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侧柏叶总黄酮提取物质量标准研究王莲萍;张莲珠;李庆杰;袁媛;赵全成【摘要】[Objective] To establish the quality control standards for CACUMEN PLATYCLADI flavone. [Method] The total flavone contentrnin CACUMEN PLATYCLADI and the content of biflavone in Amentotaxus argotaenia were determined with UV and HPLC. [ Result] The linearrnrelationship of quercetin was good when quercetin was at the range of 0. 002 08 -0. 020 8 mg/ml (r = 0. 999 3) , the average recovery wasrn98. 00% and RSD was 1.98% (n =6). The linear relationship of amentoflavone was good when amentoflavone was at the range of 0. 13 -1.rn3 μg (R = 0. 999 7) , the average recovery was 99. 266% and RSD was 1.46% ( n = 6 ). [ Conclusion ] The method is simple and accuraternwith good reproducibility, it can be used for the quality control of CACUMEN PLATYCLADI flavone.%[目的]建立侧柏叶总黄酮的质量控制标准.[方法]分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱法对侧柏叶总黄酮中的总黄酮含量及穗花杉双黄酮的含量进行测定.[结果]在0.00208～0.020 8 mg/ml范围内槲皮苷浓度与吸光度具有良好的线性关系,R=0.9993,平均加样回收率为98.00％,RSD为1.98％(n=6);在0.13 ～1.3 μg范围内穗花杉双黄酮浓度与吸光度具有良好的线性关系,R=0.9997,平均加样回收率为99.266％,RSD为1.46％(n=6);[结论]该方法简便、精确、重现性好,可作为该制剂的质量控制标准.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(040)024【总页数】3页(P11996-11997,12010)【关键词】侧柏叶总黄酮;质量标准;UV;HPLC【作者】王莲萍;张莲珠;李庆杰;袁媛;赵全成【作者单位】吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;长春中医药大学附属医院,吉林长春1301171;长春中医药大学附属医院,吉林长春1301171;吉大白求恩制药厂,吉林长春130012;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S132侧柏叶(CACUMEN PLATYCLADI)为柏科(Cupressaceae)植物侧柏(Platycladus orientalis(L.)Franco)的干燥枝梢及叶［1］。
•论箸・柏树花粉主要致敏蛋白Cup a1的分离纯化陈晴，岳诗雨，张晓楠，何韶衡作者单位：110034沈阳，沈阳医学院转化医学研究中心，沈阳医学院药学院，辽宁省过敏性疾病过敏原致病机制研究重点实验室通信作者：陈晴，E-mail:*********************DOI：10.3969/j.issn.1673-8705.2021.01.002【摘要】目的提取和分离纯化柏树花粉主要致敏蛋白Cupal。
方法使用40mmol/LNH4HCO3缓冲液作为提取液对柏树花粉致敏蛋白进行粗提取，利用离子交换层析初步纯化其主要致敏蛋白Cup a1，收集400mmo^L NH4HCO3组分的洗脱液，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对收集的组分进行鉴定。
结果柏树花粉有20余条蛋白区带，通过离子交换层析纯化出相对分子质量43000的蛋白组，主要集中在皿峰。
结论初步分离纯化及鉴定了柏树花粉主要致敏蛋白Cup a1，为临床过敏原致病机制的诊断和治疗奠定了基础。
【关键词】柏树花粉；Cup a1；离子交换层析基金项目：国家自然科学基金(21804093)；辽宁省博士科研启动基金(2020-BS-266)；辽宁省自然科学基金(20180550052)；沈阳医学院博士科研启动基金(20186068)Isolation and purification of major allergen Cup a1of Cypress pollen CHEN Qing，YUEShi-yu，ZHANG Xiao-nan，HE Shao-hengInstitute of Translational Medicine，Department of Pharmacy，Shenyang Medical College，Key Laboratory of Research on Pathogenesis of Allergen Provoked Allergic Disease of Liaoning Province，Shenyang110034,ChinaCorresponding author：CHEN Qing，E-mail:chenqing.0906@[Abstract]Objective To extract，isolate，and purify major allergen Cup a1of Cypress pollen.MethodsThe allergenic proteins of Cypress pollen were extracted by using40mmol/L NH4HCO3buffer solution as crudeextract buffer.Ion-exchange chromatography was used for purification of major allergen Cup a1.The eluate of400mmoL/L NH4HCO3was collected.The purified proteins were identified by sodium dodecyl sulfate polyacr^^l-amide gel electrophoresis(SDS-PAGE).Results20protein bands were separated from extract of Cypress pollen by using SDS-PAGE.The43000protein were eluted in peak皿of ion exchange chromatography.Conclusion Cup a1，the major allergen of Cypress pollen was isolated and purified，providing basis for diagnosis andtreatment of allergic diseases.[Key words]Cypress pollen；Cup a1；ion exchange chromatographyFund program:Natural Science Foundation of China(21804093)；PhD Start-up Foundation of LiaoningProvince(2020-BS-266)；Natural Science Foundation of Liaoning Province(20180550052)；Science andTechnology Foundation for the Shenyang Medical College(20186068)过敏性疾病被世界卫生组织列为21世纪重点防治的三大疾病之一，是当前世界性的卫生学问题[l]o柏树花粉(Cypress pollen)是引起季节性过敏性疾病最常见的原因之一，国内外对柏树花粉致敏蛋白组分的相关研究报道结果不尽相同[2]o为了减少在主要过敏原水平上引入任何可能的人工制品的风险，开发快速的提取方法，得到主要的过敏原富集物是研究的关键，可对当地过敏性性疾病进行诊断和治疗。
桂花精油的萃取技术分析与桂花纯露的提取工艺优化周晓静,乔永旭,周静,孙欣,姜婷婷,沈碧君,张永平（宿迁学院建筑工程学院，江苏宿迁223800）摘要:桂花因其“清芬袭人,浓香远逸”的独特迷人香气,常被提取为桂花精油、浸膏或精油后用作高档天然香原料,产品被应用于食物、药用、美妆等行业。
桂花品种多样,大多花期较短,在生产中有多种提取工艺,主要包括精油萃取的水蒸气蒸馏法、溶剂提取法、超临界CO2流体萃取法、超声波辅助法、酶制剂辅助提取法及微波辅助提取法等。
不同工艺的提取率不同、提取物的香气与品质差异也较大。
针对这种现状,将对桂花精油与纯露在实验研究和工业生产的提取技术、生产工艺及其应用进行深入分析与对比,总结每种方法技术的优点及不足,并对不同提取方法的产品特征进行比较分析,以期为充分利用我国本土桂花资源提供参考。
关键词:桂花;精油;纯露;萃取技术;提取工艺中图分类号:TQ654.2文献标识码:A文章编号:1005-7897(2023)18-0196-030引言桂花（Osmanthus fragrans Lour.）是木犀科木犀属的一种常绿乔木或灌木，喜光，较耐阴，喜温暖，不耐严寒，适宜酸性土壤，怕积水。
它原产于我国西南地区，先秦古籍《山海经》中多次提到桂花树，在黄河以南地区可露地种植。
作为我国十大传统名花之一，因其形美、常绿、花香在城市园林中应用普遍，现广泛栽种于淮河流域及以南地区，如四川、云南、贵州、湖南、湖北、广东、广西、江苏、浙江等地。
中国的桂花资源非常丰富，据统计，2014年以来中国的桂花种植面积已超过美国，成为世界上桂花种植面积最大的国家。
2016年，中国桂花种植面积为366200hm2，桂花产量达到创纪录的2.246亿t。
此外，我国食用桂花历史悠久，屈原在《九歌》中就有“援北斗兮酌桂浆”之句，说明两千年前，我们的祖先已把桂花制成佳酿了，桂花茶、桂花糕、桂花酒均是中国特有食品。
因其富含多糖、多酚、黄酮、萜类、色素类等多种有效成分，故桂花及其制品具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血脂、降血压、止咳化痰、缓解口臭、抑菌等功效，古人将桂花封为“百药之长”。
5.方茴说："那时候我们不说爱，爱是多么遥远、多么沉重的字眼啊。
我们只说喜欢，就算喜欢也是偷偷摸摸的。
"6.方茴说："我觉得之所以说相见不如怀念，是因为相见只能让人在现实面前无奈地哀悼伤痛，而怀念却可以把已经注定的谎言变成童话。
"7.在村头有一截巨大的雷击木，直径十几米，此时主干上唯一的柳条已经在朝霞中掩去了莹光，变得普普通通了。
“挑战杯”全国大学生课外学术科技作品竞赛简介参加“挑战杯”科技竞赛的作品一般分为三大类：自然科学类学术论文、社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作，凡在举办竞赛终审决赛的当年７月１日起前正式注册的全日制非成人教育的各类高等院校的在校中国籍本专科生和硕士研究生、博士研究生（均不含在职研究生）都可申报参赛。
每个学校选送参加竞赛的作品总数不得超过６件（每人只限报一件作品）、作品中研究生的作品不得超过３件，其中博士研究生作品不得超过１件。
各类作品先经过省级选拔或发起院校直接报送至组委会，再由全国评审委员会对其进行预审，并最终评选出８０％左右的参赛作品进入终审，终审的结果是，参赛的三类作品各有特等奖、一等奖、二等奖、三等奖、且分别约占该类作品总数的３％、８％、２４％和６５％。
竞赛的宗旨：崇尚科学、追求真知、勤奋学习、锐意创新、迎接挑战。
竞赛的目的：引导和激励高校学生实事求是、刻苦钻研、勇于创新、多出成果、提高素质，并在此基础上促进高校学生课外学术科技活动的蓬勃开展，发现和培养一批在学术科技上有作为、有潜力的优秀人才。
竞赛的方式：高等学校在校学生申报自然科学类学术论文、哲学社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作三类作品参赛；聘请专家评定出具有较高学术理论水平、实际应用价值和创新意义的优秀作品，给予奖励；组织学术交流和科技成果的展览、转让活动。
第五届“挑战杯”一等奖获奖名单清华大学浦志勇《十字路口看乡企》--中国农村乡镇企业转制问题调查报告清华大学白继红蛋白质去折叠与折叠机制的研究清华大学陈益钢基于界面设计的多层膜技术获得新型合金1."噢，居然有土龙肉，给我一块！"2.老人们都笑了，自巨石上起身。
Hebei Normal University of Science & Technology综合化学实验实验报告实验名称：侧柏叶中黄酮的提取及其在功能化妆品中的应用姓名：学号：专业：班级：同组人：指导教师：开题时间：河北科技师范学院理化学院综合化学实验室目录摘要 (2)1 绪论 (3)2 实验原理 (3)3 实验仪器和药品 (4)3.1 实验仪器 (4)3.2 实验药品 (4)4 实验过程 (4)4.1 侧柏叶中黄酮的提取及定性分析 (4)4.2 侧柏黄酮洗发香波的配制及性能定 (6)4.3 侧柏黄酮雪花膏的配制及性能测定 (7)5 结果与讨论 (7)5.1 侧柏叶中黄酮的含量 (7)5.2 侧柏叶黄酮提取物的紫外—可见分析 (8)5.3 洗发香波和雪花膏的性能测定 (9)6 结论 (10)参考文献摘要采用超声波法、索氏提取法等方法从侧柏叶中提取黄酮类化合物。
并根据不同溶度的黄铜提取液对应不同的吸光度，作出标准曲线，得出吸光度关于浓度的方程，然后再测得侧柏提取液的吸光度，根据方程计算黄酮类化合物的含量。
黄酮类化合物主要用于激活毛母细胞和促进血液循环，使毛发生长能力衰退的毛囊复活和促进血液循环后补充营养成分而发挥出养发、生发的作用。
去屑止痒的机理在于抑制头发表皮细胞蜕化的速度，延迟脱落，减少脂溢性皮肤病的产生。
同时它还有很好的美白效果。
因此，广泛应用于洗发香波和雪花膏的制备中。
关键词：侧柏；黄酮类化合物；洗发香波；雪花膏1 绪论侧柏系柏科侧柏属常绿乔木，别名扁柏、香柏、片柏、片松。
喜生于湿润肥沃的山坡[1]，分布于全国大部分地区。
现代医学研究证明，侧柏叶对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、宋内氏痢疾杆菌有明显的抑制作用，能缩短出血和凝血时间，对肺炎、痢疾、高血压等多种疾病有一定的疗效。
侧柏叶的疗效作用主要是通过存在其中的黄酮类物质起作用的。
黄酮类化合物是一类具有2-苯基色原酮结构的化合物。
它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。
柏树种子的药理活性物质的提取与分离研究柏树是一种常见的树木，其种子中含有多种具有药理活性的物质。
本文将介绍柏树种子药理活性物质的提取与分离研究，以期进一步了解其潜在的医药价值。
首先，柏树种子是提取药理活性物质的重要来源之一。
柏树种子中富含的有效成分包括挥发油和多种生物活性物质，如黄酮类、三萜类、萜类、甾醇类等。
这些物质具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种药理活性，被广泛用于传统医学和现代药物研究中。
为了提取柏树种子中的药理活性物质，可以采用不同的提取方法。
常用的提取方法包括乙醇浸提、超声波提取、热水浸提等。
其中，乙醇浸提法是最常用的方法之一。
它的优势在于提取效果稳定，适用于大规模提取。
超声波提取法则具有提取效率高、速度快的特点。
热水浸提法则是一种传统的提取方法，简单易行，并且对活性成分的保护较好。
提取后的柏树种子提取物可以通过分离和纯化的方法，进一步获取单一的药理活性成分。
常用的分离方法包括层析分离、液-液萃取、固相萃取等。
其中，层析分离是一种常用的方法。
它可以根据不同物质在固定相和流动相中的亲和性不同，分离出具有药理活性的目标化合物。
液-液萃取则是利用不同物质在两种不相溶溶剂中的分配行为，实现物质的分离。
固相萃取是一种通过固相吸附剂吸附目标物质，再利用适宜的溶剂洗脱的分离方法。
通过提取和分离方法，柏树种子中的药理活性物质已经被成功地提取和分离出来。
研究表明，柏树种子中的黄酮类、三萜类和甾醇类等物质具有广泛的药理活性。
黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等作用，可用于心血管疾病、神经系统疾病和肿瘤的预防和治疗。
三萜类化合物具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用，可用于呼吸系统感染、病毒感染和肿瘤的治疗。
甾醇类化合物则具有降脂、抗病毒和抗肿瘤等作用，可用于心血管疾病、病毒感染和肿瘤的治疗。
此外，柏树种子还具有一定的毒副作用。
提取物的安全性和剂量应该得到进一步研究和评估，以确保其在临床应用中的安全性和有效性。
总结起来，在柏树种子的药理活性物质提取与分离研究中，乙醇浸提法、超声波提取法和热水浸提法是常用的提取方法，层析分离、液-液萃取和固相萃取是常用的分离方法。
濒危植物朝鲜崖柏研究现状和保育对策引言：朝鲜崖柏（Taxus cuspidata Sieb. et Zucc.）是一种古老而珍稀的针叶植物，也是中国的特有树种之一。
由于人类活动和自然环境因素的影响，朝鲜崖柏目前正面临广泛的生境破坏和种群减少的威胁。
研究其现状和采取有效的保护对策变得尤为重要。
一、朝鲜崖柏的研究现状1. 种群数量监测：通过定期的调查和监测，了解朝鲜崖柏种群的数量、分布状况以及种群结构等情况。
2. 种群遗传多样性研究：通过采集不同地点的朝鲜崖柏样本，进行遗传多样性的分析，探究其遗传结构和变异情况。
3. 生态学研究：研究朝鲜崖柏的生活史、繁殖生态学和种内种间关系等，为保护工作提供基础数据。
4. 林分结构研究：通过对朝鲜崖柏所在林分的结构特征和动态变化的研究，为其恢复和保护提供科学依据。
5. 天然药理研究：朝鲜崖柏的叶片、种子和树皮等都具有药用价值，相关的药理研究有助于挖掘其潜在的医药价值。
二、朝鲜崖柏的保护对策1. 保护区建设：设立朝鲜崖柏自然保护区，划定核心保护区和缓冲区，加强保护区的管理和监测工作。
2. 种子库建设：建立朝鲜崖柏种子库，收集、保存和繁育优良种质资源，为植株的恢复和引种提供可靠的资源。
3. 私人养护：鼓励居民和企事业单位在自有用地上种植朝鲜崖柏，加强对植株的养护和保护。
4. 育种繁育：通过人工授粉、无性繁殖等方式，培育和繁育朝鲜崖柏优良品种，为植株增加数量提供途径。
5. 生境恢复：加强朝鲜崖柏生境的修复和恢复工作，改善其生长环境，为其繁衍生息提供良好的条件。
6. 意识教育：加强朝鲜崖柏的宣传和教育工作，提高公众对其保护和重要性的认识，培养保护的意识。
结论：朝鲜崖柏是一种珍贵的植物资源，但目前正面临生存威胁。
为了保护朝鲜崖柏，我们需要加强科学研究，了解其现状和生态特征，并采取一系列的保护对策，包括建立保护区、种子库和进行私人养护等。
只有在科学研究的基础上，采取切实可行的保护措施，才能有效地保护和恢复朝鲜崖柏的种群。
㊀山东农业科学㊀２０２３ꎬ５５(８):５６~６４ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ㊀ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２３.０８.００８收稿日期:２０２２－１０－２０基金项目:国家自然科学基金项目(３２００１９２９)ꎻ山东省自然科学基金项目(ＺＲ２０２０ＭＣ１２５)作者简介:赵晓彤(２０００ )ꎬ女ꎬ山东东营人ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为园林植物种质资源创新与应用ꎮＥ－ｍａｉｌ:２５８１１４６９４９＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:王桂清(１９６８ )ꎬ女ꎬ河北泊头人ꎬ博士ꎬ教授ꎬ主要从事植物保护教学与科研工作ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｗａｎｇｇｕｉｑｉｎｇ＠ｌｃｕ.ｅｄｕ.ｃｎ不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响赵晓彤ꎬ王桂清(聊城大学农学与农业工程学院ꎬ山东聊城㊀２５２０００)㊀㊀摘要:采用十字交叉法和血球计数法分析不同培养基㊁温度㊁光照㊁酸碱度㊁碳源和氮源等对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９菌丝生长和孢子形成的影响ꎬ明确两种木霉生长繁殖的最佳条件ꎬ指导其人工扩繁和工厂化生产ꎮ结果表明ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９在含碳源和有机氮的ＰＤＡ㊁ＣＤＡ培养基中ꎬ常温㊁黑暗㊁非强酸强碱培养条件下其菌丝生长良好ꎬ光照㊁果糖㊁牛肉膏培养条件更有利于二者孢子形成ꎻ温度㊁酸碱度和培养基是影响ＳＭＦ２和Ｔ３９孢子形成的主要因素ꎬ３５ħ㊁ｐＨ值为７㊁ＰＤＡ培养基最利于ＳＭＦ２产孢ꎬ３０ħ㊁ｐＨ值为６㊁ＣＤＡ培养基最利于Ｔ３９产孢ꎻ相同条件下ꎬＳＭＦ２的菌丝生长略快ꎬ而Ｔ３９的产孢能力更强ꎻ单糖和有机氮更有利于促进ＳＭＦ２和Ｔ３９产孢ꎮ关键词:培养条件ꎻ长枝木霉ＳＭＦ２ꎻ哈茨木霉Ｔ３９ꎻ菌丝生长ꎻ孢子形成中图分类号:Ｓ４７６.１㊀㊀文献标识号:Ａ㊀㊀文章编号:１００１－４９４２(２０２３)０８－００５６－０９ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎＧｒｏｗｔｈａｎｄＳｐｏｒｕｌａｔｉｏｎｏｆＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａＬｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍＳＭＦ２ａｎｄＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａＨａｒｚｉａｎｕｍＴ３９ＺｈａｏＸｉａｏｔｏｎｇꎬＷａｎｇＧｕｉｑｉｎｇ(ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＳｃｈｏｏｌꎬＬｉａｏｃｈｅｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＬｉａｏｃｈｅｎｇ２５２０００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａꎬｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎬｌｉｇｈｔꎬｐＨꎬｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｓｏｎｔｈｅｈｙｐｈａｇｒｏｗｔｈａｎｄｓｐｏｒｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍＳＭＦ２ａｎｄＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ３９ｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｃｒｏｓｓｍｅｔｈｏｄａｎｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄ.Ｉｔｗａｓａｉｍｅｄｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉ￣ｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｗｏＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｅｃｉｅｓꎬａｎｄｔｏｇｕｉｄｅｔｈｅｉｒａｒｔｉｆｉｃｉａｌｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎａｎｄｆａｃｔｏｒｙｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＳＭＦ２ａｎｄＴ３９ｈａｄｂｅｔｔｅｒｈｙｐｈａｇｒｏｗｔｈｕｎｄｅｒｒｏｏｍｔｅｍｐｅｒａ￣ｔｕｒｅꎬｄａｒｋꎬｎｏｎ￣ｓｔｒｏｎｇａｃｉｄａｎｄａｌｋａｌｉｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｉｎＰＤＡａｎｄＣＤＡｍｅｄｉａｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅａｎｄｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎꎬａｎｄｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｌｉｇｈｔꎬｆｒｕｃｔｏｓｅａｎｄｂｅｅｆｐａｓｔｅｗｅｒｅｍｏｒｅｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏｔｈｅｓｐｏｒｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ.ＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎬｐＨａｎｄｍｅｄｉｕｍｗｅｒｅｔｈｅｍａｉｎｆａｃｔｏｒｓａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳＭＦ２ａｎｄＴ３９ｓｐｏｒｅｓꎻ３５ħꎬｐＨ＝７ａｎｄＰＤＡｍｅｄｉｕｍｗｅｒｅｔｈｅｍｏｓｔｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏＳＭＦ２ｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎꎬａｎｄ３０ħꎬｐＨ＝６ａｎｄＣＤＡｍｅｄｉｕｍｗｅｒｅｔｈｅｍｏｓｔｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏＴ３９ｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.ＵｎｄｅｒｔｈｅｓａｍｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓꎬｔｈｅｈｙｐｈａｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｏｆＳＭＦ２ｗａｓｓｌｉｇｈｔｌｙｆａｓｔｅｒꎬａｎｄｔｈｅｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆＴ３９ｗａｓｓｔｒｏｎｇｅｒ.Ｍｏｎｏ￣ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｎｄｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎｗｅｒｅｍｏｒｅｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏＳＭＦ２ａｎｄＴ３９ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＣｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓꎻＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍＳＭＦ２ꎻＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ３９ꎻＨｙ￣ｐｈａｇｒｏｗｔｈꎻＳｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ㊀㊀生防真菌在防治作物病害(尤其是土传病害)方面发挥着巨大作用ꎬ其中研究最多和应用最广的为木霉菌(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ.)[１]ꎮ木霉菌广泛分布于不同生态环境中ꎬ以丰富的次生代谢物和强大的竞争能力及重寄生特性实现其生物防治作用ꎬ在土壤修复㊁促进植物生长和控制病害方面发挥着重要作用[２]ꎬ可作为高效㊁经济㊁环保的原材料应用于工业和农业生产[３]ꎮ因其具有生长分布的广泛性㊁种类株系的适应性㊁拮抗真菌的广谱性㊁活性物质的多样性㊁作用机制的复杂性和对环境的友好性等特点而成为最有应用前途的生防因子[４－６]ꎮ最为常见的木霉菌有哈茨木霉(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍ)㊁棘孢木霉(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａａｓｐｅｒｅｌｌｕｍ)㊁长枝木霉(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ)和绿色木霉(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ)等ꎮ哈茨木霉是目前农业生物防治中最具商业化价值的木霉菌ꎬ应用广泛ꎻ长枝木霉是较为常见的拮抗类木霉ꎬ在植病生防中越来越受到重视ꎮ哈茨木霉Ｔ２２㊁Ｔ３９作为生防产品已登记注册ꎬ不仅可以诱导寄主防御基因表达产生抗病性而防治植物病害ꎬ还可以促进作物生长进而提高生物量[７－９]ꎮ长枝木霉ＳＭＦ２主要通过产生抗菌肽康宁霉素(ｔｒｉｃｈｏｋｏｎｉｎｓꎬＴＫｓ)而对植物病害产生抑制作用ꎬ同时对苦瓜㊁白三叶草等植物具有明显的促生作用[１ꎬ１０]ꎮ木霉菌种类不同㊁菌株不同ꎬ其生态适应性也不同ꎮ绿色木霉ＴＲ－８㊁哈茨木霉ＴＨ－１均可在ＰＤＡ培养基上正常生长ꎻ光照可促进孢子产生ꎬ但二者最适生长温度㊁ｐＨ值等略有不同ꎻ微量元素Ｍｎ对ＴＲ－８菌丝生长有一定的促进作用[１１－１２]ꎮ生物学特性是研究真菌繁殖条件㊁发生规律㊁生态调控等方面的理论基础ꎬ对生防菌的科学利用具有指导作用[１３]ꎮ本试验通过研究不同培养条件下长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９的生物学特性ꎬ明确其生长繁殖条件ꎬ为其人工扩繁和工厂化生产奠定理论基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀供试材料供试菌种为长枝木霉(Ｔ.ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ)ＳＭＦ２和哈茨木霉(Ｔ.ｈａｒｚｉａｎｕｍ)Ｔ３９ꎬ由聊城大学植物病理实验室提供ꎮ将供试菌种在(２５ʃ１)ħ㊁ＬʒＤ(光照ʒ黑暗)＝１２ｈʒ１２ｈ的恒温光照培养箱内采用ＰＤＡ培养基培养３ｄ后ꎬ用打孔器取直径０.７ｃｍ的菌饼备用ꎮ１.２㊀试验设计１.２.１㊀培养基㊀供试培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(ＰＤＡ:去皮马铃薯２００ｇ㊁葡萄糖２０ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)㊁察氏培养基(ＣＤＡ:葡萄糖２０ｇ㊁ＫＨ２ＰＯ４０.５ｇ㊁Ｋ２ＨＰＯ４０.６ｇ㊁ＭｇＳＯ４ ７Ｈ２Ｏ０.５ｇ㊁ＮａＣｌ０.１ｇ㊁天门冬酰胺５ｇ㊁ＣａＣｌ２０.１ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)㊁燕麦培养基(ＯＭＡ:燕麦片４０ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)㊁基础固体培养基(ＢＣＭ:蛋白胨１０ｇ㊁牛肉浸膏３ｇ㊁Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ㊁ＮａＣｌ５ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)㊁麦芽糖琼脂培养基(ＭＥＡ:麦芽糖２０ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)[１５]共５种ꎮ１.２.２㊀温度㊀以ＰＤＡ培养基为营养源ꎬ温度范围５~４０ħ之间ꎬ设置５㊁１０㊁１５㊁２０㊁２５㊁３０㊁３５㊁４０ħ共８个处理ꎮ１.２.３㊀光照㊀以ＰＤＡ培养基为营养源ꎬ设置全光照㊁光暗交替(ＬʒＤ＝１２ｈʒ１２ｈ)㊁全黑暗３个处理ꎮ１.２.４㊀ｐＨ值㊀以ＰＤＡ培养基为营养源ꎬ使用１.０ｍｏｌ/ＬＨＣｌ溶液和１.０ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ溶液调节ＰＤＡ培养基的ｐＨ值ꎬ设ｐＨ值为３㊁４㊁５㊁６㊁７㊁８㊁９㊁１０㊁１１㊁１２共１０个处理ꎮ１.２.５㊀碳源㊀以ＣＤＡ培养基作为基础培养基ꎬ用供试碳源等量替换其中的葡萄糖(标准碳)ꎬ制成不同碳源培养基ꎮ供试碳源选用蔗糖㊁麦芽糖㊁乳糖㊁果糖㊁海藻糖㊁阿拉伯糖㊁可溶性淀粉㊁微晶纤维素共８种ꎬ并以无碳处理作为空白对照ꎮ１.２.６㊀氮源㊀以ＣＤＡ培养基作为基础培养基ꎬ用供试氮源等量替换其中的天门冬酰胺(标准氮)ꎬ制成不同氮源培养基ꎮ供试氮源选用硫酸铵㊁氯化铵㊁硝酸钠㊁牛肉膏㊁酵母浸膏㊁蛋白胨㊁甘氨酸共７种ꎬ并以无氮处理作为空白对照ꎮ１.３㊀测定项目及方法将高压湿热灭菌后的培养基制成平板(直径９ｃｍ)ꎬ于培养皿内接种木霉菌饼ꎬ１皿１饼ꎬ重复３次ꎮ研究不同培养基㊁温度㊁光照㊁ｐＨ值㊁碳源和氮源对ＳＭＦ２㊁Ｔ３９菌丝生长和产孢量的影响ꎮ不同处理分别于(２５ʃ１)ħ㊁ＬʒＤ＝１２ｈʒ１２ｈ的恒温光照培养箱培养４８ｈ后ꎬ采用十字交叉法测量菌落直径ꎬ７２ｈ后用相机拍照记录培养性状ꎬ采用血球计数法计算产孢量[１４－１５]ꎮ７５㊀第８期㊀㊀㊀㊀㊀赵晓彤ꎬ等:不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响１.４㊀数据处理与分析利用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ２０２０处理数据ꎬ用ＡｄｏｂｅＰｈｏｔｏｓｈｏｐ２０２０软件处理照片ꎬ用ＤＰＳ１９.０５中的Ｄｕｎｃａｎ ｓ法进行多组样本间的差异显著性分析ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀不同培养基对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图１显示ꎬＳＭＦ２㊁Ｔ３９在５种供试培养基中均可生长ꎬ菌丝生长呈辐射状ꎬ色素颜色为黄绿色ꎬ培养基不同菌丝色素颜色深浅不同ꎮ其中ꎬ二者在ＭＥＡ培养基上生长均不理想ꎬ菌丝稀薄ꎬ不产生色素ꎬ产孢量小ꎮ不同培养基条件下两种木霉菌丝生长速度和产孢量存在差异ꎮ由图２可知ꎬ二者在ＰＤＡ培养基上生长状况最好ꎬ菌落大㊁菌丝生长旺盛ꎬ产孢量大ꎮＳＭＦ２菌落直径达７.６９ｃｍꎬ是Ｔ３９的１.２５倍(表１)ꎬ产孢量为２.６４ˑ１０１０个/皿ꎻＴ３９菌落直径为６.１６ｃｍꎬ产孢量为３.８６ˑ１０１０个/皿ꎮ在ＣＤＡ㊁ＯＭＡ㊁ＢＣＭ培养基上ꎬ二者生长状况较好ꎬＴ３９的产孢量是ＳＭＦ２的１.２７~６.５５倍(表１)ꎬ且Ｔ３９在ＣＤＡ上的产孢量高达４.５８ˑ１０１０个/皿ꎮ上行图为ＳＭＦ２ꎬ下行图为Ｔ３９ꎬ下同ꎻ从左至右依次为ＰＤＡ㊁ＣＤＡ㊁ＯＭＡ㊁ＢＣＭ㊁ＭＥＡꎮ图１㊀不同培养基条件下两种木霉培养结果比较图２㊀不同培养基对两种木霉菌丝生长和产孢量的影响㊀㊀表１㊀不同培养基下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标ＰＤＡＣＤＡＯＭＡＢＣＭＭＥＡ菌落直径１.２５１.０５０.９７１.０９０.８４产孢量１.４６６.５５１.２７２.０１０.８８㊀㊀注:表中菌落直径的倍数为ＳＭＦ２/Ｔ３９ꎬ产孢量的倍数为Ｔ３９/ＳＭＦ２ꎬ下同ꎮ㊀㊀综合菌丝生长速度㊁产孢量和培养性状ꎬＰＤＡ为ＳＭＦ２菌株生长发育的最佳培养基ꎬＣＤＡ为Ｔ３９的最佳培养基ꎮＴ３９菌株的产孢能力明显大于ＳＭＦ２ꎮ２.２㊀不同温度对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响由图３可知ꎬ两种木霉在２５~３５ħ范围内菌丝生长旺盛ꎬ呈辐射状ꎬ菌落致密ꎬ在整个培养基上密布成堆ꎮ当培养温度ɤ２０ħ或高达４０ħ时ꎬ两种木霉生长状况均较差ꎬ菌丝稀薄ꎬ产孢量少ꎮ由图４可知ꎬ供试温度范围内ꎬ随着温度升高ꎬ两种木霉的菌落直径和产孢量均呈现先升高后降低的变化ꎮＳＭＦ２的菌落直径和产孢量拐点均出现在３５ħꎬ菌落直径最大达８.７５ｃｍꎬ是Ｔ３９的１.２９倍(表２)ꎬ产孢量最高达６１.０６ˑ１０８８５㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀个/皿ꎻ而Ｔ３９的菌落直径拐点出现在２５ħꎬ最大达８.３５ｃｍꎬ产孢量拐点出现在３０ħꎬ最高达２０６.４６ˑ１０８个/皿ꎮ５~３０ħ范围内ꎬ同一温度下ꎬＴ３９的产孢能力强于ＳＭＦ２ꎬ前者的产孢量是后者的１.１１~２３.８３倍(表２)ꎻ而３５~４０ħ时ꎬＴ３９的产孢能力低于ＳＭＦ２ꎬ后者的产孢量是前者的１.０６~１.９６倍ꎮ从左至右依次为５㊁１０㊁１５㊁２０㊁２５㊁３０㊁３５㊁４０ħꎮ图３㊀不同温度条件下两种木霉培养结果比较㊀㊀表明两种木霉在最适培养温度上有差异ꎬＳＭＦ２的菌丝生长和产孢最适温度均为３５ħꎬＴ３９的菌丝生长最适温度为２５~３０ħꎬ产孢最适温度为３０ħꎮ相同温度下Ｔ３９产孢量整体较高ꎮ图４㊀不同温度条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较㊀㊀表２㊀不同温度条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标５ħ１０ħ１５ħ２０ħ２５ħ３０ħ３５ħ４０ħ菌落直径０.９０１.４９２.２４１.２１０.９３０.９８１.２９０.９４产孢量１.１７１.１１４.００３.７０２３.８３１３.６２０.５１０.９５２.３㊀不同光照对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图５显示ꎬＳＭＦ２㊁Ｔ３９在３种不同光照条件下均能正常生长ꎬ菌落致密ꎬ菌丝呈辐射状ꎬ生长旺盛ꎮ二者在全光照条件下产孢最多ꎬ光暗交替条件下次之ꎬ全黑暗条件下最少ꎮ由图６可知ꎬ不同光照条件下ꎬＳＭＦ２㊁Ｔ３９的菌落直径范围分别为６.３１~８.１３㊁５.７５~６.６７ｃｍꎬ且菌落直径均在全黑暗条件下达到最大ꎬ全光照条件下次之ꎬ光暗交替条件下最小ꎮＳＭＦ２菌丝生长较快ꎬ是Ｔ３９的１.０５~１.２２倍(表３)ꎮ从左到右依次为全光照㊁光暗交替㊁全黑暗ꎮ图５㊀不同光照条件下两种木霉培养结果比较Ｔ３９㊁ＳＭＦ２产孢量均在全光照条件下达到最大ꎬ分别为３３.８３ˑ１０８㊁９.５０ˑ１０８个/皿ꎻ不同光照条件下ꎬＴ３９的产孢量为ＳＭＦ２的２.４５~４.１４倍(表３)ꎮ表明光照条件能够有效增加二者的产孢量ꎬ且同一光照条件下ꎬＴ３９产孢量明显高于ＳＭＦ２ꎮ图６㊀不同光照条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较９５㊀第８期㊀㊀㊀㊀㊀赵晓彤ꎬ等:不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响㊀㊀表３㊀不同光照条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标全光照光暗交替全黑暗菌落直径１.０５１.１０１.２２产孢量３.５６２.４５４.１４２.４㊀不同ｐＨ值对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图７显示ꎬ两种木霉在ｐＨ值为４~１１条件下均可生长ꎬ菌落相对致密ꎬ菌丝生长比较旺盛ꎬ孢子均匀密布整个培养基ꎻ但极强的酸㊁碱环境即ｐＨ值为３㊁１２条件下ꎬ二者生长状况较差ꎬｐＨ值为１２条件下菌丝生长缓慢ꎬ菌落较小ꎬ产孢量较少ꎻｐＨ值为３条件下由于酸性过大ꎬ培养基无法凝固ꎬ两种菌生长缓慢ꎬ产孢极少ꎮ从左到右依次为ｐＨ＝３㊁４㊁５㊁６㊁７㊁８㊁９㊁１０㊁１１㊁１２ꎮ图７㊀不同ｐＨ值条件下两种木霉培养结果比较㊀㊀由图８可知ꎬｐＨ值为４~１１条件下ꎬＳＭＦ２㊁Ｔ３９的菌丝生长和产孢量存在明显差异ꎮＳＭＦ２的菌落直径范围为６.５１~８.４５ｃｍꎬｐＨ值为９时菌落直径最大ꎻＴ３９的菌落直径范围为４.９５~７.４８ｃｍꎬｐＨ值为４时菌落直径最大ꎬ且随ｐＨ值增大整体呈减小趋势ꎮｐＨ值为４~５时ꎬＴ３９的菌丝生长比较快ꎬ其菌落直径是ＳＭＦ２的１.０７~１.１５倍ꎻｐＨ值为６~１１时ꎬＳＭＦ２的菌丝生长比较快ꎬ其菌落直径是Ｔ３９的１.１７~１.５９倍(表４)ꎮｐＨ值为４~１１条件下ꎬＳＭＦ２的产孢量为(０.４６~２.９１)ˑ１０１０个/皿ꎬｐＨ值为７时孢子量最多ꎻＴ３９的产孢量为(１.４８~５.２２)ˑ１０１０个/皿ꎬｐＨ值为６时孢子量最多ꎮ相同ｐＨ值下Ｔ３９的产孢量是ＳＭＦ２的１.２５~４.２０倍(表４)ꎮ表明中性偏碱环境有利于ＳＭＦ２的生长和繁殖ꎬ其菌丝生长和产孢的最适ｐＨ值分别为９和７ꎻ偏酸条件则更有利于Ｔ３９的生长发育ꎬ其菌丝生长和产孢的最适ｐＨ值分别为４和６ꎮ图８㊀不同ｐＨ值条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较㊀㊀表４㊀不同ｐＨ值条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标３４５６７８９１０１１１２菌落直径１.２９０.８７０.９３１.２４１.１７１.２１１.５９１.２３１.５４１.３４产孢量４.８９３.６８４.２０３.１３１.２５１.３２１.７６１.９３１.４３１.１７２.５㊀不同碳源对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图９显示ꎬ两种木霉在无碳培养基上可产孢ꎬ从左到右依次为无碳㊁果糖㊁阿拉伯糖㊁海藻糖㊁麦芽糖㊁蔗糖㊁乳糖㊁可溶性淀粉㊁微晶纤维素ꎮ图９㊀不同碳源条件下两种木霉培养结果比较０６㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀但产孢量较少㊁生长较差ꎬ菌落直径相对较小ꎬ菌丝稀疏ꎻ在其他碳源培养基上菌丝生长均较旺盛ꎬ产孢量大ꎬ呈辐射状ꎬ分生孢子密布于菌落上ꎮ不同碳源处理下两种木霉的生长发育状况较无碳对照均明显提高ꎬ表明其对碳源的要求不严格ꎬ但对单糖(果糖㊁阿拉伯糖)的利用效果优于双糖(海藻糖㊁麦芽糖㊁蔗糖㊁乳糖)和多糖(可溶性淀粉㊁微晶纤维素)ꎮ微晶纤维素由于自身溶解性较差ꎬ以其为碳源时ꎬ菌丝生长和产孢能力不理想ꎬ但其生长发育状况仍优于无碳对照ꎮ由图１０可知ꎬ无碳条件下ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９菌落直径均低于５ｃｍꎬ产孢量不超过１.００ˑ１０１０个/皿ꎮ不同碳源处理下ꎬＳＭＦ２的菌落直径为５.１６~７.７１ｃｍꎬ产孢量为(０.９５~１.６２)ˑ１０１０个/皿ꎬ分别是无碳培养基的１.０６~１.５９㊁２.７１~４.６３倍ꎻＴ３９的菌落直径为４.２０~５.６２ｃｍꎬ产孢量为(１.５６~２.５０)ˑ１０１０个/皿ꎬ与无碳培养基相比ꎬ前者产孢量是后者的１.６８~２.６９倍ꎬ菌落直径的倍数关系在１.０１~１.３６之间ꎬ差异较小ꎮ阿拉伯糖为ＳＭＦ２和Ｔ３９菌丝生长的最适碳源ꎬ果糖为二者产孢的最佳碳源ꎮ由表５可知ꎬ不同碳源条件下ꎬＳＭＦ２的菌丝生长较快ꎬ菌落直径是Ｔ３９的１.２３~１.４７倍ꎻＴ３９的产孢能力明显大于ＳＭＦ２ꎬ前者是后者的１.１０~１.６４倍ꎮ图１０㊀不同碳源条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较㊀㊀表５㊀不同碳源条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标无碳果糖阿拉伯糖海藻糖麦芽糖蔗糖乳糖可溶性淀粉微晶纤维素菌落直径１.１７１.４７１.３７１.４４１.４１１.３３１.３３１.３５１.２３产孢量２.６５１.５４１.４２１.５２１.５５１.４６１.１０１.５５１.６４２.６㊀不同氮源对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图１１显示ꎬ无氮条件下ꎬ两种木霉的孢子肉眼几乎不可见ꎮ相比较无氮对照ꎬ两种木霉在以蛋白胨㊁酵母浸膏㊁牛肉膏㊁甘氨酸为氮源的培养基上生长良好ꎬ菌丝致密ꎬ产孢量较多ꎻ而在其他氮源培养基中ꎬ菌丝稀薄ꎬ产孢量少ꎬ生长㊁产孢均不理想ꎮ从左到右依次为无氮㊁蛋白胨㊁牛肉膏㊁酵母浸膏㊁甘氨酸㊁硝酸钠㊁硫酸铵㊁氯化铵ꎮ图１１㊀不同氮源条件下两种木霉培养结果比较㊀㊀由图１２可知ꎬ不同氮源条件下两种木霉的菌丝生长差异明显ꎮ在以有机氮(蛋白胨㊁牛肉膏㊁酵母浸膏)㊁氨基酸态氮(甘氨酸)为氮源的培养基上生长速率均快于铵态氮(硫酸铵㊁氯化铵)和硝态氮(硝酸钠)ꎮ在有机氮㊁氨基酸态氮为氮源的培养基上菌落直径为４.２８~７.６９ｃｍꎬ在其他氮源培养基上的菌落直径仅为０.９２~１.８７ｃｍꎮ其中ꎬＳＭＦ２在有机氮㊁氮基酸态氮㊁硝态氮为氮源的培养基上菌落直径大于Ｔ３９ꎬ前者是后者的１.０３~１.３９倍(表６)ꎮ１６㊀第８期㊀㊀㊀㊀㊀赵晓彤ꎬ等:不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响无氮条件下ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９的菌落直径分别为３.７２㊁４.７２ｃｍꎬ产孢量为９.１７ˑ１０８㊁７３.７５ˑ１０８个/皿ꎮ不同有机氮源条件下ꎬＳＭＦ２产孢量达到(３０４.３８~５２８.３３)ˑ１０８个/皿ꎬＴ３９产孢量达到(９１.８８~１５９.３８)ˑ１０８个/皿ꎬＳＭＦ２的产孢量是Ｔ３９的２.９４~５.６９倍ꎻ而以硝态氮和铵态氮为氮源时ꎬＴ３９的产孢能力增强ꎬ其产孢量是ＳＭＦ２的２.７３~４.６８倍(表６)ꎮ㊀㊀表６㊀不同氮源条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标无氮蛋白胨牛肉膏酵母浸膏甘氨酸硝酸钠硫酸铵氯化铵菌落直径０.７９１.３９１.０５１.０３１.０６１.１６０.８６０.８１产孢量８.０５０.１８０.３００.３４０.４３４.６８３.０６２.７３㊀㊀添加有机氮源培养基的ＳＭＦ２和Ｔ３９菌落直径㊁产孢量分别是无氮源添加的１.１１~２.０７㊁１.２５~５７.６４倍ꎮ且两种木霉的菌落直径和产孢量均在有机氮源培养基中达到最大值ꎬ其菌落直径和产孢量的最佳氮源分别为酵母浸膏和牛肉膏ꎬ表明二者对有机氮源的利用情况优于其他氮源ꎮ图１２㊀不同氮源条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较３㊀讨论培养基㊁温度㊁光照㊁酸碱度㊁碳源和氮源均对木霉菌的菌丝生长和孢子形成有不同影响ꎮ３.１㊀不同培养基对两种菌培养的影响培养基是微生物学研究和微生物发酵工业的基础ꎬ其营养组成直接影响微生物生长发育ꎮ目前培养木霉菌常用的培养基有ＰＤＡ㊁ＣＤＡ㊁ＭＥＡ㊁ＰＳＡ㊁糖浆培养基㊁玉米粉葡萄糖培养基㊁小麦汁培养基和玉米培养基[１６]等ꎮ马铃薯是ＰＤＡ的重要组分ꎬ含有丰富的Ｂ族维生素㊁纤维素㊁微量元素㊁氨基酸㊁蛋白质㊁脂肪和优质淀粉等营养元素ꎬ为微生物生长提供充裕碳源㊁氮源㊁维生素和无机盐ꎻ葡萄糖是活细胞的能量来源和新陈代谢的中间产物ꎬ能够提供优质碳源ꎮＣＤＡ中葡萄糖和天门冬酰胺为重要的碳源㊁氮源ꎬ含量较高的氯化钠具有抑制细菌和减缓毛霉生长的作用ꎬ其他成分则提供必需离子ꎻＯＭＡ中的燕麦含有丰富的蛋白质㊁脂肪㊁淀粉㊁微量元素和膳食纤维ꎬ是氮源㊁碳源和微量元素等的重要来源ꎻＢＣＭ中的牛肉膏和蛋白胨为碳源㊁氮源㊁磷酸盐和维生素的主要来源ꎬ氯化钠则提供无机盐ꎮ有研究表明ꎬ长枝木霉Ｔ０５在ＰＤＡ㊁ＭＥＡ㊁ＣＤＡ㊁ＢＣＭ上都能生长ꎬ且菌丝在ＰＤＡ上生长最快[１７]ꎻ哈茨木霉ＴＨ－１分别在ＰＤＡ㊁ＭＥＡ㊁ＣＤＡ㊁ＢＣＭ上培养均能产孢ꎬ其中ＰＤＡ为最适培养基[１２]ꎮ本试验中ＰＤＡ㊁ＣＤＡ㊁ＯＭＡ㊁ＢＣＭ四种培养基因营养成分丰富ꎬ成为ＳＭＦ２和Ｔ３９菌丝生长及孢子繁殖的适宜培养基ꎬ以ＰＤＡ和ＣＤＡ最佳ꎬ而ＭＥＡ培养基成分单一ꎬ除凝固剂琼脂外ꎬ仅含有麦芽糖ꎬ故两种木霉在其上生长发育不理想ꎮ这与前人研究结果大体一致ꎬ进一步证明木霉菌株对营养环境的广泛适应性ꎮ３.２㊀不同温度对两种菌培养的影响木霉菌是一种嗜温真菌ꎬ棘孢木霉ＰＺ６在１５~３７ħ均能生长ꎬ２５~３７ħ菌丝生长较好ꎬ以３０ħ菌丝生长最快[１６]ꎻ长枝木霉ＨＱ１㊁非洲哈茨木霉ＢＢ１２菌株适宜培养温度为２８~３３ħ[１８]ꎮ本试验中Ｔ３９㊁ＳＭＦ２在２５~３５ħ范围内生长发育良好ꎻ在高温(４０ħ)或低温(２０ħ及以下)环境条件下ꎬ由于没有达到木霉菌生长发育的起点温度或有效积温积累不足ꎬ或者环境温度过高导致菌体内蛋白质㊁核酸等重要组成物质遭受不可逆的破坏ꎬ致使其生长较差ꎮ３.３㊀不同光照对两种菌培养的影响光为木霉菌菌丝生长和孢子形成提供能量ꎮ光照对哈茨木霉ＴＨ－１菌丝生长影响不大但明显影响菌株产孢量ꎬ光照时间越长产孢量越大[１２]ꎻ全黑暗条件有利于长枝木霉ＧＡＡＳＬ３－１－０.８菌丝的营养生长ꎬ而光暗交替条件则对产孢有利[１９]ꎬ即光照可以促进分生孢子产生ꎮ本试验中２６㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀Ｔ３９㊁ＳＭＦ２在全光照㊁光暗交替㊁全黑暗３种条件下均可正常生长ꎬ全黑暗条件对菌丝生长更为有利ꎬ而全光照条件对产孢更有利ꎮ这与前人的研究结果相吻合ꎬ且相同光照条件下ꎬ长枝木霉ＳＭＦ２菌丝生长较快ꎬ而哈茨木霉Ｔ３９产孢量更大ꎮ３.４㊀不同ｐＨ值对两种菌培养的影响ｐＨ值不仅通过影响真菌体内的酶活性而影响酶促反应效率ꎬ而且还通过影响膜结构稳定性和细胞质膜的通透性而影响其对营养物质的吸收ꎮ有研究表明ꎬ棘孢木霉ＰＺ６最适生长和产孢的ｐＨ值为５~９[１６]ꎻ哈茨木霉Ｔｈ－８１㊁短密木霉(Ｔ.ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ)Ｔｂ－５０和长枝木霉Ｔ１－７０在ｐＨ值为２~７时均能生长ꎬ最适生长的ｐＨ值为４[２０]ꎮ本试验中ꎬＴ３９㊁ＳＭＦ２对酸碱度的适应性较强㊁范围较广ꎬ在ｐＨ值为４~１１条件下均生长较好ꎬ且中性至弱碱性(ｐＨ值７~９)为ＳＭＦ２培养的最佳酸碱条件ꎬ其菌丝生长㊁产孢最适ｐＨ值分别为９和７ꎻＴ３９培养的最佳酸碱条件为弱酸和偏酸(ｐＨ值４~６)ꎬ其菌丝生长㊁产孢最适ｐＨ值分别为４和６ꎮ３.５㊀不同碳源对两种菌培养的影响碳源物质是真菌生长的碳素来源ꎮ木霉菌对单糖㊁双糖㊁多糖㊁嘌呤㊁嘧啶和氨基酸等的利用效果均较好[２１]ꎮ不同木霉菌其最适碳源有所差异ꎬ长枝木霉ＧＡＡＳＬ３－１－０.８以葡萄糖㊁麦芽糖㊁果糖和乳糖为碳源时ꎬ菌丝生长和产孢较好ꎬ葡萄糖为最适碳源[１９]ꎻ木糖㊁果糖和蔗糖有利于哈茨木霉Ｔ２１的菌丝生长和产孢ꎬ木糖为最适碳源[２２]ꎮ本试验中ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９在无碳源添加的培养基中虽能生长ꎬ但其菌丝质量和产孢量均不理想ꎮ碳源的加入提供了必要的营养物质ꎬ提升其生长发育质量ꎮ微晶纤维素主要成分为以β－１ꎬ４－葡萄糖苷键结合的直链式多糖类物质ꎬ由于自身不易溶解致使碳源的促生作用较差ꎮ单糖(果糖㊁阿拉伯糖)补充热能的效果比双糖㊁多糖更快ꎬ故以果糖和阿拉伯糖为碳源时ＳＭＦ２和Ｔ３９的生长发育最优ꎬ且ＳＭＦ２的菌丝生长优于Ｔ３９ꎬ但Ｔ３９的产孢能力更强ꎬ这可为二者混合使用以防治病害提供理论基础ꎮ３.６㊀不同氮源对两种菌培养的影响氮源是真菌生长的重要氮素来源ꎬ主要用于合成蛋白质等含氮物质ꎬ有助于产孢ꎮ有机氮源像蛋白胨㊁牛肉膏和酵母浸膏等成分复杂㊁营养丰富ꎬ微生物在其培养基中常表现出生长旺盛㊁菌体增长迅速等特点ꎮ有研究表明ꎬ蛋白胨和酵母膏分别为长枝木霉Ｔ０５和ＧＡＡＳＬ３－１－０.８营养生长和产孢的最适氮源[１７ꎬ１９]ꎬ哈茨木霉Ｔ２１在以牛肉膏为氮源的培养基中菌丝生长和产孢最优[２２]ꎮ氨基酸态氮(甘氨酸)存在于土壤蛋白质和多肽类化合物中ꎬ降解后只释放出相应的氨基酸为微生物生长发育提供单一营养ꎻ硝态氮和铵态氮为无机氮源(硫酸铵㊁氯化铵㊁硝酸钠)ꎬ易被菌体直接利用ꎬ促进菌体生长ꎬ但与有机氮源相比ꎬ因其成分简单㊁缺乏营养物质㊁利用效率低致使木霉菌菌丝稀薄㊁产孢量较少ꎮ因此ꎬ相比于氨基酸态氮㊁硝态氮和铵态氮ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９在以有机氮(蛋白胨㊁牛肉膏㊁酵母浸膏)为氮源的培养基中生长发育更优ꎬ有机氮源为ＳＭＦ２和Ｔ３９生长发育的适宜氮源ꎬ这与前人的研究结果一致ꎮ且ＳＭＦ２和Ｔ３９对氮源的要求相较于碳源而言更严格ꎮ４㊀结论本研究结果表明ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９具有广泛的适应性ꎬ对环境条件要求不严格ꎬ在常温㊁黑暗㊁非强酸强碱㊁含有碳源和有机氮源的条件下ꎬ二者的菌丝生长和孢子形成状况均较为优良ꎮ光照㊁果糖㊁牛肉膏更有利于二者孢子形成ꎻＰＤＡ和ＣＤＡ最适宜产孢ꎻ且二者对氮源的要求相较于碳源而言更严格ꎬ两种木霉在无碳条件下可产孢ꎬ但产孢量较少ꎬ而在无氮条件下孢子肉眼几乎不可见ꎮＳＭＦ２和Ｔ３９在添加碳源培养基中的菌落直径㊁产孢量是无碳源添加的１.０１~１.５９㊁１.６８~４.６３倍ꎬ而在添加有机氮源培养基中的菌落直径㊁产孢量是无氮源添加的１.１１~２.０７㊁１.２５~５７.６４倍ꎮ相同条件下ꎬＳＭＦ２菌丝生长较快ꎬ而哈茨木霉Ｔ３９产孢能力更高ꎮ３５ħ㊁ｐＨ值为７时最利于ＳＭＦ２产孢ꎬ而３０ħ㊁ｐＨ值为６时最利于Ｔ３９产孢ꎮ人工扩繁时ꎬ可通过调节环境温度和培养基酸碱度调控ＳＭＦ２㊁Ｔ３９的产孢情况ꎻ有机氮和单糖更有利于ＳＭＦ２和Ｔ３９菌丝生长和孢子形成ꎮ３６㊀第８期㊀㊀㊀㊀㊀赵晓彤ꎬ等:不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响参㊀考㊀文㊀献:[１]㊀王永阳ꎬ杜佳ꎬ高克祥.苦瓜枯萎病生防木霉的筛选鉴定及其定殖的ｑＰＣＲ检测[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０１８ꎬ５０(８):１１０－１１５.[２]㊀ＲａｎｉｍｏｌＧꎬＴｈｕｌａｓｉＶꎬＳｈｉｊｉＧꎬｅｔａｌ.ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｌａｃｃａｓｅｆｒｏｍＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｄｙｅｄｅｃｏ￣ｌｏｕｒｉｓａｔｉｏｎ[Ｊ].ＢｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓａｎｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ１６:４００－４０４.[３]㊀ＢｏｒｉｓｏｖａＡＳꎬＥｎｅｙｓｋａｙａＥＶꎬＪａｎａＳꎬｅｔａｌ.ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒｅꎬｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｄｙｎａｍｉｃｓｉｎＧＨ７ｃｅｌｌｏｂｉｏｈｙｄｒｏ￣ｌａｓｅｓｆｒｏｍＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａａｔｒｏｖｉｒｉｄｅꎬＴ.ｒｅｅｓｅｉａｎｄＴ.ｈａｒｚｉａｎｕｍ[Ｊ].ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＢｉｏｆｕｅｌｓꎬ２０１８ꎬ１１(１):５. [４]㊀邓薇ꎬ张祖衔ꎬ曹宇航ꎬ等.绿色木霉缓解干旱胁迫对玉米幼苗根系生长的影响[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０２２ꎬ５４(２):４０－４５. [５]㊀ＢａｇｅｗａｄｉＺＫꎬＭｕｌｌａＳＩꎬＮｉｎｎｅｋａｒＨＺ.ＲｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｂａｓｅｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｋｅｒａｔｉｎａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｆｒｏｍＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍｉｓｏｌａｔｅＨＺＮ１２ｕｓｉｎｇｃｈｉｃｋｅｎｆｅａｔｈｅｒｗａｓｔｅａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｄｅｈａｉｒｉｎｇｏｆｈｉｄｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬ２０１８ꎬ６(４):４８２８－４８３９.[６]㊀ｄｅＯｌｉｖｅｉｒａＧＳꎬＡｄｒｉａｎｉＰＰꎬＲｉｂｅｉｒｏＪＡꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｍｏｌｅｃｕ￣ｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｎｅｐｏｘｉｄｅｈｙｄｒｏｌａｓｅｆｒｏｍＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉｉｎｃｏｍｐｌｅｘｗｉｔｈｕｒｅａｏｒａｍｉｄｅ￣ｂａｓｅｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１９ꎬ１２９:６５３－６５８. [７]㊀李玲ꎬ刘宝军ꎬ杨凯ꎬ等.木霉菌对小麦白粉病的田间防效研究[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０２１ꎬ５３(７):９６－１００. [８]㊀ＰｅｒａｚｚｏｌｌｉＭꎬＭｏｒｅｔｔｏＭꎬＦｏｎｔａｎａＰꎬｅｔａｌ.Ｄｏｗｎｙｍｉｌｄｅｗｒｅ￣ｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ３９ｉｎｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅｇｒａｐｅｖｉｎｅｓｐａｒｔｉａｌｌｙｍｉｍｉｃｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓ[Ｊ].ＢＭＣＧｅｎｏｍｉｃｓꎬ２０１２ꎬ１３(１):６６０. [９]㊀ＨａｒｅｌＹＭꎬＭｅｈａｒｉＺＨꎬＲａｖ￣ＤａｖｉｄＤꎬｅｔａｌ.Ｓｙｓｔｅｍｉｃｒｅｓｉｓｔ￣ａｎｃｅｔｏｇｒａｙｍｏｌｄｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｏｍａｔｏｂｙｂｅｎｚｏｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅａｎｄＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ３９[Ｊ].Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１４ꎬ１０４(２):１５０－１５７.[１０]商娜.长枝木霉菌对白三叶草病害的防治机理及其对植物生长影响的研究[Ｄ].聊城:聊城大学ꎬ２０２１.[１１]纪明山ꎬ李博强ꎬ许远ꎬ等.绿色木霉ＴＲ－８菌株的生物学特性研究[Ｊ].沈阳农业大学学报ꎬ２００４ꎬ３５(３):１９５－１９９. [１２]李梅云ꎬ谭丽华ꎬ方敦煌ꎬ等.哈茨木霉的培养及其对烟草疫霉生长的抑制研究[Ｊ].微生物学通报ꎬ２００６ꎬ３３(６):７９－８３. [１３]王桂清ꎬ曾路ꎬ马迪ꎬ等.我国近１０年植物致病真菌生物学特性研究综述[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０１８ꎬ４６(１９):１－５. 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