放线菌(1)

放线菌筛选的一般方法

摘要：放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中（主要是链霉菌），其数量仅次于细菌。放线菌是革兰氏阳性细菌。因菌落呈放线状而的得名。常以孢子或菌丝状态存在，在自然界中分布很广，主要以孢子繁殖。由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。

关键词：放线菌 筛选 微生物

1 放线菌的情况

放线菌（Actinobacillus）是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强大的原核生物。因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。是一群革兰氏阳性、高(G+C)mol%含量(>55%)的细菌。放线菌因菌落呈放线状而的得名。

放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等）、维生素（B12）和有机酸等。弗兰克菌属（Frankia）为非豆科木本植物根瘤中有固氮能力的内共生菌。此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。少数放线菌也会对人类构成危害，引起人和动植物病害。因此，放线菌与人类关系密切，在医药工业上有重要意义。

放线菌在自然界分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，尤其是含水量低、有机物丰富、呈中性或微碱性的土壤中数量最多。放线菌只是形态上的分类，属于细菌界放线菌门。土壤特有的泥腥味，主要是放线菌的代谢产物所致。它是一个原核生物类群，主要以孢子繁殖，其次是断裂生殖。与一般细菌一样，多为腐生，少数寄生。

2 放线菌的培养基

高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3、NaCl、K2HPO4•3H2O、MgSO4•7H2O 作为无机盐，FeSO4•7H2O作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。

放线菌

是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强的原核生物。

因菌落呈放射状而得名，是丝状分枝细胞的细菌。

一般分布在含水量低，有机物丰富的微碱性土壤中，特殊土腥味。

大多数是腐生菌，少数寄生；多数异养，好氧。

突出特性是产各种抗生素。

放线菌形态与结构

细胞壁含肽聚糖，对青霉素、溶酶菌敏感。

由菌丝构成1.直径细0.2-1.2um，2.无核膜、核仁和线粒体等，仍是单细胞。

菌丝分为：基内菌丝（营养菌丝）：一级菌丝，色浅，较细

气生菌丝：二级菌丝，色深，粗。

孢子丝：繁殖菌丝，耐干燥不耐温，孢子丝比气生菌丝，耐热。

形态：放线菌菌落干燥、不透明、表面呈致密的丝绒状，上有一薄层彩色的“干粉”，菌落和培养基连接紧密，难以挑取，菌落的正反面颜色常常不一致，以及在菌落边缘的琼脂平面有变形等现象。

放线菌的繁殖

以无性孢子为主，菌丝断裂片段也可繁殖成新菌体。

孢子形成方式：横隔分裂

放线菌的群体特征：（一）在固体培养基上：放线菌的菌落由菌丝体组成，一般为圆形、平坦或有许多皱褶和地衣状。放线菌的菌落特征随菌种而不同。一类是产生大量分枝的基内菌丝和气生菌丝的菌种，如链霉菌，其菌丝较细，生长缓慢，菌丝分枝相互交错缠绕，所以形成的菌落质地致密，表面呈较紧密的绒状或坚实，干燥，多皱，菌落较小而不延伸；其基内菌丝伸入基质内，菌落与培养基结合较紧密而不易挑取或挑起后不易破碎。菌落表面起初光滑或如发状缠结，产生孢子后，则呈粉状、颗粒状或絮状。气生菌丝有时呈同心环状。另一类是不产生大量菌丝体的菌种，如诺卡氏菌，这类菌的菌落粘着力较差，结构成粉质，用针挑取则粉碎。（二）在液体培养基上：在实验室对放线菌进行摇瓶培养时，常可见到在液面与瓶壁交界处粘贴着一圈菌苔，培养液清而不混，其中悬浮着许多珠装菌丝团，一些大型菌丝团则沉在瓶底等现象。

放线菌

1. 内容

放线菌是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强的原核生物。

一、 放线菌的形态结构

细胞呈丝状分枝，在营养生长阶段，菌丝内无隔，为多核单细胞。菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。

二、放线菌的繁殖方式

可借孢子或以菌丝断裂的方式繁殖。

三、 放线菌的菌落特征

在固体培养基上形成菌落，小型、干燥、不透明、表面呈致密的丝绒状，上有一薄层彩色“干粉”；菌落与培养基的连接紧密，难挑取；菌落正反面的颜色往往不一致，菌落边缘的琼脂平面有变形。

2. 练习

一、选择题

放线菌的菌体呈分枝丝状体，因此它是一种：（ ）

A、多细胞的真核微生物 B、单细胞真核微生物

C、多核的原核微生物 D、无壁的原核微生物

答案：C

2. 在下列原核生物分类中，属古细菌类的细菌是：（ ）

A、大肠杆菌 B、枝原体 C、放线菌 D、产甲烷细菌

答案：D

3. 细菌的鞭毛是：（ ）

A、细菌运动的唯一器官 B、细菌的一种运动器官 C、细菌的一种交配器官 D、细菌的繁殖器官

答案：B

二、填空题

1. 放线菌个体为_____体，根据菌丝在固体培养基上生长的情况，可以分为_______，______和__________。

答案：分枝丝状；基内菌丝；气生菌丝；孢子丝

2. 放线菌的菌体形态呈_____，革兰氏染色呈_____，________运动，为____营养型微生物。

答案：分枝的丝状体；阳性；不能；化能有机

3. 抗生素的产生菌主要是_____菌类，其中50%以上是由______菌属微生物产生的。

答案：放线；链霉

4. 放线菌菌落形状一般为_______，表面呈___________、而霉菌菌落表面常呈________，霉菌菌落如呈粉末状者____放线菌细腻致密。

答案：圆形； 干燥细致的粉末状或茸毛状；绒毛状或棉絮状；不及

5. 放线菌对国民经济的重要性，在于它们是__________的主要产生菌，许多临床和生产上有使用价值的抗生素如________、________、________、________等等都由放线菌产生。

放线菌

放线菌（Actinobacillus）是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强大的原核生物。因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。

酶的分离纯化方法小结

1.沉淀法

酶在溶液中的稳定性与分子大小、带电荷量和水化作用有一定的相关性，改变这些因素会对酶的稳定性有所影响。当酶的稳定性遭到破坏时就会沉淀析出。常见的沉淀法有盐析法、有机溶剂沉淀法、重金属沉淀法及加热变性沉淀法，其中盐析法多用于酶的分离纯化。

1.1盐析沉淀

盐析沉淀法是根据不同酶在一定浓度盐溶液中溶解度降低程度不同达到彼此分离的方法。酶易溶于水，因为其分子的-COOH、-NH2和-OH都是亲水基团，这些基团与极性水分子相互作用形成水化层，包围于酶分子周围形成1~100nm大小的亲水胶体，从而削弱了酶分子之间的作用力。酶分子表面亲水基团越多，水化层越厚，酶分子与溶剂分子之间的亲和力就越大，因而溶解度也越大。亲水胶体在水中的稳定因素有两个，即电荷和水膜。因为中性盐的亲水性大于酶分子的亲水性，当水中加入少量盐时，盐离子与水分子对酶分子的极性基团的影响，使酶在水中溶解度增大。但盐浓度增加一定程度时，水的活度降低，酶表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是酶相互聚集而沉淀析出。

1.2等电点沉淀

利用酶在等电点时溶解度最低，而各种酶又具有不同的等电点来分离酶的方法，称为等电点沉淀法。酶的等电点(pI)即酶的净电荷为零时的pH值，由于等电点时的酶净电荷为零，因而失去了水化膜和分子间的相斥作用，疏水性氨基酸残基暴露，酶分子相互靠拢、聚集，最后形成沉淀析出。

1.3有机溶剂沉淀

有机溶剂沉淀法是指有机溶剂能使酶分子间极性基团的静电引力增加，与水作用能破坏酶的水化膜，而水化作用降低，促使酶聚集沉淀。常用的有机溶剂是