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药包材微生物限度检查操作规程药包材微生物限度检查操作规程一、目的与范围为保障药包材的卫生质量，规范药包材微生物限度检查操作，本操作规程适用于药包材微生物限度检查。
二、术语与定义1. 药包材：指用于药品包装的材料，如玻璃瓶、铝箔、袋子等。
2. 微生物限度：指药包材中的微生物污染的数量不能超过一定的限度。
3. 检查样品：指从药包材中取样检查的样品。
三、操作流程1. 准备工作1.1 检查人员应在工作前进行手部消毒，并佩戴洁净工作服、帽子和口罩。
1.2 检查仪器设备应进行清洁和消毒，确保无污染。
1.3 首次使用检查样品前，应进行无菌处理。
2. 取样2.1 根据药包材的特点，选择合适的取样方法，如剪刀剪取、刮取等。
2.2 取样时应注意避免污染，避免手部和工具的直接接触。
2.3 取样应充分代表药包材的不同部位和不同批次。
3. 样品处理3.1 将取样的药包材放入无菌容器中，避免接触外界环境。
3.2 添加合适的培养基，保证微生物生长。
3.3 药包材中的微生物落菌数较多时，可对样品进行稀释处理。
4. 培养和观察4.1 将培养基接种完毕后，密封容器，确保无菌。
4.2 将培养基置于适宜的温度和湿度条件下培养。
4.3 观察培养基是否出现细菌、真菌等微生物的生长。
5. 计数和判断5.1 培养基培养一定时间后，根据培养基上的菌落形态、颜色等特征进行初步判断。
5.2 将培养基进行放大培养，使用显微镜观察细菌、真菌的形态和结构，进行进一步鉴定。
5.3 使用计数板对菌落进行计数，记录每种微生物的数量。
5.4 根据国家规定的微生物限度标准，判断样品是否合格。
6. 结果记录和分析6.1 将检查结果记录在相应的记录表中，包括药包材名称、样品编号、微生物种类和数量等信息。
6.2 对合格的样品进行合格认证，对不合格的样品进行处理和记录。
6.3 对不合格的样品进行原因分析，查明污染源，并采取相应的措施进行处理和纠正。
四、操作注意事项1. 所有操作应在洁净室中进行，避免外界空气和微生物的污染。
微生物限度检查仪操作规程一、目的本操作规程旨在规范微生物限度检查仪的使用，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有使用微生物限度检查仪进行微生物检测的实验室。
三、设备准备1.检查仪器：确保检查仪器处于正常工作状态，且已经进行了日常的校准和验证。
2.试剂准备：准备好所需要的试剂和培养基，并按照说明书进行储存和使用。
四、操作流程1.样品准备-将待测样品进行预处理，如稀释、过滤等操作，以确保检测结果的准确性。
-按照要求取样品，确保样品的代表性，并且避免外部污染。
-将样品转移至无菌容器中，避免交叉污染。
2.检测操作-打开检查仪器的电源，确保所有参数显示正常。
-设置检测参数，包括样品体积、培养基类型等。
-在无菌条件下，将样品转移到培养基中，确保样品均匀分布。
-在培养基上绘制分类孔，确保每个样品有足够的空间生长。
-关闭培养皿，确保培养皿与培养基接触紧密，并有利于微生物的生长。
-将培养皿放入检查仪器中，确保培养皿的摆放位置正确。
-启动检查仪器，按照仪器的要求进行检测。
-检测结束后，关闭检查仪器，将培养皿取出并妥善处理。
五、数据分析与记录1.对于生长的微生物，根据标准方法进行鉴定，并记录鉴定结果。
2.对于未生长的微生物，根据标准方法进行计数，并记录计数结果。
3.对于得到的结果，根据相关标准进行数据分析，并判断样品是否符合微生物限度要求。
4.将检测结果和分析记录在相关的数据表格或文件中，确保数据的可追溯性。
六、设备维护与清洁1.检查仪器的日常维护工作包括：定期校准、保养和维修。
2.定期清洁检查仪器的内部和外部部件，确保检查仪器的清洁和卫生。
3.根据仪器的使用说明书，进行规定的维护和保养工作。
七、风险控制1.在操作过程中，严格遵守相应的操作规程和安全要求，确保个人和环境安全。
2.如发现异常情况或设备故障，应立即停止操作，并及时报告相关人员进行处理。
3.定期开展培训和教育，提高操作人员的专业知识和操作技能。
001纯化水微生物限度检查法操作规程操作规程：001纯化水微生物限度检查法一、目的和适用范围本操作规程适用于纯化水微生物限度检查法的操作流程。
检查目的是为了评估纯化水中微生物的数量和种类，确保纯化水的质量符合相关法规和标准。
二、设备和试剂1.无菌工作台2.显微镜3.火焰消毒器4.纯化水样品5.温度控制设备6.无菌试剂瓶7.营养基培养物8.细菌计数板三、操作步骤1.检查前准备1.1确保工作区域干净整洁，并进行必要的消毒。
1.2准备所需的设备和试剂。
1.3校验设备的准确性和完整性。
2.样品取样2.1使用无菌容器取样纯化水样品。
2.2尽量避免样品接触到空气。
2.3快速将样品送至检测实验室。
3.样品处理3.1使用无菌器具将样品分配到多个无菌试剂瓶中。
3.2确保样品的稀释比例符合标准要求。
4.培养试验4.1取一定量的样品，将其滴入细菌计数板的每个孔中。
4.2使用无菌移液器将细菌计数板放入孔内的细菌培养基中。
4.3将细菌计数板密封，并标注好样品信息。
4.4将细菌计数板放置于设定好的温度和湿度下进行培养。
4.5培养时间根据实验要求确定。
5.计数和分析5.1培养结束后，取出细菌计数板，使用显微镜在指定区域进行微生物计数。
5.2统计每个孔中微生物的数量，并记录下来。
5.3分析结果，与相关法规和标准进行比较。
5.4如结果符合要求，则纯化水样品通过检查；如结果不符合要求，则需进行进一步处理。
6.结果记录和报告6.1将检查结果记录在检测报告中，包括样品信息、检测日期、微生物数量等。
6.2将报告存档，并按要求进行归档保存。
四、操作注意事项1.操作过程必须保持无菌状态，避免样品的污染。
2.使用的设备和试剂必须保持干净和完整。
3.细菌计数板的培养条件必须按标准要求进行控制。
4.操作人员应熟悉操作流程和相关法规和标准，严格遵守操作规程。
五、操作记录1.操作人员应按要求记录操作流程、设备校验、样品信息等重要数据。
2.操作记录应包括操作日期、操作人员、操作步骤和结果等信息。
1 目的规范微生物限度检查操作。
2 适用范围适用于微生物限度的检查。
3 职责质量检定部人员严格按本SOP操作。
4 工作程序4.1 仪器4.1.1 超净工作台4.1.2 微生物检测系统4.2 试剂所用培养基及缓冲液均按《中华人民共和国药典》2005版三部要求进行配制。
玫瑰红钠培养基、营养琼脂培养基4.3 试验方法采用薄膜过滤法4.4试验前准备试验过程中所有用的器材都应进行灭菌后方可使用；超净工作台使用前需进行紫外灭菌30min。
4.5 试验步骤4.5.1 将样品加入薄膜过滤器的滤杯中4.3.1.3 供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响4.3.1.4 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。
4.3.1.5 检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告。
4.3.2 检验量4.3.2.1 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。
4.3.2.2 除另有规定外，一般供试品的检查量为10g或10ml；化学膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
4.3.3 供试液的制备供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
4.3.3.1液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
油剂可加入适量的无菌聚山梨脂80使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
4.3.4 细菌、霉菌及酵母菌计数4.3.4.1 检查法薄膜过滤法采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45um，直径约为50mm。
选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。
滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。
使用时，应保证滤膜再过滤前后的完整性。
微生物限度检查标准操作规程一、引言。
微生物限度检查是指在制药生产过程中，对原料药、辅料、中间体、制剂等药品进行微生物检查的一项重要工作。
微生物限度检查的目的是为了保证药品的质量和安全，防止因微生物污染而引起的药品变质和危害患者健康的风险。
本操作规程的目的是规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果准确可靠。
二、适用范围。
本操作规程适用于制药企业进行微生物限度检查的操作人员，包括检验员、操作人员等。
三、术语和定义。
1. 微生物限度，指药品中允许存在的微生物的最大数量，通常以菌落形成单位（CFU）或细菌总数来表示。
2. 微生物限度试验，是指对药品中的微生物进行检查的一种实验方法，包括细菌总数、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌等指标。
3. 标准菌株，指已经鉴定并保存在实验室中的具有代表性的微生物菌株。
四、操作流程。
1. 样品准备。
（1）取样品，按照规定的取样方法，从所检查的药品中取得代表性样品。
（2）样品处理，根据检测要求，对样品进行必要的处理，如稀释、均质等。
2. 培养基制备。
（1）准备培养基，根据检测要求，准备所需的培养基，包括琼脂培养基、液体培养基等。
（2）灭菌处理，对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，确保培养基的无菌状态。
3. 菌种接种。
（1）接种方法，根据检测要求，选择适当的接种方法，包括平板法、涂布法等。
（2）接种数量，根据微生物限度试验的要求，按照规定的接种数量接种标准菌株。
4. 培养条件。
（1）温度控制，根据不同的微生物菌种，控制培养的温度，通常为30-35摄氏度。
（2）培养时间，根据微生物限度试验的要求，培养一定的时间，通常为24-48小时。
5. 菌落计数。
（1）观察菌落，根据培养基上的菌落形成情况，进行菌落计数。
（2）结果判定，根据菌落计数的结果，判定样品中微生物的数量是否符合规定的限度要求。
五、质量控制。
1. 内部质量控制，每批次微生物限度试验前，进行内部质量控制，确保实验条件的稳定性和可靠性。
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
微生物限度检查法标准操作规程第一篇：微生物限度检查法标准操作规程概述1.引言微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品质量控制检验的重要手段之一。
它的意义在于保证制品中微生物污染的可控性，保障产品的安全有效性。
本篇文章将围绕微生物限度检查法的标准操作规程，对其概述进行介绍。
2.主要内容2.1 微生物限度检查法的定义微生物限度检查法（Microbial Limit Test, MLT）是指对药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中细菌和真菌等微生物数量进行检查的方法和标准。
它是评价产品质量与卫生安全性的重要方法。
2.2 微生物限度检查法的目的微生物限度检查法的目的在于评价药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品产品中的微生物数量是否在规定的限度范围内，以保证产品的安全性和有效性。
同时，微生物限度检查法也可为制品的生产、质量控制和质量管理提供有效依据。
2.3 微生物限度检查法的适用范围微生物限度检查法适用于药品、医疗器械、食品和化妆品等生物制品的质量控制检验。
其中，针对药品类，在我国《药典》中有详细规定。
3. 微生物限度检查法的标准操作规程3.1 样品处理样品处理过程应密闭、无菌且保持无菌状态。
洗手、穿戴无菌工作服及手套等工艺应符合规定，以避免二次污染。
3.2 检验方法微生物限度检查法主要分为计数法和筛选法，具体方法可根据制品的特性进行选择使用，并符合规定的国家标准。
对于细菌，常用的检验方法包括菌落计数法、薄膜过滤法等；对于真菌，常用的检验方法包括直接涂片法、薄膜过滤法等。
3.3 限度对于不同的制品，在药品中通常采用菌落计数法，在制品中微生物的限度规定一般标准分别为：细菌总数不超过10^3CFU/g或/mL，霉菌和酵母菌总数不超过10^2CFU/g或/mL。
3.4 结果判定若检测出的微生物数目符合规定限度，则判定结论为合格；若其中一个指标不符合规定，则判定为不合格。
更改历史微生物限度检查操作规程1.0 目的建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确2.0 范围适用于本公司采用微生物限度检查法测定的供试品。
3.0 职责质量部负责按本规程的要求执行微生物限度检查操作。
4.0 工作程序4.1 洁净区间的确认微生物计数检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全部过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品（即待检样品、产品）中微生物的检出。
4.2 培养基4.2.1 应使用按中国药典处方及规定的方法制备的培养基。
4.2.2 所用培养基可按中国药典规定的处方及制备方法自行配制，也可使用按中国药典规定的处方生产的脱水培养基进行配制；或购买商品化的预制培养基。
4.2.3 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存。
4.2.4 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
4.2.5 供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
4.2.6 供试品的微生物计数方法、控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数或控制菌检查。
4.3 菌种及菌液制备检查所用的菌种及菌液制备见附件 1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
稀释剂、冲洗液及其制备的要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查。
4.4 培养基的适用性检查供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
微生物限度检查所用的培养基每批均应进行适用性检查，检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。
具体要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
4.5 方法适用性试验供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。
文件名称微生物限度检验操作规程文件编码编制审核批准日期日期日期实施日期份数 3 版本号
发放范围XX部、XX部各1份，存档1
份
发放部门XX部
1 主体内容与适用范围
本规程规定了制剂的微生物质量标准。
本规程适用于细菌、霉菌、酵母菌和大肠杆菌的检测。
2 相关文件
《药品生产质量管理规范》（国家药品监督管理局2010年修订）
《中国药典》2010年版第二部
3 目标和原则
防止成品、内包装材料、纯化水微生物过多影响产品质量。
4 职责
检测部负责成品、内包装材料、纯化水微生物和车间洁净区沉降菌的检验。
5 术语
微生物：指一群形态上、结构上都很简单的生物体。
细菌数：是指规定单位的非规定灭菌药品制剂中污染活细菌的数量。
细菌菌落：是一个菌细胞或菌细胞团在局限位置上，经一定条件繁殖成肉眼可见的细菌群体。
霉菌和酵母菌数：是指规定单位非规定灭菌药在制剂中污染的霉菌和酵母菌的活菌数量。
大肠杆菌：为肠杆菌种埃希氏菌属细菌。
6 成品微生物限度标准（单位：个/g或个/mL）
项目名称
细菌总数霉菌及酵母菌大肠杆菌
国标
厂定内控
标准
国标
厂定内控
标准
国标
厂定内控
标准
XXXX ≤1000<950 ≤100<90 不得检出不得检出
7 检验操作步骤
7.1 培养皿的消毒灭菌
7.1.1 将洗净干燥的培养皿放入不锈钢培养皿筒内，于160℃恒温干燥箱内干热灭菌2
小时。
7.1.2 将消毒好的培养皿连同不锈钢筒经传递窗拿至净化工作台面上备用。
7.2 培养基的消毒灭菌。
将干粉培养基按各配方量倒入盛有一定水量的三角烧瓶中，微热溶解后，放入蒸汽灭菌消毒器中，按培养基要求灭菌，待压力下降至零点后将灭菌好的培养基拿出经传递窗拿至净化工作台上备用。
7.3 其它器皿的消毒灭菌
将镊子、剪刀、研钵用牛皮纸包扎好，刻度吸管放入不锈钢筒内，用盖盖好。
放入160℃恒温干燥箱内干热灭菌2小时，取出，经传递柜拿至净化工作台上备用。
7.4 供试品的检验量
每批供试品检验量一般为10 g，贵重或微量包装的供试品检验量可以酌减，但口服药品不得少于3 g 。
供试品必须取自2个以上的包装单位。
7.5 供试液的制备
7.5.1 称取固体供试品10 g，加pH 7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100 mL，混匀后，作为供试液。
7.5.2 含油（即非水溶性）的供试品
称取供试品10 g，置含有10 mL聚山梨酯80（吐温-80）的0.9%无菌氯化钠溶液100 mL中，混匀后，制成1:10的供试液。
7.5.3 液体供试品
取供试品10 mL，加入稀释剂90 mL中，混匀，作为供试液。
7.5.4 对照用菌液
控制菌检查均应作已知菌的对照试验。
对照菌株为大肠杆菌[CMCC（B）44102] 。
取营养琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，培养18-20小时后，稀释至1:106 。
对照菌的加入量为50-100个。
7.5.5 检查法
7.5.5.1 细菌、霉菌及酵母菌的计数
7.5.5.1.1 平皿菌落计数法
a取均匀供试液，必要时进一步稀释成1:102等适宜的稀释级。
分别取连续两级10倍稀释的供试液1 mL，置直径约90 mm的平皿中，再注入约45℃的培养基约15 mL，混匀，待凝固后，倒置培养，每稀释级应作2－3个平皿。
b 养琼脂培养基用于细菌计数，玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌计数，酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。
7.5.5.1.2 菌数测定阴性对照
a 取供试验用的稀释剂各1 mL，置4个无菌平皿中，分别按细菌、霉菌计数用的培养基制备平板，培养、检查，不得长菌。
b 细菌培养时间为48小时，温度为30-35℃。
分别在24小时及48小时点计菌落数，一般以48小时菌落数为准；霉菌及酵母菌的培养时间为72小时，温度为23-28℃。
分别在48小时及72小时点计菌落数，一般经72小时为准。
菌落如蔓延生长，不宜计数。
c 点计后，计算每个稀释级的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。
7.5.5.1.3 菌数报告规则
a 当用一稀释级使用2个平板时，应采用2个平板菌落数的均值为平均菌落数。
若2个平板菌落数相差在1倍以上时，该稀释级不宜采用，但不包括2个平板菌落数均在15个以下的情况。
（注：15个以下两平板菌落数允许幅度0-4 、1-7 、2-9 、3-10 、4-12 、5-14 、6-15 、7-17 、8-18 、9-19 、10-20 。
）
当同一稀释级使用3个平板时，应采用3个平板菌落数的均值为平均平板菌落数。
若其中一个平板菌落数与其它2个相近的平板菌落数的均值相差在1倍以上时，该平板菌落数不能参与平均，但不包括平板菌落数均在10个以下的情况。
b 细菌数一般宜选取平均平板菌落数在30-300之间的稀释级，霉菌数一般宜选平均菌落数在30-100之间的稀释级作为报告菌数计算的依据。
如有1个稀释级在30-300（30-100）之间时，将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告；如同时有2个稀释级在30-300（30-100）之间时，按下式计算两级比值。
比值＝高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数/低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数
当比值≤2时，以两级的菌落数均值报告菌数；
当比值>2时，以低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数为报告菌数。
如各稀释级平均菌落数均不在30-300之间，以最接近30或300的稀释级平均平板菌落数乘以稀释倍数报告菌数；
如各稀释级平均菌落数均在300（100）以上时，按最高稀释级平均平板菌落数乘以稀释倍数报告菌数；
如各稀释级平均菌落数均小于30时，一般按最低稀释级平均平板菌落数乘以稀释
倍数报告菌数。
如各稀释级平板均无菌落生长，或仅最低稀释级平均菌落数小于1时，则报告菌数为小于10个。
7.5.5.2 控制菌检查
除另有规定外，取供试液10 mL（相当于供试品1 g），直接或处理后接种，经增菌、分离培养后，进行革兰氏染色、系列化试验等项检查。
7.5.5.2.1 大肠杆菌
a .取胆盐乳糖培养基3份，每份100 mL，2份分别加入规定量的供试液，其中一份加入对照菌50-100个作阳性对照，第3份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照，于36±1℃培养18-24小时（必要可延长至48小时）。
阴性对照应无菌生长。
取上述3份培养物各0.2 mL，分别接种至5 mL MUG培养基培养管内培养，分别于5小时与24小时取未接种的MUG培养基管作本底对照，将各管置365 nm紫外光下观察，阳性对照管呈现荧光，MUG阳性。
供试液的MUC管呈现荧光，MUG阳性、供试液的MUG 管无荧光，MUG阴性。
然后加数滴靛基质试液于MUG管内，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。
b 当阴性对照呈阴性，阳性对照正常生长，供试液胆盐乳糖培养基培养液澄明证明无菌生长，判未检出大肠杆菌。
供试液MUG阳性，靛基质阳性，判检出大肠杆菌；MUG阴性、靛基质阴性，判未检出大肠杆菌。
c 如MUG阳性、靛基质阴性，或MUG阴性、靛基质阳性，均应取供试液胆盐乳糖培养基培养物划线于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板，培养18-24小时，如上述供试液培养物的分离平板无菌落生长，判未检出大肠杆菌。
有菌落生长，应挑选2-3可疑菌落作靛基质试验（Ⅰ）、甲基红试验（M）、乙酰甲基甲醇生成实验（V-P）、枸椽酸盐利用试验（C）及革兰染色、镜检。
按表1规定判断结果。
①靛基质试验（Ⅰ）取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，培养24小时。
沿管壁加入靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性；呈试剂本色为阴性。
②甲基红试验（M）取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48±2小时。
于管内加入甲基红指示液数滴，立即观察，培养液面呈鲜红色或桔红色为阳性；呈黄色为阴性。
③乙酰甲基甲醇生成实验（V-P）取可疑菌落或斜面培养物接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48±2小时。
于每2 mL培养液中加入α-荼酚乙醇试液1 mL，混匀，再加40%氢氧化钾溶液0.4 mL，充分振摇，在4小时内出现红色为阳性，无红色反应时
为阴性。
④枸椽酸盐利用试验（C）取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸椽酸盐培养基的斜面上，一般48-72小时培养。
培养基斜面有菌落生长，培养基由绿色变为蓝色时为阳性，培养基颜色改变为阴性。
d 结果判断见表1 。
对与MUG-Ⅰ反应不符的可疑菌株[见注（1）（2）]，应重新分离培养，再作生化试验证实。
表1 MUG的结果判断
MUG-Ⅰ曙红亚甲蓝琼脂IMVic 结果
＋＋
－－
＋－＋－－＋无菌生长
有菌生长
有菌生长
－＋――（1）
＋＋――（2）
检出大肠杆菌
未检出大肠杆菌
未检出大肠杆菌
检出大肠杆菌（3）
检出大肠杆菌（2）
注（1）、（2）如（1）出现＋＋――或（2）出现－＋――，均应重新分离菌株，再作MUG－Ⅰ和IMVic试验。
（3）革兰阴性杆菌。
