高效毛细管电泳分析法
- 格式:ppt
- 大小:1.35 MB
- 文档页数:84


毛细管电泳地基本理论
毛细管电泳基本原理
分离地原因:电泳迁移,电渗迁移
电泳迁移:在高压电场下,带电离子向相反地方向移动.
电渗迁移:当毛细管内充满缓冲溶液时,毛细管壁上地硅羟基发生解离,生成氢离子溶解在溶液中,这样就使毛细管壁带上负电荷与溶液形成双电层,在毛细管地两端加上直流电场后,带正电地溶液就会整体地向负极端移动,这就形成了电渗流.
在操作缓冲溶液中,带电粒子地运动速度等于电泳速度和电渗速度地矢量和,电渗速度一般大于电泳速度,因此即使是阴离子也会从阳极端流向阴极端.
加大缓冲溶液地酸度、在缓冲溶液中加入有机试剂都会减少硅羟基地解离,减小电渗流.
分离模式
毛细管电泳地分离模式有以下几种.
<1)毛细管区带电泳
<2)毛细管凝胶电泳
<3)毛细管等速电泳
<4)毛细管等电聚焦电泳
<5)胶束电动毛细管色谱
<6)毛细管电色谱
在电场作用下,溶液中地带电粒子作定向移动地现象
电渗:在电场作用下,毛细管或固相多孔物质内液体沿固体表面移动地现象.毛细管电泳原理及分析策略
一、毛细管电泳地基本原理
电泳是指电解质中带电粒子在电场力作用下,以不同地速度向电荷相反方向迁移地现象.
高效毛细管电泳
毛细管
HPCE实际上包含电泳、色谱及其相互交叉地内容,是分析科学中继高效液相色谱之后地又一重大进展,它使得分离分析科学从微升级水平进入到纳升级水平,并使得细胞地分析,乃至单分子地分析成为可能.尤其是对样品珍贵,取样极少地生物大分子,毛细管电泳具有绝对地优势.其突出特点是:
<1)所需样品量少;
<2)分析速度快,分离效率高,分辨率高,灵敏度高; <3)分离模式多,开发分析方法容易;
<4)溶剂用量少,经济、环保;
<5)应用范围极广.
毛细管电泳技术可用于分离分析多种组分,如核酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小地生物活性分子等地快速分析,以及DNA序列分析和DNA合成中产物纯度测定等,还可用于碱性药物分子及其代谢产物、无机及有机离子/有机酸、手性化合物、单细胞分析、药物与细胞地相互作用和病毒地分析.
高效毛细管电泳技术简介
高效毛细管电泳又称高效毛细管区带电泳(又称毛细管区带电泳),它的分离根据是电场中毛细管内的溶质具有不同的迁移速率。高效毛细管电泳(high
performance capillary electrophoresis, HPCE)是在传统的电泳基础上结合高效液相色谱技术发展起来的一种高效分离分析技术,由于其具有无与伦比的高效.准确和高灵敏性,这项技术广泛运用于有机离子.无机离子,氨基酸,多肽,蛋白质,核酸分子,对映异构体和临床医学分析,同时它在生物工程,药物,环保,食品检验等领域也显示了极其重要的运用前景。
毛细管电泳仪的结构和特点
毛细管电泳仪主要由5个部分组成,毛细管柱.进样系统,高压系统,检测系统和数据采集系统组成。
毛细管电泳的特点
(1) 电泳在细径(25-75um,内径)弹性石英毛细管中进行,其有限长度一般为50cm.
(2) 高电压(10-30KV)加在毛细管两端以产生高电场强度(100-500V/cm).
(3) 分析时间短,数分钟至几十分钟可完成一次分析。
(4) 多种分离模式,应用范围广(从生物大分子至小分子。离子) (5) 样品需求量少,仪器自动化高。
现阶段取得的主要进展
P/ACE MDQ主要用于蛋白质的分析:
毛细管等点聚焦 肽蛋白和糖蛋白的鉴别分析
纯度检测 免疫毛细管电泳检测
SDS-分子量测定 肽谱分析
高效毛细管电泳法(简称CE)是一种应用电泳原理的分离技术,适用于分离和测定小分子有机化合物和生物大分子,如氨基酸,肽,核酸和蛋白质等,因其操作简便,分离速度快,分辨率高,样品耗费小等优点而广泛应用于分析技术领域.
其原理主要是利用电荷作用力和电流作用力共同作用于被分离物质,在快速流动的毛细管内进行分离,不同的物质根据其理化性质差异,在电场力的作用下,快速分离并达到最终的分析结果.
具体分离过程可分为三步:1.预处理:通过对样品进行一些必要的化学或物理处理,如蛋白的
脱盐,核酸的降解等,使之达到最佳测定条件.2.分离和检测:样品被注入高压,在毛细管内被电场引导向阳极(或阴极)并被快速分离,经过检测器检测,得出分析结果.3.定量分析:基于标准品,定量分析被分离物质的浓度.
在实际应用中,高效毛细管电泳法可通过改变分离毛细管的材料、加入胶体、调整电场强度等方式,进一步提高分离效率和分辨率,并能够与其他分析技术结合使用,如质谱法、光谱法等.
综上,高效毛细管电泳法是一种快速、高效、准确的分离技术,具有广泛的实际应用价值,在
企业管理和生物学等领域都有着广泛的应用前景.
毛细管电泳分析法在药物分析中的应用
摘要
毛细管电泳技术又称为高效毛细管电泳。作为一种新的分离分析技术,以其高效,快速,低实验消耗等优点,受到了广泛重视,而其在药物分析中的应用得到迅速的发展。在原料分析中的中药材鉴别和质量控制,中药有效成分的分离与测定和中成药制剂。而在西药复方制剂中,广泛用于解热镇痛药、抗组胺药、消炎药和止咳药,降压药和抗生素、合成抗菌剂及生物技术产品等药物和制剂的分离,鉴定和分析及其对手性分子的拆分,基于手性主—客体络合的毛细管电泳手性拆分,基于手性胶束增溶的毛细管电泳手性拆分和基于蛋白质亲和的毛细管电泳手性拆分,还有临床用药中,都显示了其高效,快速的特点。毛细管电泳技术正广泛用于药物分析的各个相关的部分中,正越来越受到人们的重视。
Abstract
Capillary electrophoresis technology called high performance capillary electrophoresis. As a
new kind of separation and analysis technology, with its rapid, efficient, low consumption
advantages of experiment was Received widely attention, and its application in pharmaceutical
analysis is rapid development. The analysis of Chinese herbal medicine in raw material
identification and quality control, the TCM separation and determination and proprietary Chinese
medicine preparations. But in western medicine compound preparations, widely used in antipyretic