生物制品基础知识培训

• 活疫苗特点
可在体内繁殖 系统免疫反应和局部免疫反应 免疫力持久，产量高，成本低 有毒力增强和反祖危险 抗原干扰现象 保存条件苛刻
• 死疫苗
灭活疫苗：由完整的病毒或细菌经灭活剂灭活 后制成，即要使病原体充分死亡，丧失感染性 或毒性，又要保留其免疫原性。 亚单位疫苗：是指将病原体经物理或化学方法 处理，除去无效物质，提取其有效抗原部分制 备的一类疫苗，经提取、纯化，通过化学合成， 制成不同的亚单位疫苗。
• （2）体内诊断制品:由变态反应(超敏反应)原或
有关抗原材料制成的免疫诊断试剂,用于皮内接种等。 6、其它制品 由有关生物材料或特定方法制成,不属于上述5类的其 他生物制剂,用于治疗或预防疾病。如治疗用Ａ型肉 毒素制剂、微生态制剂和卡介菌多糖、核酸制剂等。
三、疫苗的定义和分类
1. 疫苗定义 2. 疫苗分类
基因工程重组亚单位疫苗：利用DNA重组技术， 将编码病原微生物保护性的基因 导入原核或 真核细胞，使其在受体细胞中高效表达，分泌 保护性抗原肽链，提取肽链加入佐剂制成。该 类疫苗安全性好，副反应小（有害的反应原 少），稳定性好，便于保存和运输，但研发、 生产成本高，免疫原性较差，需多次免疫才能 得到有效保护。
生物制品基础知识培训
主讲人：许冬 （2012年05月25日）
目录
• 一、生物制品的定义及概述 • 二、生物制品的分类 • 三、疫苗的定义和分类 • 四、疫苗生产工艺流程 • 五、疫苗质量控制及检定的要求 • 六、厂房、设施和仪器设备 • 七、文件系统
一、生物制品的定义及概述
生物制品是应用普通的或以基因工程、细 胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技 术获得的微生物、细胞及各种动物和人源 的组织和液体等生物材料制备，用于疾病 预防、治疗和诊断的药品。
• 单价疫苗：利用同一种微生物（菌）毒株或同一 种微生物中的单个血清型（菌）毒株的增殖培养 物制备的疫苗。 • 多价疫苗：利用同一种微生物（菌）毒株或同一 种微生物中的多个血清型（菌）毒株的增殖培养 物制备的疫苗 • 多联疫苗：利用不同的微生物增殖培养物，按免 疫学原理和方法组合而成的疫苗。接种动物后能 获得相应疾病的免疫保护，一针多防，可减少劳 动力和动物应激。
10．稳定性试验：是指疫苗在常规保存温度下的稳定性试验。 由于稳定性试验的结果直接与制品的效期有关，且试验观察时 间较长，因此应在生产工艺确定后尽早留样进行，定期取样测 定制品效力和其他相关的质量指标； 11．效力试验（生物效价）：由于用于预防的疫苗是通过机体 的免疫应答反应发生作用的，因此应评价其体液免疫和细胞免 疫的生物效价。在评价体液免疫效价时，应选择实验动物的品 系，建立检测动物血清抗体的诊断试剂，并对该类试剂进行验 证，可以计算小鼠ED50以及抗体产生的滴度 12．佐剂的质量评价：如最终制品含有佐剂，则应建立佐剂含 量以及与之结合率的检测方法，并制定相应质量标准。 13．疫苗标准品或参考品的研究：对于一种新疫苗而言，建立 检测疫苗的效力、免疫原性或毒性用标准品或参考品对判断验 室研究阶段与批量投产后的疫苗质量是否一致以及临床试验的 评价是非常重要的。
疫苗《制造及检验规程》
• 任何一种疫苗都有其《制造及检验规程》，它是 国家法定标准。 • 疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行 生产和检验，若要改变方法，则要提供研究材料 证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新 《规程》才能进行生产。 • 《规程》来源
中华人民共和国《生物制品规程》（常规疫苗） 转让单位
二、生物制品的分类
1、疫苗
疫苗是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒 等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基 因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制 剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。 当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫 系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性 生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病 原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆， 制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。
5. 无菌检查：应符合现行版《中国药典》的相关要求。 6．热原或细菌内毒素检查：可参照现行版《中国药典》 的相关要求进行； 也可以用其它方法检测疫苗中的热原物质。 7．抗生素检测：预防用疫苗在生产过程中不得添加青霉 素或其他β内酰氨类抗生素；如在生产过程中添加除上述以外 的其他抗生素，应建立相应的检测方法并规定抗生素残留量的 要求。 8．灭活效果的验证：由于制备疫苗的病原体一般均对人 类致病，因此应建立有效的灭活方法对该制品中的病原体进行 灭活，并应对灭活效果进行验证；在成品检定中应建立灭活剂 残留量检测的方法和限度标准。 9．异常毒性检查：应符合现行版《中国药典》的相关要 求。
四、疫苗生产工艺流程
菌（毒）种
物、禽胚或细胞等）
培养物（培养基、动
收获抗原（培养 配苗
液、含毒组织、胚液或细胞液等） 分装
冻干成活疫苗或灭活后制成灭
活疫苗。
细菌疫苗的制造工艺流程
蛋白胨、肉浸液等原料 菌种 生产用种子 培养基 培养 原料 配制、灭菌 灭活菌液 佐剂 配苗乳化 菌液 灭活 菌苗原液 配苗 保护剂 配制、灭菌 原料 配制、灭菌
4、细胞因子及重组ＤＮＡ产品
由健康人血细胞增殖、分离、提纯或重组Ｄ ＮＡ技术制成的多肽类或蛋白质类制剂, 如干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、 红细胞生成素等,用于治疗。
5、诊断制品 （1）体外诊断制品:由特定抗原、抗体或
有关生物物质制成的免疫诊断试剂或诊断 试剂盒,如伤寒、副伤寒、变形杆菌诊断菌 液,沙门氏菌属诊断血清,等,用于体外免疫 诊断;
一些基本概念
• 外毒素指某些细胞生长繁殖过程中分泌到 菌体外的一种代谢产物。 • 类毒素是细菌的外毒素经甲醛处理后，失 去毒性而仍保留其免疫原性，能刺激机体 产生保护性免疫的制剂。 • 内毒素是革兰氏阴性菌的菌体中存在的毒 性物质的总称。
（三）我们公司疫苗要检验哪些项目？
配制
细胞培养液
保护剂
活疫苗
灭活疫苗
病毒性组织疫苗的制造工艺流程
基础种毒 健康动物或SPF鸡胚等 生产用种毒 健康动物或SPF鸡胚等 动物或SPF鸡胚等
感染动物或胚胎
收获感染组织或胚液 原料 配制 保护剂 配苗 分装冻干 检验 配苗、乳化 分装、扎盖、贴签 检验 佐剂 纯化配制成含毒悬液 灭活 灭活病毒液 原料 配制
工序3 接毒与收获
病毒接种可与细胞同步（分装同时或分装不久后接 种病毒）或异步（细胞形成单层后接种病毒）。待 出现70%～80%以上细胞病变时即可收获。收获时 可将培养瓶反复冻融后收取；也可加EDTA-胰酶液 消化分散收获。收获的细胞毒液经无菌检验、毒价 测定合格后，供配苗用。
工序4 配苗
灭活疫苗和冻干苗的配制方法见禽胚培养疫苗。
• 死疫苗特点
不能在体内繁殖 有利于制备多价或多联疫苗 比较安全，不发生全身性副反应，无毒力反祖 现象 受外界影响小，有利于保存运输 免疫剂量大，需多次免疫，成本高 只能诱导机体产生体液免疫 通常需要用佐剂或携带系统来增强其免疫效果
举例说明活疫苗和灭活苗的区别
• 猪瘟
• 基因疫苗：包括DNA疫苗和RNA疫苗，是将 编码某种抗原蛋白的基因置于真核表达元 件的控制下，构成重组表达质粒DNA或RNA， 将其直接注入动物体内，通过宿主细胞的 转录翻译系统合成抗原蛋白，从而诱导宿 主产生抗原蛋白的免疫应答。
1、疫苗定义
• 由特定细菌、病毒、立克次体、衣原体等 微生物及寄生虫制成的，接种动物后能产 生自动免疫和预防疾病的一类生物制剂均 称为疫苗，制剂的主要成分为微生物或寄 生虫。
2、分类
按微生物分类
1. 细菌类疫苗 2. 病毒类疫苗 3. 寄生虫类疫苗
按疫苗抗原的性质和制备工艺分类 • 活疫苗
弱毒活疫苗 基因缺失疫苗：用基因工程技术将强毒株毒力 相关基因切除构建的活疫苗 基因工程活载体疫苗 病毒抗体复合疫苗：特异性高免血清与适当比 例的相应病毒组成，其特点是可以延缓病毒释 放，提高疫苗的安全性和免疫效果。
2、抗毒素及免疫血清 由特定抗原免疫动物所得由血浆或血清制成； 称抗毒素或免疫血清。 如破伤风抗毒素、抗狂犬病血清等，用于治 疗或被动免疫预防。
3、血液制品 由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离、提 纯或由重组ＤＮＡ技术制成的血浆蛋白组分 或血细胞组分制品, 如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子 (天然或重组的)、红细胞浓缩物等,用于诊断、 治疗或被动免疫预防。
活疫苗
灭活疫苗
病毒类疫苗的制造方法
• 1 毒种的选择与减毒
• 毒株须具备的条件： • （1）持有特定的抗原性； • （2）有典型的形态和感染特定组织的特性，并能 保持其生物学特性； • （3）易在特定组织中大量繁殖； • （4）不产生神经毒素或能引起机体损害的其它毒 素；
• （5）如制备活疫苗，繁殖过程中无恢复原致病性 的现象； • （6）未被其它病毒污染。
五、疫苗质量ห้องสมุดไป่ตู้制及检定的要求
（一）生产过程中质量监控标准的建立及
要求 在生产工艺的各个环节和步骤中的产品均 应建立相应的监控标准，以便后续工艺的进行, 保证产品的质量、工艺的稳定性。
（二）疫苗产品的质量检定与要求
1．外观检查：根据样品的特征建立外观的质量标准。 2．pH值检测：可根据一般生物制品的要求建立标准， 一般为7.2±0.5。 3．纯度：主要用于评价纯化制品中含有有效成分的量和 杂质的最低限量，制定相应标准，通常可测定有效抗原在疫 苗中的绝对值或测定主要杂质的量推算有效抗原在疫苗中的 相对值。 4．宿主细胞 DNA和蛋白残留量检测：采用传代细胞生 产疫苗，应限制疫苗中的宿主细胞DNA和蛋白残留量，进行 方法研究时应建立相应的标准品，并对检测试剂的敏感性和 特异性进行验证。疫苗中残余宿主细胞DNA及蛋白残留量可 参考现行版《中国药典》的相关要求。
• 5 冻干
• 冻干的疫苗充氮或真空密封保存。