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猪胴体淋巴结中致病性大肠杆菌和沙门氏菌的分离与鉴定

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中国动物检疫2008年第25卷第10期
大肠杆菌和沙门氏菌同属肠杆菌科中的成员，在自然界分布十分广泛。

大肠杆菌可分为致病性大肠杆菌和非致病性大肠杆菌两类，其血清型比较多；而沙门氏菌作为一种重要的生化特性和抗原结构相似的人畜共患的肠道病原菌，其型别也十分繁多，迄今为止已经发现了2523个血清型，且有新的血清型还在不断地被发现[1-4]。

这两种病原菌主要经动物的消化道而感染，能够引起多种畜禽及其他动物发生急性、慢性或隐性感染，同时它们也是人类发生食物中毒的主要致病菌，随着消费者对食物品质的要求越来越高，许多国家相继制定了严格的针对动物、动物产品中致病性大肠杆菌和沙门氏菌检疫法规，严禁这些产品和副产品含有致病性大肠杆菌和沙门氏菌。

近年我国许多地方农贸市场出现猪肉供不应求的现象，加之本地生猪生产又满足不了市场的实际需求，必须从外省调运，为了稳定西宁市的菜篮子工程，把好质量关，让消费者吃上放心肉及初步摸清西宁市市场中猪胴体的致病性大肠杆菌和沙门氏菌的带菌率，2007年8-9月我们对西宁市某屠宰场的猪胴体随机抽样并进行了致病性大肠杆菌和沙门氏菌的分离与鉴定。

现将结果报告如下：1材料与方法1.1材料
1.1.1样品随机采取西宁市某屠宰场猪胴体肩前淋巴结30份，置4℃冰箱，待检。

1.1.2培养基普通营养肉汤、半固体培养基、普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、S.S 琼脂平板及葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、V-P 、吲哚、H 2S 等生化培养基。

1.1.3诊断血清15种肠道致病性大肠埃希氏菌诊断血清；沙门氏菌的163种诊断血清（购于卫生部兰州生物制品研究所）。

1.1.4实验动物健康小白鼠6只（16g -18g ）（购于青海地方病研究所）。

1.2方法
1.2．1细菌分离无菌采取少许淋巴结接种于营养肉汤中，37℃培养18-24h 后，再分别各取肉汤培养物2-3环，分别接种于麦康凯琼脂平板和S.S 琼脂平板上，37℃培养18-24h 后，观察菌落形态。

1.2.2细菌纯化培养分别挑取1/3疑似致病性大肠杆菌和沙门氏菌菌落涂片、革兰氏染色、镜检后，再勾取剩余菌落分别在麦康凯琼脂平板和S.S 琼脂平板上进行数次纯化培养，而后将分纯的细菌分别接种到普通斜面上，37℃培养18~24h 后，置4℃冰箱备用。

1.2.3生化鉴定将纯化好的14株疑似致病性大肠杆菌和8株疑似沙门氏菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、肉汤及葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、MR 、吲哚、V-P 枸橼酸盐、尿素酶、H 2S 、硝酸盐还原试验等各种生化培养基中，37℃培养24-48h 后，观察结果。

1.2.4血清型鉴定操作步骤分别依据肠道致病性大肠埃希氏菌诊断血清（15种）和沙门氏菌的163种诊断血清操作说明书进行。

1.2.5动物试验选取疑似致病性大肠杆菌和疑似沙门氏菌的培养物
分别用灭菌生理盐水无菌下并稀释制成菌悬液，再与麦氏比浊管进行比浊，选取3×108个活菌/ml 浓度，分别腹腔注射小白鼠2只，0.2ml/只，同时用灭菌生理盐水腹腔注射2只小白鼠，作对照试验，观察结果。

2结果
2.1菌落形态及培养特性致病性大肠杆菌：营养肉汤变浑浊；在麦康凯琼脂平板上形成圆形、光滑、隆起的粉红色菌落；普通琼脂平板上形成圆形、隆起、边缘整齐、湿润、中等大小，灰白色、半透明的菌落；沙门氏菌：在S.S 琼脂平板上形成无色或灰白色、圆形，半透明、表面光滑、湿润、隆起、边缘整齐的菌落；在普通琼脂平板上为圆形、隆起、光滑、湿润、无色、半透明、似露珠大小的菌落。

2.2涂片、染色及镜检分别用革兰氏染色法对分离菌进行涂片染色、镜检，分别可见两端钝圆，中等大小的革兰氏阴性小杆菌。

2.3生化试验结果见表1
2.4血清学试验将14株疑似大肠杆菌和8株疑似沙门氏菌分别进行血清学鉴定，其中14株疑似致病性大肠杆菌中的O55K596株、阳性率为42.85%（6/14）；O86K613株占21.42%（3/14）；O26K602株，占14.29%（2/14）；O128K67、O125K70、O111K58、各1株，占7.14%；8株疑似沙门氏菌中有1株甲型副伤寒沙门氏菌；1株利密特沙
猪胴体淋巴结中致病性大肠杆菌
和沙门氏菌的分离与鉴定
李
刚
（西宁动物兽医检疫站，青海，西宁
810003）
中图分类号：;S852.61
文献标识码：B 文章编号：1005－944X （2008）10－0033－02
本栏目主持人：庞素芬sufen40@
防检技术
33--
中国动物检疫2008年第25卷第10期
修订后的《中华人民共和国动物防疫法》明确规定了动物疫病的流行病学调查是各级动物疫病预防控制机构的职能职责。

笔者所在的重庆市动物疫病预防控制中心就做为省级部门如何结合各区县搞好辖区内的动物疫病流行病学调查工作做了一些探索，在此抛砖引玉，与国内同行共同探讨。

1兽医行政主管部门重视，从政策上给予支持
在2008年初，当地兽医行政主管部门以文件的形式把动物疫病的流行病学调查作为工作任务下发，规定区县定期（每月一次）进行动物疫病定点流行病学调查。

并且对流行病学所定的调查点的类别和数量作了明确规定。

2制定动物疫病定点流行病学调查技术规范2.1规定了在动物疫病定点流行病
学调查时调查点确定的原则，即每个
调查点在确定时应考虑地域、饲养
量、交通、山脉、河流、历史疫区等情
况，每个点都要充分代表相应的面。

每个点一旦确定后至少在一年内不
宜更改，以确保流行病学调查所得数
据的连续性。

2.2对动物疫病定点流行病学调查
点的类别进行了规定，即各区县根据
调查内容设立散养畜禽点（每个点15
户以上）、规模养殖场、屠宰场、动物
医院、畜禽及产品交易市场、检查站
（有检查站的区县）、区县级疫情报告
点和疫苗发放点为定点流行病学调
查点。

2.3对各个动物疫病定点流行病学
调查点的调查内容进行了规定：即对
属于养殖场（户）的调查点需按动物
的不同种类对存栏数、出栏数、死亡
数、免疫情况等进行调查；对动物医
院的调查点需按照不同的动物种类
进行按就诊数量和疑似病种的调查；
对屠宰场的调查点需按不同的动物
种类对宰前后宰后的检疫情况以及
对检出动物或动物产品的处置情况
进行调查；对畜禽及其产品交易市场
的调查点需按照动物及其产品的不
同种类进行入市数、检疫数、检出数、
检出动物（或动物产品）的来源地以
及对检出动物（或动物产品的）的处
置情况进行调查；对检查站调查点需
按照动物及其产品的不同种类入境
数量、来源地、目的地、检疫不合格情
况以及对检出动物（或动物产品）的
处置情况进行调查；对疫苗发放点的
疫苗发放进度进行调查；对区县级的
疫情报告点定期内的疫情（疑似疫
省级动物疫病预防控制机构如何开展动物疫病流行病学调查初探
黄诚1，米自由2，周世福1，苏承宗1
（1.重庆市动物疫病预防控制中心401147；2.巴南区兽医防疫站401320)
中图分类号：S851.3文献标识码：C文章编号：1005－944X（2008）10－0034－02
门氏菌;4株鼠伤寒沙门氏菌和2株丙型副伤寒沙门氏菌。

详细结果表见表2 2.5动物试验试验组注射致病性大肠杆菌和沙门氏菌菌悬液小白鼠分别在24-48h内全部死亡，剖检采集肝脏分离，分别获得与原分离菌株一致的革兰氏阴性小杆菌，对照组小鼠健活。

3讨论
3.1从此次随机采集的30份猪胴体淋巴结样品中，分离出致病性大肠杆
菌14株，阳性率为46.67%（14/30）。

经血清学鉴定，14株致病性大肠杆菌
分别为O55K59、O86K61、O26K60、
O28K67、O125K70、O111K58。

其中
O55K59为优势菌株；分离出8株沙
门氏菌，阳性率为26.67%（8/30），其
中鼠伤寒沙门氏菌4株，丙型副伤寒
沙门氏菌2株，占分离株的25.00%
（2/8）；甲型副伤寒和利密特沙门氏菌
各1株，各占分离株的12.50%（1/8），
鼠伤寒沙门氏菌为优势菌株。

它们均
可引起人、犊牛、羔羊、仔猪等感染发
病。

表明该批猪胴体中的致病性大肠
杆菌和沙门氏菌的带菌率较为严重，
应该引起有关部门的关注。

3.2目前在我国中小规模养殖场中，
由于资金投入不足、养殖设备简陋、
饲养环境和卫生条件差，加之平时的
饲管不良和预防消毒工作不扎实，致
使猪只抵抗力降低，易造成致病性大
肠杆菌和沙门氏菌的感染；同时养殖
场滥用抗生素，极易造成耐药性菌株
产生和药物残留，给大肠杆菌病和沙
门氏菌病的防制带来较大的困难。

3.3由于致病性大肠杆菌和沙门氏
菌均可引起多种动物特别是人的食
物中毒，因此在食品的加工、储藏、运
输、销售等过程中要定时消毒，加强
检疫和卫生监督，科学管理，这样才
能减少或杜绝食物中毒发生的机率。

参考文献
[1]恽时锋，潘震，郑明球.鸡大肠杆菌
病研究进度[J].畜牧与兽医，1998，30
（6）：227-230.
[2]张慧玲，韦秀英.安徽省沙门氏菌血
清型分布[J].上海预防医学杂志
2000，12（6）：275-276.
[3]张燕，朱超.我国沙门氏菌病和菌型
分布概况[J].现代预防医学2002，29
（3）：400~40.
[4]李碧萍，孙福泉，林炳玲，等.“四管
法”快速检测沙门氏菌的研究[J].中国
医学杂志,1994，20（10）：10-11.
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规模化猪场大肠杆菌、沙门氏菌耐药性检测与分析

规模化猪场大肠杆菌、沙门氏菌耐药性检测与分析

中国农业大学硕士学位论文结果与分析结果与分析１大肠杆菌、沙门氏菌分离鉴定１．１生化鉴定从冬季、春季和夏季的３２６份猪粪便中分离鉴定出大肠杆菌１３６株，沙门氏菌６２株（表１）。

其中冬季大肠杆菌１９株，沙门氏菌６株，分离率分别为２１１３％和８％。

春季大肠杆菌７５株。

沙门氏菌１６株．分离率分别为５６．８％和１２．１％。

夏季大肠杆菌４２株、沙门氏菌加株。

分离率分别为３５．３％和３３．６％。

表１冬、毒、夏三季大脯杆菌、涉门氏菌分离ＴａｂｌｅｌＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＥ，ｃｏｌｌａｎｄＳａ／ｍｏｎｅＨａｉｎｗｉｎｔｅｒ，神ｇａｎｄⅫｍｍｃｒ墨壁堕婴墨登熊墼盔堕堑堕墼盐圈垦堇塑２００４．１２７５１９６２００５．４１３２７５１６２００５．７１１９４２４０总计３２６１３６６２１．２大肠杆菌、沙门氏菌血清型鉴定囤１丈脑杆酶血清型分布ＦｉｇｕｒｅｌＤｉｓｔｒｉｌｍｔｌｏａｏｆｓｅｍｔｙｐｅｓ吐最∞“ｉｓｏｌａｔｅｓ商ｎ９１４０·ａｎｔｌｓｅｒａ用１４种大肠杆菌Ｏ单价抗血清０８、０９、０９３、０１３１、０１４９、０１０１、０１３９、０１５７、０１８、０６４、０１０７、０２０、０１４１和０６０对１３６株大肠杆菌进行血请型鉴定。

结果（表２、表３和表４）表明定型大肠杆菌７６株，分属１２种血清型，占分离菌株的５５．９％。

其中０１４１、０１８、０１０７、０２０，９０１３１为优势血清型（图１），占定型株的７６．３％；１４株有自凝现象，占１０．３％；未定型分离株４６株，占３３．８％。

冬季鉴定出４种大肠杆菌血清型，优势血清型是０１４１，占该季定型株的６０％。

春季鉴定出９种血清型，ＤＡ０１８和０２０为优势血清型，占该季定型株的３８．９％和２２．２％；０８和０１５７Ｙ，ｊ该季独有的血清型。

图２大肠杆菌肠毒素基因琼脂糖凝胶电泳Ｍ：ｌ舶ｂｐｍａｒｋｅｒ，肠毒索基因：Ｊ舻，训和ｓｔ２；Ｎ：阴性对照Ｆｉｇｕｍ２ＡｇｅｒｅｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｎｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｃｎｔｃｒｏｔｏｘｉｎｇｅｎｅｐｒｏｄｕｃｔｓＭ：１００ｂｐｍａｒｋｅｒ；ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎｇｅｎｅｓ：细，ｓｔ／ａｎｄｓｔ２；Ｎ：ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｍｒｏｌ３大肠杆菌、沙门氏菌耐药性分析３．１大肠杆菌耐药性分析采用微量肉汤稀释法分析不同季节１３６株大肠杆菌分离株的耐药性。

猪大肠杆菌猪沙门氏菌

猪大肠杆菌猪沙门氏菌

猪大肠杆菌‎&猪沙门氏菌‎猪大肠杆菌‎：猪大肠杆菌‎病是由大肠‎杆菌引起的‎肠道传染性‎疾病，主要侵害仔‎猪和断奶后‎的小猪，常引起严重‎腹泻、脑水肿、生长缓慢和‎死亡。

由于病原菌‎的类型不同‎以及猪的日‎龄、个体差异、发病率和症‎状不同该病‎主要分为三‎种：即仔猪黄痢‎、白痢和猪水‎肿病。

1仔猪黄痢‎1.1流行病学‎该病常发生‎于一周龄以‎内仔猪，以1-3日龄的仔‎猪多发。

带菌母猪是‎主要传染源‎，由粪便排出‎病原体，仔猪由于吸‎乳和到处乱‎舔，经消化道感‎染。

该病的发生‎无季节性，死亡率可达‎90%以上。

1.2临床症状‎仔猪出生后‎12小时内‎突然有1-2头出现衰‎弱、昏迷症状，并很快死亡‎。

接着有的仔‎猪排黄色稀‎粪，很快变成水‎样，具腥臭味。

每小时排粪‎数次，严重时肛门‎松弛，排粪失禁，清瘦，脱水，眼球下陷，昏迷死亡。

1.3病理变化‎皮肤苍白，肠道黏膜充‎血、出血，以十二指肠‎显著。

1.4诊断与防‎治⑴诊断根据发病以‎3日龄以内‎初生仔猪为‎主，排出黄色水‎样稀便，明显脱水，消瘦，发病率和死‎亡率都很高‎，可诊断为该‎病。

⑵防治①科学免疫：临产前用大‎肠杆菌疫苗‎注射母猪，15天、30天各免‎疫1次。

仔猪出生后‎及早让其吃‎上初乳，仔猪可通过‎吸食母乳获‎得母源抗体‎得到保护。

②产房严格消‎毒，保持干燥、洁净、温暖、通风良好，防止有害气‎体产生。

③一旦有病猪‎出现，应立即全窝‎给予庆大霉‎素、痢特灵、黄连素、磺胺脒等药‎物治疗。

2仔猪白痢‎2.1流行病学‎常发生于1‎0-30日龄的‎仔猪，以20日龄‎以内仔猪多‎见，日龄越小死‎亡率越高。

该病的发病‎与外界环境‎相关，如气候突变‎、多雨潮湿、饲料变质或‎突然变换饲‎料，以及母乳缺‎乏或过浓，都可促进该‎病的发生。

2.2临床症状‎仔猪排乳白‎色或灰白色‎稀粪，呈糨糊状，具腥臭味。

病情加重则‎表现结膜和‎皮肤苍白，机体脱水消‎瘦，最后衰竭而‎死亡。

致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 20140220

致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 20140220

致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1.材料与方法1.1实验材料1.1.1器材设备：剪刀、镊子、手术刀、接种环、接种针、涂布棒、酒精灯、载玻片、盖玻片、染色缸、染色架、革兰氏染液、光学显微镜、香柏油、恒温培养箱、游标卡尺等。

1.1.2病料采集：根据临床症状、流行病学采集疑似发病未死猪或刚死亡猪只的肝脏、脾脏、心脏、肺脏、大肠、排泄物等并冷藏运输于3h内送至实验室，待检。

1.1.3培养基与试剂：普通营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、微量生化反应管、药敏片、青霉素等抗生素。

1.2试验方法1.2.1细菌的形态学检查：触片镜检，用镊子夹取待检病料一端，再用灭菌过的剪刀剪出一个切面，将新鲜的切面在干净的载玻片上轻触几下，载玻片自然干燥后进行瑞氏染色或美兰染色并镜检。

可初步判断待检病料中是否含有细菌。

触片也可以是排泄物悬浮液或研磨后的组织液，注意，为避免细胞碎片影响观察，涂片或触片时一定要均匀、薄。

1.2.2分离培养：将手术刀灼烧趁热在待检病料表面烫一下，以杀灭其表面杂菌；用无菌剪刀在烫面剪出一个小口，用灭菌过的接种环从其切面伸入并旋转勾取组织，用分区划线的方法接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上；或将组织研磨后用灭菌生理盐水或灭菌PBS液稀释，再用接种环勾取悬浮液使用分区划线的方法接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上，置37℃恒温箱培养18-24h后观察菌落形态。

在普通营养琼脂培养基上长出灰白色光滑圆形菌落，麦康凯培养基上长出粉红色或砖红色光滑圆形菌落，在伊红美蓝培养基上长出紫黑色并有金属光泽的光滑圆形菌落。

注：麦康凯培养基和伊红美蓝培养基为鉴别培养基。

1.2.3培养物革兰氏染色：用接种环取一滴灭菌生理盐水于载玻片上→用接种环挑去麦康凯培养基上单个中等大小的红色菌落于生理盐水中混匀→均匀涂布成直径约为1cm的薄层→那载玻片在酒精灯上方30-40cm处干燥→使用酒精灯外焰固定→滴加一滴草酸结晶紫1min→水洗→加革兰氏碘液2-3min→水洗→95%酒精脱色0.5-1min →水洗→滴加石炭酸复红0.5-1min，用滤纸吸干，油镜镜检。

仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验程子兵1 董春霞2石国界3沙里塔那4 马长丽1（1. 塔城地区动物疾控与诊断中心新疆塔城834700；2. 重庆市武隆县畜牧兽医局重庆市武隆县408500；3. 塔城市畜牧兽医工作站新疆塔城834700；4. 额敏县兽医工作站新疆额敏县834600）摘要:对塔城地区一农户饲养猪群中仔猪发生的临床症状以水肿病、白痢、黄痢为特征的病例进行了样品采集，后经麦康凯、伊红美蓝分离培养，糖发酵生化试验、动物试验等结果显示均为大肠杆菌，同时通过药敏试验筛选出敏感抗生素。

关键词：仔猪；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验Abstract：Specimens with dropsy and dysentery clinical symptoms were isolated from one household raises pig group in Tacheng area. By bacteria culture, biochemical test and animal test, the results indicate the bacterium is pathogenic Escherichia Coli. Meanwhile, we ascertain sensitive antibiotics to this E coli by medicine test.Key words:pig; Escherichia Coli; isolate indentify; medicine test仔猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪白痢、黄痢和水肿病，其中黄痢多发生于1周内哺乳仔猪，病猪主要表现为排黄色糊状粪便；白痢多发于10～30日龄，病猪主要表现为排乳白色或灰白色腥臭糊状粪便；水肿病多发于断奶仔猪，主要有神经症状、胃壁、肠黏膜等组织水肿，四季均可发生，发病率和致死率高低不等，严重者同窝仔猪中发病率可达90％以上，致死率可达100％，幸存者则影响生长，甚至成为僵猪【l】。