耐药结核病诊断新技术

Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用杨俊勇发布时间：2023-06-07T08:36:43.698Z 来源：《中国医学人文》2023年5期作者：杨俊勇[导读] 探讨Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌（MTB）快速检测及利福平耐药检测在黔东南州16县（市）的应用价值，旨在为后续肺结核的诊断与治疗提供指导。

方法：收集我中心结核病实验室2022年1月至10月共1367份检测样本进行Xpert MTB/RIF检测，分析Xpert MTB/RIF法检测的敏感性和特异性。

将1367份培养阳性样本进行分枝杆菌菌群鉴定和药物敏感性试验，评价Xpert MTB/RIF法检测MTB及其对利福平耐药的敏感性和特异性。

结果：MTB检出1323份，MTB未检出44份，RFP耐药基因检出87份；XpertMTB/RIF耐药位点以Probe E为主。

结论：Xpert MTB/RIF技术可快速检测MTB及其对利福平的耐药性，敏感性和特异性较好，具有较高的临床应用价值。

黔东南州疾病预防控制中心贵州黔东南 556000摘要：目的：探讨Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌（MTB）快速检测及利福平耐药检测在黔东南州16县（市）的应用价值，旨在为后续肺结核的诊断与治疗提供指导。

方法：收集我中心结核病实验室2022年1月至10月共1367份检测样本进行Xpert MTB/RIF检测，分析Xpert MTB/RIF法检测的敏感性和特异性。

将1367份培养阳性样本进行分枝杆菌菌群鉴定和药物敏感性试验，评价Xpert MTB/RIF法检测MTB及其对利福平耐药的敏感性和特异性。

结果：MTB检出1323份，MTB未检出44份，RFP耐药基因检出87份；XpertMTB/RIF耐药位点以Probe E为主。

结论：Xpert MTB/RIF技术可快速检测MTB及其对利福平的耐药性，敏感性和特异性较好，具有较高的临床应用价值。

结核病的实验室诊断方法及评价耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。

耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。

因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。

1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。

其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。

2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。

3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。

基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。

多种以PCR 为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。

这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。

由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。

Xperi MTB/RIF对结核菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点的分析高春景杨洋阚宗卫成松魏素梅胡凯【摘要】目的分析Xpert MTB/RIL检测对结核分枝杆菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点。

方法回顾分析2012年、月至2022年2月期间来院就诊患者相同标本，同时进行了结核分枝杆菌培养及药敏试验和Xpert MTB/RIL检测，且任一种方法检出MTB。

结果用Xpert MTB/RIL及培养药敏两种方法检测标本共7659例,Xpert MTB/RIL对MTB的检出率高，且有统计学意义(P<245)。

两种方法同时检出MTB3271例,Xpert MTB/RIL检出利福平耐药262例，培养药敏检出利福平耐药238例;两种方法检测利福平耐药的一致率为99.41%;采用Kappa检验，两种方法的检测结果完全符合。

RR-DB探针突变的频率为E探针63.37%、D探针20.07%、B探针&03%、A探针4.53%、C探针280%、联合探针突变2.88%；以培养药敏结果为利福平耐药的金标准,Xpert无探针突变组利福平耐药的准确性要明显低于有探针突变组;初治和复治病例探针突变频率差异有统计学意义。

结论Xpert MTB/RIL检测可以快速有效的诊断利福平耐药结核，有助于早发现、早治疗。

利福平耐药结核探针突变主要发生在E探针和D探针,C探针突变最少。

【关键词】结核分枝杆菌;Xpert MTB/RIL；耐药;rpod突变Diaanostic value of Xpert MTB/RIF assty t PUmpicin resistancc of Mycybacterinm thbercylosit and analy-sit of rpoB geee mutation chal'actePshctGAO Chun-jing,YANG Yang,KAN Zong-pji,CHENG Song,WEI Su-mni,HU KiDepartmeni of TubeTculosP,Xuzhon Igections Disease Hospitnl,Xuzhon,Jiangsp221004,Chinn【Abstract]Objective To analyze the diayzostic value of Xpert MTB/RIL assay for rdampiciz resistance of Mycodactedum tuUerchlosis and the characteristics of rpoB yeze muta/ou.Methods Retpspective analysis was per­formed ox the same samples of pa/eots aUmi—eX to the hospimi from January227to Juze2022who were simultane-oasly tested for mycodactePum tuberchlosis cylture and drua seosi—vity test and Xpert MTB/RIF assay.At the sametime, MTB was positiveeither of the two methods.Resultt A total of7659samples were UetectedXpert MTB/ RIB and mycodactePum tuPepylosis cylture.Xpert MTB,/RIB assay hak a high detectiou rate of MTB,and the yetec-tiou rate was smCsCca/u significant(P<4.45).A total of3271cases o f MTB were detectedthe two methods,262cases were rdampiciz resistantXpert MTB/RIF assas,and238rdampiciz resistant cases were detectedcylture drup seosiCvim•The coizcideoce rate of rdampiciz psistazce Uetected b,two methods was99.41%.Kappatest was used,and the test results of the two methods were completely cousisteot.The muta/ou frepueocy of pphe ofRR-DB were:pphe E63.37%,pphe D20.19%,pphe B8.03%,pphe A4.53%,pphe C4.80%,and combi­za/ou pphe2.38%.Taking cylture drup seosi—v—y as the-old standard of rdampiciz psistazce ,rdampiciz resist­ance accrmcy of the Xpert pphe free muta/ou-ppp was signi—caney lower than that of the pphe mutatiou-ppp.There was sm/stica/u significazt diRerezce iz the fpqueocy of pphe muta/ou betweez pPmarg and secondary Weat-meot cases.Conclusion Xpert MTB/RIF assy,is a rapib and effective method for the diayzosis of Pfampiciz resist­ant tuPemylosis,which is helpful for early U eWcWou and Weatmeo-.The muta/ous of rdampiciz resistazt TB pphesare mainly foavd at pphe E and pphe D,while the muW/ou of pphe C is the least-【Key words]MycodactePum tuPepylosis；Xpert MTB/RIL；drup psistazce；rpoB mutatiou目前，耐多药结核病(Muiedrup-resistadi tuber-cylosis,MDR-DB)和利福平耐药结核病(Rifampicin-dg：17.3979/j.imn.1757-6693.2521.55.517作者单位：221776江苏徐州,徐州市传染病医院结核科通信作者:胡凯,E-mail:5oolrain215@ resistant iuPercymsis,RR-DB)仍然是全球结核病控制工作所面临的严峻问题。

Xpert摘要】目的应用结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF）对肺外结核患者的非呼吸系统标本中的MTB及其RIF耐药性进行检测，探讨该方法在肺外结核病诊断中的应用价值，为临床上的应用提供参考。

方法鸡西市传染病医院感染结核二科2017年12月至2018年12月的肺外结核病临床诊断患者171例采集所有非呼吸系统标本，脓液、穿刺液和尿便标本50份，脑脊液及胸腹水标本121份，脓液、穿刺液和尿便进行涂片镜检、结核菌固体培养，对培养阳性的标本进行传统药敏检测，脑脊液及胸腹水只给予常规生化检测，所有标本进行Xpert MTB/RIF 检测,分析该方法与传统涂片、固体培养在不同标本检测结核菌的阳性率，及在浆膜腔积液、脑脊液中的病原检出率。

结果与传统涂片镜检和固体培养对比, Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的敏感度显著高于涂片镜检和固体培养，并且该技术检测结核菌及利福平耐药结果报告时间(2 h)比固体培养大大缩短(6～8周)，在穿刺液、脓液、粪便及尿液中Xpert MTB/RIF检测具有明显优势。

结论 Xpert MTB/RIF检测穿刺液、脓液、粪便及尿液中的MTB灵敏度、特异度均较高，而对于浆膜腔积液及脑脊液并不具优势，但其快速、可检测RIF耐药的优点能为临床肺外结核的诊疗提供帮助。

【关键词】肺外结核；结核分枝杆菌／利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert MTB/RIF）；结核病是威胁人类健康的疾病之一，据世界卫生组织估计，2016年全球约167万例死于结核病，其中肺外结核占10％～42％，由于肺外结核临床症状不典型、临床标本不易获得且含菌量较少，使诊断较为困难。

近年来，结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF）作为核酸检测的一种，已有大量临床研究。

该技术自应用以来已逐步证实了其对肺结核的诊断价值，显示出了较高的敏感性和特异性。

1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。

1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。

目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。

1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。

扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。

目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。

目前在国内区县级应用评估。

1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。

直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。

夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。

夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。

1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。

同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。

2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。

虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。

2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。

结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析快速准确地诊断出结核分枝杆菌感染是控制和治疗结核病的前提和关键。

多年来，结核杆菌的诊断技术在不断地发展和创新，近年来，一些针对结核杆菌检测的新方法陆续被报道，一些新型的诊断技术产品也陆续上市。

本资料综述了结核杆菌的主要诊断方法，并对目前国际市场上广泛应用的商业化诊断技术产品进行了简要分析。

标签：结核分枝杆菌；诊断技术；分析Advance in diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis and analysis of new diagnostic technologies and products in clinical applicationFENG?Meimei1??SU?Wenqin21.Haikou VTI Biological Institute,Haikou 570311,China;2.Department of Pharmacy,Hainan Medical College,Haikou 571199,China[Abstract] Fast and accurate diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection is the key and prerequisite to control and treatment tuberculosis.For many years,the diagnostic techniques of Mycobacterium tuberculosis have been developing and innovating.In recent years,some new techniques for Mycobacterium tuberculosis detection were reported and some new diagnostic products have been listed.This paper reviewed the main diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis,and analysed briefly the commercialized diagnostic products which are used widely in the international market now.[Key words] Mycobacterium tuberculosis;Diagnosis;Analysis结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，以肺结核最多见。

2024结核性脑膜炎诊断新技术的现状与进展（全文）摘要结核性脑膜炎是由结核分枝杆菌引起的中枢神经系统感染性疾病，其临床表现缺乏特异性，而传统病原学对其诊断效率较低，易导致延误诊断和治疗、影响患者预后，因此早期快速的病原学诊断对结核性脑膜炎的诊治至关重要。

文中对近年来出现的可用千诊断结核性脑膜炎的新型检测技术进行综述，主要分为核酸检测方法、代谢组学和蛋白组学3个方面，并在此基础上对未来发展作出展望。

结核性脑膜炎(tuberculous meningitis, TBM)是由结核分枝杆菌(M ycobacterium tuberculosis, Mtb)感染引起的脑脊膜非化脓性炎性疾病，是结核病中最致命的肺外结核病型。

尽管接受了抗结核治疗，TBM患者的病死率仍超过30%[ 1 ] 。

在合并人类免疫缺陷病毒(human i mmunodeficiency v irus, HIV)感染的TBM患者中病死率接近40%，而合并HIV感染的耐药TBM患者病死率可高达100%[ 2 ]。

TBM患者能否得到早期的诊断和及时的治疗是影响预后的关键因素[ 3 ] 。

但TBM的临床表现多样且缺乏特异性，难以通过临床表现和脑脊液常规生化等参数与其他病原菌引起的脑膜炎进行鉴别[4, 5 ]。

此外，TBM患者脑脊液中Mtb的载量通常较低，这对TBM的病原学诊断提出了极大的挑战[6, 7 J。

因此，在临床上应用和普及快速有效、特异性强、敏感度高的M t b及其耐药性检测方法，对TB M诊疗效率的提高至关重要[ 8 ] 。

在传统的病原学检测方法中，抗酸染色廉价、快速、简单易实施，但敏感度欠佳，无法检出低菌载矗样本中的病原体[9' 10 ]；尽管后来提出的改良抗酸染色能够使细胞内外的M t b同时在镜下呈现，增加了对脑脊液样本中M t b的检出率，但通过染色镜检无法区别M t b与非结核分枝杆菌，且无法提供病原菌的耐药信息[ 10, 11, 12]。

线性探针技术和传统基因检测技术在耐药结核病诊断中的可靠性和及时性对比韩珍;林日文;骆妙卡【摘要】目的：探讨线性探针(MTBDR plus)技术和传统基因检测技术在耐药结核病诊断中的可靠性和及时性。

方法同时采用MTBDR plus技术、核酸扩增检测技术和传统药敏实验方法对2014年1月至10月期间我院收治的246例涂阳肺结核患者的痰标本进行利福平和异烟肼耐药性的检测。

以传统药敏实验检测结果为金标准，分析MTBDR plus技术和核酸扩增检测技术诊断耐药结核病的准确性，并比较MTBDR plus技术和核酸扩增出报告时间。

结果 MTBDR plus技术检测所得利福平耐药结核病发生率、异烟肼耐药结核病发生率和耐多药结核病发生率分别为5.28%、7.32%和3.66%，和传统药敏实验检测所得的5.69%、6.91%和3.66%比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

核酸扩增检测技术检测所得利福平耐药结核病发生率、异烟肼耐药结核病发生率和耐多药结核病发生率则均低于传统药敏实验检测所得结果，差异有统计学意义(P<0.05)。

MTBDR plus技术检测利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的敏感度、Kappa值均高于核酸扩增检测技术，差异有统计学意义(P<0.05)。

MTBDR plus技术平均出报告时间为(1.26±0.58)d，显著低于核酸扩增的时间(8.89±1.08)d，差异有统计学意义(P<0.05)。

结论线性探针技术较传统基因检测技术可更及时、准确地诊断耐药结核病。

%Objective To study the reliability and timeliness of linear probe technique (MTBDR plus) and traditional genetic testing technique (TGTT) in diagnosing drug-resistant tuberculosis (TB). Methods MTBDR plus, nucleic acid amplification testing technique and traditional drug susceptibility experiment (TDSE) method were used at the same time in the rifampicin and isoniazid resistancetesting of sputum specimens of 246 smear-positive pulmonary tuberculosis patients in our hospital from January, 2014 to October, 2014. Taken the TDSE test results as the gold standard to analyze the accuracy of MTBDR plus and TGTT diagnosing drug-resistant TB and compare their report time. Results The incidence of Rifampin resistant TB, isoniazid resistant TB and mul-tidrug resistant TB tested by MTBDR plus technique were 5.28%, 7.32%and 3.66%, respectively, which had no statistical signifi-cance compared with the incidence tested by TDSE that were 5.69%, 6.91% and 3.66%, respectively (P>0.05). The incidence of Rifampin resistant TB, isoniazid resistant TB and multidrug resistant TB tested by TGTT lower than by TDSE, and the difference had statistically significant (P<0.05). The accuracy and Kappa value of diagnosing Rifampin resistance TB, isoniazid resistance TB and multi-drug resistance TB by MTBDR plus was higher than TGTT, and the difference had statistically significant (P<0.05). The average r eport time of MTBDR plus was (1.26±0.58) d, which was significantly less than (8.89±1.08) d of TGTT, and the difference had statistically significant (P<0.05). Conclusions Compared with the TGTT, MTBDR plus technique can more timely and accu-rately diagnose drug-resistant TB.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】4页(P150-153)【关键词】线性探针技术;传统基因检测技术;耐药结核病;诊断;可靠性;及时性【作者】韩珍;林日文;骆妙卡【作者单位】惠州市结核病防治研究所，广东惠州516008;惠州市结核病防治研究所，广东惠州516008;惠州市结核病防治研究所，广东惠州516008【正文语种】中文【中图分类】R52;R446.62结核病(Tuberculosis，TB)是可造成人类死亡的常见感染性疾病，是全球公共卫生面临的重大威胁[1]。

实时PCR探针熔解曲线技术在检查耐多药结核的临床应用价值探讨摘要】目的研究实时PCR探针熔解曲线技术在检查耐多药结核的临床应用方法，并与传统的结核菌培养及药敏试验作对比分析，从而得出其应用价值评价。

方法回顾性分析我科2012年1月至2016年4月收治的50例耐多药结核病人的药敏检查结果。

51例病人均做了实时PCR探针熔解曲线技术的药敏试验，其中11例病人还同时作了传统的结核菌培养及药敏试验。

以结核菌培养及药敏试验作为金标准，并对两种检查方法作对比分析，得出其应用价值评价。

结果耐INH、RFP、EMB、SM、OFX共12例，耐INH、RFP共21例，耐INH、RFP、EMB共15例、单耐INH者2例，单耐RFP者1例。

11例作两种检测方法的药敏结果符合率为97.22%。

结论实时PCR探针熔解曲线技术可快速、灵敏、特异检测结核耐药。

【关键词】结核杆菌；耐药；PCR；探针熔解曲线技术Real time PCR probe melting technology in multi drug resistant tuberculosis in the clinical value of examinationIANG Tai, YANG Ren-huiThe Third Affiliated Hospital of Guizhou Medical University in Guizhou Province, Tuyun City: 558004[Abstract]ObjectiveTo study real-time PCR probe melting curves in check resistantmulti drug tuberculosis clinical application method, and the results were comparedwith the traditional bacterial culture and drug sensitivity test, then draws a conclusion that the application of value evaluation.Methodsthe results of drug sensitivity test in50 patients with multi drug resistant tuberculosis were retrospectively analyzed in our department from January 2012 to April 2016. 51 patients per capita do the drug sensitivity test of real-time PCR probe melting curves, which 11 patients also for the traditional bacterial culture and drug sensitivity test. To bacterial culture and drug sensitive test was used as the gold standard and on the two kinds of inspection methods as comparative analysis, it is concluded that the application of value evaluation. Resultsresistant to INH, RFP, EMB, SM, OFX a total of 12 cases, 21 cases of INH, RFP,, INH, RFP, EMB a total of 15 cases, 2 cases of single INH, 1 cases of single resistant RFP cases. The results of drug sensitivity test of 11 cases were 97.22% and two. Conclusionreal time PCR probe melting curve technology is fast, sensitive and specific detection of drug resistant tuberculosis.[Key words] Mycobacterium tuberculosis; drug resistance; PCR; probe melting technology【中图分类号】R473 【文献标识码】A 【文章编号】2096-0867（2016）08-145-022010年全世界新发肺结核880万，每年死亡约300万人；我国结核病发病人数约130万，每年约死亡25万人。