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大孔吸附树脂分离纯化野菊花总黄酮_郁建生

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© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.netStudyoncorrelationbetweendecoctingtime,administrationdoseand

efficacyofwarmingYangofcrudelateralrootofaconite

ZHANGHong1,PENGCheng2,YUCheng2hao2

(1.DepartmentofPharmacognosy,SchoolofPharmacy,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China;

2.PharmacyCollege,ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610075,China)

[Abstract]　Objective:Toinvestigatethecorrelationbetweendecoctingtime(DT),administrationdosage(AD)andefficacy

ofwarmingYangofcrudelateralrootofaconite(CLRA),andthebestDTandADtoefficacyofwarmingYangoftheCLRA.Meth2

od:AccordingtotheefficacyoftheCLRAsupplementingfireandstrengtheningYang,severalanimalmodels,includingaconstipation

inducedbyinsufficiencyofYang,kidneyYangdeficientmodels,uniformdesign(UD)andregressionanalysiswereappliedtoconfirm

thebestDTandADofthedifferentactionsoftheCLRA.Result:TheCLRAobviouslyimprovedthegeneralstateofkidney2yangdefi2

ciencymice,markedlyincreasedtheirswimmingdepletedtimeinlowertemperature,andevidentlydecreasedthedefecationlatency,

promoteddefecationamount,andimprovedperistalsisfrequencyofintestinesandstomach.ThebestDTandADwere6hoursand12g

・kg-1respectivelyfortheCLRAtowarmthekidney,spleenyangandtosmoothdefecation.Conclusion:TheCLRApossessesthe

remarkableefficacyofwarmingYang,whichisobviouslycorrelatedwiththeDTandAD.ThebestDTandADforCLRAtowarmYang

are6hoursand12g・kg-1respectively.

[Keywords]　crudelateralrootofaconite;warmingyang;decoctiontime;administrationdose;correlation;uniformdesign

[责任编辑　鲍　雷]

[收稿日期]　2006212222[基金项目]　贵州省省长专项资金项目[黔省专合字(2005)261号];贵州省“十一五”农业科技攻关项目[黔科合NY字(2006)3020]

[通讯作者]　3郁建生,Tel:(0856)8986256,E2mail:yujiansh2

eng@sohu.com大孔吸附树脂分离纯化野菊花总黄酮

郁建生13,郁建平2

(1.铜仁职业技术学院,贵州铜仁554300;2.贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025)

[摘要]　目的:研究大孔吸附树脂分离纯化野菊花总黄酮工艺,为野菊花总黄酮的工业化生产提供实验依据。

方法:以贵州产野菊花为原料,以野菊花总黄酮含量及回收率等为考察指标,选用大孔吸附树脂对野菊花总黄酮进

行分离纯化,分别采用静态试验、动态试验等考察大孔树脂对野菊花总黄酮的分离纯化效果及影响因素。结果:AB

-8型大孔吸附树脂对野菊花总黄酮静态饱和吸附量为114165mg・g-1(干树脂),洗脱率9419%,动态饱和吸附

量为9415mg・g-1(干树脂),总黄酮回收率在9216%、纯度在90%以上,是实验树脂中分离纯化野菊花总黄酮的

最佳大孔吸附树脂。结论:分离纯化野菊花总黄酮最佳工艺条件为:AB-8型大孔吸附树脂,洗脱剂为70%乙醇,

洗脱剂用量为2～3倍树脂体积,上柱总黄酮量∶树脂=1∶1016,上柱液总黄酮质量浓度为1918mg・mL-1,流速2～

3mL・min-1,上柱液pH4～5。

[关键词]　大孔树脂;野菊花;总黄酮;分离;纯化

[中图分类号]R283　[文献标识码]A　[文章编号]100125302(2007)2022123205

野菊花又称野菊、野黄菊、山菊花、路边菊等,为

多年生草本菊科植物野菊Chrysanthemumindicum

L.的干燥头状花序,具有清热解毒、疏风明目、生津

止渴、宁心安神等功效[1]。现有研究表明黄酮类化

合物是野菊花中含量最多、最主要的活性成分。目

・3212・第32卷第20期

2007年10月 中国中药杂志

ChinaJournalofChineseMateriaMedica Vol.32,Issue　20October,2007

© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net前国内对野菊花总黄酮分离纯化研究尚未见到系统

报道。为了开发利用野菊花资源,本研究以野菊花

总黄酮含量及回收率等为考察指标,选用大孔吸附

树脂对野菊花总黄酮进行分离纯化,分别采用静态

试验、动态试验等考察大孔树脂对野菊花总黄酮的

分离纯化效果及影响因素,研究探讨分离纯化野菊

花总黄酮的最佳工艺及各种最佳条件因素,从而为

生产中最有效的开发利用野菊花总黄酮、发挥野菊

花的最大经济效益提供科学依据。

1　仪器与试药

TU-1800紫外可见分光光度计(北京普析),

不锈钢提取锅(武汉立中),PHSJ-3F精密酸度计

(上海雷磁),ALG5/10自动灌装封口机(上海国

彩);植株样本粉碎机(上海实验仪器厂);液体自动

混合机(北京长安仪器厂)。

野菊花全草均采自贵州省松桃县大兴镇同一地

点,由本院生物技术重点实验室进行鉴定,采用统一

的干燥方法加工制样,避免背景干扰;所用试剂

NaNO2,Al(NO3)3,NaHSO3,Na2SO3,EDTA,Tween2

80等均为分析纯,乙醇为95%食用酒精,对照品芦

丁为美国Sigma公司产品、纯度大于98%;大孔吸附

树脂:D3520型,AB-8型,NKA-9型,D4020型,S

-8型(南开大学化工厂)。

2　方法

2.1　野菊花总黄酮的测定方法　野菊花总黄酮的测

定方法采用芦丁比色法[5],测定波长500nm,回归方

程:C=841327A-0177365,r=019998,吸光度线性范

围011～016,加样回收的平均回收率99147%,RSD

1189%(n=6);精密度测定RSD0195%。

2.2　野菊花总黄酮上柱样品液的制备　取野菊花

干品粗粉500g,根据作者已有经验L9(34)正交设

计筛选出的野菊花总黄酮的乙醇浸提最优水平组合

工艺:即采用60%乙醇、80℃温度、每次3h、提取3

次进行提取制备,制得野菊花总黄酮提取液(总黄

酮9146mg・mL-1)冷藏备用。

2.3　大孔吸附树脂的筛选[6,7]　将D3520型、AB-

8型、NKA-9型、D4020型、S-8型树脂先用4倍

体积量95%乙醇或丙酮浸洗数次每次24h,至浸洗

液加适量水无白色浑浊现象止,用水反复清洗干净

至无醇味,加入4倍体积量2mol・L-1的NaOH,浸

泡12h,以水洗至中性;再加入4倍体积量4mol・

L-1的HCl,浸泡12h,用水洗至中性后备用。精密称取已预处理好的干树脂各3份,每份1

g,置100mL三角瓶中,精密加入样品液20mL后于

电动震荡机上,频率120次/min,间隔振摇2h,然后

静置20h,使其达到饱和吸附,吸取上层液测定总黄

酮质量浓度,按下式计算树脂饱和吸附量:饱和吸附

量=[(初始浓度-吸附后浓度)×吸附液体积]/树

脂量(mg・g-1干树脂),取3次平均值。将经静态

饱和吸附总黄酮后树脂滤出,吸干表面水分,精密加

入60%乙醇20mL后放于电动震荡机上,频率120

次・min-1,间隔振摇2h后滤出,测定洗脱液黄酮

的质量浓度,计算洗脱率:洗脱率=[洗脱液浓度×

洗脱液体积]/饱和吸附量×100%,取3次平均值。

2.4　洗脱剂浓度对洗脱率的影响　精密称取处理

好的AB-8型干树脂7份,每份1g,分别置100mL

三角瓶中,精密加入20mL样品液后于电动震荡机

上,按2.3项下同法震荡,使其达到饱和吸附,分离

树脂,吸干表面水分。对应加入30%,40%,50%,

60%,70%,80%,90%的乙醇20mL后于电动震荡

机上,同法间隔振摇洗脱2h后滤出,测洗脱液中总

黄酮质量浓度,按2.3项下公式计算洗脱率,取3次

平均值。

2.5　pH对AB-8型树脂吸附量的影响　精密称

取已预处理好的AB-8型干树脂各8份,每份1g,

置100mL三角瓶中,精密加入pH3,4,5,6,7,8,9,

10样品液各20mL后于电动震荡机上,按2.3项下

同法震荡,使其达到饱和吸附,吸取上层液测定总黄

酮质量浓度,按2.3项下公式计算树脂饱和吸附量,

取3次平均值。

2.6　AB-8型树脂对野菊花总黄酮的动态吸附-

洗脱性能试验　称取已处理好的AB-8型吸附树

脂100g和20g,分别湿法装入3cm×500cm的色

谱柱中,将野菊花提取液330mL(9146mg・mL-1)

以2～3mL・min-1的流速上柱,过柱完后用3倍树

脂体积量(3BV,下同)的水以3～4mL・min-1的速

度洗柱至出水无色,再用4BV70%的乙醇以2～3

mL・min-1的洗脱速度洗脱至无色透明,收集70%

的乙醇洗脱液,减压浓缩,干燥,称重,测定总黄酮含

量,计算动态吸附洗脱量。

2.7　上柱液浓度对AB-8型树脂动态吸附野菊花

总黄酮的影响　分别称取已处理好的AB-8型吸

附树脂450g,3份,湿法装入5cm×500cm的色谱

柱中,取野菊花浸膏3份,每份130g(含总黄酮

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2007年10月 中国中药杂志

ChinaJournalofChineseMateriaMedica Vol.32,Issue　20October,2007

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大孔吸附树脂分离纯化仙人掌中总黄酮的研究

大孔吸附树脂分离纯化仙人掌中总黄酮的研究

离子交换与吸附，２０１０，２６（１）：４７—５２　ＩＯＮ　Ｅ跹ＨＡＮＧＥ　ＡＮＤ　ＡＤＳ０Ｒ　ｎｏＮ　文章编号：１００１—５４９３（２０１０）０１－００４７—０６　

大孑Ｌ吸附树脂分离纯化仙人掌中总黄酮的研究　

韦国锋黄祖良何有成　

右江民族医学院应用化学研究室，百色５３３０００　

摘要：考察了４种大孔吸附树脂对仙人掌总黄酮的吸附分离性能，筛选出效果最佳的树脂为　ＡＢ一８。以总黄酮的吸附量、总黄酮含量和回收率为考察指标，采用紫外分光光度法测定总黄　酮。确定了ＡＢ．８树脂吸附分离仙人掌总黄酮的工艺条件：上样浓度为１５ｍｇ／ｍＬ，仙人掌总黄　酮最大吸附量为１８．６ｍｇ／ｍＬ，吸附流速为５ｍＬ／ｍｉｎ，洗脱荆为７０％乙醇，洗脱剂用量为６倍柱　体积，树脂可重复使用３次。经ＡＢ．８树脂分离纯化后，总黄酮含量从２９％提高到７６％，总黄　酮回收率为８６％。实验结果表明，ＡＢ．８树脂可用于仙人掌总黄酮的分离纯化。　关键词：仙人掌；总黄酮；大孔吸附树脂；吸附分离　中图分类号：Ｒ２８４．２　文献标识码：Ａ　

１前言　

仙人掌为仙人掌科（Ｏｐｕｎｔｉａ　Ｄｉｌｌｅｎｉｉ　Ｈａｗ）的根和茎，由于仙人掌资源丰富，具有较　

强的药理作用，近年来人们更加关注对仙人掌的研究，并已证实仙人掌具有抗炎消肿、抑　菌、抗脂质氧化和降低血糖的作用…。本课题组曾对仙人掌的镇痛作用进行了初步研究，　

结果显示，仙人掌提取物具有显著的镇痛作用，而总黄酮为仙人掌镇痛作用的主要活性成　分Ｉ　。但目前对仙人掌总黄酮的提取研究大部分停留在有机溶剂萃取法，所得到粗提取物　

中总黄酮的含量较低，为提高总黄酮的含量，本实验选择了４种大孔吸附树脂对仙人掌中　

总黄酮进行分离纯化，为大孔吸附树脂分离纯化仙人掌中的总黄酮提供实验依据，更好地　开发仙人掌植物资源。　

２实验部分　

２．１材料与仪器　材料与试剂：仙人掌采自广西那坡县；芦丁对照购自中国药品生物制品检定所；大孔　

吸附树脂ＡＢ一８、ＡＤＳ一１７、ＮＫＡ、Ｘ－５均购白天津南开大学化工厂：乙醇、乙醚、亚硝酸　

大孔吸附树脂纯化菊花黄酮

大孔吸附树脂纯化菊花黄酮

实验方法

一、备菊花黄酮粗提取物

将菊花粉碎，加提取液（物料比1：20乙醇浓度60%），微波提取（300w，120s），取提取液离心过滤减压蒸馏挥发掉乙醇，得浓缩液。冷藏备用

二、黄酮总量的测定及标准曲线的绘制

黄酮浓度的测定方法采用分光光度法（中国药典2000年版一部附录BV）于510nm处测定吸光度，以质量浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线得到标准曲线方程（参考方程。

样品的测定：将适量的样品液用蒸馏水定容至100ml，摇匀，取一定量于25ml容量瓶中，按标准曲线中的显色方法显色，测定吸光度，代入方程测出黄酮含量。

三、吸附树脂的筛选

3.1取型号树脂用4倍量95%的乙醇浸洗数次，每次24小时，至浸洗液加入适量水没有出现白色浑浊为止，然后用水反复洗涤至无醇味，加入2mol/L的氢氧化钠，浸泡12小时，以水洗至中性，再加入4mol/L盐酸，浸泡12小时，用水洗至中性后备用。

3.2精密称取已处理好的干树脂各三份，每份1g，置100ml三角瓶中，精密加入样品液20ml后于电动震荡机上，频率120次/min，间隔震摇2h，然后静置20h使其达到饱和吸附，吸取上层液测定总黄酮浓度，按下式计算饱和吸附量={（初始浓度-吸附后浓度）×吸附液体积/树脂量 （mg/g干树脂），取三次平均值。将经静态饱和吸附总黄酮后树脂滤出，吸干表面水分，精密加入60%乙醇20ml后放于电动震荡机上，频率120次/min，间隔震摇2h后滤出，测定洗脱液黄酮的浓度，计算洗脱率：洗脱率=（洗脱液浓度×洗脱液体积）/饱和吸附量×100%，取三次平均值。

3.3做出几种树脂对菊花总黄酮的静态饱和吸附洗脱结果汇总表，取综合性能最佳的继续进行后续实验。

四、洗脱剂浓度对洗脱率的影响

精密称取处理好的具最佳性能型号干树脂七份，每份1g，分别置100ml三角瓶中，精密加入20ml样品液后于电动震荡机上，按上一步做法震荡，达到饱和吸附，分离树脂，吸干表面水分。对应加入浓度分别为30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%的乙醇20ml后于电动震荡机上，同法间隔震摇洗脱2h后滤出，测洗脱液中总黄酮浓度，按3.2中公式计算洗脱率，重复进行3次，取3次平均值。

大孔吸附树脂分离纯化鸡血藤总黄酮的研究

大孔吸附树脂分离纯化鸡血藤总黄酮的研究

ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００８　ＶＯＬ．１９　ＮＯ．１０　时珍国医国药２００８年第１９卷第１Ｏ期　

大孑Ｌ吸附树脂分离纯化鸡血藤总黄酮的研究　

王宏　，何薇　，曾祖平　，唐　勇。　（１．北京中医药大学，北京１０００２９；　２．首都医科大学附属北京中医医院北京市中医研究所，北京１０００１０；　３．首都医科大！学附属北京中医医院，北京１０００１０）　摘要：目的研究不同型号大孔吸附树脂对鸡血藤总黄酮的吸附解吸性能，为分离纯化鸡血藤总黄酮提供选择树脂的依　据，选择最佳提取分离工艺。方法以鸡血藤总黄酮含量为指标，考察４种不同型号大孔树脂对鸡血藤总黄酮的比吸附　量和比洗脱量。结果通过吸附容量和洗脱效果的比较，ＦＬ一２和ＤＳ４０１型号树脂对鸡血藤总黄酮的吸附容量大，易洗　脱。结论４种不同型号大孔树脂对鸡血藤总黄酮的吸附及解吸性能有很大差异，综合其比吸附量和比洗脱量。ＦＬ一２和　ＤＳ４０１型号树脂较适合分离纯化鸡血藤总黄酮。　关键词：鸡血藤；总黄酮；　大孔吸附树脂　中图分类号：Ｒ２８４．２　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００８—０８０５（２００８）１０—２４４７－０２　鸡血藤为传统中药，性温，味苦、甘，归肝肾经，有补血活血，　通络的功效…，用于月经不调，血虚萎黄，风湿痹痛等症。现代　药理研究表明，鸡血藤具有抑制血小板聚集，抗心率失常　，刺　激骨髓造血的功能　Ｊ，临床上用其治疗贫血、各种原因引起的白　细胞、血小板、红细胞等全血象减少和再生障碍性贫血等疾病。　最新研究显示，鸡血藤富含黄酮类成分，具有抗氧化、抗炎、抗病　毒、抗肿瘤、扩张血管、调节免疫等多种药理作用　。能通过阻　断细胞周期和诱导细胞凋亡途径特异的抗肿瘤增殖，而对正常组　织细胞毒性较小　Ｊ。因此，揭示鸡血藤的抗肿瘤机制及活性部　位将成为重中之重，是当前研究的热点。　鉴于大孔树脂在中药纯化、富集黄酮类化合物的广泛应用，　本文将对４种性能不同的大孔树脂进行比较，选择出对鸡血藤总　黄酮吸附、解吸都较好的型号，为分离纯化鸡血藤总黄酮提供快　速、高效的途径。　１仪器与试剂　１．１仪器岛津紫外分光光度计（ｕＶ一２２０１）。　１．２　药材鸡血藤购于北京卫仁中药饮片厂（批号：　６０３３０５１０１），经鉴定为豆科植物密花豆的干燥藤茎。　对照品大豆苷元含量测定用（购于中国药品生物制品鉴定　所）；染料木素含量测定用（购于ｓｉｇｍａ公司）；葛根素含量测定　用（购于中国药品生物制品鉴定所）。　大孔树脂ＤＳ一４０１；ＦＬ一２；Ｄ１４００（天津市海光化工有限责　任公司）；ＦＬ一１（天津欧瑞生物科技有限公司）。　１．３试剂所用化学试剂均为分析纯９５％乙醇（ＡＲ）。　２方法与结果　２．１　大孔吸附树脂预处理各型树脂用９５％乙醇浸泡４　ｈ后湿　法上柱，９５％乙醇流动清洗，并不时检查流出液，至流出乙醇液与　水混合（１：５）不呈白色混浊为止，然后用大量蒸馏水流动清洗，　至无醇味备用。　２．２标准溶液的制备精密称取大豆苷元标准品５　ｍｇ　８０％乙　醇溶解，超声２０　ｒａｉｎ，充分溶解后定容至２５　ｍｌ，作为对照品溶液　备用。　２．３标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液０．１，０．２，０．３，０．４，　０．５，０．６，０．７　ｍｌ，分别置于７个１０　ｍｌ干净容量瓶中，８０％乙醇定　容至１０　ｍｌ，摇匀，紫外分光光度计２７８　ｎｍ处单波长测定，以吸收　

大孔吸附树脂分离纯化辣蓼总黄酮研究

大孔吸附树脂分离纯化辣蓼总黄酮研究

·74· Chinese Journal of Information on TCM Jan.2018 Vol.25 No.1

大孔吸附树脂分离纯化辣蓼总黄酮研究

宋漫玲1，陶俊宇2，杨剑1，胡庭俊1

1.广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530005；2.广西医科大学基础医学院，广西 南宁 530021

摘要：目的 采用大孔吸附树脂对辣蓼总黄酮进行分离纯化，探讨静态及动态吸附过程中多种因素对吸附

及解吸效果的影响，以确定其最佳分离提纯工艺。方法 提取辣蓼总黄酮，测定辣蓼黄酮乙酸乙酯部位（FEA）

与辣蓼黄酮正丁醇部位（FNB）黄酮含量，进行大孔吸附树脂对FEA与FNB的吸附试验，采用D101、AB-8、DM130和XDA-8大孔树脂优选最佳分离纯化工艺。结果 选择XDA-8进行辣蓼总黄酮的富集，其最佳工艺

为：调节FEA黄酮pH值为6，上样浓度为750 μg/mL，用75%乙醇洗脱，以1 BV/h流速洗脱5 BV；调节FNB

黄酮pH值为6.0，上样浓度为1 mg/mL，用60%乙醇洗脱，以1 BV/h流速洗脱5 BV。结论 采用XDA-8大

孔吸附树脂通过最佳工艺有利于分离纯化辣蓼总黄酮。 关键词：大孔吸附树脂；辣蓼总黄酮；分离纯化

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.01.016

中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2018)01-0074-05

Study on Separation and Purification of Total Flavonoids from

Polygonum hydropiper Linn. by Macroporous Resin

SONG Man-ling1, TAO Jun-yu2, YANG Jian1, HU TING-jun1

1. School of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530005, China;