硫酸铵饱和度的常用表,聚丙烯酰胺凝胶的配制表

8%聚丙烯酰胺凝胶电泳
50ml配方：
30%丙烯酰胺：13.33ml
10×TBE：5ml（或者5×TBE加10ml）
TEMED：25ul
10%过硫酸铵（新鲜配制）：250ul
ddH2O:补到50ml
丙烯酰胺30%为29：1（质量比，丙烯酰胺：双甲叉丙烯酰胺）
电泳槽中加入0.5×TBE
银染液的配制：
固定液: 100mL 冰乙酸加水稀释至1000mL，可重复使用；
染色液: 1g AgNO3、1. 5mL 37%甲醛, 加水至1000mL (4摄氏度预冷效果佳)，可重复使用，棕色瓶存放；
显色液: 30g Na2 CO3、1. 5mL 37% 甲醛、0. 2mL Na2S2O3(10mg/mL) , 加水至1000mL；
终止液：配方同固定液，10%冰乙酸，可以用回收的固定液进行终止。

染色：
1、加入固定液固定30min，水洗5-10min；
2、加入染色液染色30min，水洗2次，每次不超过30s；
3、加入显色液显色（条带清晰即可，一般不超过5min）；
4、加入终止液终止反应；
需要配制的溶液：
10%过硫酸铵：称取5g过硫酸铵溶解于50ml蒸馏水中。

37%甲醛：37ml甲醛和63ml蒸馏水混匀。

10mg/mL Na2S2O3：称取0.3g溶解于30ml蒸馏水中。

10%冰乙酸：100mL 冰乙酸加水稀释至1000mL，可重复使用。

5×TBE缓冲液：54gTris，27.5g硼酸，20ml 0.5M EDTA(pH8.0)，加水定容至1升。

硫酸铵饱和度的常用表1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）3．不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据聚丙烯酰胺凝胶的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）5 10 15 20 25 30 40 506%水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 101.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02 0.024 0.032 0.04 8%水 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 30%丙烯酰胺溶液 1.3 2.7 4 5.3 6.7 8 10.7 13.31.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.015 0.018 0.024 0.03 10%水 1.9 4 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%丙烯酰胺溶液 1.7 3.3 5 6.7 8.3 10 13.3 16.71.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 12%水 1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%丙烯酰胺溶液 2 4 6 8 10 12 16 201.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.0215%水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5 30%丙烯酰胺溶液 2.5 5 7.5 10 12.5 15 20 251.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.32.53.8 5 6.3 7.5 10 12.510% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 表2 配制6% Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）123456810水0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831 1.3 1.7 1.5 mol/L Tris (pH8.8)0.130.250.380.50.630.750 1.25 10% SDS0.010.020.030.040.050.060.080.1 10%过硫酸氨0.010.020.030.040.050.060.080.1 TEMED0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01。

硫酸铵溶液饱和度计算表
注：本表为室温（25℃）下数据，该温度下饱和硫酸铵的浓度为4.1mol/L,即将761g硫酸铵溶于1L水中。

同时鉴于4-25℃之间数据没有明显变化，所以表中数据也可用于4℃。

饱和溶液加入法是指将预先调好PH的饱和硫酸铵溶液逐步加至相应的蛋白质溶液中，使其达到一定的硫酸铵浓度（或饱和度），令蛋白质沉淀下来。

不同饱和度所需要加入的饱和硫酸铵的量可以用如下公式计算：V=V0 (S2—S1)/(100—S2) 其中v为应加入饱和硫酸铵溶液的体积，V0 是蛋白质溶液的原始体积，S2是所要达到的硫酸铵饱和度，S1 原来溶液的硫酸铵饱和度。

117附录五 硫酸铵饱和度的常用表　１．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（２５℃）　硫 酸 铵 终 浓 度 ， % 饱 和 度10202530333540455055606570758090100每1升溶液加固体硫酸铵的克数①0 56 114 144 176 196 209 243 277 313 351 390 430 472 516 561 662 767 10 5786 118 137 150 183 216 251 288 326 365 406 449 494 592 694 20 2959 78 91 123 155 189 225 262 300 340 382 424 520 619 253049 61 93 125 158 193 230 267 307 348 390 485 583 30 1930 62 94 127 162 198 235 273 314 356 449 546 33 1243 74 107 142 177 214 252 292 333 426 522 35 3163 94 129 164 200 238 278 319 411 506 40 3163 97 132 168 205 245 285 375 469 45 3265 99 134 171 210 250 339 431 50 3366 101 137 176 214 302 392 55 3367 103 141 179 264 353 603469 105 143 227 314 65 3470 107 190 275 70 3572 153 237 75 36115 198 80 77157 硫酸 铵 初 浓 度 ， % 饱 和 度9079○1在25℃下硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。

118２．硫酸铵溶液饱和度计算表（０℃）；硫 酸 铵 终 浓 度 ， % 饱 和 度20253035404550556065707580859095100每100毫升溶液加固体硫酸铵的克数①0 10.6 13.4 16.4 19.4 22.6 25.8 29.1 32.6 36.1 39.8 43.6 47.6 51.6 55.9 60.3 65.0 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16.6 19.7 22.9 26.2 29.6 33.1 36.8 40.5 44.4 48.4 52.6 57.0 61.5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13.9 16.9 20.0 23.3 26.6 30.1 33.7 37.4 41.2 45.2 49.3 53.6 58.1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11.1 14.1 17.2 20.4 23.7 27.1 30.6 34.3 38.1 42.0 46.0 50.3 54.7 59.2 20 02.7 5.5 8.3 11.3 14.3 17.5 20.7 24.1 27.6 31.2 34.9 38.7 42.7 46.9 51.2 55.7 25 02.7 5.6 8.4 11.5 14.6 17.9 21.1 24.5 28.0 31.7 35.5 39.5 43.6 47.8 52.2 30 02.8 5.6 8.6 11.7 14.8 18.1 21.4 24.9 28.5 32.3 36.2 10.2 44.5 48.8 35 02.8 5.7 8.7 11.8 15.1 18.4 21.8 25.4 29.1 32.9 36.9 41.0 45.3 40 02.9 5.8 8.9 12.0 15.3 18.7 22.2 25.8 29.6 33.5 37.6 41.8 45 02.9 5.9 9.0 12.3 15.6 19.0 22.6 26.3 30.2 34.2 38.3 50 03.0 6.0 9.2 12.5 15.9 19.4 23.0 26.3 30.8 34.8 55 03.0 6.1 9.3 12.7 16.1 19.7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12.9 16.4 20.1 23.1 27.9 653.1 6.3 9.7 13.2 16.8 20.5 24.4 70 03.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 03.2 6.6 10.1 13.7 17.4 80 03.36.7 10.3 13.9 85 03.46.8 10.5 90 03.47.0 95 03.5 硫 酸 铵 初 浓 度 ， % 饱 和 度100○1在0℃下硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。

硫酸鞍饱和度旳吊酰胺凝胶的配制表硫酸鞍饱和度的常用表1.调整硫酸鞍溶液饱和度计算衷(0-C)在O'C硫酸镀终浓度，％饱和度2.调整硫酸镀溶液饱和度计算表（25C）聚丙烯酰胺凝胶的配制表1配制Tris・甘低酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液6%26.水 2.6 5.37.9 10.6 13.2 15.9 21.2 5 30%丙烯酰胺溶液123 4 568 101.5 mol/L12. Tris (pH&8) 1.3 2.53.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.50.00 0.00 0.01 0.010.02 0.03 0.0TEMED482 6 0.024 2 4 8%23.水 2.3 4.6 6.99.3 11.5 13.9 18.5 2 30%丙烯酰13.胺溶液 1.3 2.74 5.3 6.7810.7 31.5 mol/L12. Tris (pH&8) 1.3 2.53.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.50.00 0.00 0.00 0.01 0.01 0.01 0.02 0.0TEMED369 2 58 4 310%19.1.9 4 5.9 7.9 9.9 11.915.9 830%丙烯酰16.胺溶液 1.7 3.35 6.7 8.31013.3 71.5 mol/L12. Tris (pH&8) 1.3 2.53.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.50.00 0.00 0.00 0.000.01 0.01 0.0TEMED2468 0.012 6 2 12%16.水 1.6 3.3 4.9 6.6 8.29.913.2 5 30%丙烯酰胺溶液2468 101216 201.5 mol/L12. Tris (pH&8) 1.3 2.53.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.50.00 0.00 0.00 0.000.01 0.01 0.0TEMED2468 0.012 6 2 15%11.水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.99.2 5 30%丙烯酰胺溶液 2.557.510 12.51520 251.5 mol/L12. Tris (pH&8) 1.3 2.53.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.50.00 0.00 0.00 0.000.01 0.01 0.0TEMED2468 0.012 6 2表2配制6 % Tris ・甘氨酸SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶所用溶液不同体积（ml 烬胶液中各成分所需体 积（ml ） __________________________ 0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.80.13 0.25 0.38 0.5 0.63 0.75 0 1.25 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 1 2 3 4 5 6 8 0.01溶液成分水 30 %丙烯酰胺溶液1.5 mol/LTris (pH&8)10%SDS10%过硫酸氨0.17 0.33 0.5 0.67 0.83 TEMED。

5×TBE（组份浓度：5×TBE，pH 8.3；配制量：1 L）：称取53.9 g Tris，27.5 g硼酸，量取20 ml 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0），置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，充分搅拌溶解；加超纯水将溶液定容至1 L；室温保存。

10% 过硫酸铵（组份浓度：10% (W/V) 过硫酸铵；配制量：10 ml）：称取1 g过硫酸铵，置于10～50 ml烧杯中；加入约8 ml超纯水，搅拌溶解；加超纯水将溶液定容至10 ml；4 ℃保存（保存时间为2周左右，超过期限过硫酸铵将失去催化作用）。

30% 丙烯酰胺（组份浓度：30% (W/V)丙烯酰胺；配制量：1 L）：称取290 g丙烯酰胺，10 g N,N'-亚甲基双丙烯酰胺，置于1 L烧杯中；加入约600 ml超纯水，水浴加热至37 ℃，充分搅拌至溶解；加超纯水将溶液定容至1 L，用0.45 μm滤膜过滤除去杂质；并检测该溶液pH值应不大于7；棕色瓶4 ℃保存。

0.1% AgNO3（组份浓度：0.1% (W/V) AgNO3；配制量：1 L）：称取1 g AgNO3，置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，；加超纯水将溶液定容至1 L；棕色瓶室温保存。

显色液（组份浓度：2% (W/V) NaOH，0.04% (W/V) Na2CO3，0.4% (W/V) 37%甲醛；配制量：1 L）：称取20 g NaOH，0.4 g Na2CO3，置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，充分搅拌溶解；加4 ml 37%甲醛溶液，加超纯水将溶液定容至1 L；室温保存。

10% 冰乙酸（组份浓度：10% 冰乙酸；配制量：1 L）：量取100 ml冰乙酸，置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，搅拌混匀；加超纯水将溶液定容至1 L；室温保存。

2.2.6 电泳检测2.2.6.1 玻璃板清洗首先用去污粉将电泳用玻璃板、胶垫、梳子等反复清洗；然后用Ⅲ级蒸馏水漂洗2～3次，直至玻璃板表面出现均匀水膜，既不聚成水滴，也不成股流下；再用超纯水漂洗1次，晾干；最后用无水乙醇擦拭，晾干备用[74]。

聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE胶的配制
各种浓度PAGE胶的配制（DNA电泳用）
50ml体系：
5ml体系：
1、丙烯酰胺30%为29：1（质量比，丙烯酰胺：双甲叉丙烯酰胺）
2、TEMED 可以加到1ul/ml。

不同浓度丙烯酰胺和DNA的有效分离范围表
*表中给出的数字为与指示剂迁移率相等的双链DNA分子所含碱基对数目(bp). 凝胶的制备过程：
1、按要求装配好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边，防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。

2、将装好的玻璃电泳板倾斜成45～60℃角。

3、按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。

4、加入TEMED后，立即混匀，缓缓倒入两玻璃板间的胶床中，直到液体接近溢出时为止。

5、立即插入适当的梳子，密切注意防止梳齿下产生气泡，用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上，然后将玻璃板斜靠在物体上，使成10°角，可减少液体泄漏的机会。

6、室温聚合一小时后，将玻璃板插入电泳槽中，上紧，倒入0.1XTBE缓冲液。

7、小心取出梳子，加样。

是啊。