考试复习重点总结仪器分析总结

仪器分析、检验仪器原理及维护

（掌握）临床检验仪器的常用性能指标：灵敏性，误差，噪声，最小检测量，精确度，可靠性，重复性，分辨率，测量范围和示值范围，线性范围，响应时间，频率响应范围。

（熟悉）误差：两种表示方法。一是绝对误差，二是相对误差。

（熟悉）离心机的工作原理：离心机就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力，迫使液体中的微粒克服扩散，加快沉降速度，把样品中具有不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。

（熟悉）离心力：由于物体旋转而产生脱离旋转中心的力，也是物体作圆周运动所产生的向心力的反作用力。

（熟悉）相对离心力：通常颗粒在离心过程中的离心力是相对于颗粒本身所受的重力而言，因此把这种离心力叫做相对离心力。

（熟悉）离心机的分类：按转速分可分为低速、高速、超速离心机等；按用途可分为制备型、分析型和制备分析两用型；

（熟悉）离心机的主要技术参数： 3、最大容量 离心机一次可分离样品的最大体积，通常表示为m×n。

（掌握）差速离心法：差速离心法又称为分步离心法。根据被分离物的沉降速度不同，采用不同的离心速度和时间进行分步离心的方法，称为差速离心法。该方法主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。

优点：操作简单，离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开，并可使用容量较大的角式转子；分离时间短、重复性高；样品处理量大。

缺点：分辨率有限、分离效果差，沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，不能一次得到纯颗粒；壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高时，在离心管一侧会出现沉淀，颗粒被挤压，离心力过大，离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。（P24）

（掌握）密度梯度离心法：密度梯度离心法又称区带离心法，该方法主要用于沉降速度差别不大的微粒，将样品放在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡，在一定离心力下把颗粒分配到梯度液中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。

优点：具有很好的分辨率、分离效果好，可一次获得较纯的颗粒；适用范围广，既能分离沉淀系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度的颗粒；颗粒不会积压变形、能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。

缺点：离心时间较长；需要制备梯度液；操作严格、不易掌握。

（掌握）光学显微镜的工作原理：光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，供人们提取物质微小结构信息的光学仪器。光学显微镜由两组会聚透镜组成光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜；焦距较长，靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜。被观察物体位于物镜的前方，被物镜做一级放大后成一倒立的实像，然后此实像再被目镜作第二次放大，得到最大放大效果的倒立的虚像，位于人眼的明视距离处。相对于物镜的成像条件及最后二次成像于观察者的明视距离等条件的满足，是通过仪器的机械调焦系统来实现的。

光学显微镜的最小分辨率是：0.2μm

（熟悉）光学显微镜的基本结构：

光学系统：物镜、目镜、聚光镜、反光镜。

机械系统：聚光镜升降、调焦系统、载物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等支持部件，一些特殊类型或高级显微镜还有一些附加装置。（P31）

（熟悉）光学显微镜照明设置的几个主要部件：

光源：显微镜的光源有自然光源和电光源两大类。

滤光器：即滤光片，作用主要是改变入射光的光谱成分和光的强度，便于显微镜观察和显微摄影。最常使用的滤光片是有色玻璃滤光片。必须了解滤光片的光谱特性并正确选用，才能获得最佳效果。

聚光镜：对于大孔径物镜，不可能使用大尺寸光源，只有使用光学系统把光源的像放大，并把光源的聚焦于被观察物体附近，这个聚光系统就是聚光镜。

玻片：大多数生物显微镜的标本是夹在两片薄玻璃片中进行观测的。上面一片称盖玻片，下面一片称载玻片。由于它们处于观察光路之中，它们的光学性质对照明系统有较大的影响，因此应对玻片的参数做统一规定。（P34）

（熟悉）光学显微镜的机械系统包括底座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调焦结构和聚光镜升降等，主要起固定、支撑、运动和调节等作用。（P34）

（掌握）紫外-可见分光光度计的工作原理：光照射到物质可发生折射、反射和透射，一部分光会被物质吸收。光被吸收后，其能量常以热的形式释放出来，这种能量一般觉察不到，但可以利用测量物质对某些波长光的吸收来了解物质的特性。不同的物质会吸收不同波长的光。改变入射光的波长，并依次记录物质对不同波长光的吸收程度，就得到该物质的吸收光谱。每一种物质都有其特定的吸收光谱，因此可根据物质的吸收光谱来分析物质的结构、含量和纯度，这就是吸收光谱分析法的理论基础。

（掌握）光的吸收定律：即郎伯-比尔定律，是比色分析的基本定律。表达了物质对单色光吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的函数关系。

浓度为c、液层厚度为b的溶液，k为比例常数。A=kbc

当一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度与液层厚度及溶液浓度的乘积成正比。此即朗伯-比尔定律。

（掌握）紫外—可见分光光度计的基本结构：光源、单色器、吸收池、检测器、信号显示系统。

光源：提供入射光的装置；常用的光源有钨灯或卤钨灯、氢灯或氘灯、汞灯等多种。

单色器：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光速的装置，是分光光度计的关键部件；

吸收池：又称为比色皿、比色杯、样品池或液槽等，是用来盛放被测溶液的器件，同时也决定着透光液层厚度、特定波长光的透光度等多种参数，应具有良好的透光性和较强的耐腐蚀性。在可见光范围内，常用无色光学玻璃或塑料制作；在紫外区，需用能透紫外线的石英玻璃或蓝宝石制作。（P53）

检测器：把光信号转换为电信号的装置。又称为光电转换器。通常使用光电管、光电倍增管或光电二极管阵列作检测器。（P53）

信号显示系统：是把放大的信号以适当的方式显示或记录下来的装置。（P54）

（熟悉）血细胞分析仪的定义：血细胞分析仪（BCA）又称血细胞自动计数仪（ABCC）、血液自动分析仪（AHA）等，是对一定体积全血内血细胞数量和异质性进行自动分析的常规检验仪器。其主要功能是血细胞计数、白细胞分类、血红蛋白测定、相关参数计算等。

（掌握）电阻抗型血细胞分析仪的细胞计数原理：血细胞与等渗的电解质溶液相比为不良导体，其电阻值比稀释液大。当血细胞通过检测器的微孔的孔径感受区时，其内外电极的恒流电路上的电阻值瞬间增大，产生电压脉冲信号。脉冲信号数等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积成正比。根据欧姆定律，在恒电流电路上，电压变化与电阻变化成正比，电阻值又同细胞体积成正比，血细胞体积越大，电压越高，产生信号的脉冲幅度就越大。各种大小不同的细胞产生的脉冲信号分别被送入仪器的检测通道，

经计算机处理后，以体积直方图显示出特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。最后得出白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）等相关参数。该原理也称库尔特血细胞检测原理。

（掌握）联合检测型血细胞分析仪的细胞计数原理：以流式技术为基础再联合使用流式、激光、射频、电导、电阻抗、细胞化学染色等多项技术进行细胞分析，并综合分析检测数据，从而得出较为准确的“五分类”结果。其共有特点是均使用了流式细胞计数，形成流体动力聚焦的流式通道，使单细胞流在鞘液的包裹下通过流式通道，将重叠限制到最低限度。

（掌握）网织红细胞计数分析基本原理：采用激光流式细胞分析技术与细胞化学荧光染色技术联合对网织红细胞进行分析，即利用网织红细胞中残存的嗜碱性物质—RNA，在活体状态下与特殊荧光染料（新亚甲蓝、氧氮杂芑750、碱性槐黄O等）结合，激光激发产生荧光，荧光强度与RNA含量成正比；用流式细胞技术检测单个的网织红细胞的大小和细胞内RNA含量及血红蛋白含量。由计算机数据处理系统综合分析检测数据，得出网织红计数及其他参数。（P68）

（掌握）血细胞分析仪测定血红蛋白的原理：除干式离心分层型、无创型外，各种BCA对血红蛋白测定都采用光电比色原理。血细胞悬液中加入溶血剂后，红细胞溶解释放出血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统。在特定波长（多为530~550nm）下进行光电比色，吸光度值与所含血红蛋白含量成正比，经仪器计算显示出血红蛋白浓度。与不同型号BCA配套的溶血剂不同，形成血红蛋白衍生物也不同，吸收光谱也有差异，但最大吸收峰都接近540nm，因为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的氰化高铁（HiCN）法的最大吸收峰在540nm，仪器血红蛋白的校正必须以HiCN值为标准。

（熟悉）血液凝固分析仪的定义：血液凝固分析仪（ACA）是采用一定分析技术，对血栓与止血有关成分进行自动检测分析的临床常规检验仪器。在血栓/止血实验室中最基本的设备就是血液凝固分析仪。（P74）

（熟悉）血凝仪的常用检测方法：凝固法是血栓/止血实验中最基本、最常用的方法。

（熟悉）技术性能评价：ICSH对血凝仪性能评价的标准如下：1.精密度2.线性3.准确性4.携带污染率5.干扰6.可比性分析

（掌握）血液凝固分析仪的临床应用

半自动血凝仪以凝固法测定为主,检测项目较少,而全自动血凝仪可使用多种方法进行凝血、抗凝、纤维蛋白溶解系统功能、用药的监测等多个项目的测定。

1、凝血系统的检测常规筛选实验： 如PT、APTT、TT测定;单个凝血因子含量或活性的测定

2、抗凝系统的检测抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）、蛋白C（PC）、蛋白S（PS）、活化蛋白抵抗（APCR）、狼疮抗凝物质（LAC）等测定。

3、纤维蛋白溶解系统的检测血浆纤溶酶原（PLG）、α2-抗纤溶酶（a2-AP）、纤维蛋白降解产物（FDP）、D-二聚体（D-Dimer）等。

4、临床用药的监测当临床应用普通肝素（UFH）、低分子肝素（LMWH）及口服抗凝剂如华法林时，常用血凝仪进行监测以保证用药安全。

（熟悉）血液黏度计的分类：按工作原理，可分为毛细管黏度计和旋转式黏度计。

（熟悉定义）红细胞沉降率：是指红细胞在一定条件下沉降的速度，简称血沉。

（熟悉）自动血沉仪的工作原理：所有自动血沉仪的原理和方法都是建立在魏氏法的基础上

（掌握）影响红细胞沉降的因素：红细胞的大小和形态；红细胞的变形性；红细胞聚集性，红细胞间的相互作用；血细胞比容；血浆介质和沉降管的倾斜度等。

（熟悉）光源：采用红外光源；

（掌握）红细胞沉降曲线：分为红细胞不下沉的悬浮期、红细胞缗线状形成的聚集期、红细胞等快速下降的快速沉降期、红细胞开始积压的缓慢沉降期。

自动血沉分析仪的质量控制：

（熟悉）样本的采集与抗凝：静脉采血要求在30秒内完成1ml左右的采血且不能淤血和溶血。

（熟悉）质控物的选择：质控物的质量是质控的关键，标准化方法要求使用新鲜人血，血沉值为15-105mm，按参考方法进行校验，95%的差值应在5mm以下。一般采取低值、中值和高值三个新鲜血样，要求这三个血样的血沉值应为1-99mm之间。

（掌握）尿液分析临床意义：是临床诊断泌尿系统疾病的重要措施之一，通过对尿液的物理学检查和化学检查，可观察尿液物理性状和化学成分的变化。在尿沉渣检查中能够看到的有形成分为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细菌、精子以及由尿液中沉析出来的各种结晶（包括药物结晶）等。这些检查资料对肾和尿路疾患的诊断、鉴别诊断以及疾病的严重程度和预后的判断，都有极重要的意义。