按照2020版药典检测方法 测定连翘苷含量

关于不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量测定【摘要】目的考察不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量。

方法采用HPLC-PDA法，以Diamonsil-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)为色谱柱，流动相为甲醇-水，梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长270 nm。

结果连翘果实中连翘酯苷的含量远高于金钟花，金钟花果实中不含连翘苷。

结论不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量有较大差别，金钟花不应混作连翘使用。

【关键词】连翘；金钟花；连翘酯苷；连翘苷；含量测定Key words：Forsythia suspensa；Forsythia viridissima Lindl；forsythiaside；forsythin连翘是历史悠久、使用广泛的一种中药，具有清热解毒、消肿散结的功效。

我国药典收载的连翘为木犀科连翘属植物连翘Forsythia suspense (Thunb.)Vahl的干燥果实，主产于山西、河南、陕西[1]。

对全国大部分地区使用的商品连翘调查发现，在少数地区有将同属植物金钟花F.viridissima Lindl.的果实混作连翘使用现象[2]。

另外，近几年在连翘的主产区皆出现了“抢青”现象，产区“采青”时间过长，采收混乱，造成连翘品质差异较大，严重影响了连翘的质量和产量[3]。

基于上述现象，本研究比较了不同采收期连翘、金钟花果实中连翘酯苷和连翘苷的含量，为中药连翘的质量控制提供理论依据。

1 材料1.1 仪器与试剂美国BECKMAN高效液相色谱仪，125型泵，168型PDA检测器，32Karat色谱工作站；HAMILTON微量进样器(HAMILTON公司)；微孔滤膜φ＝13 mm，0.45μm(天津市色谱科学技术公司)；YCQ-300型超声波清洗器(上海凯波超声设备有限公司)。

甲醇为色谱纯，水为双蒸水并经0.45 μm水系滤膜过滤。

HPLC法测定连翘中连翘苷含量的不确定度评价【摘要】目的：使用HPLC方法来针对连翘中连翘苷含量的不确定性进行分析，总结导致不确定因素产生的成因。

方法：结合我国官修药典相应的连翘含量测定法来规范测定过程，并且针对测量过程进行分析来找出不确定度产生的成因；结果：使用HPLC这种方法来测定连翘苷含量的不确定度大约为1%，最终确定其含量不确定度的主要源为对照品称量。

【关键词】连翘；连翘苷；含量测定；不确定度；高效液相色谱法实验室质量控制可以在很大程度上决定实验结果和测量不确定度。

通过一系列不确定因素的控制就可以找到一个测量数值的合理区间，进而让一个数值变为一个阈值范围，不免将检验结果错判，保证检测结果的有效性。

连翘花是木犀科植物的一种，在民间多作为茶类饮品，对于风热感冒、咽喉肿痛等症状的治疗有奇效。

但是目前对于连翘花中的连翘苷测定的相关文献还仍然较少，本文对连翘苷含量的测定方法进行了简要介绍，并且总结了不确定度的影响要素，希望可以给相关工作的开闸能提供一些参考。

1仪器与材料戴安Ultimate3000高效液相色谱仪(CHROMELEON工作站，紫外检测器)；METrLERAX205DR电子天平(瑞士)；RQ一300VDE型双频数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

连翘苷对照品购自中国药品生物制品检定所(批号为110821—200508)，甲醇(色谱纯，MERCK)，水为高纯水。

连翘花药材2007年4月采自河南省林州市石板岩乡王相岩桃花谷，经李振国主任药师鉴定为木犀科植物连翘Forsythiasuspense(Thunb．)VaIll的干燥花。

二、连翘花中连翘苷的含量测定（一）色谱条件色谱柱为DIONEXC18色谱柱(DIONEXAcclaim，5Ixm，150x4．6am)，乙腈一水(25：75)为流动相，流速1．0ml／min，柱温30℃，检测波长277nm。

（二）对照品溶液制备精密称取连翘苷对照品5．14mg置25ml容量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，，备用。

XXXXXXXXXXX有限公司成品质量标准及检验操作规程1 品名：1.1 中文名：连翘提取物1.2 汉语拼音：LianqiaoTiquwu2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：中国药典（2020年版一部）。

6 质量标准：检查水分不得过5.0%（通则0832第二法）。

重金属取本品1g，依法检查（通则0821第二法），不得过20mg/kg。

砷盐取本品5g，置坩埚中，取氧化镁1g覆盖其上，加入硝酸镁溶液（取硝酸镁15g，溶于100ml水中）10ml，浸泡4小时，置水浴上蒸干，缓缓炽灼至完全炭化，逐渐升高温度至500-600℃，使完全灰化，放冷，加水5ml使湿润，加6mol/l盐酸溶液10ml，转移至50 ml量瓶中，坩埚用6mol/l盐酸溶液洗涤3次，每次5ml，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，取10ml，加盐酸3.5ml与水12.5 ml，依法检查（通则0822第一法），不得过2mg/kg同法定标准特征图谱照高效液相色谱（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为235nm。

理论板数按连翘酯苷A峰计算应不低于4000。

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0～1010～4040～6010～2525～4040～6090～7575～6060～40参照物溶液的制备取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含连翘苷30µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品25mg，精密称定，至5ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

供试品特征图中应有4个特征峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。

HPLC 法测定清热胶囊中连翘苷的含量潘喆;张辉;宋文静【摘要】目的：建立 HPLC 法测定清热胶囊中连翘苷含量。

方法：取清热胶囊样品经中性氧化铝柱预处理，再以 Dia-monsil C18（250 mm ×4.6 mm，5μm）为色谱柱，乙腈-水（25∶75）为流动相，检测波长为277 nm，流速为1.0 ml／min。

结果：连翘苷含量与峰面积在0.2160~2.16μg 范围内具有良好的线性关系（r =0.9997）；平均回收率为99.7%，RSD 为1.18%（n =9）。

结论：该方法简便、准确、重复性好，可用于清热胶囊中连翘苷的含量测定。

【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2016(028)002【总页数】2页(P16-17)【关键词】连翘苷;HPLC;清热胶囊;含量测定【作者】潘喆;张辉;宋文静【作者单位】天津市南开区中医医院，天津 300102;天津市南开区中医医院，天津 300102;天津市南开区中医医院，天津 300102【正文语种】中文【中图分类】R927.2清热胶囊是天津市南开区中医医院的院内制剂，主要含有连翘、大青叶、拳参、板蓝根等中药，具有清热解毒、透热达表、利咽消肿的功效，适用于外感风热、咽喉肿痛、口干咽燥、久热不退者。

目前该制剂的质量标准只规定了拳参和连翘的薄层鉴别，没有定量检测方法。

连翘苷作为清热胶囊中主要有效成分之一，本课题拟采用HPLC法测定其含量，建立一种准确可靠、专属性强、简便快捷的定量方法，从而进一步提升该制剂质量标准，更好地控制该制剂的质量。

美国戴安UltiMate TM3000高效液相色谱仪(检测器：VWD-3100；泵：ISO-3100SD；自动进样器：WPS-300SL)；KH3200B型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)。

连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110821-200111)；清热胶囊由本院制剂室提供(批号130909、131208、140110)。

高效液相色谱法测定清喉咽颗粒中连翘苷的含量
范瑞;冯慧
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2010(022)006
【摘要】目的建立反相高效液相色谱法测定清喉咽颗粒中连翘苷的含量.方法采用Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(25:75)为流动相,流速为0.8mL·min-1,检测波长为UV277nm,柱温:30℃,进样量:10μL.结果连翘苷在10.50～40.20μg·mL-1范围内,浓度与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),精密度试验RSD为0.16%(n=5),稳定性试验RSD为0.5%,平均回收率为99.26%.结论本方法简便,快速,结果准确,可靠,重现性好,可供本品质量控制用.
【总页数】2页(P87-88)
【作者】范瑞;冯慧
【作者单位】天津市大港医院,天津300000;天津市大港医院,天津300000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定小儿感冒颗粒中连翘苷含量 [J], 朱影影
2.高效液相色谱法测定银翘解毒颗粒中连翘苷的含量 [J], 汪玉萍;李传响
3.反相高效液相色谱法测定小儿感冒颗粒中连翘苷含量 [J], 郑小平;杨堃
4.高效液相色谱法测定清喉咽合剂中连翘苷含量 [J], 石瑞平;曹璐玮
5.高效液相色谱法测定感冒热毒清合剂中连翘苷的含量 [J], 邹晓华;何伟康;戴安印;邹杰;张扬
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连翘苷的提取及其稳定性研究赵咏梅;王雷【摘要】采用甲醇提取法提取连翘叶中的连翘苷,HPLC法进行含量测定,并用分光光度法测定温度、酸碱度、光照条件和不同食品添加剂对连翘苷提取液稳定性的影响.结果表明,样品连翘苷含量为48.182 mg·L-1,纯度为96.3％.连翘苷提取液不耐高温,50℃以上时,吸光度值下降;连翘苷提取液在中性条件下最稳定,并且光稳定性好.糖类对连翘苷稳定性无明显影响,经过蔗糖、麦芽糖、葡糖糖和果糖处理之后其吸收值在0.4035～0.4037之间;柠檬酸盐类对连翘苷提取液的稳定性影响较大,但与时间因素无关.【期刊名称】《陕西农业科学》【年(卷),期】2016(062)005【总页数】3页(P21-23)【关键词】连翘苷;食品添加剂;吸光度;稳定性【作者】赵咏梅;王雷【作者单位】西安文理学院生物与环境工程学院,陕西西安710065;西安文理学院生物与环境工程学院,陕西西安710065【正文语种】中文连翘(Forsythia suspense)属木犀科植物，主要分布于陕西、山西、四川、河南、河北等地［1］，其良好的经济效益、生态效益、以及在新药开发和新资源利用中的重要地位已被越来越多的人所认识。

连翘中的主要活性成分是木脂素类化合物连翘苷［2］。

连翘苷不仅具有清除自由基、减肥降血脂作用，同时其抑制神经细胞损伤，增加细胞活性的作用已被证实［3～5］。

笔者还就连翘苷的甲醇提取法进行了研究，认为采用甲醇提取的连翘苷具有纯度大、稳定性较好的优点，然而，其稳定性分析和研究还较缺乏［6］。

为此，笔者实验选择连翘叶为提取原料，通过单因素试验研究连翘苷提取液在不同温度、pH、糖类和光照条件下的稳定性，并检测了几种食品添加剂对连翘苷提取液稳定性的影响，为更好控制连翘提取物质量提供依据。

现报道如下。

1．1 材料、试剂和仪器设备1．1．1 植物材料连翘叶，采摘自秦岭北麓蓝田灞源段，清洗、烘干后保存备用;连翘苷标准品购自于陕西省食品药品监察局，冰箱中避光保存。

连翘含量测定方法（连翘苷）来源: 作者:佚名连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspense（Thunb.）Vahl的干燥果实。

2005版《中国药典》采用高效液相色谱法测定了连翘苷的含量。

文献报道的连翘苷的含量测定方法主要有高效液相色谱法和薄层扫描法。

一、高效液相色谱法2005《中国药典》连翘含量测定项下：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25：75）为流动相，检测波长为277nm；理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。

供试品溶液的制备：取本品粉末约1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液5ml，蒸至近干，加中性氧化铝0.5g拌匀，加置中性氧化铝（100～120目，1g，内径1～1.5cm）上，用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

文献报道的HPLC法，流动相系统以乙腈-水为多，也有以乙腈-冰醋酸溶液为流动相的。

现总结如下：王隶书等用HPLC法测定抗病毒滴丸中连翘苷的含量。

采用日本岛津LC210AT高效液相色谱仪，紫外分光检测器；日立U23400型分光光度计；日本岛津ODS-C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-水(24：76)为流动相；柱温30℃；检测波长277nm。

杨德柱等采用高效液相色谱法测定夏莲颗粒剂中连翘苷的含量时，采用日本岛津公司高效液相色谱仪；色谱柱：Shim-pack ODS柱（日本岛津公司, 5μm，150mm×4.6mm）；柱温：25℃；流动相：乙腈-水-三乙胺（24：76：0.02）；流速：1.0mL/min；检测波长：276nm。

样品的制备方法同药典。

徐晓梅等采用RP-HPLC法测定病毒清口服液中连翘苷的含量。

药典标准提高连翘抢青将得到有效遏制2020年版《中国药典》进一步完善了中药饮片标准体系。

其中，对连翘含量测定增加了挥发油的检测项，这一变化对连翘产业将带来什么影响呢？挥发油检测的重要性近年来，《中国药典》对连翘的检测项目不断增加，标准不断提升与完善：2000年版增加了连翘苷的含量测定；2010年版增加连翘酯苷A的含量测定；2020年版又增加了挥发油的检测项。

在笔者看来，挥发油的检测非常重要。

对于连翘来说，仅测定连翘苷和连翘酯苷A是不够的。

因为连翘苷与连翘酯苷A不仅在连翘果实中有，其果柄、枝梗、叶子中均含有。

环太行山连翘产业协同创新联盟曾经做过一个《连翘入药部位探讨》的实验，发现连翘叶子中连翘苷、连翘酯苷A的含量均高于果实。

还有实验表明，连翘未成熟的青果中连翘苷、连翘酯苷A的含量高于连翘成熟果实。

连翘苷和连翘酯苷A，可以说是连翘植物的固有成分，是与生俱来的。

但连翘的挥发油则是后期形成的，成熟的果实才有，嫩果、叶子是没有的。

挥发油是聚集在连翘种子种仁部位，只有待连翘果实膨大、果实表皮有多数突起的小斑点生长出来，连翘果实内部的种子生成以后，才开始逐渐生成与积累，并随着果实的成熟不断增加与聚集。

果实越接近成熟，挥发油含量越高。

所以采摘连翘鲜果要坚决杜绝抢青，抢青的连翘鲜果不含挥发油或含量较低。

对连翘增加挥发油的检测项，将有效促进连翘质量的提高，引导这一产业健康发展。

连翘抢青将得到有效遏制连翘入药的历史很悠久，其采收加工的历史也很久远。

产地采收，原本都是在连翘果实生长成熟之后，农民才上山采摘，晒干之后再过筛、分拣，之后才去出售。

而近些年来出现的抢青，是在连翘果实未成熟时提前采摘。

使用抢青的连翘不仅不利于药品安全有效，而且造成了巨大的资源浪费。

笔者几十年来几乎跑遍晋豫陕鄂冀鲁六省份所有的连翘主产地与次产地，对连翘的生长环境、灾害影响、采摘时节、杀青技巧、烘干技术、质量标准、需求企业等情况比较了解。

让人痛心的是，近些年来，受利益驱使，未到最佳采收期就有采摘者和商贩抢青采摘和收购连翘。