荧光定量PCR技术在植物基因表达研究中的应用

第３４卷第２期　２０ｌ１年６月　江　西　植　保　

ＪＩＡＮＧＸＩ　ＰＬＡＮＴ　ＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮ　ＶｏＩ．３４．ＮＯ．２　Ｊｕｎｅ，２０ｌｌ　

实时荧光定量ＰＣＲ在植物害虫研究中的应用　

郭庆，王忠跃　，孔繁芳，武艳霞　

（中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京１００１９３）　

摘要：实时荧光定￣．ＰＣＲ技术作为一项新兴技术，以快速、准确定量、便捷等优点广泛应用于科学研究各个领域，　越来越受到人们的重视。近年来，随着实时荧光定ｍ－ＰＣＲ技术的发展和深入，大大提高了植物害虫的研究水平。　

本文结合了最近几年来应用于鉴定和研究植物害虫的情况，同时也介绍了在植物病原线虫和害螨研究中的应用，　

综合论述了实时荧光定量ＰＣＲ技术在植物害虫研究中的应用。　关键词：实时荧光定量ＰＣＲ；Ｃｔ；植物害虫；荧光阈值；荧光探针　

中图分类号：￥７６３－３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６－－４２４９（２０１１）０２—００４７—０７　

１９８３年美国ＰＥ　Ｃｅｔｕｓ公司人类遗传研究室的　

Ｋａｒｙ　Ｍｕｌｌｉｓ发明了聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｃｈａｉｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）川，该体外核酸扩增技术具有特异、　

敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化　

等突出优点，被广泛应用于基础研究，成为分子生　

物学、鉴别遗传疾病和快速检测病毒和病菌感染必　不可少的研究工具。１　９９２年日本人Ｈｉｇｕｃｈｉ想实时观　察ＰＣＲ反应的全过程，最终达到检测样品中的ＤＮＡ　量的目的，最早提出了实时荧光定量ＰＣＲ的设想【２，　引，继而由１９９６年美国Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司首先　推出实时荧光定量ＰＣＲ技术。由于传统的ＰＣＲ技术　

都是依赖于产物的终点浓度进行分析的，存在不能　准确定量，且操作过程中易污染而使得假阳性率高　

等缺点，使其应用受到局限，直到近年来荧光共振　能量转移（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｒｅｓｏｎａｎｃｅ　ｅｎｅｒｇｙ　ｔｒａｎｓｆｅｒ，　ＦＲＥＴ）技术用于ＰＣＲ定量后，上述问题才得到较好　的解决【４Ｊ，随着实时荧光定量ＰＣＲ的发明，此技术　

ModDiagnTreat2019May30渊9冤

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遥1资料与方法1.120153~20179

48

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1.2.1尧HIC1

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1/2~1/3RNA袁渊12000g30s4益冤袁袁75ml/dl袁

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cDNA袁-20益遥1滋lcDNA袁0.15滋l尧

12.5滋lMix袁25滋lRNA袁PCR袁:

95益5min渊冤尧95益20s渊冤尧58益45s渊冤尧

72益45s渊冤尧72益5min渊冤40遥:72益尧5min60益尧15s95益尧15s4益袁*:实时荧光定量RT轧PCR检测宫颈癌组织中HIC1

基因表达的应用研究

谭毅菁1袁招钜泉2*袁吴校连1渊1.袁528200;2.

袁528200冤

摘要:目的HIC1RT轧PCR渊FQ轧FCR冤遥方法20153~2017948袁25袁

RNA袁FQ轧FCRHIC1袁HIC1袁HIC1遥结果HIC1轧mRNA袁P<0.05袁HIC1轧mRNA尧袁P<0.05袁HIC1轧mRNA袁P<0.05遥结论FQ轧FCRHIC1袁HIC1尧尧遥关键词:HIC1曰RT轧PCR曰曰中图分类号:R361文献标识码:B文章编号院1011轧8174渊2019冤09轧1461轧021461窑窑ModDiagnTreat2019May30渊9冤

实时荧光定量ＰＣＲ技术在水稻氮素基因表达中的应用研究与展望　

李庆体　

（江苏滨海县正红镇农业生产服务中心。江苏滨海２２４５００）　

擒要：实时荧光定量ＰＣＲ技术实现了对低拷贝基因表达量　

的快速、准确定量，展望了荧光定量ＰＣＲ技术在水稻氮素相关　基因表达中的应用前景。　

关键调：水稻；氮素；基因表达；荧光定量ＰＣＲ；应用研究：展　

望　２Ｏ世纪６０－－７０年代水稻矮化育种和杂交稻三系配套的成　

功和应用使水稻产量大幅度提高，但同时导致氮肥施用量的急剧　增加。尽管氮肥在提高水稻产量的过程中起着非常重要的作用，　但对地下水、土壤、河流、湖泊和大气等农业环境的污染严重，间　

接影响人体健康。目前在作物生产中氮素利用率较低，只有２８％　

４０％，而水稻是我国第一大粮食作物，因此如何提高水稻氮素利　用率，是当前亟需攻克的重要课题。　

ｌ水稻与氮素的关系研究　１．１氮在水稻生产中的作用　

世界上许多地区的水稻生产越来越注重于优化籽粒产量、降　

低生产成本、减少对环境的污染危害。限制水稻生产的投入之一　是氮，氮素对水稻是重要的，约７５％的叶片氮与叶绿体有关，而后　

者通过光合作用在干物质生产中发挥着重要的生理作用。在营养　生长期水稻吸收氮素促进生长和分蘖，从而决定潜在的穗数；在　穗形成初期氮素有利于小穗的形成；而在穗形成后期，则通过减　

少退化小穗数增加谷壳大小而增加库容。　１．２水稻氮肥吸收利用率现状　

长期以来大量施用氮肥一直是稳定和提高水稻产量的重要　

措施，因不断增加水稻植株中的氮素含量导致回报率降低，并不　是总能增加水稻产量，因此从经济方面考虑这一措施并不总是最　

优的。同时，过量施用氮肥还会对环境和人体健康产生潜在的不　利影响，并增加病害的发生和倒伏。水稻的种植容易导致氨挥发、　

硝化一反硝化脱氮、淋溶以及径流而使氮素丢失。基于此，国内外　越来越重视研究和改良水稻氮素吸收利用的遗传潜力和生理机　

制，建立高效生产技术体系，从根本上提高水稻对氮素营养的吸　收利用。我国的氮肥吸收利用率为３０％￣３５％，低于世界平均水　

２００８年８月第１Ｏ卷第８期　中国现代中药Ｍｏｄｅｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｕｇ．２００８　Ｖｏ１．１０　Ｎｏ・８　

绩ｌ、ｌ　

ｃＤＮＡ－ＡＦＬＰ技术及其在药用植物基因　

表达研究中的应用展望△　

于光，段金廒　

（南京中医药大学江苏省方剂研究重点实验室，江苏　南京　２１００４６）　

［摘要］　简要阐述ｅＤＮＡ．ＡＦＬＰ技术原理，讨论操作过程中可能出现的问题和技术关键，展望该技术在药用　

植物研究中的潜在应用价值。　

［关键词］　ｅＤＮＡ—ＡＦＬＰ；药用植物；差异表达　

基因的表达包括基因的转录和蛋白质的翻译两　

个阶段，是遗传信息表现为生物性状的过程，该过　

程是通过基因产物的生物学功能来实现。高等生物　

大约有３０　０００个不同的基因，但在生物体内任意细　

胞内只有１０％的基因得以表达，而这些基因的表达　

是按时间和空间顺序有序地进行着，这种表达的方　

式即基因的差异表达¨Ｊ。现阶段基因组学研究已经　

进入后期的功能基因组学（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓ）的研究　

阶段，对基因在特定时期转录水平上的表达丰度及　

差异表达等情况进行研究，由此分析基因的表达方　

式及作用已经形成了功能基因组学的重要方面——　

转录组学（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓ）。Ｌｉａｎｇ等　在１９９２年建　

立的ｍＲＮＡ差异显示反转录ＰＣＲ技术（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　

ｄｉｓｐｌａｙ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ—ＰＣＲ，ＤＤＲＴ—ＰＣＲ）因其操　

作简单、实验过程快速得到广泛应用　，但该技术　

可重复性较差，假阳性高，扩增产生的ｃＤＮＡ片段　

包含的差异表达基因的信息量相对较少，因此逐渐　

退出对基因转录组学的研究。ＳＡＧＥ、微阵列和　

ｃＤＮＡ—ＡＦＬＰ￣ＩＪ可对生物体转录组进行全面、系统地　

大规模分析，相比而言ｃＤＮＡ—ＡＦＬＰ技术更适合对转　

录组进行全面的分析Ｈ　Ｊ，结果假阳性低，并且获得　

的转录衍生片段（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，ＴＤＦ）