HA-4741资料

第２８卷第５期　２０１０年１０月　实　验　与　检　验　医　学　ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ　ＡＮＤ　ＬＡＢ０ＲＡＴ０ＲＹ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　．４４３・　

ＶｏＩ＿２８　Ｎｏ．５　０ｅｔ．２０１０　

・论著・　

ＥＧＦ—ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０重组毒素的构建、表达及其意义　

高峰，赵眷，陈亚军　

（江苏省中医院检验科，江苏南京２１００２９）　

摘要：目的构建人表皮生长因－￣（ＥＧＦ）一柔性连接肽（１ｉｎｋｅｒ）一铜绿假单胞菌外毒素活性片段（ＰＥ４０）重组毒素的表达载体并诱导　表达．以探索其成为治疗肿瘤新型靶向药物的可能性。方法用ＰＣＲ技术扩增出ＥＧＦ和ＰＥ４０基因，通过引物设计在两者之　间加上１９个中性氨基酸短肽ｆｆＳ一（Ｇ４Ｓ）３一ＡＣ）的ｌｉｎｋｅｒ编码序列、克隆ＰＣＲ产物，并构建ｐＥＴ２２ｂ（＋）一ＥＧＦ—ｌｉｎｋｅｒ—ＰＥ４０表达质　粒，将其转化Ｅ．ｃｏｌｉ　ＢＬ２１（ＤＥ３）后，诱导表达，ＳＤＳ—ＰＡＧＥ及凝胶薄层扫描分析ＥＧＦ—ｌｉｎｋｅｒ—ＰＥ４０重组毒素的表达情况。结果　ＥＧＦ—ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０重组毒素在ＢＬ２１（ＤＥ３１中可溶性表达．目的蛋白占细胞总蛋白的１８％左右。结论应用基因工程技术，成功　地构建了重组毒素ＥＧＦ—ｌｉｎｋｅｒ—ＰＥ４０的表达载体．并得到高效可溶性表达．为进一步研究其结构功能关系和肿瘤临床应用奠　定了基础。　关键词：表皮生长因子；铜绿假单胞菌；外毒素；重组　中图分类号Ｒ７３４．２．Ｑ７８６　文献标识码Ａ　文章编号１６４７—１　１２９（２０１０１０５—０４４３—０４　ｌ　；　Ｑ：　鱼　，ｊ！　ｓ　塾！！鱼：！　＝！１　：至　！　！Ｑ　！　ｌ　Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＥＧＦ－ｌｉｎｋｅｒ－ＰＥ４０　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ＧＡ　０　Ｆｅｎｇ，ＺＨＡ　０　Ｃｈｕｎ，ＣＨＥＮ　Ｙａ－　凡．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　Ｎａｎｊｉｎｇ　

CA3130 高输入阻抗运算放大器 Intersil[DA TA]

CA3140 高输入阻抗运算放大器

CD4573 四可编程运算放大器 MC14573

ICL7650 斩波稳零放大器

LF347(NS[DATA]) 带宽四运算放大器 KA347

LF351 BI-FET 单运算放大器 NS[DA TA]

LF353 BI-FET 双运算放大器 NS[DA TA]

LF356 BI-FET 单运算放大器 NS[DA TA]

LF357 BI-FET 单运算放大器 NS[DA TA]

LF398 采样保持放大器 NS[DATA]

LF411 BI-FET 单运算放大器 NS[DATA]

LF412 BI-FET 双运放大器 NS[DA TA]

LM124 低功耗四运算放大器 ( 军用档 ) NS[DATA]/TI[DATA]

LM1458 双运算放大器 NS[DATA]

LM148 四运算放大器 NS[DATA]

LM224J 低功耗四运算放大器 (工业档 ) NS[DATA]/TI[DA TA]

LM2902 四运算放大器 NS[DATA]/TI[DATA]

LM2904 双运放大器 NS[DATA]/TI[DA TA]

LM301 运算放大器 NS[DATA]

LM308 运算放大器 NS[DATA]

LM308H 运算放大器（金属封装） NS[DATA]

LM318 高速运算放大器 NS[DATA]

LM324(NS[DATA]) 四运算放大器 HA17324,/LM324N(TI)

LM348 四运算放大器 NS[DATA]

LM358 NS[DATA] 通用型双运算放大器 HA17358/LM358P(TI)

LM380 音频功率放大器 NS[DATA]

LM386-1 NS[DATA] 音频放大器 NJM386D,UTC386

・英语学习・　

英语会话及医院常用词汇　

胰岛素的用药指导　

ＩｎｓｔｒｕｃｔｉＯｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｉｎｓｕｌｉｎ　

背景：　

张女士，６６岁，有２型糖尿病史１２年，长期服用达美　

康、美迪康、消渴丸等降糖药物治疗。近一年来血糖控制一　

直不理想，空腹血糖１２～１３　ｍｍｏｌ／Ｌ，餐后血糖ｌ７～ｌ８　

ｍｍｏｌ／Ｉ　。近阶段出现视物模糊、双下肢麻木症状。由于药　

物控制不佳，医生要求她住院改用胰岛素治疗。但护士小　

周了解到患者有顾虑，不愿意接受胰岛素治疗。在阅读了　

这位病人的病历资料，计划了教育内容后来到病人床边。　

Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：　

Ｐａｔｉｅｎｔ　Ｍｓ．Ｚｈａｎｇ，６　６　ｙｅａｒｓ　ｏｌｄ　ｗｉｔｈ　ｌ　２　ｙｅａｒｓ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　

２　ｄｉａｂｅｔｅｓ，ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｔａｋｉｎｇ　Ｄｉａｍｉｃｒｏｎ，Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ　ａｎｄ　Ｘｉ—　

ａｏＫｅ　ｅｔｃ．ｔｏ　ｌｏｗｅｒ　ｈｅｒ　ｂｌｏｏｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｌｅｖｅ１．Ｈｅｒ　ｂｌｏｏｄ　ｇｌｕ　

ｃｏｓｅ　ｗａｓ　ｐｏｏｒｌｙ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｓｔ　ｙｅａｒ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｆａｓｔｉｎｇ　

ｂｌｏｏｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｒａｎｇｅｄ　１２～１３ｍｍｏｌ／Ｌ，ａｎｄ　ＰＢＧ　ｒａｎｇｅｄ　ｂｅ—　

ｔｗｅｅｎ　１７～１８　ｍｍｏｌ／Ｌ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ｓｈｅ　ｉｓ　ａｌｓｏ　ｓｕｆｆｅｒｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｖｉｓｕａｌ　ｂｌｕｒｒｉｎｇ　ａｎｄ　ｌｏｗｅｒ　ｅｘｔｒｅｍｉｔｙ　ｎｕｍｂｎｅｓｓ．Ｂｅｃａｕｓｅ　ｔｈｅ　

ｕｎｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｂｙ　ｔｈｅ　ａｂｏｖｅ　ｍｅｎｔｉｏｎｅｄ　ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，ｔｈｅ　

ｐａｔｉｅｎｔ　ｗａｓ　ａｄｖｉｓｅｄ　ｔＯ　ｂｅ　ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚｅｄ　ｆｏｒ　Ｉｎｓｕｌｉｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．　

Ｎｕｒｓｅ　Ｚｈｏｕ　ｕｎｄｅｒｓｔｏｏｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐａｔｉｅｎｔ　ｈａｓ　ｓｏｍｅ　ｃｏｎｃｅｒｎｓ　

Novagen •ORDERING800-526-7319 •TECHNICALSUPPORT800-207-0144TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGC...315bp...CTGGCCGGTTCTGGTTCTGGCCATATGCACCATCATCATCATCATTCTTCTGGTCTGGTGCCACGCGGTTCT MetSer 105aa...LeuAlaGlySerGlySerGlyHisMetHisHisHisHisHisHisSerSerGlyLeuValProArgGlySerGGTATGAAAGAAACCGCTGCTGCTAAATTCGAACGCCAGCACATGGACAGCCCAGATCTGGGTACCGACGACGACGACAAGGlyMetLysGluThrAlaAlaAlaLysPheGluArgGlnHisMetAspSerProAspLeuGlyThrAspAspAspAspLysGCCATGGCTGATATCGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAAAlaMetAlaAspIleGlySerGluPheGluLeuArgArgGlnAlaCysGlyArgThrArgAlaProProProProProLeuArgSerGlyCysEndGCCATGGCGATATCGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAA pET-32b(+)AlaMetAlaIleSerAspProAsnSerSerSerValAspLysLeuAlaAlaAlaLeuGluHisHisHisHisHisHisEndGCCATGGGATATCTGTGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAA pET-32c(+)AlaMetGlyTyrLeuTrpIleArgIleArgAlaProSerThrSerLeuArgProHisSerSerThrThrThrThrThrThrGluIleArgLeuLeuThrCAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTG LysProGluArgLysLeuSerTrpLeuLeuProProLeuSerAsnAsnEndBamH IHind IIISac INco INot ISal IXho IEcoR IEcoR VAva IEag ITrx•TagT7 terminatorBpu1102 IT7 terminator primer #69337-3T7 promoterrbsXba IS•Tag primer #69945-3His•TagthrombinS•TagenterokinaseNsp Vlac operatorHis•TagMsc IKpn IBgl IIpET-32a(+)The pET-32 series is designed for cloning and high-level expression of peptide sequences fusedwith the 109aa Trx•Tag™ thioredoxin protein (1). Cloning sites are available for producing fusionproteins also containing cleavable His•Tag®and S•Tag™ sequences for detection and purification.Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 con-vention, so the T7 expression region is reversed on the circle map. The cloning/expression regionof the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is orientedso that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corre-sponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using theT7 terminator primer (Cat. No. 69337-3)Vallie, E.R., DiBlasio, E.A., Kovacic, S., Grant, K.L., Schendel, P.F. and McCoy, J.M. (1993) Bio/Technology11, 187–193.trxA (366-692)lacI (1171-2250)ori (3684)Ap (4445