百度文库 - 让每个人平等地提升自我
1 实验三 蛋白质颜色反应及沉淀反应
一、目的
1、掌握鉴定蛋白质的原理及方法。
2、熟悉蛋白质的沉淀反应。
3、进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、原理
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸种类不同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。
三、实验器材
1、鸡蛋白 2、试管 3、吸管 4、滴管 5、水浴锅等
四、实验试剂
1、卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释20-40倍，2-3层纱布过滤，滤液冷藏备用。
2、%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml。
3、10%氢氧化钠溶液：10g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至100ml。
4、浓硝酸：比重。
5、1%硫酸铜溶液：硫酸铜1g溶于蒸馏水，稀释至100ml。
6、饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100ml加硫酸铵至饱和。
7、95%乙醇。
8、结晶氯化钠。
9、1%醋酸铅：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。
10、饱和苦味酸溶液。
11、1%醋酸溶液：冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml。
五、操作
1、颜色反应：
A、双缩脲反应：蛋白质分子中含有肽键，与两分子尿素经过加热形成的双缩脲的结构相似，能与硫酸铜结合成红紫色的络合物。
取一支试管，加蛋白质溶液10滴，再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色。
B、黄色反应：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸。遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物。 百度文库 - 让每个人平等地提升自我
2 于一试管中加蛋白质溶液10滴及浓硝酸3-4滴，加热，冷却后再加10%NaOH溶液5滴，观察颜色变化。
精美文档 1 实验 蛋白质的沉淀反应与颜色反应
一、实验目的
掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理
蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器
1、吸管 2、滴管 3、试管 4、电炉 5、pH试纸 6、水浴锅7、移液管
四、实验试剂
1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、 0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
精美文档 2 3、Millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。
4、尿素晶体
5、1%CuSO4：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml
6、10%NaOH：10g NaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml
7、浓硝酸
8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.
9、 冰醋酸
10、浓硫酸
11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml
15、氯化钠晶体
16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml
个人收集整理-ZQ
1 / 3 实验三 蛋白质颜色反应及沉淀反应
一、目地
、掌握鉴定蛋白质地原理及方法.
、熟悉蛋白质地沉淀反应.
、进一步掌握蛋白质地有关性质.
二、原理
蛋白质分子中地某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定地颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸种类不同，颜色反应亦不同.颜色反应不是蛋白质地专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同地颜色反应，因此不能仅根据颜色反应地结果决定被测物质是否是蛋白质.颜色反应是一些常用地蛋白质定量测定地依据.b5E2R。
多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解地盐后，即产生沉淀.
三、实验器材
、鸡蛋白 、试管 、吸管 、滴管 、水浴锅等
四、实验试剂
、卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释倍，层纱布过滤，滤液冷藏备用.
、茚三酮溶液：茚三酮溶于乙醇并稀释至.
、氢氧化钠溶液：氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至.
、浓硝酸：比重.
、硫酸铜溶液：硫酸铜溶于蒸馏水，稀释至.
、饱和硫酸铵溶液：蒸馏水加硫酸铵至饱和.
、乙醇.
、结晶氯化钠.
、醋酸铅：醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至.
、饱和苦味酸溶液.
、醋酸溶液：冰醋酸用蒸馏水稀释至.
五、操作
、颜色反应：
、双缩脲反应：蛋白质分子中含有肽键，与两分子尿素经过加热形成地双缩脲地结构相似，能与硫酸铜结合成红紫色地络合物.p1Ean。
取一支试管，加蛋白质溶液滴，再加溶液滴及溶液滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色.
、黄色反应：蛋白质分子中含有苯环结构地氨基酸.遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色地硝苯衍生物.DXDiT。
于一试管中加蛋白质溶液滴及浓硝酸滴，加热，冷却后再加溶液滴，观察颜色变化. 个人收集整理-ZQ
2 / 3 、茚三酮反应：蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色地还原茚三酮、茚三酮和氨地缩合物.此反应为一切蛋白质及α氨基酸所共有.含有氨基地其他物质亦呈此反应.RTCrp。
1 实验三 蛋白质的颜色反应和沉淀反应
一、目的：
1.熟悉蛋白质的沉淀反应、颜色反应及其机理。
二、原理：
(一)蛋白质的颜色反应原理
蛋白质分子中的某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
(二)蛋白质的沉淀反应原理
蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如—NH3+，—COO-，—SH，—CONH2等和水有高度亲和性，当蛋白质与水相遇时，就很容易被蛋白质吸住，在蛋白质颗粒外面形成一层水膜(又称水化层)。水膜的存在使蛋白颗粒相互隔开，颗粒之间不会碰撞而聚成大颗粒。因此蛋白质在溶液中比较稳定而不会沉淀。蛋白质能形成较稳定的亲水胶体的另一个原因，是因为蛋白质颗粒在非等电状态时带有相同电荷，使蛋白质颗粒之间相互排斥，保持一定距离，不致相互凝集沉淀。
蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。当某些物理化学因素破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。
三、仪器、试剂和材料
1. 卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释20～40倍，2～3层纱布过滤，滤液冷藏备用。
2. 饱和硫酸铵溶液：称硫酸铵850g 加于1000mL 蒸馏水中，在70～80℃下搅拌促溶，室温中放置过夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸铵溶液。
3. 1%醋酸铅溶液
4. 1%硫酸铜溶液
5. 0.1%茚三酮溶液：0.1g 茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100mL。
6. 浓硝酸：比重1.42。
7.试管及试管架、吸管、量筒、布氏漏斗。 2
四、操作步骤
(一)蛋白质的沉淀反应
1.盐析作用：取1支试管加入3mL 蛋白质氯化钠溶液和3mL 饱和硫酸铵溶液，混匀，静置约10min，球蛋白则沉淀析出。过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解达到饱和为止，析出的沉淀为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。
