人类免疫缺陷病毒抗体检测规程

检验医学与临床２０１１年１月第８卷第２期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ　２Ｏｌ１，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．２　・２１７・　

红蛋白的单克隆抗体及多克隆抗体，另一类是抗人红细胞基质　抗体，特异性针对粪便中的人血红蛋白＿３］。各种动物血血红蛋　

白在５００　ｍｇ／Ｌ、辣根过氧化物酶在２　０００　ｍｇ／Ｌ时不会出现干　扰，因此免疫金标法不受动物血血红蛋白的干扰，试验前不需　

禁食肉类，具有良好的灵敏度，一般血红蛋白为每克粪便０．２　ｍｇ或０．０３　ｍｇ就可得到阳性结果。　从本文统计结果可以看出（表１），用金标法检测肠癌组阳　性率达到９０．０　，另外３例患者可能不出血，或者是间断性出　

血，所以为阴性结果。金标法测定的９例柏油便，其开始测得　的结果全为阴性，标本稀释５ｏ倍后再做，有５例出现阳性反　应，但仍有４例始终为阴性。而用匹拉米洞法测得的肠癌阳性　率仅为７３．３　，这可能是由于出血量少，方法敏感性低而测不　出来，造成假阴性。上消化道出血组中，免疫金标法阳性率为　８３．３　，其中有５例柏油便经过５Ｏ倍稀释后才检测出阳性结　

果。免疫金标法隐血试验主要检测下消化道出血，约有４Ｏ　

～５Ｏ　的上消化道出血不能检出，原因是：（１）血红蛋白或红细　

胞经过消化酶降解变性或消化殆尽已不具有原来的免疫原性；　（２）过量出血而致反应体系中抗原过剩而呈现后带现象；（３）患　

者血红蛋白的抗原与单克隆抗体不匹配。匹拉米洞法阳性率　为１００　，因此有时外观为柏油便而金标法测不出来时，需要　

将粪便稀释５ｏ～１００倍重做或者用匹拉米洞法复检。　综上所述，金标法检测粪便潜血对诊断和治疗引起胃肠道　出血的疾病有重要意义，尤其对消化道肿瘤患者，在早期无症　

状时粪便潜血就可能为阳性。所以粪便潜血检测可作为肠癌　普查的重要参考指标，可以做到早发现、早治疗，提高肠癌患者　

的生存率。值得注意的是，检测时两种方法不可偏废，应根据　临床情况结合使用，这样才能提高消化道出血的检出率。还应　注意大便是固体，有区域性节段，必要时要做追踪性试验。另　

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人类免疫缺陷病毒检测试剂临床研究

注册技术审查指导原则

一、前言

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）检测试剂是指利用免疫学及分子生物学等方法原理对人血清、血浆或其他体液中的特定的HIV生物学标记物，包括HIV 1型（HIV-1 ）p24抗原、HIV抗体、HIV核酸、HIV基因耐药突变等进行定量或定性分析的试剂。据《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》（国食药监械〔2007〕229号）的分类原则，该类产品作为第三类体外诊断试剂（In Vitro

Diagnostic,IVD）管理，属高风险管理产品。本指导原则制定的主要目的是让申请人明确在注册申报过程中对本类试剂在临床研究方面重点关注内容，同时规范注册申请人对于注册申报资料中有关临床研究资料的要求。

本指导原则是对HIV检测试剂临床研究的一般性要求，申请人应依据具体产品的特性对临床研究资料的内容进行充实和细化。申请人还应依据具体产品的特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需具体阐述其理由及相应的科学依据。

本指导原则只是针对HIV检测试剂的特点，强调需重点考虑的问题，临床试验的基本要求应符合《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》（国食药监械〔2007〕240号）的规定，包括临床试验协议、方案、报告的撰写等。

本指导原则不包括行政审批要求，不作为法规强制执行。本指导原

— 48 — 则是申请人和技术审评人员的指导文件，如果有能够满足适合的法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。

二、适用范围

HIV生物学标记物是指机体在感染HIV后，在不同的感染阶段出现的生物学标记物，包括：HIV抗体、HIV-1p24抗原、HIV核酸、HIV基因耐药突变等。

人类免疫缺陷病毒抗体检测规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。

4、编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照一型、二型各一孔，空白对照一孔。

5、加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100ul。

6、温育：覆盖黏胶纸，置37度孵育30分钟。

7、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。 8、每孔加酶结合物100微升，取新粘胶纸覆盖放映板，置37度孵育30分钟。

9、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。

10、每孔加入底物缓冲液50微升，TMB50微升，混匀，置37度显色10分钟。

11、加终止液50微升震荡反应板5秒钟，使之充分混匀。

12、在酶标度数仪上，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），仪空白对照孔校零，读取每孔吸收值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）

二、结果判断：

抗HIV阳性对照OD值大于0.8，抗HIV阴性对照OD值小于0.08。 Cutoff Value=阳性对照值乘以10%（若阳性对照OD值大于2.5按2.5计算）

标本OD值小于等于Cutoff Value为阴性。

标本OD值大于Cutoff Value为阳性。

三、注意事项：

1、在试剂的使用单位必须使当地卫生行政部门标准的HIV初筛试验室。

2、整个检测工作必须符合HIV试验室管理范围和生物安全守则规定，严格防止交叉感染。

操作时必须带手套，穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。

3、HIV检测结果的判定不许以酶标仪的读数为准。

4、标本和酶结合物均应用加样器加注，并经常校对其准确性。

人类免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗体诊断试剂盒（胶体金法）

标准操作规程

一. 预期用途

本试剂盒定性检测人血清、血浆或者全血样品中可能存在的HIV-1/HIV-2抗体，作为HIV感染的辅助诊断方法。

二. 检测原理

本试剂盒利用免疫层析原理，采用双抗原夹心法检测，在硝酸纤维膜上的检测区域包被

HIV-1和HIV-2区段抗原，用胶体金标记同样含有的HIV-1和HIV-2区段的标记抗原，用抗HIV抗体作为对照线原料包被到硝酸纤维膜上形成对照线。检测时，如果样品内还有HIV抗体时，样品中的HIV抗体可与纸条前段的“胶体金-抗原”结合，形成免疫复合物，复合物由于层析作用沿膜带移动，并在包被了抗原的检测区形成一条红色线，判为阳性；如果样品内不含有HIV抗体，检测区不会形成红色线，判为阴性。

三. 试剂

1. 生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司

2. 规格： 1人份/袋 10人份/盒

3. 试剂组成：测试卡、铝箔袋、干燥剂、说明书、样品稀释液。

测试卡主要成分：塑料卡、塑料底板、吸水滤纸、硝酸纤维膜（包括包被有HIV-1和HIV-2抗原的检测线和包被有抗HIV抗体的对照线），金垫（附着有胶体金标记的HIV-1和HIV-2区段抗原）。

四. 仪器

加样器

五. 样品要求：

1、 本试剂检测人血清、血浆或全血

2、 血清、血浆样品3日内检测的，置2-8℃冰箱保存；超过3日不检测的样品，应低温保存。

3、 全血样品建议在采血后立即检测，不可长期放置后检测。

六. 检验方法：

1、 检测血清或血浆样品，用加样器取80ul血清或血浆样品，缓慢滴加在测试卡加样端中心。

2、 检测全血样品：在测试卡加样端中心滴加1滴（约40ul）全血样品，后立即滴加1-2滴（约40-80ul）样品稀释液。

七. 质量控制：

出现阳性对照线实验结果有效，不出现阳性对照线实验结果无效。

八. 参考值：

加样完毕，室温放置30分钟观察结果，出现两条红色线为阳性，只出现一条对照线为阴性。