金银花提取液抗氧化酶活性与清除自由基能力的研究

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activity from Lonicera japonica Thunb in Chongqing
表5金银花酶活性与清除自由基能力之间的相关性 Table 5 The correlatand scavenging capacities on free radicals of onicera japonica Thunb
万方数据
中国食品学报
2007年第2期
氮兰四唑(NBT)50%为1个酶活性单位121。 2.3过氧化物酶(POD)活性的测定
称取样品后。加入0.05 mol/L pH 7.8的磷酸 缓冲液,在冰浴中研磨成匀浆后定容至4 mL,离 心20 min,取上清液用愈创木酚法测定嘲。 2.4过氧化氢酶(CAT)活性的测定
样品加无水CaCO,和少量去离子水研磨成匀 浆后转移至刻度试管中,定容至10 mL,过滤后稀 释10倍得到样液。采用碘量法测定过氧化氢酶活 性闱。
2.5 O。清除率的测定阎 参照Beauchamp等的方法.在5 mL反应液
中,VB2的浓度为30xlO。6 mol/L,甲硫氨酸浓度为 lxl0’2 mol/L。在25℃、光照20 min条件下,VB2即
定其对超氧自由基(O,)、羟自由基(·一OH)和H20: 的清除效应。 2.2超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
取样后置于预冷的研钵中.加入少量的石英 砂及10 mL 0.05 mol/L pH 7.8的磷酸缓冲液。在 冰浴上研磨成匀浆,全部转入离心管中,离心,上 清液为酶液。供SOD活性测定用。加入适当酶液 后。在25℃、4 000 k光照下反应15 rain后立即终 止光照。用分光光度计在560Ilm波长下比色,得 消光值(OD)。以照光、不加酶液(用等量缓冲液替 代)的反应体系为对照,以不照光、不加酶液(以等 量缓冲液替代)的反应体系为参比,用抑制光还原
因光化反应产生O,,然后在此体系中加入氮兰四 唑(NBT),使浓度达到lxl04 mol/L。光照VB2产生
的O,能将NBT还原为蓝色的产物,以不光照的试 液作校正。在560 nm处测得其吸光度A。可表示
O,的含量,加入提取物后能清除O,,抑制NBT的
还原,测得其吸光度A,。A“,表示O,的减少量, 则清除率的计算公式:
SOD、POD和CAT普遍存在于动植物体内。 SOD是1种含金属离子(Cu—Zn、Fe或Mn)的保护 酶.它的主要功能是催化超氧物阴离子自由基发 生的歧化反应.从而消除超氧自由基对细胞的损 害.在维护细胞活性氧代谢的平衡中起重要作用。 H202的清除需要依赖CAT和POD两种保护酶的 共同作用。只有SOD、POD、CAT三者协调一致,才 能使生物体内活性氧、自由基维持在较低的水平, 使生物进行正常的生长和代谢[71。本试验表明。金 银花花蕾、叶片和枝条的膜保护酶及对自由基清 除能力随金银花采收期的不同而变化(见表2、表 4),其中花蕾的清除自由基能力最好(见表3)。金 银花清除自由基能力从4月开始逐步上升.在5
关键词金银花酶活性 自由基清除能力 生物化学 文章编号1009—7848(2007)02--0027-06
有研究表明,自由基系统与人类健康、衰老以 及疾病的发生密切相关。人类的多种疾病都可由 自由基及其代谢物诱发和加重。随着对自由基与 疾病关系研究的不断深入,对抗氧化剂的研究,特 别是在植物中寻找清除自由基有效药物的研究已 引起科学家们的广泛重视。
万方数据
第7卷第2期
金银花提取液抗氧化酶活性与清除自由基能力的研究
31
70 60
翊50 !ig 40 爱30 u
20 10 0
y=0.1423x+20.061 R2=0A463
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趟50 l}g 40
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u 20 10 0
,,=0.3969x+25.135 R2=0A387
SOD活性
图2重庆市金银花SOD活性与CAT活性相关性分析
3西南大学资环学院 重庆400617)
摘要为研究金银花不同采收期和不同部位提取液膜保护酶的活性与清除自由基的能力,采用生物化学分析 法测定了不同采集期金银花花蕾、叶片和枝条膜保护酶活性,结果显示。SOD、POD和CAT活性从4月开始平稳 上升。6月上旬前后迭到最高值。叶片的上述指标最高,枝条最低。对自由基的清除能力也呈平稳上升趋势。金 银花花蕾对超氧自由基和羟自由基的清除效应最高。花蕾和叶片对过氧化氢清除效应相当,枝条的最低。几种 膜保护酶活性之间均呈较显著的正相关。当膜保护酶活性增强时,清除自由基的能力也随之提高,可能是它们 的协调作用使金银花有较强的清除自由基的能力。
金银花是我国公布的食药兼用的植物之一, 具有清热解毒、疏风通络的功效。近年来,已有研 究表明金银花提取液具有抗氧化和清除自由基活 性作用口1。本文采用生物化学分析法研究了不同采 收期金银花提取液的抗氧化酶活性以及清除自由 基的能力.为寻找和筛选自由基清除剂以及金银 花综合利用提供参考。
1材料与仪器 1.1试验材料
从几种膜保护酶活性与自由基清除能力的相 关性分析来看,均呈较显著相关(见表5)。4月到 6月期间,当几种膜保护酶活性增强时。清除自由
SOD活性
图1 重庆市金银花SOD活性与POD活性相关性分析 Fig.1 Correlative analysis of POD and SOD
activity from Lonicera japonica Thunb in Chongqing
清除率=型岩半x100%=瓮x100%
2.7 H202清除率的测定悯 在碘量瓶中加入一定量的样品和pH 3.0的
柠檬酸缓冲液,加入定量的蒸馏水和1.0 mL 0.1
mol/L H202。于37℃恒温水浴反应20 min后取 出,加入lO%KI与2 mol/L磷酸反应。用标准的 Na2S20,滴定剩余的12。H20:清除率的计算公式:
清除率(%):善1二》×100% y1一y 0
体积其(m中L),;y广y厂一样阳品性对液照消(耗H2N02a):消S耗20N3a的2S2体03积的 (mL);yr阴性对照(空白)消耗Na2S20,的体
积(mL)ts。
3结果与讨论 3.1 不同采收期金银花膜保护酶活性
不同地点、不同采集期金银花花蕾、叶片和枝 条的SOD、POD和CAT的活性见表1、表2。试验 结果表明,采收时间不同,SOD、POD和CAT的活 性也不同。不论是从金银花花蕾的膜保护酶活性 变化。还是从花蕾、叶片和枝条的膜保护酶活性变 化的平均值来看,从4月开始金银花花蕾、叶片和 枝条的膜保护酶活性平稳上升并维持到6月上旬 前后(枝条的膜保护酶活性在5月中旬达到最高 值)。从4月下旬开始直到6月中旬,叶片的膜保 护酶活性最高,枝条最低,花蕾居中。叶片的SOD 和CAT活性平均值分别是192.3 Izmol/(g·rain)和 54.267 p。mol/(g·min)。分别是花蕾的120%和 146%,枝条的255%和209%。叶片的POD活性略 低于花蕾,为花蕾的92.7%,枝条的219%。 3.2不同采收期金银花对几种自由基的清除能 力
基的能力也随之提高。
4结论 本试验结果显示金银花花蕾、叶片和枝条中
的SOD、POD和CAT的活性变化与清除自由基能
力密切相关,均达到显著和较显著相关。叶片中的
SOD、POD和CAT活性高于花蕾,但对02和·一OH 基的清除效应却低于花蕾,对H20:的清除效应与 花蕾相当。金银花膜保护酶与内源性抗氧化剂组 成、比例及其它酶的作用机理还需进一步研究。
表2重庆市不同地区金银花不同采收期膜保护酶活性平均值(单位:13·矿) Table 2 Average activity of membrane protecting enzyme of Lonicera japonica Thunb from different harvest time
and;area8 in Chongqing(Unit:U·g-1)
第7卷第2期 2 0 0 7年4月
中国食品学报
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technolog)r
V01.7 No.2 Apr.2 0 0 7
金银花提取液抗氧化酶活性与清除自由基能力的研究
兰 华· 高 丹2 申 鸿, 陈宗道1 (1西南大学食品科学学院 重庆400617 2重庆市第一人民医院重庆400015
Eg.2 Correlative analysis of SOD and CTA
activity from Lonicera japonica Thunb in Chongqing
POD活性
图3重庆市金银花POD活性与CAT活性相关性分析 Fig.3 Correlative analysis of POD and CTA
from different harvest times and areas in Chongqing(Unit:%)
3.3膜保护酶活性与自由基清除能力的相关性 分析
重庆市金银花花蕾、叶片和枝条的膜保护酶 活性都是从4月开始平稳上升维持到6月上旬前 后。从SOD、POD和CAT活性相关性分析可以看 出。几种膜保护酶活性之间均呈较显著的正相关。 可能是它们的协调作用使金银花具有较强的清除 自由基的能力(见图l一图3)。
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中国食品学报
2007年第2期
表4重庆市不同地区金银花不同采收期自由基清除效应平均值I单位:%) Talbe 4 Average value of the scavenging capacities on tree radicals of Lonicera japonica Thunb
表1 重庆市不同地区金银花花蕾不同采收期膜保护酶活性(单位:U·旷)
Table 1 The activity of membrane protecting enzyme in the Flower bud of Lonicera japonica Thunb from different harvest time and al陀a8 in chongqing(unit:u·g-1)