艾滋病病毒灭活试验

附件：重庆市疾病预防控制机构行政事业性项目收费标准一、预防性体检费1、本项包括食品、化妆品、饮用水从业人员体检费,公共场所从业人员体检费，共2个子项。

2、体检机构必须按照项目内涵包括的所有项目作全项体检,并按人次收费。

当国家法律法规要求增减体检项目时,应参照现行《重庆市医疗服务价格》执行.12二、卫生监测费及卫生质量检验费1、本项共427个子项目，包括:（1）卫生微生物、疾病控制、寄生虫病监测、检验94个子项；（2）消毒、杀虫、灭鼠监测67个子项;（3）食品卫生监测、检验18个子项；(4）环境卫生监测、检验30个子项;（5)职业卫生监测、检验43个子项；（6）放射卫生监测、检验86个子项；（7)学校卫生监测、检验7个子项;（8)毒理试验25个子项；（9)仪器方法监测、检验24个;（10）医学实验动物和放射免疫检测16个子项;（11)公共场所集中空调通风系统检测费9个子项；（12）证书工本费3个子项;（13）安全性评价5个子项。

3456789101112131415161718192021222324252627282930三、疫情处理费本项共13个子项目，包括中毒、事故10个子项，污染、超期、不符合卫生要求、标准的健康相关产品3个子项。

3132四、委托性卫生防疫服务费本项共51个子项目,包括卫生业务咨询、资料费3个子项，卫生学评价31个子项,职业病危害17个子项。

33343536注：项目编码说明一级分类编码为1、2、3、4，如“预防性体检费”编码为“1"，“监测费、卫生质量检验费等"编码为“2”；二级分类编码,如“卫生微生物、疾病控制、寄生虫病检测检验”编码为“201";三级分类编码,如“卫生微生物”编码为“20101”；四级分类编码，如“细菌总数”编码为“20101001”;子项目编码,如“O157：37H7免疫磁珠法培养鉴定”编码为“20101018a”。

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艾滋病毒（I型Ⅱ型）病毒实验活动风险评估报告一、生物因子（一）一般特性1981年，艾滋病首次被报导。

1983年，艾滋病病毒被首次分离到。

1986年，国际病毒命名委员会统一将其命名为人类免疫缺陷病毒（HumanImunodeficiencyVirus，HIV）。

HIV属逆转录病毒科中的慢病毒属或组（Lentivirus）。

成熟的病毒直径为100～120nm，圆形，电子显微镜下可见致密的圆锥状蛋白的核心，内有病毒RNA分子和酶。

其外层有包膜。

包膜为两层的磷脂蛋白膜，膜上为突起，约有80个突起。

HIV-1的基因组长度为9.3kb，HIV-2为9.7kb左右。

基因组的两侧有LTR、3个结构基因（Gag、Pol、Env）和至少有6个调控基因（Tat、Rev、Nef、Vif、Vpu、Vpr）。

病毒的结构蛋白为核心蛋白（Gag）及包膜蛋白（Eev）。

Gag蛋白的P17、P24与P13与病毒核心相联系。

外膜蛋白是一个大分子糖蛋白（Gp120），形成病毒体表面的刺突。

跨膜蛋白（Gp41）的作用是将包膜蛋白固着于细胞膜上。

将病人自身外周或骨髓中的淋巴细胞经pHA刺激48～72h作体外培养（培养液中加IL2）1～2周后，病毒增殖可释放至细胞外，并使细胞融合成多核巨细胞，最后细胞破溃死亡。

亦可用传代淋巴细胞系如HT-H9、Molt-4细胞作分离及传代。

我国将HIV归为二类病原微生物，WHO将其归为于生物安全危险度3级的病原微生物。

原卫生部编制的《人间传染的病原微生物名录》规定病毒分离培养在BSL-3实验室进行，未经培养的感染性材料操作在BSL-2实验室中进行，灭活材料和无感染性物质操作在BSL-1实验室中进行。

运输包装要求按照A类包装，空运属A类（UN2614）。

（二）来源HIV的宿主为人类，感染人后引起艾滋病。

研究发现HIV的序列与猴免疫缺陷病毒（SIV）有高度同源性。

因此，人们用HIV最初是由动物传播给人类的说法来解释HIV流行的起源。

预防艾滋病测试题库及答案1、下列哪一位是预防控制艾滋病的形象大使？ ( )A、牛群B、成龙C、李宁D、濮存昕答案：D2、怎样处理艾滋病病人的尸体才是正确的( )A、死后就没有传染性，不必做消毒处理B、必须就地火化，火化前要彻底消毒C、由病人家属自行处理答案：B3、下列哪项不是急性HIV感染的临床表现：( )A、发热B、咽痛C、淋巴结肿大D、口腔真菌感染答案：D4、窗口期内的艾滋病病毒感染者具有传染性.( )A、正确B、不正确C、不知道答案：A5、艾滋病常见合并症不包括：( )A、肺炎B、一过性脑膜炎C、念珠菌性食管炎D、急性肾炎答案：D6、下列哪个不是艾滋病的传播途径: ( )A、性接触B、血、血制品、器官移植和污染的注射器C、蚊虫叮咬D、母婴垂直传播答案：C7、我国防治艾滋病的工作原则是 ( )A、政府组织领导，部门各负其责，全社会共同参与B、以人为本、科学防治、依法防治C、预防为主、防治结合、综合治理D、突出重点、分类指导、注重实效；答案：A8、下列哪类人群不属于艾滋病毒感染的高危人群：( )A、同性恋者B、性乱交者C、静脉吸毒者D、无偿献血人员答案：D9、2008年世界艾滋病日的主题是：( )A、关注妇女，抗击艾滋B、相互关爱，共享生命C、预防艾滋病，你我共同参与D、遏制艾滋，履行承诺答案：D10、《艾滋病防治条例》于何时正式实施 ( )A、2006年1月18日B、2006年1月29日C、2006年2月18日D、2006年3月1日答案：D11、对于HIV/AIDS的诊断最重要的是根据( )A、临床表现B、经确认HIV抗体阳性C、具有高危行为答案：B12、下列不属于艾滋病急性感染期症状的是 ( )A、发热、出汗、乏力B、厌食、恶心、腹泻C、肌肉酸痛D、消瘦、口腔粘膜白斑答案：C13、下例哪项不是急性HIV感染的临床表现( )A、发热B、咽痛C、淋巴结肿大D、口腔真菌感染答案：D14、目前全球艾滋病流行最严重的地区是：( )A、亚洲B、欧洲C、非洲D、北美答案：C15、关于艾滋病疫苗正确的说法是：( )A、我国科学家已经研制成功了艾滋病的疫苗B、世界上现约有80种艾滋病疫苗C、目前世界上尚未研制出有效预防艾滋病病毒的疫苗答案：C16、最容易受艾滋病感染的高危人群是：( )A、性乱人群、男性同性恋、吸毒人群B、高收入人群、青少年人群C、无偿献血者答案：A17、患者CD4细胞在什么数值时会使机体免疫功能极其低下，继发各种机会性感染。

附件4同种异体植入性医疗器械病毒灭活工艺验证技术审查指导原则（2020年修订版）同种异体植入性医疗器械是以同种来源组织为原料加工或组成的产品。

我国目前对同种异体植入性医疗器械产品组织供体的病毒筛选多采用检测血清中病毒特异性抗体或抗原的方法，其中对人免疫缺陷病毒（HIV）还要求检测血液中的病毒核酸。

但是，尽管对供体进行了严格的筛选，仍然存在漏检和未知病毒存在的风险，以及生产过程中带入外源病毒的风险。

因此，要求同种异体植入性医疗器械产品在生产过程中采用有效的病毒灭活工艺，并对病毒灭活工艺的有效性进行科学的验证。

本指导原则是对同种异体植入性医疗器械生产过程中特定病毒灭活工艺的效果进行验证的一般要求，注册申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，如采用的病毒灭活工艺及相关参数等，并依据具体产品的特性确定其中的具体内容是否适用。

本指导原则是对注册申请人和审评人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

—1 —本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。

本指导原则为2011年发布的《同种异体植入性医疗器械病毒灭活工艺验证技术审查指导原则》的修订版。

主要修订内容包括：修改指导原则中部分语言描述，如常用病毒灭活方法、染毒方法、病毒灭活效果判定、其他需考虑的问题、病毒灭活工艺的再验证等；完善指示病毒类型选择及举例的相关描述；增加病毒灭活/去除有效性验证的原则。

一、适用范围本指导原则适用于需要对生产过程中特定病毒灭活工艺的效果进行验证的同种异体植入性医疗器械。

二、基本要求（一）常用的病毒灭活方法同种异体植入性医疗器械的病毒灭活有多种方法，企业应根据产品的特性选择合适的病毒灭活工艺。

艾滋病病的PCR检测技术PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种常用的分子生物学技术，在艾滋病病毒的检测中起着重要作用。

本文将介绍艾滋病病毒的PCR检测技术以及其在诊断、病毒量测定和研究中的应用。

一、PCR检测技术简介PCR是由美国生物化学家基里尔·穆利斯（Kary Mullis）于1983年发明的一种体外扩增DNA的方法。

它通过模拟DNA在体内复制的过程，能够对少量DNA进行放大，从而便于检测和分析。

二、艾滋病病毒的PCR检测技术艾滋病病毒的PCR检测主要包括两个方面：一是检测病毒的核酸，在感染早期和晚期均可检测到；二是检测病毒的基因型，有助于了解病毒的分类和毒株差异。

1. 检测病毒核酸PCR技术可以通过特异性引物和酶来扩增病毒核酸，并通过凝胶电泳等方法进行检测。

该方法具有高度敏感性和特异性，可以检测到非常低浓度的艾滋病病毒。

2. 检测病毒基因型PCR技术可以通过特定的引物和扩增条件来扩增不同基因型的艾滋病病毒，例如HIV-1和HIV-2。

通过PCR扩增产物的序列分析，可以确定不同基因型的遗传特征和抗药性。

三、PCR技术在艾滋病病毒诊断中的应用PCR技术在艾滋病病毒的诊断中有以下几个方面的应用：1. 早期感染检测艾滋病病毒感染初期，体内的病毒数量较少，无法通过传统的抗体检测方法进行诊断。

而PCR技术则可以在感染后的数天内检测到病毒核酸，从而早期发现感染者。

2. 感染源追踪通过PCR技术检测病毒核酸，并进行基因型分析，可以追踪艾滋病病毒的感染源，了解传播途径和病毒变异情况，从而制定相应的预防和控制策略。

3. 抗病毒治疗监测艾滋病病毒的抗病毒治疗需要监测病毒的荷载量，即病毒在体内的含量。

PCR技术可以对病毒核酸进行定量检测，从而监测治疗效果，并调整治疗方案。

四、PCR技术在艾滋病病毒研究中的应用PCR技术在艾滋病病毒的研究中有以下几个方面的应用：1. 病毒变异研究通过PCR技术扩增不同基因型的艾滋病病毒，并进行序列分析，可以研究病毒的变异情况和进化规律，为疫苗研发和治疗策略提供理论支持。

血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则目前已知经血液制品传染的病毒主要有HBV、HCV、HIV—1、HIV-2、HTLV和细小病毒B19。

尚未发现经血液制品传染CJD.但有少数研究报告发现有实验性传染现象，因此要密切关注CJD，特别是vCJD的发展动向。

为了提高血液制品安全性,生产工艺要具有一定的去除/灭活部分病毒能力，生产过程中应有特定的去除/灭活病毒方法。

本技术指导原则是对血液制品（指以人血浆为原料制备的制品)生产过程以及特定的去除/灭活病毒方法验证的指导原则，包括指示病毒和病毒去除/灭活方法的选择、验证方案的设计、结果判定以及附录所列技术验证申报的程序。

一、去除/灭活病毒方法的选择由于不同类血液制品潜在的污染病毒的可能性不同,为此选择病毒去除/灭活方法的侧重点也应有所不同：（一）凝血因子类制品生产过程中应有特定的能去除/灭活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一种或多种方法联合去除/灭活病毒。

（二）免疫球蛋白类制品对于免疫球蛋白类制品（包括静脉注射用人免疫球蛋白、人免疫球蛋白和特异性人免疫球蛋白）生产过程中应有特定的灭活脂包膜病毒方法。

但从进一步提高这类制品安全性考虑,提倡生产过程中加入特定的针对非脂包膜病毒的去除/灭活方法。

（三）白蛋白采用低温乙醇生产工艺和特定的去除/灭活病毒方法，如巴斯德消毒法等.二、常用的去除/灭活病毒方法评价（一）巴斯德消毒法（巴氏消毒法）1．人血白蛋白制品几十年临床应用结果表明，白蛋白的巴氏消毒法对HIV和肝炎病毒是安全的。

其病毒灭活条件已很完善，可不要求进行病毒灭活验证。

但是必须对巴氏消毒法所用设施进行验证，使巴氏消毒各参数符合要求（包括制品内温度分布的均一性和灭活时间）。

2．其它血液制品(液体制剂）由于制品的组成、稳定剂（如:氨基酸、糖、枸橼酸盐等)及其浓度的不同,均会对灭活病毒效果有一定的影响。

因此在采用巴氏消毒灭活病毒方法时必须进行病毒灭活效果验证。

艾滋病病毒灭活试验（1）目的测定消毒剂对艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）灭活所需的剂量，以验证对该病毒污染物消毒实用剂量。

（2）实验原理用细胞感染法测定消毒剂作用前后（或实验组与对照组）样本中HIV 的量。

以细胞病变作为判断指标，确定各组病毒的感染滴度，计算消毒剂对 HIV 的灭活对数值。

（3）安全防护试验中要求采取严密防护措施。

我国规定所有接触 HIV 的试验均需在生物安全三级（biological safety level 3，BSL 3）实验室内进行，并制定有相应的安全防护措施。

在 HIV 灭活试验时，必须严格按照有关安全规定进行。

（4）试验分组1）试验组。

根据所测消毒剂对其他微生物的杀灭或灭活剂量估计，设立适宜的浓度与作用时间组（不少于1个浓度，3个作用时间），对作用时间的设计应不短于30s。

所设组应能测出使 HIV 全部灭活所需的最低有效剂量（药物浓度与作用时间）。

2）阳性对照组。

用去离子水代替消毒剂，按试验组规定步骤加入 HIV 悬液进行试验和培养，观察 HIV 生长是否良好。

3）阴性对照组。

用不含 HIV 的完全培养基作为阴性对照，观察所用培养基有无污染，细胞是否生长良好。

4）消毒剂对细胞毒性组。

取 100μl 待测消毒剂，加入含有100μl 用完全培养基制备的MT4 细胞悬液（含细胞400 000 个/ml）的 96 孔培养板内。

置二氧化碳温箱（37℃）中培养 7 d，观察细胞生长情况，确定消毒剂对细胞无毒性的最高稀释度。

（5）HIV 悬液定量灭活试验操作程序1）从液氮中取出冻存的 MT4 细胞，在37℃ 温水中迅速融化，并用细胞维持液洗涤两次后，转种于加有 10ml 完全培养基培养瓶中。

逐日观察细胞生长情况，在细胞对数生长期时收获细胞用于消毒试验。

2）从液氮中取出冻存HIV-1毒种，接种于含10ml细胞悬液（含细胞700 000个/ml～800 000个/ml）培养瓶中。

输血科三基知识测试题含参考答案1、输血相关性病毒性肝炎主要是由丙型和乙型肝炎病毒引起，尤其是前者约占输血后肝炎的（）A、≥70％B、≥10％C、≥30％D、≥90％E、≥50％答案：C2、医疗机构所需全血及其血液成分，需要那级政府批准的血站负责提供？（）A、省级以上人民政府卫生行政部门批准B、由各医院批准C、医疗机构自采自用D、血站答案：A3、WHO加强输血安全工作的指导原则，以下哪项不是：（）A、建立国家协调的采供血机构体系并实施质量管理B、只从低危人群中的无偿献血者采集血液C、严格检测血液，提高输血安全D、督促各国政府对血液机构的资金投入E、加强临床用血管理，做到科学、合理用血，确保输血安全答案：D4、全血的有效成分主要是（）A、红细胞、白细胞B、红细胞、白细胞、血小板、C、红细胞、血浆蛋白及各种有形成分D、红细胞、血浆蛋白、稳定的凝血因子答案：D5、由于输血穿刺过程中未严格执行无菌操作或辅料应用不当造成局部静脉感染，感染最常见的细菌是：（）A、葡萄球菌B、链球菌C、厌氧菌D、大肠埃希菌E、以上都不是答案：A6、下列关于艾滋病病毒的灭活不正确的是（）A、35％山梨醇，70℃失去活性B、56℃230分钟失去活性C、不加稳定剂，70℃失去活性D、0.2％次氯酸钠5分钟失去活性E、室温保存7天无法灭活答案：E7、某患者因肾功能障碍出现高钾血症，此时因贫血症状显著需要输血，最好选择哪种红细胞制品：（）A、洗涤红细胞B、浓缩红细胞C、少白细胞的红细胞D、悬浮红细胞E、辐照红细胞答案：A8、下列输血操作错误的是：（）A、血小板制品从输血科取回后应立即输注，以患者能够耐受的速度尽快输注完毕B、输注血液制品过程中，护士应严密观察和护理，如出现输血不良反应需要进行必要的处理C、红细胞制剂内禁止添加任何药物D、输血时当发生阻塞时可强行挤压血袋和输血器E、红细胞制品粘稠度比较大，输注过程中需要经常反复倾倒血袋，使红细胞悬液混匀答案：D9、血型为B型的人，其基因型有几种：（）A、1B、2C、3D、4E、5答案：B10、溶血反应的早期特征是（）A、面部潮红，出现荨麻疹B、寒战高热，呼吸困难C、粘膜皮肤有出血点和瘀斑D、头部胀痛，恶心呕吐E、腰背部剧痛，心前压迫感答案：E11、可用于补充血容量的是（）A、免疫球蛋白B、血小板C、冷沉淀D、白蛋白液E、浓缩红细胞答案：D12、“输血标本采集、接收制度”规定护士采集输血标本的流程是：（）A、护士应遵医嘱按标本采集要求做好标本采集前准备B、护士在血液标本采集前，先遵医嘱打印用血申请单的标本条形码，贴好血标本试管，标识清楚，患者基本信息正确无误C、护士在血标本采集时，应持输血申请单和标识试管，在患者床前当面核对患者姓名、性别、年龄、住院号、床号、血型，并采集2-4ml血样D、采集完成后必须再次核对标本标识与患者是否相符，标本条形码与申请单是否一致E、以上都是答案：E13、对于有免疫缺陷或有免疫抑制患者输血，最好应输（）A、浓缩红细胞B、辐照红细胞C、悬浮红细胞D、洗涤红细胞答案：B14、可用于难治性感染的是（）A、免疫球蛋白B、冷沉淀C、血小板D、白蛋白液E、浓缩红细胞答案：A15、手术全麻患者输血后出现下列哪项临床表现应考虑急性溶血反应A、皮肤粘膜苍白B、心率增快与心律不齐C、呼吸竭难D、原因不明的血压下降及创面出血不止（）E、尿量增加答案：D16、下列各项不是储存式自体输血禁忌症的是：（）A、服用抑制代偿性心血管反应药物者B、有活动性癫痫病史者C、有献血后发生迟发性昏厥史者D、可能患有菌血症或正在使用抗生素抗感染治疗的患者E、健康人希望预存自体血液以备需要时使用答案：E17、《广东省实施<中华人民共和国献血法>办法》（广东省人民政府第250号令）规定，医疗机构临床用血应当遵守下列规范：（）A、使用依法设立的本行政区域内血站提供的血液B、储存、运输血液应当符合国家规定的卫生标准和要求C、严格执行输血技术规范和制度，科学、合理用血，不得浪费和滥用血液D、禁止出售无偿献血的血液E、以上均是答案：E18、输血后患者出现酱油色尿，意味着可能出现：（）A、过敏反应B、发热反应C、喉头水肿D、溶血反应E、呼吸困难答案：D19、红细胞在正常人血液循环中的平均寿命大约是：（）A、100天B、3~4天C、7天D、120天E、24小时答案：D20、再生障碍性贫血的产生是由于（）A、造血原料缺乏B、无效造血C、骨髓造血功能低下D、红细胞破坏过多E、出血答案：C21、某人某基因型为Bi，其父母的表型可以是：（）A、A型+AB型B、A型+O型C、AB型+AB型D、A型+A型E、O型+O型答案：A22、下面的叙述中哪种说法不正确：（）A、Rh血型系统的抗原性最弱B、中国汉族人群中大多数是RhD阳性C、Rh血型是继ABO血型发现后临床意义最大的血型D、Rh血型不合的输血，可产生危及生命的溶血性输血反应E、母子Rh血型不合可导致新生儿溶血病答案：A23、《中华人民共和国献血法》何时开始实施：（）A、1997年7月B、1999年10月C、1998年10月D、2001年10月E、2000年1月答案：C24、患者男，50岁。

HIV实验室检测方法和步骤HIV，也称为人类免疫缺陷病毒，是一种能导致艾滋病的病毒。

HIV实验室检测方法和步骤被广泛应用于检测感染HIV的个体。

以下是一般情况下使用的实验室检测方法和步骤的详细说明。

1.预处理和登记在进行HIV实验室检测之前，需要对样本进行预处理和登记。

预处理包括标识样本的相关信息，如样本编号和患者信息。

这些信息对于结果记录和跟踪是至关重要的。

此外，还需检查样本的适应性和完整性。

2.血液样本采集3.血清分离采集到的血液样本需要进行血清分离。

这可以通过离心来分离血液的不同成分，例如血红蛋白和血清。

离心速度和时间需要根据实验室设备和协议进行调整。

4.酶联免疫吸附测定法（ELISA）最常用的HIV实验室检测方法是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。

这种方法使用特定的抗体来检测血液中特定的抗原。

根据ELISA方法的不同，可检测HIV抗原或抗体。

实验室技术人员将患者血清样本加入到已包含HIV相关抗原或抗体的试剂盘中，然后根据试剂盘的建议操作，包括孵育时间、温度和洗涤步骤。

任何与接触抗原或抗体反应的特异性颜色改变，都可作为阳性结果。

否则，结果被视为阴性。

5.确认试验在进行HIV检测的初步结果后，通常会进行一个或多个确认试验。

确认试验的目的是统一确定检测结果的可靠性。

常用的确认试验包括HIV免疫荧光试验（IFA）和西方印迹法（Western blot）。

这些试验通过检测血清中的HIV特异性抗体，以确保先前的结果的准确性。

6.分子检测有时，为了获得更加可靠和敏感的结果，实验室会使用分子检测方法，例如聚合酶链式反应（PCR）。

PCR可以检测和放大病毒的基因或核酸，以确定HIV感染的存在和病毒的数量。

7.结果解读和记录HIV实验室检测结束后，实验室技术人员需要解读并记录结果。

阳性结果意味着存在HIV感染，而阴性结果则表示未检测到HIV感染。

针对不同的检测方法和样本类型，结果的解释可能有所不同。

因此，在结果解读和记录时，实验室人员需要严密遵循实验室的标准操作规程（SOP）。