MTT法检测RAW264_7细胞活力及可能因素分析

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mtt法检测细胞活性实验报告

mtt法检测细胞活性实验报告MTT法检测细胞活性实验报告细胞活性是评估细胞健康和功能的重要指标。

在细胞培养实验中，MTT法被广泛应用于评估细胞的存活率和代谢活性。

本实验旨在通过MTT法检测细胞活性，探究不同处理条件对细胞的影响，并分析实验结果。

实验材料和方法：1. 细胞培养：选取人类肺癌细胞株A549作为实验对象，通过传代培养维持细胞的生长状态。

2. 细胞处理：将A549细胞均匀分配到不同处理组，包括对照组和实验组。

实验组根据需求添加不同浓度的药物处理，对照组则不添加药物。

3. MTT法测定细胞活性：将处理后的细胞悬液均匀分配到96孔板中，每组设置3个孔位。

加入MTT溶液，孵育一定时间后，加入溶解液，最后测定吸光度。

实验结果：通过MTT法测定细胞活性，我们得到了以下结果。

1. 实验组A：添加药物A处理的细胞活性明显下降。

随着药物A浓度的增加，细胞存活率呈现逐渐下降的趋势。

最高浓度的药物A处理组，细胞存活率仅为对照组的30%。

2. 实验组B：添加药物B处理的细胞活性呈现剂量依赖性下降。

低浓度的药物B处理组，细胞存活率与对照组相近。

高浓度的药物B处理组，细胞存活率显著下降，仅为对照组的50%。

3. 实验组C：添加药物C处理的细胞活性呈现非线性变化。

低浓度的药物C处理组，细胞存活率略高于对照组。

中等浓度的药物C处理组，细胞存活率降低，但仍高于对照组。

高浓度的药物C处理组，细胞存活率显著下降，仅为对照组的40%。

讨论与分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论。

1. 药物A对A549细胞具有明显的抑制作用。

随着药物A浓度的增加，细胞存活率逐渐降低，表明药物A可能具有抗肿瘤活性。

然而，高浓度的药物A处理组细胞存活率仅为30%，可能存在细胞毒性作用。

2. 药物B对A549细胞的影响呈现剂量依赖性。

低浓度的药物B处理组细胞存活率与对照组相近，可能对细胞没有明显影响。

然而，高浓度的药物B处理组细胞存活率下降，表明药物B可能对细胞产生抑制作用。

MTT法检测细胞活力精讲

耐药性机制研究
通过MTT法可以研究肿瘤耐药性的机制，了解耐药相关基因和蛋白的表达及功能。
逆转耐药性
MTT法可用于筛选能够逆转肿瘤耐药性的药物或分子，提高肿瘤治疗的疗效。
注意事项与局限性
01
02
03
04
实验条件控制
细胞状态与培养时间
干扰因素
仅适用于贴壁细胞
MTT法的实验条件需严格控制，以确保实验结果的准确性和可靠性。
细胞类型特异性
MTT法在不同类型的细胞中表现出不同的敏感性，可用于研究不同细胞类型的毒性特征。
细胞凋亡检测
通过MTT法可以检测细胞凋亡的发生，了解凋亡相关基因和信号通路的活性。
在肿瘤耐药性研究中的应用
肿瘤耐药性评估
MTT法可用于评估肿瘤细胞对化疗药物的耐药性，为制定有效的治疗方案提供依据。
通过MTT法可以研究药物的作用机制，了解药物对细胞生长、增殖和凋亡等方面的影响。
药物浓度与细胞毒性关系
通过MTT法可以观察不同浓度的药物对细胞活力的影响，从而确定药物的毒性阈值和安全使用范围。
在细胞毒性研究中的应用
01
02
03
细胞毒性评估
MTT法可用于评估不同因素对细胞造成的毒性作用，如化学物质、辐射、病毒等。
80%
细胞毒性评估
通过比较给药组与对照组的OD值，可评估药物的细胞毒性。OD值降低表明药物对细胞活力产生负面影响。
02
mtt法的操作步骤
细胞培养与样品准备
细胞培养
选择适宜的细胞系，在适宜的培养条件下进行细胞培养，确保细胞生长旺盛、状态良好。
样品准备
将待检测的细胞样品离心，去除培养液，并用磷酸盐缓冲液清洗细胞，去除残留的培养液。

MTT法检测细菌细胞数的主要影响因素分析_吴窈画

标准菌株 E． coli ATCC 25922 P． aeruginosa ATCC BAA427 S． pneumoniae ATCC 6305 B． fragilis ATCC 25285
1． 1． 1
菌株由 ATCC 引进的实验菌株包括大肠埃希菌（ Escherichia coli，ATCC 25922 ）、铜绿假
1． 2． 3
脂（ TSA，含或不含 5% 羊血）、脑心浸液液体培养（ BHI ）（ BHIA ，基和脑心浸液琼脂含 5% 羊血）。 1． 1． 3 主要试剂 5 mg / mL MTT 溶液［6］（取 100 mg MTT 溶于 20 mL pH 7． 4 的 0． 01 mol / L PBS 缓 4 ℃ 避光保存）、冲液中，充分溶解后过滤除菌，三
［25 ］，性试验、肿瘤放射敏感性测定以及微生物活［67 ］。菌计数微生物学用于细菌计数的常规方法
基金项目：国家科技型中小企业技术创新基金（ 08C26213200567 ）作者简介：吴窈画女，硕士，工程师。研究方向为微生物样本采集和传递技术。 Tel： 02586200378 ， Email： wuyh@ citotest． com． cn 0425 ；修回日期： 20110522 收稿日期： 2011-
同时进行平板菌落计数法测定：对测试样品进行 10 倍梯度稀释，取各梯度菌液分别做活菌平板培养计数。 1． 2． 2 还原反应时间和 MTT 剂量分析取 4 种病原菌对数生长期的纯培养物（各菌株所用培养
［10 ］基及培养条件如表 1 ），于适量 0． 90% NaCl 中 9 分别制成约 3． 0 × 10 cfu / mL 细菌悬液，连续 3 倍

MTT法检测细胞活性的操作方法

MTT法检测细胞活性的操作方法一、MTT是什么MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。

是一种黄颜色的染料。

二、MTT法用来做什么简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。

MTT主要有两个用途1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；2．细胞增殖及细胞活性测定。

三、为何MTT可以用来做上述工作检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。

四、实验所需材料1．MTT 溶液的配制通常MTT 配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS 或生理盐水做溶剂。

市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g。

1.1对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。

具体做法：预先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml PBS，从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。

可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。

将MTT 完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。

按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。

细胞学堂RAW264.7分化问题全攻略

不规则形（圆形、短梭形）
DMEM＋10% FBS＋1% P/S 气相：95%空气；5%CO2 温度：37℃ 1:3 - 1:6 55% DMEM 40% FBS 5% DMSO
▲RAW 264.7生长图片养好RAW 264.7之进阶篇1 除了基础条件，其他外界因素也容易引起细胞的“小脾气”，比如运输路上的颠簸、传代方法等等。针对几种常见的问题，小普来一一为大家解答。
分化的细胞贴壁牢固，传代的时候请勿强制性吹下这些细胞，只接种容易吹下的那些未分化细胞； 3 吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打； 4 细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关，有时RAW 264.7 会出现太容易吹下的情况，连分化细胞都贴壁较松，此时更适宜用巴氏管吹打； 5 培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围； 6 RAW 264.7分裂活跃，记得每天看一看，周末也要抽点时间关心一下它哦~ 养细胞不易，每个细胞对我们而言，都像是宝宝，含在嘴里怕化了，捧在手里怕摔了。
▲推荐传代的密度养好RAW 264.7之终结篇讲了那么多如何处理RAW 264.7分化的情况，那分化了的细胞到底是什么形态呢？
分化的RA264.7 分化的细胞呈多角形，体积明显增大，时常有较长的黑色触角。注意事项 1 RAW 264.7细胞三天不传代更容易分化，很难吹下，每一次接种密度都要控制好； 2
细胞名称
细胞别称
种属组织来源生长特性细胞形态生长培养基培养环境推荐传代比例冻存液配方
RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7 小鼠（雄性，成年BALB/c鼠） Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤贴壁细胞

MTT法检测RAW264.7细胞活力及可能因素分析

MTT法检测RAW264.7细胞活力及可能因素分析白生宾;陈红香;钟近洁;冯树梅;李甜;罗学港【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2011(21)23【摘要】目的通过MTT法检测RAW264.7细胞活力并绘制生长曲线,探讨MTT 作用环节中的可能影响因素,优化实验方案.方法以对数生长期的RAW264.7细胞为实验对象,分别用正常培养和脱离血清培养法,记录在不同时间点的OD值.并在加入DMSO后,分别在6、12、24和48 h及3、15和30d进行OD值测量.结果加入DMSO后不同时间点的MTT法检测结果,随着时间的延长,结果差异越来越大,超过3d后影响较大,与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).3d内,与对照组比较,差异没有统计学意义(P＞0.05).结论①验证、测量并绘制RAW264.7的生长曲线；(②加盖后影响透光度,增大了OD值,影响了实验结果；③随着DMSO时间的延长以第3天为限,否则影响实验结果.【总页数】3页(P2831-2833)【作者】白生宾;陈红香;钟近洁;冯树梅;李甜;罗学港【作者单位】新疆医科大学基础医学院组胚教研室,新疆乌鲁木齐 830011;新疆维吾尔自治区人民医院妇科,新疆乌鲁木齐 830001;新疆医科大学基础医学院组胚教研室,新疆乌鲁木齐 830011;新疆医科大学基础医学院组胚教研室,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学基础医学院组胚教研室,新疆乌鲁木齐 830011;中南大学湘雅医学院人体解剖与神经生物学系,湖南长沙 410013【正文语种】中文【中图分类】Q2-33【相关文献】1.MTT法与CC K-8法检测兔视网膜色素上皮细胞活性的比较研究 [J], 杨冬萍;杨晓旭;俞洋2.预制检测板MTT法检测癌患者外周血淋巴细胞化疗药物敏感性的研究 [J], 李胜水;于翠珍;崔克勤;张风梅3.MTT法不适用于代谢水平改变的细胞活力检测 [J], 施文荣;刘艳4.MTT法检测细菌细胞数的主要影响因素分析 [J], 吴窈画;谈书华;范超超;李正华5.比较MTS与MTT用于大鼠热应激模型中肠上皮细胞活力检测 [J], 梅晨;何莎莎;许磊;李德银;吕安;张志聪;张彤;宫平;刘凤华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

mtt检测方案

MTT检测方案1. 简介MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）是一种常用的细胞代谢活性指标，被广泛用于评估细胞的增殖、存活和损伤程度。

MTT检测方案是一种基于MTT试剂的细胞活力检测方法，通过将MTT试剂与细胞共培养，细胞内的还原型MTT物质将被代谢酶还原为紫色的甲啉盐，进而通过溶解甲啉盐来测定细胞数量或活力。

本文将介绍MTT检测方案的具体步骤和注意事项，以帮助研究人员正确进行细胞活力的评估和相关实验。

2. 实验原理MTT试剂是一种黄色的水溶性试剂，在细胞共培养过程中，MTT会被细胞内的代谢酶还原为紫色的甲啉盐。

甲啉盐在一定条件下可溶于有机溶剂，例如二甲基亚砜（DMSO），这样可以通过分光光度计测定溶解后的甲啉盐的光吸收度，间接反映细胞的活力。

MTT检测方案的基本步骤如下：1.细胞培养：选择适当的细胞系，并使用合适的培养基进行细胞的繁殖和培养。

确保细胞处于良好的生长状态时进行后续实验。

2.细胞处理：将细胞接种在培养物底物上，使其附着生长。

当细胞密度达到合适的程度时，加入待检测的样品或药物处理，根据实验需要进行时间和浓度的调整。

3.MTT试剂处理：将培养的细胞洗涤一遍，添加MTT试剂至培养基中，通常浓度为0.5 mg/ml。

将细胞孵育在37°C的培养箱中，孵育时间通常为4小时。

4.紫色甲啉盐形成：孵育结束后，将培养基中的MTT溶液用吸管吸除，加入溶解剂（如DMSO）彻底溶解甲啉盐。

一般来说，溶解剂的体积与MTT试剂所添加的体积相当，可在溶解前进行调整。

5.测定吸光度：将溶解后的甲啉盐溶液取出一定体积放入96孔板中，使用分光光度计在570 nm波长处测定吸光度。

吸光度的数值与细胞活力相关，数值越高代表细胞活力越强。

3. 注意事项1.实验前准备：细胞培养需要遵守相关的无菌操作规范，并针对不同的细胞系选择合适的培养基、培养条件和培养器具。

小鼠巨噬细胞RAW264_7的培养技巧及经验总结

现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.12NO.22AUG.2012·技术与方法·小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结*方瑶毛旭虎△(第三军医大学医学检验系临床微生物教研室重庆400038)摘要：RAW264.7细胞具有很强的黏附和吞噬抗原的能力，是研究微生物学、免疫学的常用细胞株。

很多研究者发现这种细胞形态极不稳定，细胞状态的评价也很困难。

本文作者结合RAW264.7培养经历及文献资料探讨RAW264.7细胞培养的经验教训和评价细胞状态的方法，旨在为培养该细胞的科研工作者提供一定的借鉴。

关键词：小鼠巨噬细胞RAW264.7（TIB-71）；细胞培养；细胞形态中图分类号：Q95-3，Q813文献标识码：A 文章编号：1673-6273（2012）22-4358-02Culture Skill and Experience of RAW264.7*FANG Yao,MAO Xu-hu △(Department of Clinical Microbiology and Immunity,the Third Military Medical University,Chongqing,400038,China)ABSTRACT:RAW264.7has doughty capability of adhesion and antigen phagocytosis,so it is commonly used in microbiology and immunology.However,many researchers find that the cell is very unstable because of its morphous variation,and it is difficult to value its state.In this paper we mainly discussed the skills and experience in culturing RAW264.7and method of evaluating cell state.We hope to provide some references to researchers who would culture such cell line.Key words:Mice macrophages;RAW264.7(TIB-71);Cell culture;Cell morpha Chinese Library Classification(CLC):Q95-3,Q813Document code:A Article ID:1673-6273（2012）22-4358-02*基金项目：国家重大科技专项（2008ZXJ09014-007）作者简介：方瑶（1987-），男，硕士，主要研究方向：病原与宿主相互作用，E-mail ：lolfang@ △通讯作者：毛旭虎，E-mail ：mxh95xy@ （收稿日期：2011-11-23接受日期：2011-12-18)RAW264.7是由Abelson 鼠白血病病毒诱导BALB/c 小鼠产生肿瘤后收集小鼠腹水单核样巨噬细胞得到的细胞株（ATCC Number:TIB-71）。

聚多巴胺纳米颗粒调控Raw264.7细胞M1极化

-1262-中国老年学杂志2621年3月第41卷1Hunt K.,Jaffa MA,Garrett SM,t ad Plasma Ccwmctive Tissue Growth Factor-CTGF/ECN4)Levels Predict Myocardial Infaytiov in the Veterans Affaiv Diabetes TTal(VADT)CWwO〔J〕.Diabetes CaT465；41(4)：8407.17Gianelli U,FRT S,CatWnee D,et ad Prognostic sig/ficance of a compreXexsive histologic evaluation of reich/u fibrosis:collagen deposihoh and osteosclerosis in primaq myelofibrosis patiex-s〔J〕.,2617；71(0-：892798.1Liu M,Yan L,Liang B,ti ad Hykrogex sulkde attenuates myocardial fibrosis in diaketie rats throuah the JAKSTAT signaling pathway 〔J〕.1/J MP MeX,271C；41(2)：56776.1Filidoh E,Valatas V,DTaiannakis Q tt ad Cytohine receptor proCling in human colonic suUepithelal myoCbrohlasts:a diTerextial elect of Th polaTzatioh-ossociateX cytohines in intestinal fibrosis 〔J〕.EUamm Bowel Dis,275；21(15-：22217720Brown E,Veigh CJM,Santos L,et ad TNFa-PeyeyUent anUedo/a and uureguladov of hippocampal serotovin transporter acUvity in a mouse mohel of coCagex-TnuceX adhTUs〔J〕.NeuTpharmacc0o2, 275；57(13)：21107.〔26190608修回〕(编辑王一涵)聚多巴胺纳米颗粒调控Raw264.9细胞M1极化倪宇昕-，，章立群-，谢安琪-，刘学-，杨旭72（1华中科技大学协和深圳医院口腔科，广东深圳518200；2深圳大学第六附属医院口腔科;3吉林大学口腔医院种植科）〔摘要〕目的分析聚多巴胺（PDA）纳米颗粒对巨噬细胞M）极化的作用。

基因编辑RAW264.7细胞系——助力炎症以及破骨细胞生成相关研究

基因编辑RAW264.7细胞系——助力炎症以及破骨细胞生成相关研究小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）被认为是巨噬细胞的最佳模型之一，因为该细胞能够进行胞饮和吞噬作用，在炎症、免疫、凋亡、肿瘤研究应用广泛。

RAW264.7细胞在体外可以对刺激产生反应，并随后产生具有破骨细胞完全分化的特征的多核细胞，被广泛用于研究骨骼疾病如风湿性关节炎、骨质疏松症、骨质溶解、牙周炎等。

RAW 264.7细胞系的应用：RAW264.7是单核细胞/巨噬细胞样细胞系，源自BALB/c 微小核糖核酸的Abelson白血病病毒转化细胞系。

RAW 264.7是破骨细胞、炎症研究最常用的体外模型之一。

1. 破骨细胞生成研究：RAW 264.7已被证明在RANKL诱导下容易分化为破骨细胞。

与原发性破骨细胞前体不同，RAW 264.7的分化无需添加巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）。

2. 炎症研究：RAW264.7是筛选抗炎活性物和研究炎症最常用的体外研究模型。

在诱导剂（如脂多糖LPS）的作用下，RAW264.7细胞会模拟炎症反应，释放或上调多种炎症介质如一氧化氮（NO）、环氧合酶-2（COX-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）等。

CRISPR/Cas9介导的miRNA-155敲除模型，帮助探究类风湿关节炎中可抑制RAW264.7细胞产生促炎细胞因子据报道，类风湿关节炎(RA)影响着全世界2100多万人。

RA是一种影响关节的自身免疫性炎症疾病。

它的特征是巨噬细胞和淋巴细胞浸润，滑膜成纤维细胞增殖，最终的关节破坏。

巨噬细胞在RA发病机制中发挥重要作用。

RA炎性滑膜中巨噬细胞数量高于正常关节，与关节疼痛和炎症的严重程度呈正相关。

许多药物已经被批准用于治疗风湿性关节炎，基因或细胞疗法。

MicroRNA 155 (miR-155)在小鼠16号染色体和人类21号染色体的BIC基因中被发现。

在临床和实验模型中，miR-155与RA的发病机制有关，因为它在RA患者的滑膜和滑膜液巨噬细胞中上调。

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白生宾１，陈红香３，钟近洁１，冯树梅１，李甜１，罗学港２
（１．新疆医科大学基础医学院组胚教研室，新疆乌鲁木齐８３００１１；２．中南大学湘雅医学院人体解剖与神经生物学系，湖南长沙４１００１３；３．新疆维吾尔自治区人民医院妇科，新疆乌鲁木齐８３０００１）
摘要：目的通过ＭＴＴ法检测ＲＡＷ２６４．７细胞活力并绘制生长曲线，探讨ＭＴＴ作用环节中的可能影响
Abstract: 【Objective】 To draw RAW264.7 cell growth cureve assay cell viability via MTT method. Find possible affective factor and optimalize experimental methods. 【Methods】Note the OD value in the different time using normal RAW264.7 cell culture and discard serum RAW 264.7 cell culutre methods. Write these data after 6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 3 day, 15 day and 30 days. 【Results】the OD value is not obviously be－ tween group comparison (P >0.05) when time is from 0 hour to 48 hours. The OD value is obviously between group comparison (P <0.05) when time is more than 3 days. 【Conclusions】 Verification and drawing RAW264.7 cell growth curve. 96 well plate cover can increase OD value and affect OD data. When time is not more than 48 hours OD value is stable and experimental results are reliable.
取对数生长期的 RAW264.7 细胞，分别以 5× 104 和 2×105 种植于 96 孔板，分别在不同时间，加 MTT，一般每孔 200μL 培养基加入 20μL MTT（5 mg/mL），37℃培养箱内继续孵育 4 h，血清浓度尽量不高于 10%，最好在加 MTT（5 mg/mL）前换成无血清的培养基，呈色，比色。RAW264.7 细胞是贴壁细胞，小心吸出培养上清液，每孔加入 100μL DMSO，使结晶物充分溶解，选择 490 nm 波长测定，在酶标仪上测定各孔数值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。１．３统计学处理
第 21 卷第 23 期 2011 ournal of Modern Medicine
Vol. 21 No.23 Aug. 2011
文章编号：１００５－８９８２（２０１１）２３－２８３１－０３
·论著·
MTT 法检测 RAW264.7 细胞活力及可能因素分析*
响较大，与对照组比较，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。３ｄ内，与对照组比较，差异没有统计学意义（Ｐ＞０．０５）。
结论 ①验证、测量并绘制ＲＡＷ２６４．７的生长曲线；②加盖后影响透光度，增大了ＯＤ值，影响了实验结果；③
随着ＤＭＳＯ时间的延长以第３天为限，否则影响实验结果。
１材料和方法
１．１材料细胞株：小鼠破骨前体细胞 RAW264.7（ATCC
TIB- 71），DMEM 培养基（美国 Gibco 公司），胎牛血清（杭州四季青公司），Forma 3131 型 CO2 培养箱（美国），倒置相差显微镜 CK41（Olympus 公司），超净工作台（上海博讯实业有限公司），超纯水仪（Elix3+Mill- GB，法国 Milipo 二公司），坐式自动电热压力蒸汽灭菌器（ZDXX- 35BI 型，上海），电子分析天平（BP221S，美国），低温高速离心机（HC- 3018R，中国），MTT （Amresco 分装）溶解于 PBS 中，5 mg/mL，抽滤除菌备用，二甲基亚砜（DMSO）（国产分析纯），BioTek ELx800 全自动酶标仪（美国 BioTek 公司）１．２方法
Key words: MTT; RAW264.7; viability; factor analysis
MTT 是一种四唑盐，经线粒体琥珀酸脱氢酶裂解后生成 formazan，formazan 的生成量与细胞释放出
的酶活性成正比例，而酶活力与细胞数及细胞活力成比例。MTT 酶促显色反应主要用于定量分析线粒
照片见图 1。取对数生长期的 RAW264.7 细胞，以 2×105 种植于 96 孔板，脱离血清进行培养观察 48 h 内细胞生长情况，生长曲线如图 2 所示；另取对数生长期的 RAW264.7 细胞，以 5×104 种植于 96 孔板， 10%的血清正常培养 8 d，每 2 天换液 1 次，记录 OD 值，描绘生长曲线，见图 3。
24 h 0.887±0.029 0.825±0.028
48 h 0.865±0.025 0.804±0.031
3d 0.723±0.031覮 0.673±0.037覮
15 d 0.401±0.018覮 0.359±0.015覮
30 d 0.296±0.021覮 0.243±0.011覮
注：覮与 0 h 组相比，P <0.05
·2832·
第 23 期
白生宾，等：MTT 法检测 RAW264.7 细胞活力及可能因素分析
附表９６孔板盖子对ＯＤ值的影响比较（x±s）
分组加盖组去盖组
0h 0.918±0.022 0.859±0.016
6h 0.923±0.024 0.867±0.029
12 h 0.915±0.019 0.860±0.029
笔者认为，当受试细胞在进行 MTT 实验时，首先需要对种植细胞的浓度进行计数，最好选择在 1×104~2×105 的细胞数比较合适，对实验中检测和绘制细胞生长曲线以及细胞活力等试验指标影响较小。另外，即将检测的细胞应当用锡箔纸包裹，室温下避光保存。在进行 MTT 检测时，如果疏忽没有将盖子取下来，所测得的 OD 值，要比正常测量的值要高很多，这可能与盖子影响到了透光度有关。
0
空白组
12
24
36
48
时间（h）
图２无血清培养ＲＡＷ２６４．７细胞的生长曲线
吸光度值
培养天数
图３ＲＡＷ２６４．７细胞的生长曲线
DMSO 溶解后放置不同时间，OD 值的变化以及孔板盖子对 OD 值的影响。将对数生长期 RAW264. 7 细胞，以 2×105 种植于 96 孔板，DMSO 溶解后，将细胞移入另一 96 孔板，分别在不同时间进行比色，并将 96 孔板盖子盖上和去掉，所得结果显示，DMSO 溶解后 0~48 h 内，OD 值结果差异没有统计学意义（P >0.05）；3~30 d，OD 值结果与 0 h 组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。加盖前后 OD 值比较，差异没
关键词：ＭＴＴ；ＲＡＷ２６４．７；活力；因素分析
中图分类号：Ｑ２－３３
文献标识码：Ａ
RAW264.7 cell viability via MTT assay and possible factor analysis*
BAI Sheng-bin1, CHEN Hong-xiang3, ZHONG Jin-jie1, FENG Shu-mei1, LI Tian1, LUO Xue-gang2
有统计学意义（P >0.05），但是加盖后 OD 值相对值要增大0.06~0.07，对最终结果有一定的影响。见附表。
３讨论
众所周知，MTT 是一种显色剂，可以检测细胞存活和生长[4- 6]。它的作用原理都已经很清楚，活细胞内的琥珀酸脱氢酶还原 MTT 形成蓝色的结晶物，与细胞数成正比，采用 Biotek Elx800 酶标仪在 490 nm 处测其吸光度，可间接反应活细胞的数量。但是，当反应体系中存在影响细胞生长的因素时，常会影响实验结果造成实验数据的偏差[7-9]。在 MTT 比色法实验操作结尾时，要进行 OD 值测量时，也可能会存在误差，或因时间选择等问题造成数据偏差或错误。在实验中，操作者处理完孔板内的细胞后，通过 2 种方式将细胞移出放入酶标仪进行测量，通常用 DMSO 完全溶解后，全部移入相同孔数的板子，直接进行测量；另一种，有一次性酶标仪转移板，也可直接移入进行测量。如果能够实时测量且工作量较少，则可以进行，不会影响测量结果。考虑到药物剂量的筛选、细胞毒性试验的测定等批量工作，设想能将不同作用时间的细胞和不同作用的细胞数量在某个剂量下，既能同时检测，又能反映出细胞的活力，而且不影响实验结果。
采用 SPSS 11.0 统计软件行方差分析，检验水准α=0.05。
２结果
处于生长期的 RAW264.7 细胞在倒置显微镜下
A 倒置显微镜下 RAW 细胞 B 普通光镜下 HE 染色 RAW 细胞图１ＲＡＷ细胞
OD 值
1.100 1.000 0.900 0.800 0.700 0.600 0.500 0.400 0.300
收稿日期：2010- 12- 01 *基金项目：国家自然科学基金资助项目（No：30860249） [通信作者] 钟近洁，E- mail: zhongjinjie@