丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)

酸氨基转移酶(ALT)测定（速率丙氨法）标准化操作程序文件1概述肝脏内含有丰富的酶系统，以维持机体的正常生理代谢过程。

不少酶是由肝脏合成并由肝胆系统排泄，当肝脏有病时，可由于酶生成亢进或释出异常，引起血清内酶的活性改变。

这些改变在一定程度内反映了肝脏的功能状况。

人体转氨酶的种类甚多，而以血清丙氨酸氨基转移酶，血清天门冬氨酸转换酶活性最强。

此两种酶广泛在于机体组织细胞内，以肝脏，心脏，肾脏及骨骼肌中较多。

在肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量最多，AST以心肌含量最多，此两种转氨酶较多地释放在血液中，使血清中两种酶活性增高。

2 样本收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3 方法原理L-丙氨酸+α-酮戊二酸—————→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH—————→L-乳酸+NAD﹢4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。

试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量15 u/l 试剂量：第一试剂240 u/l（R1）；第二试剂60 u/l测光点23—38 测定模式：速率法负反应分析波长：340nm/405nm(主波长/副波长)6计算方法样本浓度（U/L）=样本管吸光度的变化×校准液浓度（U/L）校正管吸光度的变化7 线性范围：本实验的线性范围：4----1000U/L8 参考范围：男性；：5—40U/L 女性：5---35 U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)检测试剂盒说明书【产品名称】丙氨酸氨基转移酶（ALT/GPT）试剂盒【包装规格】2000人份，1000人份，500人份，200人份【预期用途】本试剂用于体外在酶标仪，生化分析仪上测定血清中丙氨酸氨基转移酶活性。

【检验原理】L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT 丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+P+O2 PO H2O2+乙酰磷酸H2O2+色原剂POD 红色化合物【主要组成成份】R150m l×1瓶L-丙氨酸、a-酮戊二酸、TBHBA、低铁氰化钾。

R2 2.5m l×1瓶丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林。

R3 50m l×1瓶终止剂校准血清0.75ml×1瓶(校准值请参见校准血清包装标签）质控血清0.75ml×1瓶(质控值请参见质控血清包装标签）【条件及有效期储存】1．储存条件：试剂在2-8ºC密封保存。

若试剂出现颗粒物质、浑浊或在492nm处用蒸馏水调零，试剂吸光度值≥0.150时，请不要使用。

校准血清和质控血清于-15ºC以下冰室内保存。

2．有效期：自生产日期起2~8℃保存，有效期为半年。

工作液存放于2~8℃可稳定一周。

【适用仪器】酶标仪：HT3；MK3；ZS-3；Spectra系列Ⅲ；BioRad系列680 【样本要求】血清1. 由于标本中红、白细胞糖酵解作用而产生丙酮酸，造成ALT假性增高，如8小时内不测定，将标本在2~8℃冰箱内保存。

2. 血清ALT>100 KarU的标本，用生理盐水将标本按1：9稀释后再测定，将结果乘以10。

【检验方法】1.工作液配制根据自己实验室工作量可任意选择下列一种方法配制工作液。

（1）用前取R2瓶试剂倒入R1瓶内混匀，然后小心地将少量R1再倒入R2瓶内，最后再倒入R1瓶内，混匀待用。

（2）用前分别取R1试剂2.0份与R2试剂0.1份（20比1）比例混匀待用。

丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒（丙氨酸底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清中丙氨酸氨基转移酶的活性。

1.1 规格试剂1:3×60 mL，试剂2:1×45 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×20 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×12 mL；试剂1:4×60 mL，试剂2:4×15 mL；试剂1:2×40 mL，试剂2:2×10 mL；试剂1:3×28 mL，试剂2:3×7 mL；试剂1: 1×4L，试剂2: 1×1L；试剂1: 2×4L，试剂2: 1×2L。

1.2 主要组成成分试剂1主要组分：试剂2主要组分：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。

2.2 外观试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液。

外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度应不小于1.0（波长340nm，光径1cm）。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率（△A/min）应不大于0.004。

2.4 分析灵敏度测试100U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0025。

2.5 准确度用参考物质(GBW09177)定值的血清测定，实测值与标示值的偏差不超过±12.0％。

2.6 重复性批内变异系数（CV）应不大于5%。

2.7 线性2.7.1在[0.5，800]U/L区间内，线性相关系数r应不低于0.9900；2.7.2[0.5，96）U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±11.52U/L；[96，800]U/L 区间内，线性相对偏差应不超过±12%。

2.8 批间差批间差应不大于10％。

2.9 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，检测结果应符合2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7的要求。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)简介：Leagene 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，丙酮酸与NADH 经LDH 催化生成NAD +，上述方法实际为ALT 速率法，其反应公式如下：L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。

丙酮酸+NADH+H +→L-乳酸+NAD +。

在上述偶联反应中，NADPH 的氧化速率与样本中酶活性呈正比。

对于单试剂速率法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT 催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在340nm 处吸光度下降速率(-ΔA /min)，下降速率(-ΔA /min)与ALT 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，进而计算酶的活性单位。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①_x0001_ 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。

②_x0001_ 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。

③_x0001_ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT 含量。

编号 名称TE0125 100TTE0125 200TStorageALT 检测液(R)成分 终浓度 2×50ml 2×100ml 4℃ 避光Tris 缓冲液 100mM L-丙氨酸 500mM 酮戊二酸 15mM NADH 0.18mM LDH 1700U/L 防腐剂 15mM使用说明书1份分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

丙氨酸氨基转移酶试剂盒（丙氨酸底物法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作, 保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。

2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。

3 适用范围: 本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活力。

4 检验方法本试剂反应原理采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐的方法。

5 检验原理在丙氨酸氨基转移酶的作用下, L-丙氨酸与α-酮戊二酸反应, 生成丙酮酸和L-谷氨酸。

丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸, 同时NADH被氧化为NAD＋, 使340nm处的光吸收值下降, 通过监测340nm处光吸收值下降的速率, 可以测定丙氨酸氨基转移酶活力。

样品中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH在反应延迟时间内消除, 不会干扰测定。

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+6 检验标本要求6.1 样本为血清。

6.2 不得使用溶血或被污染的样本。

6.3 样本在2℃~8℃条件下可保存7天、室温条件下可保存1天。

7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司丙氨酸氨基转移酶试剂盒7.2试剂组成7.3试剂的稳定性与贮存:7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下, 干燥、避光、密封贮存, 有效期为18个月。

7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天, 试剂不可冷冻。

7.3.3 反应液在2℃~8℃可稳定30天。

7.4试剂的变质指示: 若试剂混浊, 或在340 nm处试剂空白吸光度值低于1.000A 时, 不能使用。

8 实验仪器及性能指标8.1实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 空白吸光度: A≥1.000。

8.2.2 空白吸光度变化率: ︱△A︱/min≤0.002/min。

8.2.3 分析灵敏度：测试1U/L被测物时, 吸光度变化率（△A/min）＜-0.0001。

血清丙氨酸氨基转移酶测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。

ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮LDH（乳酸脱氢酶）酸+ L-谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD++ H2O 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与`样品中ALT的活力成正比,在340nm处NADH呈现特性吸收峰，而NAD+则没有。

因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-△A/min）,计算出ALT的活性单位。

2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂欧泰克ALT测定试剂盒6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH 7.4 80mmol/LL-丙氨酸800mmol/LLDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/La-酮戊二酸18mmol/LNADH 0.18mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。

不可入口！避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

7. 仪器：日立7060生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

一、诺华单人份核酸检测试剂参数1.适用于核酸检测设备，试剂原理：转录介导扩增技术。

★2.试剂灵敏度：常规工作模式下： HIV-1：21.2 IU/ml、HCV: 5.4 IU/ml、HBV: 3.4 IU/ml★3.检测形式：检测系统能够在同一反应管内同时进行HBV DNA/HCV RNA/HIV-1 RNA三项核酸检测4.内置的过程控制：核酸检测试剂盒包含有内对照，能够监控核酸提取、扩增和检测全过程5.灵活的试管兼容性：检测试剂适合用于标本类型为血清以及EDTA、ACD、CPD、CPDA抗凝的血浆★6.全封闭系统：核酸提取、扩增、检测在同一密闭系统中进行，核酸纯化产物的转移无需人工干预7.扩增系统：扩增反应体系由仪器自动加样，检测试剂有防污染设计，降低污染发生★8.应急标本检测：检测系统能满足随时插入应急标本进行检测的需求。

9．检测模式：适用于单检或混样检测，对血站现有采供血流程应无影响。

★10.应急模式：单采血小板和应急标本必须实施单检模式，单采血小板和应急标本的判定由血液中心自行指定。

11.其他检测性能：针对HIV-1，具有两个或两个以上的检测区域。

二、BECKMAN COULTER丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒（乳酸脱氢氨法）参数一、适用Beckman Coulter AU400分析仪二、试剂用途：定量测定人血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）三、技术参数1．试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。

2．储藏和稳定性：在2-8℃不开封储藏时，试剂可保持稳定到声明的失效期；开封后，在分析仪上储藏时，可保持稳定30天3.参与反应成分的最终浓度：Tris 缓冲液，pH：7.15 (37°C) 100 mmol/LL- 丙氨酸 500 mmol/L2-氧戊二酸盐 12 mmol/LLDH ≥ 1.8 kU/LNADH 0.20 mmol/L4、线性：在3-500U/L(0.05-8.33ukat/L)的浓度范围内，实验结果呈线性。

丙氨酸氨基转移酶检测操作程序丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase ，ALT ）属于转氨酶类，主要存在于肝细胞内，参与肝细胞内的新陈代谢，在血液中不发挥催化作用。

采用速率法测定，能有效地降低内源性物质的干扰，使测定结果较为准确。

主要用于肝脏等疾病的诊断。

实验原理L-丙氨酸和a-酮戊二酸在ALT 作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。

丙酮酸被试剂中的LDH 还原为L-乳酸，同时NADH 被氧化为NAD +，通过监测340nm 处吸光度值下降的速率，可以测定ALT 活力。

样本中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH 在初始孵育期内快速、完全地消除，不会干扰测定。

反应如下：L-丙氨酸 + a-酮戊二酸丙酮酸 + L-谷氨酸丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+样本中丙酮酸 + NADH L-乳酸 + NAD+试剂与仪器1. 试剂1.1.丙氨酸氨基转移酶试剂盒（由上海复兴长征医学科学有限公司提供）化学组成：R1: L-丙氨酸600mmol/L 乳酸脱氢酶 ＞1820U/L NADH 0.26mmol/L Tris 缓冲液 80mmol/L R2: Tris 缓冲液 80mmol/L a-酮戊二酸 36mmol/LEDTA5.0mmol/L在开展项目之前或更换试剂品牌时，将以上工作参数输入到仪器内，并按要求进行调整后，方可进行实验。

技术性能指标:试剂空白起始吸光度（340nm37℃）≤1.60A 。

线性范围：450U/L ±10%。

准确度：相对偏差(RE%)≤±10%。

精密度：批内精密度变异系数(CV%)≤5%；批间精密度相对极差(%)≤5%。

储存条件、有效期：储存于2～8℃，避光可稳定12个月。

启用后可稳定30天。

混浊或以蒸馏水为空白在340nm 处光吸收值高于1.0A 时，则不能使用。

ALTLDH LDH计算公式： ALT(U/L )= K= ——————————式中 TV=总反应体积(mL )SV=样本体积(mL )6.3=NADH 在340nm 处的毫摩尔吸光系数P=比色杯光径(cm )K 为工作参数表中的【K Factor 】以上是依据化学实验计算测试结果的公式，全自动分析时将工作参数（K 值）输入仪器即可。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)1．检测目的规范丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测实验，确保检测结果的准确性和重复性。

2.标本采集(1)ALT测定可以采用血清、肝素或EDTA抗凝血浆。

(2)稳定性：在室温(20℃)可以保存48小时，在4℃冰箱可保存l周，在一25℃以下可保存1个月。

(3)建议使用带分离胶的真空采血管，并及时分离血清。

3.测定方法(1)方法：速率法(2)原理：在ALT速率法测定中酶偶联反应式为L一丙氨酸+α一酮戊二酸 A L T 丙酮酸+L一谷氨酸丙酮酸+NADH+H+L D H L一乳酸+NAD++H20上述偶联反应中．NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，在340nm波长处，NADH呈现特征性吸收峰，而NAD+则没有。

因此，可在340nm处连续监测吸光度的下降速率( - △A／min)，计算出ALT的活性单位。

4.试剂试剂成份实验深度RⅠa-酮戊二酸NADH乳酸脱氢酶(LDH)15mmol/l0.18mmol/l≥5000U/LRⅡTris缓冲液（PH7.3)L-丙氨酸100mmol/L 500mmol/L5.校准(1)校准物的准备与保存，严格按照购置说明执行。

(2)校准频率：①新仪器设备在开始使用时；②设备进行重要维护保养以及发生故障维修之后；③试剂盒在仪器上28天后；④试剂批号更改后；⑤更换试剂厂家后；⑥由室内质控结果决定；⑦定期校准，可由实验室根据检测系统(仪器与试剂)的情况自行决定校准周期。

6质量控制(1)质控品：质控品应选择稳定、瓶间差小、基质效应小的物质。

同时，因为是定量检测项目，所以应选择两个不同浓度水平的质控品，这样有利于在不同的医学决定性水平上监测方法的性能。

(2)质控方法的选择：备选的质控规则如下：12s(一个质控结果超出i±2SD为违背此规则，提示警告)。

13s(一个质控结果超过i±3SD为违背此规则，提示失控，存在随机误差)。

22s(两个连续质控结果同时超过i±2SD，提示失控，存在系统误差)。

丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（速率法）说明书[产品名称] 通用名称: 丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（速率法）英文名称:L-Alanine Aminotransferase Assay Kit（ALT）[包装规格]2×200Tests；2×400Tests；R1:4×60ml、R2:4×15ml；R1:4×80ml、R2:4×20 ml；R1:4×120ml、R2:2×60ml；R1:8×40ml、R2:2×40ml；R1:4×50ml、R2:2×25 ml；R1:2×40ml、R2:2×10ml；R1:4×50ml、R2:4×25ml。

[预期用途] 用于体外定量检测人血清中的丙氨酸氨基转移酶的活力。

[检验原理]ALTL-丙氨酸 +α-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDH丙酮酸 + NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ + H2O[主要组成成份]由试剂R1和试剂R2组成。

试剂R1：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、乳酸脱氢酶（LDH）、L-丙氨酸、α-酮戊二酸；试剂R2：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、还原型辅酶（NADH）。

[储存条件及有效期] 试剂在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期。

有效期12个月。

开瓶后2℃～8℃可稳定30天。

备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。

[适用仪器]日立7170、奥林巴斯AU640、贝克曼LX-20全自动生化分析仪。

[样本要求]使用新鲜的无溶血血清，血清不宜反复冻融，以免影响酶活性。

[检验方法]（1）双试剂无需配制，直接使用。

（2）试验条件：样本（S）：15 µl试剂1(R1) ：200 µl 试剂2（R2）：50 µl温度：37 ℃测定类型：速率法主波长：340 nm 副波长：405 nm 反应方向：下降方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后2分钟至4分钟之△A/min 。