真菌的常规检验法
实验室检查：
标本采集 分离培养
直接镜检 生化反应
染色镜检 免疫学试验
一、临床标本的采集
1．皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、头屑、皮屑等。
2．各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。
3．血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。
4．脓汁及渗出物。
二、检验方法
（一）标本直接检查法 不染色标本检查
染色标本检查
（二）培养检查
（三）鉴定
①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。
②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等）
③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。
④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。
微生物学检查步骤：
取患部标本 （毛发、皮屑等）__置载玻片__加10%NaOH（或10%KOH）→微加温消化
→镜检（观察菌丝和孢子）
直接镜检的意义
①有诊断意义，如浅部真菌病等；
②通过真菌的形态，可确定某些致病性真菌的属或种,
如假丝酵母菌的厚膜孢子等；
③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。
直接镜检的局限性：
①阴性结果不能排除真菌感染；
②有假阳性结果。
因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。
2. 染色标本检查
（1）革兰染色：各种真菌均染成革兰阳性。
（2）乳酸酚棉蓝染色 （3）糖原染色：
又称过碘Schiff（简称PAS或PASH）。真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有多糖。过碘酸使糖氧化成醛，再与品红－亚硫酸结合，成为红色，故菌体均染成红色。为真菌染色最常用的方法之一。
（4）嗜银染色（GMS）：染成黑色
学术探讨 噩 墨 黧 ； 矍 检查结果显示存在肺部浸润阴影等，应考虑可能存在真菌感染，并对患者进行 肺部病菌的排查监测工作，尤其是对于几种易发生感染的病菌，如白色念珠菌、 热带念珠菌、光滑念珠菌等，及时确定患者的感染病菌类型，并采用抗真菌治疗 的方式进行病情控制 当前在临床中常用肺部真菌感染治疗的药物有三唑类 和多烯类药物．这些药物对于真菌感染有很好的治疗效果。但是长期服用也会 造成剐作用，因此，应当在药物控制的基础上结合饮食调整，提高患者的免疫力。 良好的饮食搭配和护理工作可以有效降低肺部真菌感染的发病率，因此， 对于内科患者要进行良好的护理工作，减少真菌病源的接触，例如：为患者营造 良好的护理环境，保持室内温度和湿度的恒定，再者要定期进行消毒工作，避免 患者出现感染情况，对于治疗过程中的衣物、药品等及时的清除，保证环境的整 洁干净。最后要提升患者的免疫力，尤其是注意进行饮食的调整，多进食蛋白 质和水果，保证患者体内抗体的数量。 ４总结 总而言之，内科患者在治疗过程之中很容易出现真菌感染的状况，这和患
【中圈分类号】Ｒ８１４．４ 者长期服用激素类药物有一定的关系，同时患者免疫力的下降也是导致其肺部 感染的原因之一。因此，要加强内科患者的病情监控，对于长期服用糖皮质激 素、广谱抗生索、放化疗和营养不良的患者要重视肺部真菌感染的防治，同时要 加强真菌感染的诊断和治疗，及时使用抗真菌类药物控制感染，并提高护理水 平，保证患者的饮食搭配，提高患者的免疫力。 作者简介：沈一竟（１９８６．３一），女，汉族，籍贯：浙江东阳，执业医师，本科学 历，研究方向：妊娠期合并症防治。 参考文献 ［１］彭姝蓉．呼吸内科患者肺部真菌感染的临床研究［Ｊ］．医学检验，２０１４（３）． ［２］贺利荣．老年患者肺部真菌感染临床分析［Ｊ］．吉林医学，２０１０。３１（３１）． ［３］余卫林．呼吸内科患者肺部真菌感染的临床分析［Ｊ］．中国医学创新，２０１１，８ （１７）． 肺结核合并真菌感染病原菌检验 张屹立 （辽宁省丹东市结核病防治所辽宁丹东１１８０００） 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６３２—５２８１（２０１４）１２ 【摘要１目的：分析肺结挺合并真茵感染病原茵检验结果。方法：选取我院收治的肺结核合并真茵感染患者共７８例，对其呼吸遭样本经孵箱内培养后行鉴定 和检验。结果：本次研究共检查出５种真茸种群，其中３８株白假丝酵母茸，占４８．７％；１８株热带念珠茵，占２３．１％；１０株光滑念珠茼，占１２．８％；５例克柔念珠茼。 占６．４％；７林曲霉菌，占９％。结论：真茼培养是诊断肺结核合并真菌感染的重要方法之一，这对肺结核合并真茵感染的防治有着重要意义。 【关键词】肺结核、真茼感染、病原茼、检查 肺结核通常是由于结核菌从而导致的肺部感染性疾病０健康人群感染上 结核蘸后发病几率较小，通常为人体抵抗力下降后出现发病。结核患者典型的 表现为持续性低热、咳痰、胸痛以及咯血等表现。结核病具有易反复、难治愈和 病程长等特点，极有可能使患者出现二重感染。肺结核合并真菌感染的患者也 在呈现出上升趋势。为给临床合理用药提供依据，我院对肺结核合并真菌感染 病原菌检验进行了分析，现将报道如下。 １．一般资料与方法 １．１一般资料 选取２０ｌ０年８月一２０１３年１月期间，我院收治的肺结核合并真菌感染患者 共７８例，其中男４３例，女３５例，年龄３Ｏ一７Ｏ岁，平均年龄（６ｏ．３±２．１）岁。其 中包括２ｌ例胸膜炎、２０例冠心病、ｌ５例糖尿病、２２例基础病变。本次研究中所 有患者均在病情稳定后发生高热或低热情况；有部分患者病情加重，经ｃＴ扫描 以及ｘ线检查均发现患者胸部出现病灶区以及原有肺部病灶，同时出现肺结核 病恶化现象。在对患者下呼吸道样本培养过程中，生产出同种真菌群。 １．２方法 所有患者均在早晨漱口后咳深部痰，下呼吸道标本为痰液中黏稠部分，分 别接种于血平板、麦康凯和沙包培养，孵箱内温度为３５％，培养时间４８ｈ。将培 养出的可疑菌落进行涂片，同时经革兰染色后转种马铃薯蔗糖琼脂培养基以及 科马嘉念珠菌显色培养，根据《临床检验操作规程》中的相关要求进行菌种检验 和鉴定。 １．３统计学分析 本研究数据以ＳＰＳＳ１８．０软件进行分析，计量资料以（ｉ±ｓ）表示。比较以ｔ 检验；计数资料的比较经ｘ 检验，以Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。 ２．结果 本次研究共检查出５种真菌种群，其中３８株白假丝酵母菌，占４ Ｂ＿７％；１８ 株热带念珠茵，占２３．１％；１０株光滑念珠菌，占１２．８％；５例克柔念珠菌，占６． ４％；７株曲霉菌。占９％。见表１ 裹１真菌培养结果 ３讨论 真菌通常为条件致病菌，经常发生于慢性疾病，患者若是长时间使用免疫 抑制剂、激素以及应用细胞毒性药物以及抗生素等，同样可能发生于重症以及 衰竭的重症患者。该病由于发病隐秘，且鉴定技术要求较高。因此往往被医生 误诊。若是怀疑有肺真菌病，需要及时进行深部痰标本涂片找菌丝。张超英认 为涂片检查对培养出同一种菌有重要意义。结核分枝杆菌会通过患者的呼吸 道进行传播，有文献表明，全世界结核病患者共有９００万人左右。且正呈现出上 升趋势，而每年死于结核病的患者则高达２００万人，早已被医学界公认为威胁人 类生命健康的传染性疾病，在国内外也同样被引起了广泛关注。现如今，随着 我国广谱抗生索药物的滥用，结核病合并真菌感染的患者也在逐渐增多 ２，引 起肺结核合并真菌病的主要真菌包括曲霉菌以及念珠菌【 。本次研究中７８例 患者均被确诊为肺结核合并真菌感染，且对患者下呼吸道样本中的真菌类型进 行检查发现，绝大部分均以念珠菌为主。且以白假丝酵母均居多，占所有念珠菌 的４８．７％。白假丝酵母菌会通过分泌磷脂Ａ粘附到人体靶细胞中。从而使淋巴 细胞受到抑制，使机体免疫力降低，是主要致病菌之一【 。 通过对本次研究中的７８例患者进行研究发现，由于肺结核患者肺部早已出 现坏死以及空洞等生理病变，为真菌提供了生长环境，使患者在ＩＩ缶床上多为发 热，同时加重了病情。部分患者有使用广谱抗生素药物以及链霉素使用史，极有 可能被认为是单纯性结核分枝杆菌感染。所以，要想尽旱发现肺结核合并真菌 病，就应当对肺结核患者的下呼吸道样本进行及时涂片查找菌丝。同时对其进 行真菌培养，这对肺结核合并真菌感染的诊断以及治疗有着重要意义 ４。 参考文献 ［１］孔文红．肺结核合并真菌感染病原菌检验分析［Ｊ］．基层医学论坛，２０１２，３２： ４２９８—４２９９． ［２］罗秀珂．肺结核合并真菌感染患者的临床检验分析［Ｊ］．中国民族民间医药， ２０１３，０４：３８．１４８—１５１ ［３］孝丹．肺结核合并真茵病感染病原茵检验分析［Ｊ］．中国社区医师（医学专 业），２０１０，３２：１６６．２６５—２６８ ［４］马莺．肺结核合并肺真菌感染的护理［Ａ】．中国防痨协会．２０１１年中国防痨 协会全国学术会议论文集［ｃ］．中国防痨协会：，２０１１：２．１５６—１５９
真菌感染的常规检测方法
在生活中，真菌几乎无处不在。现今发现的真菌种类已有7万多种这些真菌对人体有利有弊，其弊端就是导致人体疾病，损害两大系统。一是皮肤系统，二是内脏系统。内脏系统主要指的是肺以及其他重要脏器。皮肤系统主要是皮肤会出现癣菌病，淋巴管感染等。既然真菌感染对人体伤害大，那么我们怎样来对其进行检测呢？本文主要介绍真菌感染的监测方法。
1.
标本的采集
不同真菌感染的临床标本采集是不同的，对于一些人体浅部的真菌感染可以采用采集毛发、皮肤等方式，在采集完标本之后，利用75%的医用酒精进行消毒；而一些深部感染，如真菌性胃炎，则需要采集痰液、各种穿刺液或是活检组织，注意在深部感染样本采集中注意无菌性，提高样本采集的有效性和真实性，对于已经使用了一段时间的患者，其样本采集需要先停药一阵子再展开样本采集。
1.
真菌检验方法
1.
真菌镜检
是最简单也是很有价值的实验室诊断方法。其优点在于简便、快速，无菌部位的阳性结果可直接确定真菌感染。但由于阳性率较低，阴性结果也不能排除诊断。直接镜检对于浅表和皮下真菌感染最有帮助。
2. 真菌培养 真菌培养是实验室检查的重要环节，培养出致病真菌是进一步鉴定菌种的前提条件。常规培养需要在28—30摄氏度下培养3—4周，一般培养选用沙氏培养基（SDA）或者马铃薯琼脂培养基（PDA）。
3. 分子生物学鉴定
常用的分子生物学鉴定方法包括：真菌DNA？基组成（G+CMol%）、限制性片段多态性（RFLP）、随机扩增多态性DNA（RAPD）、Southern印迹、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、rDNA序列测定等。
1.
生理学和生物化学法
在纯培养上真菌生长比较快，可以使用生理、生化方法来鉴定菌种，多用于酵母菌的鉴定。测定真菌的不同生长温度的温度试验也可用于鉴定。对碳水化合物的利用能力是酵母菌鉴定的主要手段，目前已有商品化的API系统，也可用于丝状真菌的鉴定。此外，微生物自动鉴定系统Vitek、autoSCAN-4、Biolog和MIS等自动鉴定系统，可以较满意地鉴定临床上常见的病原学酵母菌。
真菌感染的微生物学实验室检查方法
对真菌的诊断需要了解真菌寄生的部位，完整的病史，包括职业、业余爱好和旅游史。检查一般采用直接镜检和真菌培养两种方法即可确诊。必要时再进行实验、血清学反应或动物接种等。
标本的采集 用无菌操作收集适宜部位的标本，可疑浅部真菌感染应取病变部位的毛发、指（趾）甲屑及皮屑等，可疑深部真菌感染的病人应根据临床症状和体征选取、脑脊液或分泌物、排泄物及痰液等并及时检查，一般不超过1～2小时，以免变质污染。
真菌的直接镜检 皮屑、指（趾）甲和毛发等致密而难以透明的标本应先用10%的KOH微加温处理，溶解角质层和细胞基质，然后进行镜检。脓、痰或血标本可直接涂片镜检。镜下观察是否有孢子、菌丝或假菌丝。若怀疑新生隐球菌等有荚膜的真菌感染，根据所致疾病选取标本，经墨汁负染后镜检，见有芽生菌体外围绕着宽厚的荚膜即可做出诊断。
真菌的分离培养 一般用于直接镜检不能确诊时。病原性真菌培养用沙保弱培养基（pH5.6，不适宜生长）培养，为了防止细菌或腐生性真菌的污染，经常加入放线（菌）酮、青霉素、链霉素或其他抑
制性抗生素。如果是皮肤、毛发和甲屑等标本，需经70%乙醇或2%石炭酸浸泡2～3分钟杀死杂菌，再经无菌盐水洗净后接种于沙保弱培养基上，在25℃～28℃的条件下培养数日至数周，观察菌落特征。
可疑深部真菌感染的标本可接种于血平板、肉渣培养基或硫酸钠肉汤内，分别在室温和37℃培养数日至数周。必要时可在玻片上做真菌小培养，能在光镜下观察真菌的形态和结构的特点及生长发育的全过程，便于鉴别。阴道或口腔粘膜处标本可直接用棉拭子取材，在血平板上分离。血液标本需事先增菌，脑脊液标本则取其沉淀物接种于血平板上，于37℃培养。若疑为假丝酵母菌，可取菌落接种于0.5ml血清试管内，37℃1h后涂片，革兰染色后镜下见有假丝酵母菌细胞长出芽管即可初步鉴定为白假丝酵母菌。
血清学诊断可辅助检查深部真菌感染。通常使用的方法是乳胶凝集和补体结合等试验。用乳胶凝集试验可检测脑脊液或血液中新生隐球菌的荚膜抗原，经有效治疗后，其抗原效价下降；但是在AIDS患者合并新生隐球菌感染时，抗原效价经常会在长时间内维持高水平。但主要问题是多种真菌细胞壁缺乏具有原性的成分。
