荧光显微镜 倒置荧光显微镜

倒置相差显微镜及荧光显微镜的使用摘要：倒置相差显微镜是相差显微镜与倒置显微镜的结合，能够在倒置的情况下观察到普通显微镜所不能清楚的观察的活细胞和未经染色的生物标本，在细胞培养、显微操作技术等方面有了广泛的应用。

荧光显微镜利用物质激发产生的微弱的荧光形成明亮的观察图像，在生物学以及医学的许多领域已经成为一种不可替代的观察和测试手段，能够精确的对生物标本中的特定组分、微量荧光染料进行分析研究。

关键词：倒置相差显微镜、荧光显微镜、使用1.倒置相差显微镜及荧光显微镜的工作原理1.1倒置相差显微镜的工作原理在显微镜下镜检时，视场中的样品只有在反射光的波长（颜色）和振幅（亮度）与周围介质有变化时，方能窥见被检样品。

活的样品多为无色透明，照明光线通过这种物体时，透过或反射光的波长和振幅都不发生改变，所以用普通光学显微镜难以辨清活体的结构。

必须借助于固定和染色等理化方法，使样品和背景的反射或透射光在波长和振幅上发生变化，即在颜色和亮度上有所差异，以供识别。

相差方法应用于生物学上的主要价值，在于它能对透明的活体进行直接观察，无需采用使细胞致死的固定和染色的方法。

染色合活体以有害的影响，甚至失真。

由此，才使相差法显得异常重要。

1.2 荧光显微镜的工作原理荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光，激发检测标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，通过物镜和目镜系统的放大以观察标本的荧光图像的光学显微镜，是医学检验中的重要仪器之一。

2.倒置相差显微镜及荧光显微镜的结构2.1 倒置相差显微镜的结构倒置相差显微镜是相差显微镜与倒置显微镜的结合，即具有倒置显微镜的倒置观察方式与同相差显微镜相一致的成像原理。

倒置相差显微镜的照明系统位于镜体上方，而物镜和目镜则位于下部。

这样在集光器和载物台之间有较大的工作距离，可以放置培养皿、细胞培养瓶等容器，辅助以相差的光学系统，可以很方便地对培养中的细胞进行观察。

leica dmi8倒置荧光显微镜工作原理
Leica DMI8倒置荧光显微镜工作原理基于倒置的光路径设计，通过逆向放大观察样品。

具体工作原理如下：
1. 光源：Leica DMI8倒置荧光显微镜通常采用激光或者弧光
灯作为光源。

光线通过光源进入显微镜系统。

2. 激发光源与滤光片：激发光源产生的光通过滤光片进行过滤。

滤光片选择能够激发样品荧光的波长，而过滤其他多余的光线。

3. 物镜：经过滤光片后的光线进入物镜。

物镜有不同的倍数，可以放大样品。

光在物镜中被聚焦，形成一个局部的高强度光点。

4. 分光镜：经过物镜后的光线进入分光镜。

分光镜表面涂有特殊的薄膜，将激发光和荧光信号分开。

激发光线被反射到目镜或相机，荧光信号则透过分光镜射向样品。

5. 样品：样品通常是放置在一个液体培养皿或者玻璃底片上。

荧光染料标记的生物标本或者细胞，会在激发光的作用下发出荧光信号。

6. 荧光信号：样品中的荧光染料吸收激发光子，高能激发光子的能量会导致荧光染料的电子跃迁到一个高能态，当电子回到基态时，会释放出激光波长较长的荧光信号。

7. 探测荧光信号：荧光信号通过目镜或者相机进行观察和记录。

荧光信号的特点可以提供有关样品的信息，如位置、结构和代谢活性等。

通过上述步骤，Leica DMI8倒置荧光显微镜能够通过荧光信
号对样品进行观察和分析。

倒置荧光显微镜使用方法(一)倒置荧光显微镜使用方法简介倒置荧光显微镜是一种常用于细胞、组织等生物样品观察的显微镜。

其特点是将物镜和光源的位置倒置，使得观察样品更加方便。

下面将介绍几种常见的倒置荧光显微镜使用方法。

方法一：样品准备1.在无菌条件下，将生物样品移植到培养皿或载玻片中。

2.样品可以是活细胞，也可以是固定的组织切片等。

3.如果需要染色，可以根据实验需求选择适当的荧光染料。

方法二：显微镜设置1.将倒置显微镜放在实验台上，并确保显微镜的稳定性。

2.打开显微镜电源，待显微镜系统启动后进行下一步操作。

3.调整光源，使得荧光光源均匀而明亮。

4.根据实验需求选择适当的滤光片，用于选择荧光发射波长。

方法三：样品装载1.将培养皿或载玻片放置在显微镜的样品台上。

2.使用目镜观察样品并调整焦距，确保样品清晰可见。

3.根据样品大小和形状进行显微镜调焦，以获得最佳的观察效果。

4.确保样品和显微镜的镜头之间没有空气或污染物，以避免影响观察结果。

方法四：荧光观察1.使用目镜观察样品后，可以使用显微镜的荧光通道进行观察。

2.打开荧光激发光源，调整光强度适当，避免过度曝光或低信号。

3.使用适当的荧光滤光片，选择要观察的荧光波长范围。

4.使用气体扩散器或其他方法降低样品温度，以减少荧光褪色和光损伤。

方法五：图像处理与分析1.使用相机或图像采集系统，记录荧光显微镜观察的图像。

2.可以使用图像处理软件进行曝光、对比度、亮度等调整，以优化图像质量。

3.利用图像分析软件进行细胞大小、数量、定量荧光信号等参数的测量和分析。

方法六：清洁与维护1.每次使用完成后，及时关闭荧光光源和显微镜电源。

2.用干净的纸巾或棉签轻轻擦拭显微镜的镜头和其他表面。

3.定期检查显微镜的各个部件，如镜头、滤光片、光源等，若有问题及时修理或更换。

以上是倒置荧光显微镜的使用方法，希望对您的实验有所帮助。

请根据实际需求进行调整和适配，并注意实验的安全性和准确性。

正置倒置荧光显微镜原理及操作步骤
荧光显微镜是一种特殊的显微镜，它利用荧光现象来观察样品。

它的原理和操作步骤如下：
原理：
1. 荧光显微镜使用紫外光激发样品中的荧光物质，使其发射可见光。

2. 样品中的荧光物质吸收紫外光后，其中的电子被激发到高能级，随后返回基态时会放出能量，即发射荧光。

3. 荧光显微镜通过滤光片选择性地过滤激发光和荧光，从而增强对荧光信号的观察。

操作步骤：
1. 准备样品：确保样品中含有发射荧光的物质。

如果需要观察细胞或组织样品，可以使用荧光染料或标记物来标记目标结构或生物分子。

2. 打开荧光显微镜：打开显微镜电源，并将荧光灯打开。

调节荧光灯的亮度适合观察。

3. 安装样品：将样品放置在显微镜的载物台上，并用固定装置固定样品。

确保样品与目标物镜的工作距离适当。

4. 调节目标物镜：使用低倍或中倍物镜来定位样品，然后切换到高倍或油浸物镜以获得更高的放大倍率。

调节焦距和聚焦，使样品清晰可见。

5. 选择滤光片：根据所使用的荧光染料或标记物的特性，选
择合适的滤光片来过滤激发光和荧光信号。

这可以增强观察的对比度和清晰度。

6. 观察和记录：通过目镜或连接电脑的摄像头观察样品。

可以使用不同的荧光通道来观察多个标记物质。

记录所观察到的图像或视频。

需要注意的是，操作荧光显微镜需要具备一定的实验室技巧和基础知识，以确保正确的操作和解释观察到的结果。

2.物镜3.总放大倍数4.聚光镜：特长工作距离聚光镜（带相衬装置）：工作距离75mm；5.大台面载物台：移动范围: 75mm×50mm；6.带限位和调节松紧装置的同轴粗微动调焦系统；微动手轮格值为: 0.002mm；7.瞳距调节范围：53mm~75mm；8.照明系统:A.透射照明光源12V30W卤素灯（亮度可调）；B.落射荧光光源100W超高压直流汞灯；9. 电源电压：110V（60Hz）或230V（50Hz）10.激发滤色片组：紫外光(UV)：激发光谱区域：330-400nm；可见荧光起始光谱：425nm.紫光(V)：激发光谱区域：395-415nm；可见荧光起始光谱：455nm.蓝光(B)：激发光谱区域：420-485nm；可见荧光起始光谱：515nm.绿光(G)：激发光谱区域：460-550nm；可见荧光起始光谱：590nm.二、显微镜结构图一1.倒置灯箱2.汞灯灯箱3.移动机构4.纵向移动手轮5.横向移动手轮6.电源开关7调节松紧手轮8移动机构固紧螺钉9.载物台10.目镜11.挡板图二12.滤色片座13.三目头14.主体15粗动调焦手轮16.微动调焦手轮17.亮度旋钮18.激发滤色片组19.物镜20.汞灯灯箱固紧螺钉21.集光镜22.左右对中旋钮23上下对中旋钮24.相衬装置显微镜的安装图三1.物镜2.汞灯电源箱3.汞灯灯箱4.倒置灯箱5.相衬聚光镜组6.挡板7.三目头8.目镜四、显微镜观察操作按照图3所示安装所需组件，检查仪器工作电压是否与本地区的电网电压一致时，便可把电源插头插入电源插座。

Ⅰ．倒置观察的操作步骤1. 将电源开关9拨向“I”一边，接通电源（图1）。

2. 将激发滤色片组27拉出（图2）3. 将标本放在载物台13上，10×物镜转入工作位置，对标本调焦。

4. 调节瞳距和视度。

5. 调节聚光镜的位置、亮度调节旋钮10和孔径光栏调节转环39，以达到满意的照明状态。

倒置荧光显微镜使用方法1. 简介倒置荧光显微镜是一种特殊的显微镜，与传统显微镜不同的是，它将物镜和光源进行了倒置。

这种设计使得倒置荧光显微镜非常适合观察生物样品、细胞培养和活体成像等应用。

在本文中，我们将全面介绍倒置荧光显微镜的使用方法，包括准备工作、样品处理、操作步骤以及注意事项。

希望能够帮助读者更好地理解和运用倒置荧光显微镜。

2. 准备工作在开始使用倒置荧光显微镜之前，需要进行一些准备工作。

2.1 检查设备首先要确保倒置荧光显微镜的各个部件都处于正常工作状态。

检查目标物镜、滤光片、滤波器和荧光探针等配件是否齐全，并检查是否有任何损坏或污染。

2.2 清洁工作台清洁工作台是进行样品处理和操作的地方，必须保持干净整洁。

使用无菌纸巾和适当的清洁剂擦拭工作台面，确保没有灰尘或杂质。

2.3 准备试样根据实验需求，准备好需要观察的生物样品。

根据不同的实验目的，可以是细胞培养物、组织切片或者荧光标记的分子。

3. 样品处理在观察样品之前，可能需要进行一些样品处理步骤。

3.1 固定和染色对于细胞培养物或组织切片，通常需要先进行固定和染色。

固定可以保持样品的形态结构，染色可以使特定结构或分子可见。

选择合适的固定剂（如甲醛）将样品固定，并根据实验要求选择合适的荧光染料进行染色。

注意避免使用与荧光显微镜滤波器不匹配的染料。

3.2 荧光标记如果需要观察特定分子或结构，可以使用荧光探针对其进行标记。

选择合适的探针并按照说明书进行标记步骤。

4. 操作步骤在准备好样品后，可以开始使用倒置荧光显微镜进行观察。

4.1 打开显微镜将倒置荧光显微镜放置在稳定的台面上，并插入电源线。

打开电源开关，等待一段时间，直到显微镜完全启动。

4.2 调整镜头调整目标物镜和眼镜的位置，使其与视野对齐。

使用焦距调节旋钮或者移动台面，使样品处于焦点位置。

4.3 切换光源和滤光片根据实验需要，选择合适的光源和滤光片。

通常情况下，荧光显微镜使用紫外线或蓝绿光作为激发光源，并通过滤光片选择特定波长的荧光发射信号。

荧光显微镜技术参数一、倒置荧光显微镜（用于常规细胞培养观察、支原体荧光染色等实验）用途：可观察细胞培养及荧光标记的观察，用于研究工作。

技术参数：1、光学系统：UIS2无限远校正光学系统。

2、调焦机构：通过物镜转盘的上下移动进行调焦（载物台高度固定）；备有聚焦机构同轴粗、微调旋钮，旋钮扭矩可调，由滚柱机构导向；总行程量为从比载物台面高1mm的焦点起算向上7mm、向下2mm；粗调行程每一圈为≥39.6mm，微调行程每一圈为≤0.2mm。

*3、照明系统：新型LED长寿命照明系统，使用寿命≥20000小时。

4、聚光镜：可拆装的超长工作距离聚光镜（数值孔径为0.3，工作距离为72mm）。

5、物镜转盘：固定式4孔物镜转换器*6、物镜齐焦距离≤45mm*7、物镜：万能平场半复消色差相差物镜：4x(数值孔径0.13，工作距离17mm)万能平场半复消色差相差物镜：10x(数值孔径0.3，工作距离10mm)长工作距离平场半复消色差相差物镜：20x(数值孔径0.45，工作距离6.6-7.8mm)40x(数值孔径0.6，工作距离3.0-4.2mm)*8、载物台：高硬度陶瓷表面机械载物台，备有右手用低位置同轴X、Y向传动旋钮，200mm （长）×252（宽）mm,无需更换适配器，适用多种细胞培养板，培养瓶，96孔板等，载物台拥有x/y刻度，可实现孔板定位操作。

*9、观察镜筒：宽视野三目观察筒，镜筒倾角为45°，瞳距可在48-75mm范围内进行调节，屈光度可调节，视场数为22，分光比为观察100%：0%；0%：100%；*10、目镜：10X，带眼罩，视场数≥22；*11、ipc相差系统：无需调节相差环即可实现10X-20X的相差观察，方便实验操作*12、激发块转盘≥3孔，无需拆卸可更换激发块,内置光闸,防水设计;?13、荧光照明器:直型荧光照明臂;带视场光阑。

14、荧光光源:100 W APO 等级汞灯光源?15、激发块:荧光激发块的干涉膜采用了新型UW 超宽谱带多层镀膜技术,激发带宽(BP)以及荧光带宽(BA)比传统谱线缩短了6nm, 独特的光吸收涂层可吸收99%以上的杂散光,信噪比更进一步得到提高。

倒置荧光显微镜的原理倒置荧光显微镜是一种常用于生物学研究的显微镜，其原理是利用荧光物质对特定波长的光进行吸收后发出的荧光信号来观察样品。

相对于传统的正立显微镜，倒置荧光显微镜具有更大的工作距离和深度，适用于观察厚度较大的样品或三维细胞培养。

倒置荧光显微镜的构造与正立显微镜有所不同。

它的光学系由凹透镜、凹透镜、过渡镜和目镜组成。

样品被放置在显微镜的下方，光线通过凹透镜透射到样品上方，然后由目镜观察。

这种布局使得样品可以直接放置在培养皿、培养瓶或光学盖玻片上，方便地观察细胞培养、组织切片和活体显微镜的实验等。

倒置荧光显微镜的关键原理是荧光物质的激发和发射。

荧光物质是一类在特定波长的激发光下吸收能量并向高能级跃迁，然后通过非辐射跃迁的方式释放出低能级的光子的化合物。

荧光物质通常具有特定的激发波长和特征的发射光谱。

这种特性使得荧光物质可以被用来标记特定的生物分子或结构，并通过显微镜观察。

在倒置荧光显微镜中，激发光从灯源通过滤光片和凸透镜聚焦到样品上方。

被标记的样品经过适当的处理后，荧光物质会吸收激发光并发出发射光。

这些发射光通过物镜的凹透镜透射后经过过渡镜，再从目镜观察。

过渡镜的作用是将发射光和激发光进行分离，以避免激发光进入目镜。

同时，通过选择合适的滤光片，只有发射光可以通过，从而进一步加强图像的对比度和清晰度。

倒置荧光显微镜还具有荧光激发区域广、检测极限低、对光线入射角不敏感等优点。

由于光线入射于样品下方，所以样品的厚度对观察结果的影响较小。

这也使得倒置荧光显微镜特别适合观察厚度较大的样品，如多层细胞、培养组织和活体标本。

此外，倒置荧光显微镜还广泛应用于细胞培养、细胞动力学研究、组织工程和生物物理学等领域。

总之，倒置荧光显微镜利用荧光物质的激发和发射原理来观察特定标记的样品。

通过合适的激发光源、滤光片和过渡镜，可以将发射光和激发光进行分离，从而获得清晰的荧光显微图片。

倒置荧光显微镜具有工作距离长、适用于厚度较大的样品以及对光线入射角不敏感等特点，是生物学研究中常用的显微镜。

倒置荧光显微镜使用流程及注意事项倒置荧光显微镜是一种用于研究生物细胞和组织的高级显微镜。

下面是关于倒置荧光显微镜使用流程及注意事项的10条详细描述：1. 准备样本：在使用倒置荧光显微镜之前，您需要准备好待观察的生物样本。

根据您的研究目的，将样本固定、染色、清洁并转移到易于观察的载物上。

2. 打开显微镜：将倒置荧光显微镜放在平稳的工作台上，并插上电源线。

打开电源开关，同时打开镜头底部的白光源开关。

3. 调整照明：使用镜头底部的可调节照明装置，调整荧光显微镜的照明强度。

确保照明充足，但不会损害样本。

4. 安装镜头：根据您的研究需求，选择合适的镜头并安装到镜头握架上。

确保镜头固定在正确的位置，并确保调节环顺利工作。

5. 校准照明通道：根据您使用的荧光染料的光谱特性，选择正确的滤光片或激发光源，并将其安装在照明通道中。

这将有助于仅激活您感兴趣的染料。

6. 调整焦点：使用荧光显微镜底部的焦点旋钮调整样本的焦距。

将样本调整到最清晰的观察状态。

7. 调节荧光强度：使用显微镜上的荧光滤光片或光强调节装置，调节荧光显微镜的荧光强度。

确保光强足够以激发和检测荧光信号，但不能过强以导致样本破坏。

8. 观察与记录：通过荧光显微镜的目镜观察样本，确保样本在荧光显微镜的视野范围内。

您可以使用相机或软件记录您感兴趣的图像，以备日后分析和报告使用。

9. 清理和保养：在使用完荧光显微镜之后，关闭电源开关，并将滤光片和激发光源取下。

用干净的柔软布轻轻擦拭荧光显微镜的各个部件，保持其清洁和良好状态。

10. 注意事项：在使用倒置荧光显微镜时，您应注意以下事项：避免长时间持续使用荧光显微镜，以避免样本受损。

避免直接触摸显微镜的物体表面，以防指纹污染样本。

谨慎处理染料，以免接触到皮肤或被误吞食。

在工作台上放置显微镜时，确保表面平稳和牢固。

定期对荧光显微镜进行维护和保养，以确保其正常工作和延长使用寿命。

这些关于倒置荧光显微镜使用流程及注意事项的详细描述将帮助您正确地操作和保养这种高级显微镜装置，以获得准确和清晰的观察结果。

倒置荧光显微镜使用方法简介倒置荧光显微镜是一种特殊的显微镜，常用于生物学、细胞学和医学研究中。

与传统的直立显微镜不同，倒置荧光显微镜的物镜和光源被颠倒放置，使得观察样本更加方便。

本文将详细介绍倒置荧光显微镜的使用方法。

准备工作在开始使用倒置荧光显微镜之前，需要进行一些准备工作：1.清洁工作台：确保工作台干净整洁，避免灰尘和杂物对实验结果的影响。

2.样本制备：根据实验需求制备好待观察的样本。

可以是细胞培养物、组织切片等。

3.荧光染料：根据实验需求选择合适的荧光染料，用于标记待观察的结构或分子。

步骤1. 打开显微镜将倒置荧光显微镜放在清洁的工作台上，并轻轻打开仪器。

确保所有部件都处于正常工作状态。

2. 样本安装将样本安装到显微镜的载物台上。

使用载玻片夹固定样本，确保样本稳定且不会移动。

3. 调节荧光滤光片倒置荧光显微镜使用荧光染料来标记待观察的结构或分子。

在观察之前，需要根据使用的荧光染料调节滤光片。

1.选择正确的激发滤光片：根据荧光染料的激发波长选择对应的滤光片。

通常，显微镜附带了一组滤光片，可以根据需要更换。

2.安装激发滤光片：将激发滤光片安装到显微镜中。

确保滤光片正确对齐，并紧固固定螺丝。

3.调节透射镜筒：通过旋转透射镜筒，调节透射光的强度。

确保透射光与荧光染料激发波长相匹配。

4. 调节目镜和物镜1.调节目镜：通过调节目镜的高度和焦距，使得样本的图像清晰可见。

可以使用显微镜上的焦距调节轮来实现。

2.选择合适的物镜：根据对样本的放大需求，选择合适倍数的物镜。

倒置荧光显微镜通常配备多个物镜，可以根据需要进行更换。

5. 调节荧光滤光器在观察荧光信号之前，需要正确调节荧光滤光器。

1.选择正确的发射滤光片：根据荧光染料的发射波长选择对应的滤光片。

通常，显微镜附带了一组滤光片，可以根据需要更换。

2.安装发射滤光片：将发射滤光片安装到显微镜中。

确保滤光片正确对齐，并紧固固定螺丝。

6. 观察样本通过目镜观察样本是否清晰，如果不清晰可以通过调节目镜或物镜来改善。