个贴壁生长的正常细胞与另一个细胞相互接触时，便停止了分裂增殖，相互虽然紧密接触，但不形成交叉重叠生长。

3.In vitro transformation （体外转化）：细胞在体外培养过程中发生与原代细胞形态、抗原、增殖或其他特性的可遗传的变化，但不一定具有致瘤性。

4.Cell fusion（细胞融合）：体外培养条件下，经化学试剂、病毒或物理方法诱发，使不同种的体细胞融合产生杂交细胞的过程。

5.Passage（Subculture，传代或传代培养）：将细胞从一个培养瓶转移到更多培养瓶的过程。

6.Saturation density（饱和密度）：在特定条件下，培养容器能达到的最高细胞数，当细胞达到饱和密度后细胞群体停止增殖。

在贴壁生长的细胞以每平方厘米的细胞数表示，而悬浮生长的细胞则以每立方厘米的细胞数表示。

7.Suspension culture（悬浮培养）：细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中的一种培养方法。

8.Transfection （转染）：用生物学的、物理的或化学的方法将目的基因转移到培养细胞内的实验方法。

9.饲细胞（Feeder cells）：也称滋养细胞，通常成纤维细胞或其他细胞长成单层后，再用大剂量射线照射，使细胞失去增殖能力，但仍能存活并有代谢活动。

可作为支持物，然后接种上其他细胞，饲细胞的代谢产物利于其他细胞生长，用于某些难培养细胞的培养。

10. Apoptosis（细胞凋亡）：是指细胞死亡程序的开启而导致细胞自杀的过程，因此也常称为程序性细胞死亡。

细胞凋亡与机体正常发育、形态形成以及多余细胞的清除等生理过程密切相关，所以被认为是一种积极的生理性死亡。

11.裸鼠（nude mouse)是20世纪60年代作为无毛变种被发现，后来查明该类小鼠先天性胸腺缺陷，此性状由隐性遗传基因“nu”传递。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910190210.4(22)申请日 2019.03.13(71)申请人 武汉大学地址 430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山(72)发明人 蒋卫　檀梦天　(74)专利代理机构 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222代理人 彭劲松(51)Int.Cl.C12N 5/071(2010.01)C12N 5/0735(2010.01)C12N 5/10(2006.01)(54)发明名称一种由人多能干细胞分化获得胰腺前体细胞及胰岛β细胞的方法(57)摘要本发明提供了一种由人多能干细胞分化获得胰腺前体细胞以及胰岛β细胞的方法。

在由人多能干细胞来源的内胚层细胞向胰腺谱系细胞特化过程中，通过阶段性加入WNT信号通路抑制剂可以提高人多能干细胞向胰腺前体细胞分化效率。

本发明在提高胰腺前体细胞分化效率后，进而提高成熟的胰岛β细胞分化效率。

该方法适用于不同细胞系的胰腺分化，获得大量胰岛β细胞，为糖尿病细胞治疗、药物筛选、疾病模型等提供有力的支持，具有良好的应用前景。

权利要求书2页 说明书13页序列表2页 附图6页CN 109749986 A 2019.05.14C N 109749986A权　利　要　求　书1/2页CN 109749986 A1.一种由人多能干细胞分化获得胰腺前体细胞及胰岛β细胞的方法，其特征在于：所述的方法步骤为：1)人多能干细胞分化为定型内胚层细胞：a.配制定型内胚层阶段培养基1，将人多能干细胞使用所述培养基于37摄氏度二氧化碳培养箱内培养1天；b.配制定型内胚层阶段培养基2，将经过上述步骤a培养后的细胞更换为定型内胚层阶段培养基2，于37摄氏度二氧化碳培养箱内培养3天，每天更换培养基；所述定型内胚层阶段培养基1的组成为：以IMDM培养基和F12培养基以1:1比例混合做基础培养基，还包括下述工作浓度成分：0.2％牛血清白蛋白(BSA)、1％青霉素、1％链霉素、100ng/ml重组人激活素-A(Activin A)、50ng/ml Wnt3a蛋白，所述浓度均为终浓度；所述定型内胚层阶段培养基2的组成为：以IMDM培养基和F12培养基以1:1比例混合做基础培养基，还包括下述工作浓度成分：0.2％牛血清白蛋白(BSA)、1％青霉素、1％链霉素、100ng/ml重组人激活素-A(Activin A)，所述浓度均为终浓度；2)诱导定型内胚层细胞向胰腺前体细胞分化：配制胰腺前体细胞培养基，将经过步骤1)培养后的细胞，更换为胰腺前体细胞培养基，于37摄氏度二氧化碳培养箱内培养5天，每天更换培养基；所述胰腺前体细胞培养基的组成为：以MCDB131培养基为基础培养基，还包括下述工作浓度成分：0.5％牛血清白蛋白(BSA)、1.5g/L碳酸氢钠、1×谷氨酰胺(GlutaMAX)、10mM葡萄糖、0.25M的维生素C、1×胰岛素-转铁蛋白-硒-乙醇胺添加剂(ITS-X)、50ng/ml成纤维细胞生长因子(KGF)、0.5μM SANT1(抑制剂靶点为smo)、100nM维甲酸(TTNPB)、500nM佛波醇12，13-二丁酸酯(PDBu)、2μM ALK抑制剂(K02288)、WNT信号通路抑制剂，所述浓度均为终浓度；3)由胰腺前体细胞进一步分化获得胰岛β细胞：a.配制胰岛β细胞培养基1，将经过步骤2)培养后的细胞，更换为胰岛β细胞培养基1，于37摄氏度二氧化碳培养箱内培养5天，每天更换培养基；b.配制胰岛β细胞培养基2，将经过上述步骤a胰岛β细胞培养基1培养后的细胞，更换为胰岛β细胞培养基2，于37摄氏度二氧化碳培养箱内培养5天，每天更换培养基；所述胰岛β细胞培养基1的组成为：以MCDB131培养基为基础培养基，还包括下述工作浓度成分：20m M的葡萄糖、2％牛血清白蛋白(B SA)、1.5g/L碳酸氢钠、1×谷氨酰胺(GlutaMAX)、0.05mM维生素C、1×胰岛素-转铁蛋白-硒-乙醇胺添加剂(ITS-X)、2μM ALK抑制剂(K02288)、1μM三碘甲状腺原氨酸(T3)、10μM YO-01027(Notch信号通路抑制剂)、10μM 硫酸锌，所述浓度均为终浓度；所述胰岛β细胞培养基2的组成为：以MCDB131培养基为基础培养基，还包括下述工作浓度成分：20m M的葡萄糖、2％牛血清白蛋白(B S A)、1.5g/L碳酸氢钠、1×谷氨酰胺(GlutaMAX)、0.05mM维生素C、1×胰岛素-转铁蛋白-硒-乙醇胺添加剂(ITS-X)、1μM三碘甲状腺原氨酸(T3)、10μM Repsox(ALK5抑制剂)、10μM维生素E、10μg/ml肝素钠、2μM R428(Axl 抑制剂)、10μM硫酸锌、10mM N-乙酰-L-半胱氨酸(N-cys)，所述浓度均为终浓度。

动物细胞工程第一章动物细胞工程概论一、动物细胞工程的概念1.动物细胞工程的定义动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的技术方法对动物细胞进行各种操作并使其在体外生长、增殖、分化以生产有用产品或引向成体化（产生新型生物个体）的技术体系，是生物技术（生物工程）的重要组成部分。

狭义细胞工程指对细胞个体进行的各种操作，广义的细胞工程包括对细胞、组织、器官所进行的各种操作。

2.动物细胞工程研究的主要内容以狭义细胞工程为主，兼顾组织、器官工程等内容的研究。

(1)狭义细胞工程：研究体外分离、培养、增殖、分化动物细胞的条件以及保存、操作及利用动物细胞的工艺技术体系。

(2)组织工程：研究体外培养、增殖动物组织的条件以及保存、操作及利用动物组织的工艺技术体系。

(3)器官工程：研究体外培养、增殖器官的条件以及保存、操作及利用动物器官的工艺技术体系。

(4)动物胚胎工程：研究动物胚胎生产、保存、操作及移植的工艺技术体系。

3.动物细胞工程研究的意义(1)是动物繁殖的重要技术手段加快动物繁殖速度：A.体外受精生产胚胎 B.胚胎移植生产动物(2)是人类辅助生殖技术的重要组成部分体外受精—胚胎移植技术，可以克服雄性不育和雌性不孕；(3)是动物遗传育种的重要技术手段对精子或卵子进行遗传操作，或利用细胞融合、胚胎嵌合技术可以使若干个动物性状进行有机组合，产生新的生物个体；(4)生产药物直接培养细胞或组织，从细胞或组织代谢物中直接获得药物;对细胞进行遗传操作，生产转基因动物，利用转基因动物生产药物（生物反应器）；(5)保存珍惜动物资源由于动物克隆技术的成功，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生命个体，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生物种群(6)提供人类器官移植的材料人类器官移植发展很快，目前可以进行心脏、肝、肾脏移植，可以进行皮肤、角膜、骨髓细胞移植。

三、动物细胞工程讲授的主要内容1.动物细胞、组织培养2.动物细胞融合3.动物细胞重组4.向细胞内引入高分子物质5.动物细胞冷冻保存6.动物胚胎工程四、动物细胞工程实验（实习）内容1.实验仪器设备的识别与使用2.动物细胞培养用液的制备3.动物胎儿成纤维细胞分离与培养4.动物细胞常规检查和生物学检测5.培养细胞的冻存与复苏五、动物细胞工程研究取得的重要进展1.精液采集、精液冷冻与人工授精技术的成熟和发展，为充分发挥利用雄性动物生殖潜力奠定了基础；2.雌性动物卵母细胞体外成熟培养技术的成功，使人们在体外完成动物生殖过程成为可能；3.体外受精与胚胎移植技术的成功，产生了试管婴儿，试管牛，试管猪，试管山羊，试管兔；4.细胞核移植技术的成功，使人们克隆高等哺乳动物的梦想得以实现体细胞核移植、胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植技术的成功，为克隆动物和转基因动物生产提供了技术支撑；5.胚胎干细胞与组织干细胞成功分离、体外扩增与诱导分化研究的成功，为人类医学发展提供了宝贵的材料；胚胎干细胞，胰腺干细胞，神经干细胞，骨髓干细胞，皮肤干细胞，角膜干细胞6.转基因细胞（细胞转染基因）技术的成功，为转基因动物的生产创造了条件；7.胚胎嵌合技术一种或两种动物胚胎共同生长发育形成一个生物个体的技术，即在一个生物体内，含有来源于两个不同胚胎的细胞和组织；8.细胞融合技术将两种或两种以上的细胞融合，形成一个具有新性状的细胞，这种技术称为细胞融合技术。

猪胰腺干细胞分离与培养猪腺干细胞分培细胰离与王细～细忠英～细海～细～细春细婷;西北细林科技大家干细胞生物技细中心细西分中心～细西细凌学国712100, 摘要,【目的】探细一细细细的腺干细胞的分方法胰离,以便细糖尿病的细胞治细究提供富的细研丰【方法】采用细消化法分细得细胞～利用细含有胰离 5%的血的清 RPMI 1640 培细基培细细胞～低细度的细胞大量死亡漂浮～只留下少细壁的小细细胞数。

而后血细度提高到将清 15%以上细细培细;采用免疫细细得的细胞是否具有腺干细胞特征予以细细胰～细定了细胞的生细曲细并。

【细果】在血细度提高后每清胞能快速增殖形成一克隆～细细细细增殖后的细胞可以细细细代～目前已细至并个 60 代。

细免疫细化细表达 PDX-1、GLUT-2、vimentin 等腺干细胞的细志胰;细胞也表达Glucagon、insulin、somatostatin、pol等胰腺内分泌细胞的细志.【细细】通细本方法细得的细胞细细细定确细胰腺干细胞,在体外可自细分化分泌部内 4 细主要细胞。

细细细,胎猪～细～腺干细胞～糖尿病胰胰Isolation and Culture of Porcine Fetus Islet Stem CellWANG Yun, DOU Zhong-ying, QIAO Hai, ZHAO Ting, YANG Chun-rong(Shaanxi Province Branch Center of National Stem Cell Engineering Technology Center, Northwest Agricultural aUniversity, Yangling 712100, Shaanxi)Abstract:【Objective】To find an easy method for islet stem cell isolation.【Method】Cells derived fromporcinhave been cultured in RPMI 1640 with only 5% serum. This method made most of those cells die. Only a few lsurvived. These cells proliferated quickly when medium was changed to RPMI 1640 with 15% serum and could foIslet stem cell’s marker was noticed and detected by immunochemical method.【Result】Cells possess strongproliferawere sub cultured over 60 passages till now. It expressed islet stem cell’s marker such as PDX-1, GLUT-2, and vimen expressed insulin, Glucagon, somatostatin and polypeptide.【Conclusion】Cells derived by this method were determincells. It can differentiate into islet endocrine cell in vitro. This study has provided a reference for isolation and expansicell. Also, it has provided materials for diabetes therapy.Key words: Porcine fetus; Islet; Islet stem cell; Diabetes成熟～细细胞移植已成细治愈糖尿病胰[2]0引言法。

从胰岛移植到胰岛干细胞移植姚　磊(哈尔滨医科大学第二临床医学院普外四科,黑龙江哈尔滨150086)关键词:胰岛移植;胰岛干细胞移植学科分类代码:32012765 中图分类号:R62219 文献标识码:A 文章编号:1004-5775(2008)04-0266-04 糖尿病是由多种原因引起的胰岛β细胞功能减退或衰竭,导致胰岛素绝对或相对不足,机体出现糖代谢紊乱,进而造成全身多器官损害的一种疾病。

其中,I型糖尿病患者终生需要依赖胰岛素治疗,给患者的生活带来极大的不便。

借助于分子生物学技术,利用基因工程的方法,人们现在已经可以为糖尿病患者提供十分优质的胰岛素及其类似物,并在胰岛素输注技术上也有了全新的改观,从而提高了糖尿病治疗的顺应性,但糖尿病学家在胰岛移植这一研究领域的艰辛探索并未停止过。

从最初的胰腺移植到以后的胰岛移植;从同种异体胰岛移植到异种胰岛移植;从免疫特许部位胰岛移植到微囊化胰岛移植;从胰岛的分离、纯化到冷冻保存;从转基因克隆细胞到胰岛干细胞的诱导及移植,不仅反映了人们在这一领域的认识轨迹,同时也反映了这一技术内在的发展规律。

1　胰岛的制备和培养自从1967年Lacy等,从胰腺分离出胰岛并体外培养成功后,胰岛分离纯化技术不断改善〔1〕。

111　常规分离培养法常规消毒后,无菌条件下取出胰腺,置于冷的无菌的Hanks液中漂洗,除去包膜、血管、脂肪组织、淋巴结等胰外组织,将胰腺剪成110mm3的小块置于RP MI-1640培养液(20%胎牛血清与庆大霉素50μg/m L)中,pH约712,在37℃恒温, 95%氧气、5%C O2的细胞培养孵箱内培养,隔日调换培养液,培养1～2周。

但用此方法分离出的胰岛纯度及质量不高。

112　胶原酶消化方法无菌条件下除去胰外组织,Hanks液冲洗,剪成015～110mm3大小,用新配制的胶原酶消化,再用Ficoll液密度梯度离心,使其与外分泌部分离〔2〕。

自1984年G ray及1985年Scharp相继介绍先从胰管内注入高浓度胶原酶,经短期培养后,用尼龙筛过滤或行Ficoll密度梯度离心,可获得较大数量的纯化胰岛,每个成人胰腺能分离出810～20万个胰岛。

大鼠胰岛细胞的分离培养与鉴定苏力担卡扎·仇曼;林海;何铁英;程坤;王松;郝晓文;陈启龙;韩玮【摘要】目的探讨胰岛细胞的分离、培养与鉴定.方法从实验室中挑选出30只成年雄性大鼠,将胶原酶注入大鼠的胰腺导管,聚蔗糖梯度离心法分离胰岛细胞,并培养与鉴定胰岛细胞.培养1周后用双硫腙(DTZ)行胰岛细胞鉴定.用丫啶橙(Ao)、碘丙啶(PI)检测胰岛细胞活性.结果经过分离与纯化,大鼠胰岛细胞的获得率较高且较稳定;分离后的胰岛细胞在适宜环境中生长,生长状态较佳,在培养后的12 ～ 24 h可贴壁,在培养后4～5d细胞生长状态达到顶峰,细胞完好,且折光性能优异.利用免疫组化法鉴定胰岛细胞,分离的细胞SMA及PDGFR表达呈阳性,少数细胞vWF表达呈阳性.结论我科此次分离纯化大鼠胰岛细胞的方法为逆行灌注胶原酶+原位消化+Fico11液梯度分离法,实验结果显著,能在一定程度上获取纯度较高的大鼠胰岛细胞.分离后的胰岛细胞在培养4～5d后达到最佳状态,适用于作为实验室胰岛细胞功能深入研究的实验材料.【期刊名称】《肝胆胰外科杂志》【年(卷),期】2016(028)005【总页数】4页(P389-392)【关键词】胰岛细胞;分离;培养;鉴定;大鼠【作者】苏力担卡扎·仇曼;林海;何铁英;程坤;王松;郝晓文;陈启龙;韩玮【作者单位】新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院胰腺外科,新疆乌鲁木齐830054【正文语种】中文【中图分类】Q81320世纪90年代末期以来，国内及国外许多优秀的医学研究学者把实验室大鼠胰岛细胞的分离与培养作为研究胰岛细胞功能的一项重要科学课题［1-2］。

ＣＲＴＥＲ青岛大学医学院附属医院内分泌科，山东省青岛市２６６００３杨芬★，女，１９６６年生，河南省安阳市人，汉族，青岛大学医学院在读硕士，主要从事诱导分化胰岛干细胞方面的研究。

ａｙｗｘｙｆ＠１２６．ｃｏｍ中图分类号：Ｒ５８７．１文献标识码：Ａ文章编号：１６７３－８２２５（２００７）０７－０１３３３－０４收稿日期：２００６－１０－１９修回日期：２００６－１２－０６（０６－５０－１０－７５４８／ＺＳ・ＬＬ）胰岛干细胞来源及诱导分化与分子标记物★杨芬，杨乃龙Ｓｏｕｒｃｅｓ，ｉｎｄｕｃｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓＡｂｓｔｒａｃｔＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｓａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｄｉａｂｅｔｅｓｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｉｔｍａｙｏｖｅｒｃｏｍｅｔｈｅｓｈｏｒｔａｇｅｏｆｈｕｍａｎｄｏｎｏｒｉｓｌｅｔｓａｎｄａｖｏｉｄｔｈｅｌｏｎｇ－ｔｅｒｍａｐｐｌｙｉｎｇｏｆｉｍｍｕｎｉｔｙｄｅｐｒｅｓｓｏｒｓ．Ｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ，ｗｅｒｅｖｉｅｗｔｈｅｒｅｃｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅｓｏｕｒｃｅｓ，ｉｎｄｕｃｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．ＤＡＴＡＳＯＵＲＣＥＳ：Ａｃｏｍｐｕｔｅｒ－ｂａｓｅｄｏｎｌｉｎｅｓｅａｒｃｈｏｆＰＵＢＭＥＤｗａｓｕｎｄｅｒｔａｋｅｎｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｒｅｌａｔｉｖｅａｒｔｉｃｌｅｓｐｕｂｌｉｓｈｅｄｉｎＥｎｇｌｉｓｈｆｒｏｍＪｕｎｅ１９９７ｔｏＪｕｎｅ２００６ｗｉｔｈｔｈｅｋｅｙｗｏｒｄｓｏｆ＂ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ，ｓｔｅｍｃｅｌｌ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ，ｍａｒｋｅｒ＂．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｗｅｓｅａｒｃｈｅｄＷａｎｆａｎｇｄａｔａｂａｓｅｆｏｒｔｈｅｒｅｌａｔｅｄＣｈｉｎｅｓｅａｒｔｉｃｌｅｓｐｕｂｌｉｓｈｅｄｂｅｔｗｅｅｎＪｕｎｅ１９９７ａｎｄＪｕｎｅ２００６ｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｋｅｙｗｏｒｄｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅ．ＳＴＵＤＹＳＥＬＥＣＴＩＯＮ：Ｔｈｅａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｆｉｒｓｔｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｔｈｅｑｕｏｔａｔｉｏｎｓｃｉｔｅｄｂｙｅｖｅｒｙａｒｔｉｃｌｅｗｅｒｅｌｏｏｋｅｄｏｖｅｒ．Ｉｎｃｌｕｓｉｖｅｃｒｉｔｅｒｉａ：Ｔｈｅａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｃｕｓｉｎｇｏｎｔｈｅｓｏｕｒｃｅ，ｉｎｄｕｃｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｅｘｃｌｕｓｉｖｅｃｒｉｔｅｒｉａ：ＲｅｐｅａｔｅｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｏｒＭｅｔａａｎａｌｙｓｉｓａｒｔｉｃｌｅｓ．ＤＡＴＡＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｉｎｃｌｕｓｉｖｅｃｒｉｔｅｒｉａ，３１ａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｆｉｎａｌｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄａｍｏｎｇｔｈｅ８２ｏｎｅｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｄａｔａｂａｓｅｓ．Ｆｉｆｔｙ－ｏｎｅｏｌｄｄａｔａｏｒｄｕｐｌｉｃａｔｅｄｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｗｅｒｅｅｘｃｌｕｄｅｄ．Ａｍｏｎｇｔｈｅ３１ｓｅｌｅｃｔｅｄａｒｔｉｃｌｅｓ，６ｐｒｅｓｅｎｔｅｄｔｈｅｍａｉｎｃｏｎｃｅｐｔｉｏｎｓ，１５ｗｅｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌａｎｄｉｔｓｉｎｄｕｃｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，９ｗｅｒｅｆｏｃｕｓｅｄｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓａｎｄ２ｄｉｓｃｕｓｓｅｄｔｈｅｍａｊｏｒｏｂｓｔａｃｌｅｓａｔｐｒｅｓｅｎｔ．ＤＡＴＡＳＹＮＴＨＥＳＩＳ：Ｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｒｅｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔｉａｌｃｅｌｌｓｗｉｔｈｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｏｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗ；ｔｈｅｙａｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏｔｗｏｍａｊｏｒｃｌａｓｓｅｓ：ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌａｎｄａｄｕｌｔｓｔｅｍｃｅｌｌ．Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏｔｈｅａｄｕｌｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ｃｏｕｌｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏｔｕｂｅｃｅｌｌｓ，ｉｎｓｕｌｉｎ－ｓｅｃｒｅｔｉｎｇｃｅｌｌｓ，ｅｘｏｃｒｉｎｅｃｅｌｌｓａｎｄｏｔｈｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｎｃｒｅａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｃｈｐｏｓｓｅｓｓｔｈｅｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ．Ｔｈｅｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｓｏｕｒｃｅｓ，ｉｎｄｕｃｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｒｅｅｘｔｒｅｍｅｌｙｕｓｅｆｕｌｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｒｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｂｅｓｉｄｅｓｇｅｎｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｉｎｓｕｌｉｎ－ｓｅｃｒｅｔｉｎｇｃｅｌｌｓａｒｅｍａｉｎｌｙｇｅｎｅｒａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄａｄｕｌｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓｓｕｃｈａｓｐａｎｃｒｅａｔｉｃｄｕｃｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ｎｅｓｔｉｎ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍ／ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｃｅｌｌｓ，ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｔｏｔｈｅｂａｓｉｃａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈ．ＰＤＸ－１，ｎｅｓｔｉｎ，ＣＫ－１９，ＣＫ－２０，Ｎｇｎ３ａｎｄＰＧＰ９．５ａｒｅｔｈｅｍａｊｏｒｍａｒｋｅｒｓｕｓｅｄｉｎｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｈｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓｏｎｉｓｌｅｔｃｅｌｌｓａｎｄｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓａｒｅｐｒｏｍｏｔｉｎｇ．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔｓｉｎｓｅａｒｃｈｆｏｒｔｈｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｈａｖｅｂｅｅｎａｃｈｉｅｖｅｄ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｍａｎｙｏｂｓｔａｃｌｅｓｓｈｏｕｌｄｂｅｏｖｅｒｃｏｍｅｂｅｆｏｒｅａｎｙｃｌｉｎｉｃａｌｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｓｃａｎｂｅｅｘｐｅｃｔｅｄ．Ｗｉｔｈｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｉｎｓｔｅｍｃｅｌｌｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｉｔｉｓｐｏｓｓｉｂｌｅｔｏｏｂｔａｉｎｅｎｏｕｇｈｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｆｒｏｍｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．ＹａｎｇＦ，ＹａｎｇＮＬ．Ｓｏｕｒｃｅｓ，ｉｎｄｕｃｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．ＺｈｏｎｇｇｕｏＺｕｚｈｉＧｏｎｇｃｈｅｎｇＹａｎｊｉｕｙｕＬｉｎｃｈｕａｎｇＫａｎｇｆｕ２００７；１１（７）：１３３３－１３３６（Ｃｈｉｎａ）［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ／ｚｇｌｃｋｆ／ｅｊｏｕｒｎａｌ／ｕｐｆｉｌｅｓ／０７－７／７ｋ－１３３３（ｐｓ）．ｐｄｆ］摘要目的：胰岛干细胞移植是治疗糖尿病的一条新途径，可避免胰腺供体匮乏及长期使用免疫抑制剂的问题。