ABO血型鉴定操作规程

检验科ABO及RH血型标准操作规程

1. 【目的】

确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。

2. 【职责】

2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3. 【样本类型及实验前准备】

3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)

3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管

3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。

1.2 5%A、B及O型试剂红细胞悬液。

1.3受检者血清。1.4受检者5%红细胞盐水悬液。

2. RH 2.1IgG型抗D标准血清。

2.2 5%D阳性红细胞生理悬液。2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。

4. 【测定原理】

ABO血型鉴定：

生理盐水凝集法一试管法

常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。

RH鉴定：

红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。

5. 【操作步骤】

ABO鉴定步骤：

1. 试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。

2. 标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。

3. 分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。

精品

可编辑

1.0

原理

ABO 血型鉴定操作规程

2.0

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7.0

7.1

根据红细胞上和血清（或血浆）中有无 A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为

A 型、B 型、AB 型及 O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血

型。正定型正定 是指用已知抗-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和（或）

B 抗原；反定型反定 是指用已知 A1型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相

应的抗-A 和（或）抗-B。

原始样品要求

5 mL 静脉全血。

样品容器和添加剂

真空试管，EDTA.K2抗凝/普通试管，不抗凝。

检测环境要求

温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。

所需材料和设备

设备 普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。

材料 抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水

（NS）、干净空试管。

检测操作过程

将受检标本以 1000g 离心 5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS

洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。

取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、 “自身”、 “Ac”、“Bc”、 “Oc”。

在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50 L ，其余管加入受检血浆/血清各

100 L 。

在“-A”、“-B”、 “自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50 L ，摇匀。

在“Ac”、“Bc”、 “Oc”管中分别加入 A1、B、O 红细胞试剂各 50 L ，摇匀。

1000g 离心 15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。

根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在 4℃、37℃下观察结果。

实验二 ABO血型的测定

[实验目的] 学会用玻片法测定ABO血型，根据测定结果确定血型。

[实验原理] 红细胞膜上的A抗原与另一人体内血浆中的抗A抗体相遇或B抗原与抗B抗体相遇时会发生红细胞凝集反应。故可利用已知含抗A凝集素和抗B凝集素的诊断血清，分别与被测者的红细胞混合，根据是否发生红细胞凝集反应，判断红细胞所含的凝集原，从而鉴定其血型。

[实验用品]

人、抗A诊断血清(从B型血的血清中茯得)、抗B诊断血清(从A型血的血清中茯得)、

双凹玻片，采血针，滴管，小试管，竹签，生理盐水，75％酒精棉球，低倍显微镜。

[实验步骤]

1．取干净双凹玻片一块，用玻璃蜡笔在两端分别标明A、B字样。

2．在A侧凹内滴加抗A诊断血清l滴，B侧凹内滴加抗B诊断血清1滴，注意不可混淆。

3．用75%酒精棉球消毒耳垂或指端后，以消毒针刺破皮肤，滴1～2滴血于盛有1ml生理盐水的小试管中混匀，制成红细胞混悬液。

4．用吸管吸红细胞混悬液，在双凹玻片的抗A、抗B诊断血清中各加一滴，分别用竹签使其充分混匀。放置10—15分钟后用肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨者用低倍显微镜观察。

5．根据有无凝集现象判定血型。

[注意事项]

1.采血针和采血时必须严格消毒，以防感染。

2．制备红细胞混悬液不能过浓或过稀，以免造成假结果。 3.滴标准血清的滴管和作混匀用的竹签各2只(根)，专用，搅动血清时切不可使抗A、抗B两种血清发生混合。

4.注意区别凝集现象与红细胞叠连。发生红细胞凝集时，肉眼观察呈朱红色颗粒，且液体变得清亮。

ABO血型测定标准操作规程 文件编码：PAFC-BXJY-SOP-LM04-07

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1. 目的和适用范围：

1.1. 为保证原料血浆的质量，规范实验操作，特制定本操作规程。

1.2. 适用于本公司检验科，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。

2. 术语：无。

3. 职责：

3.1. 实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。

4. 工作程序

4.1. 操作说明

4.1.1. 实验原理：ABO系统中的血型是根据红细胞上有无A或B抗原及血清中有无抗A或抗B抗体来决定。用抗A、抗B定型血清分别加入被测红细胞，以观察其抗原、抗体反应结果。

4.1.2. 实验所需设备和材料：血型反应板、竹签、微量振荡器、被检测标本、抗A定型血清（效价1:128以上），抗B定型血清（效价1:64以上）亲和力应在15秒钟以内出现凝集现象，并在3分钟时凝集块的大小应不小于1mm

4.2. 实验操作步骤：

4.2.1. 方法：正定型法

4.2.2. 受检者全血和血型试剂在纸片上按1：1比例混合，摇匀，按照有无凝集判定结果。

4.3. 结果判读：

4.3.1. 受检者红细胞与抗A血型试剂发生凝集反应而不和抗B血型试剂发生凝集反应为A型。

4.3.2. 受检者红细胞与抗A血型试剂不发生凝集反应而和抗B血型试剂发生凝集反应为B型。

4.3.3. 受检者红细胞与抗A、抗B血型试剂都不发生凝集反应0型。

4.3.4. 受检者红细胞与抗A、抗B血型试剂都发生凝集反应AB型。

受检者血型 红细胞的凝集反应

抗A试剂 抗B试剂

A + -

B - +

O - -

AB + +

注：“＋”=凝集；“－”=不凝集

4.4. 注意事项：

4.4.1. 如果由于受检者的红细胞抗原弱，或抗A、抗B血清凝集力低，需要充分时间方能判定ABO血型测定标准操作规程 文件编码：PAFC-BXJY-SOP-LM04-07