miRNA21对人肺癌A549细胞增殖及迁移的影响
- 格式：pdf
- 大小：883.37 KB
- 文档页数：5
下载文档原格式
合集下载
miRNA-21与肿瘤相关研究新进展
2011年第38卷第6期miRNA-21与肿瘤相关研究新进展*杨旸综述康春生审校摘要小RNA（microRNA，miRNA）是近年发现的一类内源性非编码单链RNA，在转录后水平对基因表达发挥负调控作用，参与细胞生长、发育、凋亡等重要生物过程。
研究发现miRNA-21在肿瘤的发生发展过程中扮演着非常重要的角色，在不同类型肿瘤中的表达均出现明显上升，与肿瘤细胞的增殖、侵袭、血管的生成和抗药性等生物学行为相关。
本文将从miRNA-21的表达与定位、对靶基因的调控以及对miRNA-21的转录调控等方面进行综述。
关键词miRNA-21肿瘤信号通路转录doi:10.3969/j.issn.1000-8179.2011.06.016Recent Advances in the Research on the Relationship between miRNA-21and CancerYang YANG,Chunsheng KANGCorrespondence to:Chunsheng KANG,E-mail:kang97061@Department of Neurosurgery,Tianjin Medical University General Hospital,Laboratory of Neuro-Onoclogy,Tianjin Neurological Insti-tute,Tianjin300052,ChinaThis work was supported by National Natural Science Foandation of China(No.30971136)and Science and Technology Planning Pro-gram of Tianjin(No.09JCZDJC17600)Abstract MicroRNAs(mRNAs)are a class of endogenous small noncoding single-stranded RNAs that negatively regulate gene expression at the post-transcriptional level.MicroRNAs are involved in diverse biological processes,including development,cell differ-entiation and cell death.It was found that miRNA-21played an important role in the course of oncogenesis.The expression of miR-NA-21is significantly upregulated in different kinds of solid tumors.It is involved in cell proliferation,cell invasiveness,angiogenesis and other biological behaviors.This review summarizes the current knowledge concerning the expression and location of miRNA-21 and the regulatory network related to miRNA-21in cancer.Keywords miRNA-21;Cancer;Signal transduction pathway;Transcription小RNA（microRNA，miRNA）主要存在于真核生物基因组非编码区,在转录后水平调控一个或多个基因表达。
miR-296对人肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响
·224·肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，恶性肿瘤致死病因中肺癌占27%，位于恶性肿瘤首位［1］。
根据组织病理学特性将肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌 （ non -small cell lung cancer，NSCLC ），其中NSCLC占80%~85%。
相对于其他类型的肺癌，NSCLC增殖、迁移较快，约75%患者发现时已处于中晚期，患者5年生存率较低［2］。
微小RNA是长约22 nt的非编码RNA，它能与目标靶基因特异性结合，通过调控靶基因的表达参与调控细胞分化、增殖、迁移以及凋亡等生理过程，在糖尿病、心力衰竭以及肿瘤等多种疾病的病理生理发展过程中发挥重要作用。
研究［3-10］表明微小RNA-296 （microRNA -296，miR -296） 与结直肠癌、肝癌、胶质母细胞瘤、口腔鳞状细胞癌、胰腺癌、卵巢癌、子· 论著 ·miR -296对人肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响刘洋1，夏书月1，武晶晶2（1. 沈阳医学院附属中心医院呼吸与危重症医学科，沈阳 110024；2. 中国医科大学生命科学学院医学遗传学教研室，沈阳 110122） 摘要 目的 探讨微小RNA-296（miR -296）对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响及其潜在的分子机制。
方法 将miR -296表达载体、抑制剂及相应阴性对照分别转染人肺腺癌A549细胞，实时PCR 检测miR -296在不同细胞中的表达情况，CCK8法和平板克隆实验检测miR -296对A549细胞增殖能力的影响，流式细胞术检测细胞凋亡率，Transwell 法检测细胞迁移能力，Western blotting 检测S100A4在各组A549细胞中的表达情况。
结果 与相应的对照组比较，转染了miR -296表达载体的A549细胞miR -296表达显著上调，细胞增殖和迁移能力明显下降，凋亡率明显上升，S100A4蛋白表达下调，差异均有统计学意义 （均P < 0.05） ；而转染了miR -296 抑制剂的A549细胞miR -296表达显著下调，细胞增殖和迁移能力明显增强，凋亡率明显下降，S100A4蛋白表达上调，差异均有统计学意义 （均P < 0.05）。
miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－４６９５．２０２１．０８．０１０ 文章编号：１６７１－４６９５（２０２１）０８－０８２０－０５ｍｉＲ－１２９０对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响黎亮 蔡仁中 李高 黄修明 （海南省人民医院胸外科 海南 海口 ５７０３１１） 【摘要】 目的 探究ｍｉＲ－１２９０对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。
方法 回顾性收集２０１８年３月至２０１９年６月海南省人民医院收治的４５例患者，取肺腺癌组织及癌旁组织，采用荧光定量聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测组织中ｍｉＲ－１２９０的表达。
将肺腺癌细胞随机分为对照组、ｍｉＲ－１２９０ｍｉｍｉｃ组和ｍｉＲ－１２９０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ组，通过脂质体２０００试剂盒，分别以无意义序列、ｍｉＲ－１２９０ｍｉｍｉｃ、ｍｉＲ－１２９０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ转染细胞。
分别采用细胞计数试剂盒（ＣＣＫ－８）、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。
蛋白质印迹法检测ＣｙｃｌｉｎＤ１、ｐ２７、基质金属蛋白酶（ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９）蛋白的表达。
经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测ｍｉＲ－１２９０的靶基因，荧光定量ＰＣＲ和蛋白质印迹法检测ｍｉＲ－１２９０靶基因的表达。
结果 与癌旁组织比较，肺腺癌组织中ｍｉＲ－１２９０表达明显增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
与对照组比较，ｍｉＲ－１２９０ｍｉｍｉｃ组ｍｉＲ－１２９０表达明显增加，ｍｉＲ－１２９０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ组ｍｉＲ－１２９０表达明显降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
培养４８ｈ时，与对照组比较，ｍｉＲ－１２９０ｍｉｍｉｃ组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加，ｍｉＲ－１２９０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
与对照组比较，ｍｉＲ－１２９０ｍｉｍｉｃ组细胞周期蛋白ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９蛋白表达量明显增加、ｐ２７蛋白表达明显降低，ｍｉＲ－１２９０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ组ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９蛋白表达量明显降低、ｐ２７蛋白表达明显增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
靶向OPN的miRNA对人肺腺癌细胞株A549顺铂敏感性的影响
［ 摘要】目的 通过 ｍＲ Ａ介导 Ｒ Ａ 沉默 Ｏ Ｎ表达探讨其对人肺腺癌细胞株 Ａ ４ 顺铂 （ Ｄ ） ｉＮ Ｎｉ Ｐ ５９ Ｄ Ｐ敏感性的影响。方 法 利用
体外构建的靶 向 Ｏ Ｎ的 ｍ Ｒ Ａ表达质粒瞬时转染 Ａ ４ ， Ｐ ｉＮ ５ ９ 酶联免疫 吸咐法 （ ＬＳ 检测转染后 ４ ｈ细胞 Ｏ Ｎ蛋白表达 ； Ｅ ＩＡ） ８ Ｐ 转
ｔｎｌ ｈｎｓ ｅ ｉｎ ｃ ｎｅ ，ｅｉｇ１０ ０ ， ｈｎ ｉ ａ Ｃ ｉｅｅＭ ｄｃ ｅ ｉ ｃｓＢ ｉｎ ０ ７ ０ Ｃ ｉａ ｏ ｉ Ｓｅ ｊ 【 ｂ ｔａ ｔ Ｏ ｊｃｉｅ Ｔ ｘｌ ｅｔｅｄｕ ｎｉｖｙｏ ｎ ｄｎ ｃｒｉｏ ａｃｌｌ ｅＡ ４ ｉ ｌｉ（ Ｄ ｂ Ｒ Ａ ｓｅｉｃ ｏ Ｏ Ｎ Ａ ｓｒ ｃ 】 ｂ ｅ ｔ ｏｅｐｏ ｒｇｓ ｓｉｔ ｆｕｇａ ｅｏａｃ ｍ ｅ ｎ ５ ９ｔ ｃ ｐ ｔ Ｄ Ｐ） ｙｍｉＮ ｐｃ ｒ Ｐ ｖ ｒ ｈ ｅ ｔ ｉ ｌ ｎ ｌｉ ｏ ｓ ａｎ ｉ ｆ ｆ
１Ｍｅ ｉ ａ Ｄｅ ａｔ ｎ ， ａ ｕ ｔ ｃ ｏ ｌ ｆＮ ｎ ｈ ｎ ｉｅ ｓ ， ａ ｃ ａ ｇ ３ ０ ０ Ｃ ｉａ； ． ｅ ａｔ ｎ ｆ ｉｃ ｅ ｓ ｙ ａ ｄ Ｍｏｅ ｕ ａ ｉｌ— ． ｄｃｌ ｐ ｒ ｍｅ ｔ Ｇｒ ｄ ａ ｅ Ｓ ｈ ｏ ａ ｃ ａ ｇ Ｕｎ ｖ ｒｔ Ｎ ｎ ｈ ｎ ３ ０ ６， ｈ ｎ ２ Ｄ ｐ ｒｍｅ ｔｏ Ｂ ｏ ｈ ｍｉｔ ｎ ｌｃ ｌｒ Ｂ ｏｏ ｏ ｙ ｒ ｇ ， ｄ ｃ ｌ Ｃ ｌ ｇ ｆＮａ ｃ ａ ｇ Ｕｎ ｖ ｒ ｉ ， ａ ｃ ａ ｇ ３ ０ ０ ， ｈ ｎ ； ． ｓｉ ｔ ｏ ｕ ｕ ｃｕ ｅ ａ ｄ Ｍｏ ｉｕ ｔ ｎ Ｃ ｉ ａ Ａ ａ ｅ ｆＴ ａ ｉ Ｙ Ｍｅ ｉａ ｏｌ ｅ ｏ ｎ ｈ ｎ ｉｅｓｔ Ｎ ｎ ｈ ｎ ３ ０ ６ Ｃ ｉ ａ ３ Ｉ ｔ ｕ ｅ ｆＡｃ ｐ ｎ ｔｒ ｎ ｘｂ ｓ ｏ ， ｈ ｎ ｃ ｄ ｍｙ ｏ ｒｄ — ｅ ｙ ｎ ｔ ｉ
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》范文
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是全球最常见的肺癌类型，具有较高的致死率。
随着对肺癌发病机制的不断深入，越来越多的研究关注于微小RNA（miRNA）在肿瘤发生、发展及治疗中的作用。
其中，miR-342-5p作为一种具有广泛生物活性的miRNA，其在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及其调节机制尚不明确。
本文旨在探讨miR-342-5p在非小细胞肺癌中的功能及其潜在的治疗价值。
二、材料与方法1. 材料本实验所使用的非小细胞肺癌细胞系A549和H460均购自ATCC细胞库。
实验所涉及的试剂、仪器等均经过严格筛选和校准，以确保实验的准确性。
2. 方法（1）细胞培养与转染：将A549和H460细胞在特定条件下培养，并利用脂质体转染法将miR-342-5p模拟物或抑制剂转染至细胞中。
（2）实时荧光定量PCR（RT-qPCR）：检测转染前后miR-342-5p的表达水平。
（3）Western Blot：检测相关蛋白的表达情况。
（4）细胞功能实验：包括细胞增殖、凋亡、迁移等实验，以评估miR-342-5p对细胞功能的影响。
三、实验结果1. miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系中的表达情况通过RT-qPCR实验发现，miR-342-5p在A549和H460细胞中的表达水平较正常肺组织明显升高。
2. miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞功能的影响（1）细胞增殖实验显示，过表达miR-342-5p可促进A549和H460细胞的增殖，而抑制miR-342-5p则可抑制细胞的增殖。
（2）细胞凋亡实验表明，过表达miR-342-5p可降低A549和H460细胞的凋亡率，而抑制miR-342-5p则可增加细胞的凋亡率。
（3）迁移实验显示，miR-342-5p可促进非小细胞肺癌细胞的迁移能力。
3. miR-342-5p的调节机制研究通过Western Blot实验发现，miR-342-5p可能通过调控相关信号通路中的关键蛋白，如XXX、YYY等，来影响细胞的增殖、凋亡和迁移。
《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》范文
《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是一种常见的恶性肺癌类型，严重影响人们的生命健康。
miRNA是一类小分子RNA，可以参与多种生物过程的调控。
其中，miR-424-5p作为其中的一种成员，近期引起了广泛的关注。
在众多研究报道中，其与非小细胞肺癌之间的关系也受到了广泛的关注。
本文旨在研究miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节机制。
二、研究背景miR-424-5p的异常表达与多种癌症的发生、发展密切相关。
在非小细胞肺癌中，miR-424-5p的表达水平与肿瘤的恶性程度、转移能力等密切相关。
然而，其具体作用机制尚不明确。
因此，研究miR-424-5p在非小细胞肺癌中的作用及调节机制，对于揭示肺癌发病机制、诊断及治疗具有重要意义。
三、研究方法1. 实验材料：非小细胞肺癌细胞A549、miR-424-5p模拟物及抑制剂、相关试剂等。
2. 实验方法：（1）利用生物信息学方法预测miR-424-5p的靶基因；（2）通过细胞实验验证miR-424-5p的靶基因；（3）研究miR-424-5p在A549细胞中的表达情况；（4）利用过表达和敲低技术，研究miR-424-5p对A549细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响；（5）通过荧光素酶报告实验等手段，研究miR-424-5p的调节机制。
四、实验结果1. 预测及验证：通过生物信息学方法预测，我们发现多个基因可能是miR-424-5p的靶基因。
通过细胞实验验证，我们确定了其中几个关键靶基因。
2. miR-424-5p在A549细胞中的表达情况：我们发现miR-424-5p在A549细胞中表达水平较高。
3. miR-424-5p对A549细胞的影响：过表达miR-424-5p可以显著促进A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力，而敲低miR-424-5p则具有相反的效果。
4. 调节机制：通过荧光素酶报告实验等手段，我们发现miR-424-5p通过调控其靶基因的表达，进而影响A549细胞的生物学行为。
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》范文
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一摘要：本文通过实验研究，探讨了miR-342-5p在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系A549和H460中的表达情况及其潜在作用机制。
通过生物信息学分析、细胞实验及分子生物学手段，我们发现miR-342-5p的表达与NSCLC的恶性程度和肿瘤发展密切相关，并通过对其调节途径的研究，揭示了其潜在的抗肿瘤作用机制。
一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型之一，其发病率和死亡率均居高不下。
近年来，随着分子生物学技术的发展，越来越多的研究表明微小RNA（miRNA）在肺癌的发病机制中扮演重要角色。
miR-342-5p作为一种具有重要生物活性的miRNA，其在NSCLC中的具体作用及调节机制尚不明确。
因此，本研究旨在探讨miR-342-5p在NSCLC细胞系A549和H460中的表达及其潜在作用机制。
二、材料与方法1. 材料本实验采用非小细胞肺癌细胞系A549和H460，以及相应的正常肺组织细胞作为对照。
实验所使用的试剂和仪器均为分子生物学实验常用设备。
2. 方法（1）生物信息学分析：通过数据库检索miR-342-5p的相关信息，分析其在NSCLC中的表达情况及潜在作用机制。
（2）细胞实验：通过qRT-PCR技术检测A549和H460细胞中miR-342-5p的表达水平。
（3）分子生物学手段：通过构建过表达和敲低miR-342-5p 的细胞模型，研究其对细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响。
三、结果1. miR-342-5p在NSCLC细胞系中的表达通过qRT-PCR实验发现，与非正常肺组织细胞相比，miR-342-5p在NSCLC细胞系A549和H460中的表达水平显著升高。
2. miR-342-5p对NSCLC细胞生物学行为的影响（1）过表达miR-342-5p的A549和H460细胞增殖能力减弱，凋亡率增加。
抑制miR-21-5p表达通过靶向FOXP2调控肺癌细胞增殖和凋亡
殖情况 ２５％胰蛋白酶消化肺癌细胞，调整细胞浓 度为 ２×１０４个 ／ｍｌ，接种于 ６孔板中，分别转染 ｍｉＲ ２１５ｐｍｉｍｉｃ、ａｎｔｉｍｉＲ２１５ｐ、ｐｃＤＮＡＦＯＸＰ２及 其 阴 性序 列 或 共 转 染 ａｎｔｉｍｉＲ２１５ｐ、ｓｉＦＯＸＰ２；转 染 ４８ｈ后弃去旧培养基，加入 ＭＴＴ２０μｌ混匀，培养 ４ｈ；然 后 每 孔 加 ＤＭＳＯ 溶 液 １００μｌ混 匀，培 养 １５ｍｉｎ；采用酶标仪检测吸光值，每组 ３个复孔。 １２７ 流式细胞仪检测细胞凋亡 转染后 Ａ５４９ 细胞培 养 ４８ ｈ后，弃 去 培 养 基，磷 酸 盐 缓 冲 液 （ＰＢＳ）清洗 ２次；加入 ５００μｌ１×结合缓冲液，５μｌ ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ，避光孵育 １５ｍｉｎ；加入 ２５μｌＰＩ， 孵育 ５ｍｉｎ，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 １３ 统计学方法 采用 ＳＰＳＳ２２０软件进行 ｔ检 验、单因素方差分析。
崔艳红等 抑制 ｍｉＲ２１５ｐ表达通过靶向 ＦＯＸＰ２调控肺癌细胞增殖和凋亡 第 １４期
·３０７３·
２ｍｉｎ，９５℃ １５ｓ，６０℃ ２０ｓ，７２℃ ２０ｓ，共 ４０个循环； 反应体系为 ２０μｌ：２×ＳＹＢＲＭｉｘ１０μｌ，上下游引物各 ０５μｌ，１０×ｃＤＮＡ模板 １μｌ，Ｈ２Ｏ８μｌ。引物序列： ｍｉＲ２１５ｐ：正义链 ５′ＧＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＧＡＧＧＴ３′，反 义 链 ５′ＧＣＣＧＣＴＡＧＣＴＴＡＴＣＡＧＡＣＴＧＡＴＧＴ３′；Ｕ６： 正义链 ５′ＣＴＣＧＴＴＣＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣＣＴ３′，反义链 ５′ ＴＣＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣＧＴ３′；ＦＯＸＰ２：正义链 ５′ＧＧＴＣＡＴ ＧＡＣＣＣＣＴＧＡＴＴＡＧＧ３′， 反 义 链 ５′ＡＧＴＣ ＣＴＣＴＡＧＡＧＧＣＴＴＣＡＴ３′；βａｃｔｉｎ：正 义 链 ５′ＣＡＧ ＣＧＡＣＡＣ ＣＣＡ ＣＴＣ ＣＴＣ３′，反 义 链 ５′ＴＧＡ ＧＧＴ ＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴ３′。分别以 Ｕ６、βａｃｔｉｎ为 ｍｉＲ ２１５ｐ、ＦＯＸＰ２的内参基因计算相对表达量。 １２３ Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测蛋白表达情况 肺癌细胞 株以 ５×１０４ 个 ／ｍｌ接种于 ６孔板中贴壁培养 ２４ｈ， 收集细胞，ＲＩＰＡ裂 解 液 冰 上 裂 解 ５ｍｉｎ提 取 总 蛋 白，测定总蛋白浓度，蛋白与样品缓冲液混合后煮沸 ５ｍｉｎ变性蛋 白；１０％ 十 二 烷 基 硫 酸 钠聚 丙 烯 酰 胺 凝胶电 泳 （ＳＤＳＰＡＧＥ）跑 胶，转 膜 至 聚 偏 氟 乙 烯 （ＰＶＤＦ）膜，５％脱脂奶封闭 １５ｈ；一抗 ４℃孵育过 夜，ＴＢＳＴ清洗 ３次 ／５ｍｉｎ；稀释二抗室温孵育 １ｈ， ＴＢＳＴ清洗 ３次／５ｍｉｎ；ＥＣＬ显影液显影，ＧＩＳ凝胶成像 仪采集图片，以 ＧＡＰＤＨ为内参计算蛋白表达水平。 １２４ 双荧光素酶实验检测 ｍｉＲ２１５ｐ对 ＦＯＸＰ２ 的影响 扩增 ＦＯＸＰ２基因的转录本 ３′ＵＴＲ，构建野 生型 ＦＯＸＰ２３′ＵＴＲ（ＷＴｐＧＬ３ＦＯＸＰ２３′ＵＴＲ）质粒； 采用定点突变技术，将 ３′ＵＴＲ上的与 ｍｉＲＮＡ结合 的核心区域突变构建突变型 ＦＯＸＰ２３′ＵＴＲ（ＭＵＴ ｐＧＬ３ＦＯＸＰ２３′ＵＴＲ）质粒；将两种质粒分别转染至 肺癌细胞，转染 ４８ｈ后检测荧光强度。 １２５ 细胞转染 转染前 ２４ｈ将细胞接种于 ２４ 孔板中，使细胞贴壁密度约 ８０％。设计并合成 ｍｉＲ ２１５ｐｍｉｍｉｃ、ａｎｔｉｍｉＲ２１５ｐ及 其 对 应 阴 性 序 列，使 用 ｌｉｐ２０００将合成序列分别转染肺癌细胞，空白对照 （ＮＣ）组不做任何处理，无血清 ＤＭＥＭ 培养 ６ｈ，换 完全培养基培养 １８ｈ后进行功能试验，并继续培养 筛选稳定低表达 ｍｉＲ２１５ｐ的细胞株。
miR_214对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响
肺癌是对人类生命威胁最大的恶性肿瘤之一。
早期研究表明在部分人类癌症发病机制中MicroRNA(miRNA)的改变可能参与调控[1]。
小分子RNA(miRNAs)是一种内源性的单链非编码RNA，成熟miRNA主要通过与靶基因的3UTR区特异结合来抑制靶基因的转录和翻译过程，引起靶基因mRNA发生降解或翻译受到抑制，进而发挥其生物学功能[2]。
miRNA被认为在多种细胞过程中发挥关键作用如扩散、生长、分化与细胞凋亡[3,4]。
近年来越来越多的研究发现miRNA在乳腺癌、 胃癌、直肠癌及白血病等许多恶性肿瘤的发生过程起着癌基因及抑癌基因作用。
但对于miRNA在肺癌发病机制中的作用还知之甚少[5]。
本研究构建了miR-214的真核表达载体，并将其转染人肺癌A549细胞，以探讨其对A549细胞增殖和侵袭能力的影响。
1材料和方法1.1 细胞培养和转染 人肺腺癌细胞株A549，用含有10%新生牛血清，100 U/ml的青霉素和100 U/ml 的链霉素的DMEM培养液在37℃、5%CO 2饱和湿度条件下培养。
当细胞生长至对数生长期后，按照lipo2000(Invitrogen公司)说明书的方法进行转染。
细胞转染48h后进行后续相关实验。
1.2 Real-time PCR 用Trizol(Invitrogen公司)提取细胞总RNA后反转录为cDNA(Takara)。
miR-214的反转录引物为5′-GTC GTA TCC AGT GCA GGG TCC GAG GTA TTC GCA CTG GAT ACG ACA CTG CC-3′；real-time PCR引物序列：上游引物5′- GGA CAG CAG GCA CAG ACA-3′，下游引物5′- CAG TGC AGG GTC CGA GGT-3′。
以U6为内参，反转录引物序列为5′-GTC GTA TCC AGT GCA GGG TCC GAG GTA TTC GCA CTG GAT ACG ACA AAA TAT GGA AC-3′；real-time PCR引物序列：上游引物作者简介：林述琨(1958-)，男，本科，主治医师，主要从事病理诊断工作，E-mail：ling-tong-sheng@通讯作者：温吉海(1966-)，男，本科，主任医师，肺外科主任，副院长，主要从事肺外科工作，E-mail：wen-jihai@The effects of miR-214 on proliferation and invasion abilities of lung cancer cell line A549ｍｉＲ－２１４对人肺癌Ａ５４９细胞增殖和侵袭能力的影响林述琨1 王耀鹏1 温吉海21.大连，普兰店市中心医院病理科；2.普兰店市中心医院肺外科中图分类号 R735.1 文献标识码 A 文章编号 1672-2809(2012)36-0031-04 LIN Shu-tun 1，WANG Yao-peng 1，WEN Ji-hai 21.Department of Pathology,Pulandian central hospital,Da lian 116200,China；2.Department of Thoracic Surgery,Pulandian central hospital,Da lian 116200,China[摘要] 目的：通过构建miR-214的真核表达载体，研究其对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》范文
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型之一，具有高发病率和高死亡率的特点。
近年来，随着分子生物学和基因组学研究的深入，microRNA（miRNA）在肿瘤发生、发展及转移过程中的作用逐渐受到关注。
miR-342-5p作为一种重要的miRNA，在多种肿瘤细胞中表现出调控作用。
本研究旨在探讨miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节机制，为非小细胞肺癌的治疗提供新的思路和方法。
二、研究方法1. 实验材料本研究选用非小细胞肺癌细胞系A549和H460作为研究对象，同时使用miR-342-5p的模拟物和抑制剂进行实验。
2. 实验方法（1）通过生物信息学方法预测miR-342-5p的靶基因；（2）利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测A549和H460细胞中miR-342-5p的表达水平；（3）通过过表达和敲低miR-342-5p，观察其对A549和H460细胞增殖、迁移和侵袭的影响；（4）利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-342-5p与预测靶基因的结合情况；（5）通过Western blot检测靶基因在蛋白水平的表达变化。
三、实验结果1. miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的表达情况通过RT-qPCR实验发现，与非癌肺组织相比，miR-342-5p 在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的表达水平显著降低。
2. miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞系A549和H460的影响（1）过表达miR-342-5p可抑制A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭；（2）敲低miR-342-5p可促进A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭。
3. miR-342-5p的靶基因验证通过生物信息学方法预测及实验验证，发现miR-342-5p可与某靶基因的3'UTR区域结合，且过表达miR-342-5p可显著降低该靶基因在A549和H460细胞中的表达水平。