Akt1基因沉默降低小鼠乳腺癌细胞肺转移能力20页PPT

靶向沉默SIRT1对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响施鹏;陶辉;张家贵;曹炜;钱鹏;占红英;石开虎【摘要】目的探究沉默信息调节因子1(SIRT1)对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响作用.方法应用转化生长因子-β1处理乳鼠原代心肌成纤维细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测SIRT1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达水平;Western blot法检测SIRT1、α-SMA的蛋白表达水平;MTT法检测心肌成纤维细胞的细胞增殖活性;使用LipofectamineTM 2000 Reagent向乳鼠原代心肌成纤维细胞中转染siRNA-SIRT1.结果转染siRNA-SIRT1的心肌成纤维细胞,SIRT1蛋白和mRNA 表达下降,同时α-SMA蛋白和mRNA表达下降;转染siRNA-SIRT1明显抑制心肌成纤维细胞的增殖活性.结论 siRNA-SIRT1对心肌成纤维细胞增殖活性有明显抑制作用,SIRT1可能成为心脏结构重构防治的新靶点,其调控剂的应用将为心肌纤维化的防治提供新的思路和方案.%Objective To investigate the effect of silent information regulator 1(SIRT1) on the proliferation of cardiac fibroblasts in neonatal rat.Methods The original generation of rats cardiac fibroblasts were delt with TGF-β1.qRT-PCR was applied to assess the mRNA expression levels of SIRT1 and α-SMA.The protein expression levels of SIRT1 and α-SMA were detected by Western blot.MTT assay was used to determine the cytoactive of cardiac fibroblasts.LipofectamineTM 2000 Reagent was used to transfected cardiac fibroblasts with siRNA-SIRT1.Results The expression of SIRT1 protein and mRNA was down-regulated in the cardiac fibroblasts transfected with siRNA-SIRT1, as well as the α-SMA protein and mRNA expression.Theactivity of cardiac fibroblasts was restrained after transfected with siRNA-SIRT1.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2017(052)004【总页数】5页(P471-475)【关键词】SIRT1;心肌成纤维细胞;α-SMA【作者】施鹏;陶辉;张家贵;曹炜;钱鹏;占红英;石开虎【作者单位】安徽医科大学第二附属医院心胸外科,合肥 230601;安徽医科大学心血管病研究中心,合肥 230601;安徽医科大学第二附属医院心胸外科,合肥 230601;安徽医科大学心血管病研究中心,合肥 230601;安徽医科大学第二附属医院心胸外科,合肥 230601;安徽医科大学心血管病研究中心,合肥 230601;安徽医科大学第二附属医院心胸外科,合肥 230601;安徽医科大学心血管病研究中心,合肥 230601;安徽医科大学第二附属医院心胸外科,合肥 230601;安徽医科大学心血管病研究中心,合肥 230601;安徽医科大学第二附属医院心胸外科,合肥 230601;安徽医科大学心血管病研究中心,合肥 230601;安徽医科大学第二附属医院心胸外科,合肥 230601;安徽医科大学心血管病研究中心,合肥 230601【正文语种】中文【中图分类】R542.23心肌纤维化是许多常见心血管疾病的最后阶段，其主要特点为细胞外基质蛋白呈网状沉积[1]，心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)是哺乳动物心脏中最丰富的细胞类型，CFs的活化增殖是心肌纤维化发生发展及心室重构的关键[2]。

·502·· 论著 ·抑制AKT通路对埃克替尼耐药的非小细胞肺癌细胞迁移能力的影响杨旸1，王一喆1，郑春雷2，侯科佐2，王晓楠1，胡雪君1（中国医科大学附属第一医院 1. 呼吸疾病研究所老年病呼吸感染科； 2. 肿瘤内科，辽宁省抗肿瘤药物与生物治疗重点实验室，沈阳 110001）摘要 目的探讨抑制AKT通路对埃克替尼耐药的非小细胞肺癌细胞迁移能力的影响。

方法采取持续暴露并逐渐增加药物浓度方法筛选建立耐药细胞系，MTT法检测细胞增殖能力，Transwell法检测细胞迁移能力，Western blotting检测蛋白表达。

结果耐药细胞PC9/IcoR迁移能力高于PC9细胞（P < 0.05）；PC9/IcoR细胞表皮生长因子受体及AKT磷酸化水平明显高于PC9细胞（P < 0.05）；LY294002抑制AKT活化后PC9/IcoR细胞迁移能力明显下降（P < 0.05）。

结论抑制AKT通路可以抑制埃克替尼耐药的非小细胞肺癌细胞迁移。

关键词 非小细胞肺癌；埃克替尼耐药；迁移； AKT通路中图分类号 R734.2 文献标志码 A 文章编号 0258-4646 （2019） 06-0502-05网络出版地址 /kcms/detail/21.1227.R.20190524.1325.014.htmlDOI：10.12007/j.issn.0258‐4646.2019.06.006Effects of AKT Pathway Inhibition on the Migration Ability of Icotinib-ResistantNon-Small -Cell Lung Cancer CellsYANG Yang1，WANG Yizhe1，ZHENG Chunlei2，HOU Kezuo2，WANG Xiaonan1，HU Xuejun1（ 1. Department of Respiratory and Infectious Disease of Geriatrics，Institute of Respiratory Disease，The First Hospital，China Medical University，She-nyang 110001，China； 2. Department of Medical Oncology，Key Laboratory of Anticancer Drugs and Biotherapy of Liaoning Province，The First Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China）Abstract Objective To investigate the effect of AKT pathway inhibition on the migration of PC9/IcoR cells. Methods The icotinib re-sistant cell line was established through continuous exposure of PC9 cells to gradually increasing concentrations of the drug. Cell proliferation，protein expression，and cell migration were analyzed through MTT assay，Western blotting，and Transwell assay，respectively. Results The migration ability of drug-resistant PC9/IcoR cells was higher than that of PC9 cells （P < 0.05） . The expression levels of the phospho-epider-mal growth factor receptor （p-EGFR） and phospho-AKT were higher in PC9/IcoR cells than in PC9 cells （P < 0.05） . Inhibition of the AKT pathway using LY294002 significantly decreased the migration ability of the PC9/IcoR cells （P < 0.05） . Conclusion Inhibition of the AKT pathway could inhibit the migration of icotinib-resistant non-small-cell lung cancer cells.Keywords non-small-cell lung cancer； icotinib-resistance； migration； AKT pathway研究［1-2］显示，肺癌是对人类健康威胁较大的恶性肿瘤之一，80%~85%的肺癌为非小细胞肺癌 （non-small-cell lung cancer，NSCLC）；NSCLC发病率及死亡率逐年攀升。

AKT1表达与非小细胞肺癌临床病理特征及预后的关系【摘要】目的探讨AKT1表达与非小细胞肺癌临床病理特征及预后关系。

方法取2021年1月-2021年12月，医院收治的82例非小细胞肺癌患者为研究对象。

对所有患者AKT1表达情况予以检测，分析、对比该指标与临床病理特征和预后间的关系。

结果82例患者中AKT1阳性率为58.5%（48/82），低分化、淋巴结转移、Ⅲ+Ⅳ期患者的AKT1阳性率均较高中分化、淋巴结未转移和Ⅰ+Ⅱ期患者高（P＜0.05）；AKT1阳性组18个月生存率较AKT1阴性组低（P＜0.05）。

结论非小细胞肺癌患者中AKT1呈高表达，且其表达与肿瘤进展及预后不良间存在密切关系。

【关键词】AKT1表达；非小细胞肺癌；临床病理特征；预后在恶性肿瘤疾病中，肺癌的发生率相对较高，且以非小细胞肺癌较为常见，大多患者在患病初期的临床症状并不明显，致使其在疾病确诊后已处于中晚期，以致手术和化疗的实施均无法得到相对理想的应用效果[1]。

所以，需通过对上述疾病在发病机制方面的研究，以此寻找出新的利于疾病准确、治疗及预后评估的肿瘤标志物。

丝/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）是由上百个氨基酸所组成的，凭借对下游多种因子的活化状态产生影响，进而在细胞代谢、调控及凋亡等诸多方面发挥其功能[2]。

鉴于此，本文在非小细胞肺癌中进行AKT1表达情况研究，以探讨其与疾病特征、预后情况间的关系。

1资料与方法1.1一般资料取2021年1月-2021年12月，医院收治的82例非小细胞肺癌患者为研究对象。

其中，男53例，女29例，年龄43-74岁，平均（54.9±3.9）岁；疾病类型：腺癌69岁，鳞癌13岁；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期37例，Ⅲ期18例，Ⅳ期7例。

入选患者均对本研究知情、同意。

1.2方法对入选人员的年龄、性别、病灶大小、疾病类型、分化程度、是否存在淋巴结转移和TNM分期予以调查并比较，同时，进行AKT1检测，具体为：取患者的病理切片，利用梯度乙醇水、二甲苯脱蜡予以处理，将3%的双氧水在内源性过氧化物酶当中予以封闭，且在室温中静置15min。

Akt信号转导通路课件目录CONTENCT •细胞信号转导概述•Akt蛋白激酶结构与功能•PI3K/Akt信号转导通路组成与调控•Akt信号转导通路在疾病中作用•实验方法与技术应用•总结与展望01细胞信号转导概述信号转导定义与意义信号转导是指细胞通过一系列生物化学反应，将外部或内部信号转化为细胞内特定响应的过程。

信号转导在细胞生长、分化、凋亡、代谢以及免疫应答等生理过程中发挥重要作用。

研究信号转导有助于深入理解细胞功能和疾病发生机制，为药物研发提供潜在靶点。

细胞内外信号分子种类细胞外信号分子包括激素、神经递质、生长因子、细胞因子等，通过与细胞膜上受体结合启动信号转导。

细胞内信号分子包括第二信使（如cAMP、cGMP、Ca2+等）、激酶、磷酸酶、转录因子等，参与信号转导的级联放大和调控。

信号转导途径及调控机制信号转导途径包括G蛋白偶联受体途径、酶联受体途径、核受体途径等，涉及多种信号分子的相互作用和转化。

信号转导的调控机制包括受体表达调控、信号分子活性调控、信号转导通路的交叉对话与整合等，确保信号转导的精确性和时效性。

Akt信号转导通路是细胞内重要的信号转导途径之一，参与细胞生长、增殖、分化、凋亡等多种生理过程的调控。

Akt通路的异常激活与多种疾病的发生发展密切相关，如肿瘤、糖尿病、心血管疾病等。

Akt通路已成为药物研发的重要靶点，针对该通路的药物在肿瘤免疫治疗、代谢性疾病治疗等领域具有广阔的应用前景。

Akt信号转导通路在细胞生物学中地位02Akt蛋白激酶结构与功能010203Akt蛋白激酶属于AGC激酶家族，具有典型的激酶结构域。

Akt蛋白包含PH结构域，能够结合磷脂酰肌醇，参与信号转导。

Akt蛋白具有激酶催化结构域，负责底物磷酸化。

Akt蛋白激酶基本结构特点1 2 3Akt蛋白激酶通过磷酸化活化，其活化过程受到PI3K的调节。

PI3K在细胞膜上生成PIP3，吸引含有PH结构域的Akt蛋白。

Akt蛋白在细胞膜上被PDK1磷酸化激活，进而发挥激酶活性。