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糖元染色PAS法的改良秦皇岛市肿瘤医院康文喜李伟刘小兰邮编：066001糖原是单纯的多糖，因其功能与结构和植物淀粉相似，故又称动物淀粉。
糖原是由葡萄糖组成的带分支的大分子多糖，主要储存在肝脏和肌肉的胞质内。
在一些疾病的诊断和研究中，如心肌病、心血管疾病、糖原积累病、糖尿病肿瘤（肝细胞癌、横纹肌肉瘤、骨尤文氏瘤、汗腺瘤等）的诊断，经常要做糖元染色加以确诊。
糖原的染色方法很多，最为经典的是PAS法（periodic acid Schiff）。
经多年的临床摸索和研究，在PAS染色法的基础上，我们对肝糖原染色进行了改良，结果表明，改良后的糖元染色操作方便、省时、色彩鲜艳，易于学习和掌握。
1材料和方法材料①取人活检肝穿组织，用95%酒精固定，常规石蜡切片备用。
②无色品红液（schiff）的配制：取三角烧瓶一只，加入蒸馏水400ml 进行煮沸，煮沸后取下放置1min，然后加入碱性品红1g，轻轻摇荡3min，使碱性品红彻底溶解，待冷却至50 0C，过滤后装于另一只烧瓶内并加入亚硫酰氯1ml，塞紧瓶口，常温下置阴暗处12h，加入活性炭2g, 轻轻摇荡3min，静置待碳粉下沉，用双层滤纸过滤后，滤液装于有色瓶内放入冰箱内备用。
③高典酸液的配制：蒸馏水100ml加高典酸0.5g溶解后备用。
④偏重亚硫酸钠液的配制：蒸馏水100ml加偏重亚硫酸钠0.5g溶解后备用。
方法切片常规脱蜡脱水；0.5%高典酸液氧化5-8min，流水冲洗2min，再用蒸馏水浸洗2次；加入无色品红液于暗处常温染色5-10min；0.5g偏重亚硫酸钠液滴洗2次，每次1min，流水冲洗2min；Mayer 苏木精复染胞核，流水冲洗10min；常规脱水透明，中性树胶封固。
结果镜下见肝组织内糖原呈鲜紫红色为（+）反应。
2讨论本方法的原理是高典酸为一种氧化剂，它能破坏多糖分子结构的碳-碳键（c-c），切片首先用高典酸液氧化，使切片中多糖分子的1,2-乙二醇基（-CHOH- CHOH-）或1-羟基-2-氨基（-CHOH- CHNH2-）等的碳-碳键打开，暴露出二醛（CHO- CHO），后者与无色品红液作用，生成紫红色复合物而得到定位。
细胞PAS糖原染色1. 简介细胞PAS糖原染色是一种常用的组织学技术，用于检测细胞内是否存在糖原。
PAS （Periodic Acid-Schiff）染色方法通过使用周期酸和Schiff试剂，能够将组织中的糖原染成紫红色。
2. 原理2.1 PAS染色方法PAS染色方法主要包括以下几个步骤： 1. 取细胞或组织标本，固定并包埋。
2. 制作切片，将切片脱脂去蜡。
3. 将切片置于周期酸溶液中，在适当的时间内进行氧化处理。
周期酸能够氧化多数糖类物质，使其产生亲合Schiff试剂的位点。
4. 清洗去除周期酸。
5. 加入Schiff试剂，与氧化后的糖原结合形成紫红色沉淀。
6. 清洗去除Schiff试剂。
7. 对切片进行脱水、透明化和封片。
2.2 PAS染色结果解读•阳性反应：呈紫红色至红色，表示细胞中存在糖原。
•阴性反应：无颜色或淡黄色，表示细胞中不存在糖原。
3. 实验步骤3.1 材料准备•周期酸溶液•Schiff试剂•脱蜡剂•脱水液（不同浓度乙醇）•透明剂（如山梨醇）•封片剂3.2 实验步骤1.取已经固定并包埋的组织标本，制作切片。
2.将切片放入去蜡剂中，去除蜡质。
3.进行脱水，逐渐将切片浸泡于不同浓度的乙醇中（如70%，80%，90%和100%），每次浸泡时间约为2-5分钟。
4.将切片放入周期酸溶液中，在室温下进行氧化处理。
氧化时间根据需要可在5-30分钟之间调整。
5.清洗去除周期酸，将切片置于流动自来水下冲洗数分钟。
6.加入Schiff试剂，将切片置于试剂中静置10-15分钟。
注意避免阳光直射。
7.清洗去除Schiff试剂，将切片置于流动自来水下冲洗数分钟。
8.进行脱水，逐渐将切片浸泡于不同浓度的乙醇中，每次浸泡时间约为2-5分钟。
9.将切片置于透明剂中，使其变得透明。
10.将切片放入封片剂中，并用玻璃盖片封装。
4. 结果分析通过PAS糖原染色方法，我们可以观察到细胞中的糖原含量及分布情况。
糖原(PAS)染色[原理]过碘酸能使细胞内乙二醇基氧化成二醛，醛基与雪夫氏溶液起反应，使无色品红结合成红色反应，沉着含糖原的细胞结构上，标本上所能显红色的糖类主要为多糖包括糖原、糖蛋白、粘多糖和糖脂等。
[试剂](1)由上海虹桥乐翔医用试剂技术有限公司提供。
(2)试剂组成:固定液4.5ml；过碘酸溶液20ml；雪夫氏溶液20mg。
(3)苏木素。
[操作](1)新鲜或陈旧血片、骨髓片于固定液内3-5分钟，水洗、晾干。
(2)滴加过碘酸于涂片上氧化10分钟，水洗、晾干。
(3)放入雪夫氏溶液中，置37度水浴箱5-10分钟。
(4)取出后流水冲洗10-20分钟，晾干、镜检。
(5)苏木素复染。
[结果观察]糖原在细胞浆内可染成红色，其判断标准随细胞不同而异。
有核红细胞判断：(-)：无红色阳性颗粒和浅红色物质。
(+)：胞浆中有少数分散红色阳性颗粒，或呈浅红色反应，比正常红细胞色深。
(++)：胞浆中有1或2个浓的红色颗粒环，或胞浆中有1一10个中等大的颗粒，或弥漫的红色物。
(+++)：胞浆中有11—20个红色中粗颗粒或染深红色。
(++++)：胞浆中红色颗粒明显增多且较粗，致密或呈紫红色物质。
淋巴细胞的判断:(-)：胞浆内无粉红色颗粒。
(+)：胞浆内有1一10个红色小颗粒或弥漫的浅红色物质。
(++)：10个以上红色颗粒。
编写：胡芙蓉制定日期：2009.01.01(+++)：胞浆中含有较多红色颗粒及小块紫红色物质。
(++++)：胞浆中含许多红色颗粒及小块紫红色物质。
[临床意义](1)用于营养性巨幼细胞贫血与红(白)血病的鉴别，前者的正常红细胞及有核红细胞常为阴性，而后者可呈强阳性反应。
(2)用于鉴别急性淋巴细胞性白血病与急性非淋巴细胞性白血病，前者的原淋巴细胞和幼稚淋巴细胞可见大块红色物质。
后者的原始阶段细胞常为阴性。
(3)高雪氏细胞呈强阳性，而尼曼匹克氏细胞呈微弱阳性。
[附注](1)雪夫氏液变红即不能再用，以免细胞出现假阳性。
糖蛋白的三个作用高中功能是什么
糖蛋白（糖被）具有识别功能，相当于公民的“身份证”；红细胞膜上的血型决定；卵细胞膜表面对同物种精子的识别；人体免疫细胞识别外来侵入物。
糖蛋白
糖蛋白（glycoprotein）是一种含有寡糖链的蛋白质，两者之间以共价键相连。
其中的寡糖链通常是经由共转译修饰或是后转译修饰过程中的糖基化作用而连结在蛋白质上。
糖蛋白多肽链常携带许多短的杂糖链。
它们通常包括N-乙酰己糠胺和己糖（常是半乳糖和/或甘露糖，而葡萄糖竟较少）。
该链末端成员常常是唾液酸或L-岩藻糖。
这种寡糖链常分支，很少含多于15个单体的，一般含2—10个单体，分子量相当于540—3,200。
糖链数目也变化很大。
糖蛋白主要的作用
1、首先糖蛋白主要存在于胃粘膜上面，可以帮助保护胃粘膜的大量细胞成分。
2、其次是对于呼吸道上的细胞而言，糖蛋白可以帮助增加呼吸道的润滑作用，对于出现的咽喉问题，补充糖蛋白可以缓解喉咙的干燥感。
3、第三是在生殖系统上，糖蛋白可以帮助卵细胞膜表面对于精子来进行识别。
糖蛋白也是人体重要的一种免疫细胞，可以抵抗细菌和病毒的。
糖蛋白中的蛋白质起什么作用
糖蛋白含糖的蛋白质，由寡糖链与肽链中的一定氨基酸残基以糖苷键共价连接而成。
主要生物学功能为细胞或分子的生物识别：消化道和呼吸道上皮细胞表面的糖蛋白有保护和润滑作用；糖被与细胞表面的识别有密切关系。
动物细胞表面糖蛋白的识别作用，好比是细胞与细胞之间，或者细胞与其他大分子之间，互相联络用的文字或语言。
蛋白质作为组成部分，一般不说他单独作用，而是整个大生物分子的
作用。
百泰派克生物科技
糖蛋白检测
糖蛋白是蛋白质糖基化修饰作用后产生的一种蛋白质类型，生物体内约50%的蛋白质以糖蛋白的形式发挥其生物学功能。
通过糖蛋白检测可对蛋白质糖基化修饰过程进行研究，糖蛋白检测包括糖基化修饰的定性定量分析、糖基化修饰位点分析等。
一般可使用液相色谱质谱联用（LC-MS）或亲水作用色谱串联质谱（HILIC-MS/MS）技术对特定修饰的糖蛋白进行检测，包括特定修饰糖蛋白的鉴定、糖基化结合位点鉴定等内容。
糖蛋白检测思路：在进行糖蛋白检测之前，需要对经过特定修饰的糖蛋白样本进行富集；之后进行内切酶裂解（如胰蛋白酶消化）得到小片段糖肽，得到的糖肽利用LC-MS或HILIC-MS/MS检测，根据质谱检测结果分析糖肽序列，即可鉴定得出带有特定糖链的所有糖蛋白，结合生物信息学可分析特定修饰糖蛋白糖基化修饰位点。
百泰派克生物科技采用LC-MS和HILIC-MS/MS等高分辨质谱系统提供糖蛋白分析服务，该服务可用于鉴定血浆/血清、细胞、组织或生物体中的全部糖蛋白，并使用质谱系统进行定性和定量分析。
您只需将实验目的告知并将样品寄出，我们将负责项目后续所有事宜，包括蛋白提取、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。
糖原PAS染色液(真菌专用)操作步骤及染色结果说明货号：G1366规格：3×20ml/3×50ml有效期：6个月有效。
产品内容：3×20ml3×50ml保存试剂(A):过碘酸溶液20ml50ml4℃避光试剂(B):Schiff Reagent20ml50ml4℃避光试剂(C):亚硫酸钠溶液20ml50ml RT密闭产品简介：糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该技术不仅能显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。
过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-乙二醇基，使之变为二醛，醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。
由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化，这是很关键的步骤。
糖原PAS染色液(真菌专用)利用真菌含有多糖，过碘酸氧化真菌壁上的多糖而暴露出醛基，醛基与无色Schiff结合呈现红色。
该染色法性能稳定，特异性强；操作简捷，仅需0.5h;浓度低过碘酸更适用于对真菌染色，无盐酸乙醇分化液分化步骤。
自备材料：1.10%中性福尔马林固定液2.蒸馏水3.系列乙醇操作步骤(仅供参考)：1、常规固定(常采用10%福尔马林),常规脱水包埋。
2、细胞涂片入蒸馏水(无需包埋、脱蜡)或组织切片脱蜡入蒸馏水。
3、入过碘酸溶液，室温氧化10min。
4、自来水冲洗2次，蒸馏水浸洗2次。
5、入Schiff Reagent并加盖，置于室温阴暗处浸染10～20min。
6、亚硫酸钠溶液滴洗2次，每次2min。
7、流水冲洗2min。
8、逐级常规乙醇脱水。
二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：真菌：紫红色；细胞质：深浅不一的红色备注：颜色深浅很大程度上取决于样品在过碘酸溶液和Schiff Reagent中作用时间的长短。
糖类染色该类物质以往人们习惯称之为碳水化合物，因为它含有碳、氢、氧三种元素所组成的化合物，和水分子中的氢和氧原子的数量一样，因此而得名，但随着年代的变迁，研究的深入，发现了有些物质的比例不象上述的碳氢比例那样相同，因此这类物质的正确叫法称为糖类。
糖类所包含的物质很多，分布很广泛，无处不在，分类也比较复杂。
下面将根据各种染色法所显示的颜色，对它们进行显示，分类。
（I）多糖这类物质包括糖元，纤维素，淀粉等。
是以甙键结合成大分子的化合物，分子量大至几万到几百了等。
1、糖元，最常见于肝细胞内也可见于心肌和横纹肌。
（1）固定，历来都强调，糖元都溶于水，因此含水的固定液不能用，固定糖元用丙酮固定，效果非常好，值得注意的是，应用上述两种试剂固定糖元时，要防止“流水样”人工假象的出现，即糖元经固定液穿入组织时，将其推向细胞的一端后被固定，形成不溶性的物质，Bancroft应用福尔马林生理盐水固定时，获得满意的效果。
（2）显示法PAS（+）2、纤维素，该法物质在机体发生病变时，（如白喉，痢疾等）所作出的反应。
（1）固定：历来对含有纤维素的组织的固定，不做特别的要求，但本人认为，如要作好纤维素的显示，也应与糖元的处理一样。
（2）显示法：PAS+PTAH，MSB3、淀粉，（请看淀粉染色）（II）中性粘多糖（中性黏液物）该类物质存在于胃黏膜的表面上皮，十二指肠腺，结肠的杯状细胞，颌下腺，前列腺上皮等，含有氨基己糖和游离的己糖基，不含任何的游离酸基或硫酸酯，故称为中性。
其反应基为乙二醇基或氨羟基。
应用PAS显示时为阳性，AB阴性。
（III）酸性粘多糖（酸性黏液）A、硫酸化黏液物。
（1）强硫酸化结缔组织性黏液物。
它存在于皮肤，角膜，软骨，心瓣膜，主动脉，肥大细胞等。
PAS反应为阴性，AB为阳性。
（2）弱硫酸化上皮性黏液物。
它存在于气管，支气管，结肠，颌下腺等。
临床应用：①用于区别正常与病变组织，正常胃肠黏膜上皮，幽门腺，十二指肠等主要分泌中性黏液物，而小肠腺主要分泌中性黏液物而小肠及大肠的杯状细胞分泌酸性黏液物。
百泰派克生物科技
糖蛋白怎么测定
糖蛋白是一类多肽链上特殊部位的氨基酸残基共价结合短的、多带有支链的寡糖或聚糖的蛋白质，即发生了糖基化的蛋白质。
糖蛋白测定就是对糖基化蛋白质进行定性测定，检测其是否发生糖基化。
糖蛋白定性测定的大致思路是先将样品进行电泳分离，然后利用Shiff试剂、考马斯亮蓝、高碘酸盐和百里苯酚等染色剂对分离后的蛋白质进行染色，再根据显色反应判断发生糖基化蛋白质；也可以在电泳后进行免疫印迹，将分离后的蛋白条带转移到NC膜或PVDF膜上，利用相应的糖蛋白检测试剂盒对糖蛋白进行定性检测。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合nanoLC-MS/MS纳升色谱提供快速精确的糖蛋白测定服务，对糖蛋白进行定性分析，包括糖型、糖基化位点和糖链结构分析等，还可根据需求提供定制化检测方案，满足多种检测需求，欢迎免费咨询。
营养之蛋白质（糖蛋白）介绍营养之蛋白质（糖蛋白）介绍糖蛋白，简单地说就是指有糖链结合在上面的蛋白质（糖类分子与蛋白质分子共价结合形式形成的蛋白质）。
也是由寡糖和多肽链共价修饰连接而形成的一类重要生理活性物质，它广泛存在于细胞膜、细胞间质、血浆以及粘液中，糖基化修饰使蛋白质分子的性质和功能更为丰富和多样。
分泌蛋白质和质膜外表面的蛋白质大都为糖蛋白。
糖蛋白可以是胞溶性的，也可以是膜结合型的，可以存在于细胞内，也可存在于细胞间质中。
组成糖蛋白分子中的单糖有几种：葡萄糖、半乳糖、甘露糖等。
由这些单糖构成各种各样的寡糖可经两种方式与蛋白部分连接即N-连接寡糖和 O一连接寡糖，因此糖蛋白也相应分成N-连接糖蛋白和O-连接糖蛋白。
【糖蛋白的种类】糖蛋白普遍存在于动物、植物及微生物中，种类繁多，功能广泛。
可按存在方式分为三类：一可溶性糖蛋白——存在于细胞内液、各种体液及腔道腺体分泌的粘液中。
血浆蛋白除白蛋白外皆为糖蛋白。
可溶性糖蛋白包括酶（如核酸酶类、蛋白酶类、糖苷酶类）、肽类激素（如绒毛膜促性腺激素、促黄体激素、促甲状腺素、促红细胞生成素）、抗体、补体、以及某些生长因子、干扰素、抑素、凝集素及毒素等。
二膜结合糖蛋白——膜结合糖蛋白包括酶、受体、凝集素及运载蛋白等。
此类糖蛋白常参与细胞识别，并可作为特定细胞或细胞在特定阶段的表面标志或表面抗原。
三结构糖蛋白——为细胞外基质中的不溶性大分子糖蛋白，如胶原及各种非胶原糖蛋白(纤粘连蛋白、层粘连蛋白等)。
它们的功能不仅仅是作为细胞外基质的结构成分起支持、连接及缓冲作用，更重要的是参与细胞的识别、粘着及迁移，并调控细胞的增殖及分化。
【糖蛋白的生物作用】生物界种类繁多的糖蛋白执行着千差万别的生物学功能。
大致可归纳为直接或间接参加生物学功能两种1 直接参与生物学功能方面的作用，与细胞或分子的生物识别有关；2 间接作用则在于维持整个分子的天然构象，保持一定的活性寿期及决定理化特性等。
