液相色谱-质谱联用(LC-MS)使用指南及注意事项

液质联用系统安全操作及保养规程液质联用系统（LC/MS）是一种结合液相色谱和质谱分析技术的分析仪器，对于分析化学领域有着极其重要的作用。

LC/MS具有高灵敏度、高分辨率、高准确性和高特异性等优点，广泛应用于食品、医药、环保等行业。

然而，对于使用者而言，操作和保养LC/MS也是十分必要和重要的，以确保仪器的正常工作并保证分析结果的准确性和可靠性。

安全操作须知1.实验前的准备在进行实验分析前，必须仔细阅读LC/MS使用手册中的所有安全注意事项，并作好以下准备工作：•将仪器电源连线插入接地插座，确保电源线接合可靠。

•确保分析样品和化学品处理过程符合实验室安全标准以及实验室规定的相关操作规程。

•向仪器中注入液相色谱用毒性和危险性低的试剂前，要对管路进行完全清洗以去掉残留的有机物和其它污染物。

•准备好实验用品，包括气源、溶剂等。

2.操作仪器时应注意的事项•在操作仪器时，必须先开启抽风设备，确保仪器内部是真空状态。

•在液相色谱柱加入样品前，必须紧闭阀门，待离子阱内压力达到最大值时再进行开启。

•操作仪器时，生产出的气体或化学品蒸气对人体有毒性或危害的，应留意防护政策。

3. 不良事件的处理在使用LC/MS操作过程中，可能会出现仪器故障或抽真空失败等问题，需及时采取相应的应急措施，避免对仪器使用和操作人员安全造成影响。

保养规程为了保证LC/MS正常运行并提高仪器的寿命，需要对仪器进行定期的保养和维护。

1. 液相色谱柱保养液相色谱柱是LC/MS系统中最重要的部分，定期清洗液相色谱柱可以提高柱寿命和GC/MS分析的准确性。

•长时间不使用柱的情况下，应该清理柱上涂层。

•对应用多次的液相色谱柱，可以使用高压水洗清洗柱体。

•不要过度使用柱，超出要求使用寿命，会降低仪器的灵敏度和分辨率，产生干扰物。

2. 真空泵保养真空泵是LC/MS中主要的工作部件之一，维护真空泵的正常工作状态十分重要。

•定期清理真空泵上的减压单元，以保证泵的稳定性和抽取气体的速度。

液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）设备安全操作规程1. 前言：液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）是分析化学的一种重要手段，它具有高灵敏度、高分辨率、高准确度、高特异性等优势，广泛应用于环境、医药、制药、化工、食品、农业等领域的分析和检测。

然而，LC-MS作为一种特殊的化学分析仪器，在操作中存在潜在的危险，若不遵循正确的操作规范，不仅容易引起设备损坏，还可能对人员造成伤害。

为了保障人员安全，实现设备的正常运行，特制定本操作规程，供液相色谱-质谱联用仪的使用者参考。

2. 设备基本情况：液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）是由主机、气源、布图仪、气液控制器等部分组成的，具体情况如下：•主机：负责液相和质谱数据的采集和处理；•气源：提供质谱需要的空气或氮气；•布图仪：由我们提供样品，通过特定的方法将样品尽量分离，并且将其从液体中进入气态；•气液控制器：控制样品的流动，以便样品进入到质谱分析中。

3. 设备安全操作规程：3.1 设备运行前的检查在每次使用之前，操作人员必须进行设备的检查，确保设备状态正常，无任何故障，具体操作如下：•检查主机的电源线和通讯线是否连接牢固；•检查各个部分的仪器是否通电，是否工作正常；•检查设备的气源是否给予充足，如供气压力、纯度是否符合要求。

3.2 操作前的准备操作人员在开始操作前，必须完成以下准备工作：•佩戴实验室的个人防护用品，包括手套、防护眼镜、口罩等；•将操作手册材料准备齐全，保持操作手册对设备的清洁程度；•检查样品的来源和容器包装，保证样品的完整性。

3.3 操作时的注意事项操作人员在实验操作中，必须注意以下事项：•在操作前认真阅读操作手册，并按照操作手册上的步骤进行操作；•操作过程中，必须正确设置设备的参数，并按照标准的操作流程进行操作；•在使用设备时，必须遵守操作规范，领先实验室人员的统一指挥。

3.4 操作后的注意事项操作人员在完成操作后，必须进行以下事项：•断开电源，关掉气源，离开安全区域；•将设备周围的样品容器归位，并整理好样品的相关文件；•检查设备的状态，是否存在漏洞、损坏等情况，并及时进行相应的处理。

液相色谱质谱联用仪器器使用方法说明书一、介绍液相色谱质谱联用仪器是一种高效、精确的分析仪器，结合了液相色谱（HPLC）和质谱（MS）的技术优势，广泛应用于化学、生物、医药等领域。

本说明书旨在详细介绍液相色谱质谱联用仪器的使用方法，帮助用户正确操作和充分发挥仪器的性能。

二、仪器组成液相色谱质谱联用仪器包括色谱部分和质谱部分。

色谱部分主要由进样器、柱温箱、高压泵和检测器组成。

质谱部分则包括质谱检测器、离子源和质谱转移接口等组件。

三、仪器准备1. 确保仪器通电并连接到电源稳定；2. 检查进样器、柱温箱、高压泵和检测器是否正常工作；3. 检查质谱部分的质谱检测器、离子源和质谱转移接口是否工作正常。

四、进样1. 准备样品溶液，并通过微量注射器将其注入进样器中；2. 设置进样容量和进样方式，如全量进样或部分进样；3. 启动进样器，确保样品能够顺利进入柱温箱。

五、柱温箱设置1. 根据分析需求选择合适的柱子，并放置于柱温箱中；2. 设置柱温箱的温度，保证样品在一定温度下进行分离。

六、色谱方法1. 根据分析目标，选择合适的色谱方法，包括流动相选择、流速控制、柱温控制等；2. 设置色谱条件，如柱温、梯度洗脱程序、检测器波长等；3. 运行色谱仪器，确保色谱分离的有效进行。

七、质谱条件1. 设置质谱检测器的参数，包括电压、电流等；2. 选择离子源类型和工作模式，如正离子模式或负离子模式；3. 调节质谱转移接口的温度，确保质谱分析的稳定进行。

八、数据处理1. 选择适当的质谱数据采集软件，并连接到液相色谱质谱联用仪器；2. 运行数据采集软件，对质谱数据进行采集和保存；3. 使用相关的数据处理软件进行数据分析和解释。

九、注意事项1. 使用仪器前，请先阅读仪器的安全操作指南，并按照要求进行操作；2. 定期检查和维护仪器的各个部件，保持其正常工作状态；3. 注意样品的储存和处理，避免污染和损失。

以上是液相色谱质谱联用仪器的使用方法说明书，希望对用户有所帮助。

液相色谱电喷雾质谱联用仪使用方法说明书使用方法说明书1. 概述液相色谱电喷雾质谱联用仪（以下简称LC-MS）是一种先进的分析仪器，它能够同时进行液相色谱和质谱分析，广泛应用于生物化学、临床医学、环境科学等领域。

本说明书将详细介绍LC-MS的使用方法，以便用户正确高效地操作仪器。

2. 仪器准备2.1 确保仪器处于稳定的工作环境，远离振动和电磁干扰。

2.2 检查LC-MS各部分的连接是否紧固，并检查气源、溶剂、离子源等是否充足。

2.3 打开电源，启动LC-MS系统，让其进行自检和预热，待系统完全准备好后方可进行下一步操作。

3. 参数设置3.1 打开软件界面，在菜单栏中选择“方法设置”。

3.2 在方法设置界面中，根据样品的特性和实验需求，设置相应的参数，如柱温、流速、采集范围等。

3.3 确认参数设置无误后，保存参数并返回主界面。

4. 样品准备4.1 根据样品的性质，选择合适的样品制备方法，如溶解、稀释等。

4.2 准备样品注射器，将样品按照设定的体积注入。

4.3 将样品放入样品托盘中，并按下合适的注射方法，如自动、手动等。

5. 分析操作5.1 在软件界面点击“运行”菜单，选择“样品分析”功能。

5.2 确认样品装载完毕后，点击“开始运行”按钮，仪器开始进行样品分析。

5.3 观察分析过程中的仪器状态，如气流、电压、流速等，确保正常运行。

5.4 分析完毕后，保存分析结果，关闭软件界面。

5.5 关闭电源，切断气源，并进行仪器的清洗、维护等操作。

6. 数据处理6.1 打开数据处理软件，导入保存的分析结果。

6.2 根据实验要求，进行数据处理、质量校正等操作。

6.3 绘制数据图表，进行结果展示和分析。

6.4 根据需要，将数据导出保存或打印出来。

7. 注意事项7.1 操作中需注意安全，避免溶剂溅出、电流过大等情况。

7.2 使用前务必检查仪器状态，如气源、溶剂余量等，确保仪器正常工作。

7.3 操作过程中如出现异常情况，应及时停机排除故障或咨询专业人员。

液相色谱质谱仪安全操作及保养规程液相色谱质谱仪（LC-MS）是一种高档的分析仪器设备，其功能主要是将液相色谱与质谱相结合，能够对样品的组成及结构进行快速、准确的分析。

本文主要介绍液相色谱质谱仪的安全操作和保养规程，以确保仪器的顺畅运行和长期使用。

操作安全1.安全指南在使用液相色谱质谱仪之前，用户必须熟知仪器的安全指南，确保自己的安全和设备的安全。

安全指南通常包括以下内容：•工作场所应清洁、通风良好，无任何杂物；•操作前需要注意静电防护；•在操作过程中，用户应当严格遵守操作步骤，不要随意更改设备的工作状态；•操作过程中不要摆放任何易燃、易爆、有毒、有害物品；•已使用的化学试剂及设备必须正确处理。

2.实验室涉及的安全标识为保证实验室的安全，用户必须熟知实验室内涉及的安全标识。

液相色谱质谱仪实验室通常包括以下安全标识：•电源开关；•高压开关及指示灯；•消防灭火器及应急电话等。

保养规程1.日常维护•屏幕及键盘：每天用干净柔软的布擦拭，防止灰尘与污垢积累；•列管和积分器：应该定期清洗，以免样品残留而污染设备和传感器；•柱温箱：应该定期清洗，并且使用干的清洗布将柱温箱干燥，以免产生水分影响设备；•电脑主机：需要定期清理灰尘，以保持通风良好；•定期检查冷却水的水质和水量，以免反应器过热。

2.工作结束后的清理和保养•清洗并干燥积分器，以免样品残留影响使用；•清理槽内残留的试剂；•将标准品及样品浓缩得到的溶液和残留杂质处理掉，以免污染液相色谱质谱仪；•关闭电源等设备，避免设备过热及短路。

总结液相色谱质谱仪的安全操作和保养规程能够保证设备的顺畅运行，延长其使用寿命。

用户在使用设备之前，必须认真了解安全指南和实验室内涉及的安全标识，以确保自己的安全。

用户还必须按照规程进行日常维护，及时清理设备，确保设备的正常运行。

总之，正确的操作和日常维护，加上仪器的定期检查，都有助于仪器的长期安全运行。

高效液相色谱质谱联用仪使用方法说明书一、仪器概述高效液相色谱质谱联用仪（以下简称LC-MS）是一种先进的仪器设备，结合了高效液相色谱（LC）和质谱（MS）技术，广泛应用于生物分析、环境监测、药物研发等领域。

本说明书旨在介绍LC-MS的使用方法，以帮助用户正确操作该设备。

二、仪器安装1. 确保工作环境安静、干燥，温度适宜（推荐温度范围为20℃-25℃）。

2. 按照仪器说明书的指导，将LC-MS按正确方式连接至电源，确保电源连接可靠。

3. 连接好所有必要的外接设备，如气源、进样器、数据处理系统等。

4. 打开气源，检查气源压力是否符合要求。

5. 开机并等待仪器初始化完成。

三、仪器操作1. 样品准备a) 根据待测样品的性质和目的，选择合适的前处理方法，如萃取、纯化、稀释等。

b) 遵循实验室安全规范，佩戴适当的防护设备。

c) 调整样品pH值、浓度等参数，以适合LC-MS分析需求。

2. 进样操作a) 将样品转移到进样器中，确保进样量在仪器规定范围内。

b) 选择合适的进样模式，如定量进样或定性进样。

c) 设置进样速度和持续时间，确保进样过程稳定、准确。

3. 色谱条件设置a) 根据实验需求，选择合适的色谱柱和流动相。

b) 设定流动相流速、梯度程序等参数。

c) 检查色谱柱是否安装正确，确保流动相通畅。

4. 质谱条件设置a) 选择合适的离子源和检测器。

b) 设置离子源温度、碰撞能量、离子化模式等参数。

c) 调整质谱仪的扫描范围和灵敏度，以获得最佳的信号质量和峰形。

5. 数据采集与分析a) 启动数据采集系统，确保数据记录正常进行。

b) 设置合适的检测时间、数据采集速率等参数。

c) 对采集到的数据进行初步处理和分析，如峰识别、质谱图解析等。

d) 可根据需要，进行数据后处理，如定量计算、峰面积积分等。

6. 仪器维护与保养a) 每日操作结束后，及时清洗进样针和色谱柱，以保证仪器性能。

b) 定期检查仪器的气路、流路、电路等，确保其正常工作。

液相色谱质谱联用仪使用方法说明书一、概述液相色谱质谱联用仪（Liquid Chromatography Mass Spectrometry,LC-MS）是一种高效、灵敏、准确的分析仪器，可广泛应用于药物研发、食品安全、环境监测等领域。

本说明书将详细介绍液相色谱质谱联用仪的使用方法，以帮助用户正确操作设备、获得准确可靠的实验结果。

二、仪器准备在操作液相色谱质谱联用仪前，必须先保证仪器和设备处于正常工作状态。

以下是仪器准备的步骤：1. 检查仪器的电源和通电线路，确保供电正常。

2. 打开仪器主机，并等待其启动完成。

3. 检查液相色谱部分的压力、流速等参数是否正常设置。

4. 检查质谱部分的离子源、质谱扇区等参数是否正常设置。

5. 检查进样部件及其周围的管线是否干净，无杂质。

6. 检查色谱柱的连接是否牢固，无泄漏。

三、样品处理在进行液相色谱质谱联用分析之前，需要对样品进行适当的前处理。

以下是样品处理的一般步骤：1. 收集样品，并进行必要的前处理，如固相萃取、溶解等。

2. 确保样品处理过程中不受外界污染物的干扰。

3. 对于浓度较高的样品，需进行稀释，以避免过高的信号干扰质谱仪器。

4. 在样品处理过程中，注意保持操作环境的洁净和无尘。

四、仪器操作液相色谱质谱联用仪的操作需要严格按照下述步骤进行：1. 启动液相色谱模块和质谱模块，并确保它们的连接稳固。

2. 在液相色谱控制软件中设置样品信息、进样体积和流速等参数。

3. 使用自动进样器或手动进样装置将样品注入，务必避免空气进入系统。

4. 开始液相色谱分离过程，注意实时观察结果，确保色谱峰的分离良好。

5. 通过质谱软件设置离子源和扇区等参数，将样品引入质谱进行离子化。

6. 在质谱软件中选择所需的检测模式和离子反应监测。

7. 开始质谱分析，观察质谱峰的出现和相对丰度。

8. 根据实验需要，可进行质谱检测参数的优化和调整。

9. 实验结束后，关闭仪器，并做好相关的仪器保养和维护。

液相色谱质谱联用仪器操作说明书1. 引言液相色谱质谱联用仪器（LC-MS/MS）是一种广泛应用于科研、医学和环境等领域的高效分析工具。

本操作说明书旨在提供该仪器的详细操作步骤，以帮助用户正确并有效地操作该仪器。

2. 仪器概述LC-MS/MS联用仪器主要由液相色谱系统和质谱系统组成。

液相色谱系统用于分离复杂样品，质谱系统用于对分离后的样品进行分析和识别。

仪器配备了高精度电泵、自动进样器、色谱柱和质谱探测器等关键部件。

3. 操作步骤3.1 准备工作a) 检查仪器的供电线路，确保接触良好并与电源连接；b) 检查液相色谱系统和质谱系统的连接线路，确保连接稳固；c) 检查样品进样器和色谱柱的连接情况；d) 确保仪器内部的溶剂储罐中有足够的溶剂；e) 打开仪器主机，并等待其启动完成。

3.2 液相色谱系统操作a) 设置流动相：根据实验需求，在液相色谱系统的控制面板上设置合适的流动相比例和浓度；b) 准备进样器：确保进样器中装有正确的样品，并使用注射器将样品注入进样器内；c) 开始运行：根据实验要求，在液相色谱系统中点击启动按钮，开始分离样品。

3.3 质谱系统操作a) 等待分离完成：待液相色谱系统运行结束后，确保样品成功进入质谱系统之前，暂停运行；b) 设置离子源参数：根据需要，在质谱系统面板上设置合适的离子源参数，例如离子化模式；c) 设置质谱扫描模式：根据实验要求，选择合适的质谱扫描模式，例如全扫描或选择离子监测（SIM）；d) 开始数据采集：点击质谱系统控制面板上的开始按钮，开始数据采集和分析；e) 结束实验：实验结束后，按照操作程序进行仪器的关机和清洁工作。

4. 注意事项a) 在操作仪器之前，必须经过相关培训并掌握仪器操作的基本知识；b) 严格按照操作手册中的步骤来操作，避免操作错误；c) 在更换色谱柱或样品时，必须彻底冲洗系统以避免交叉污染；d) 定期对仪器进行保养和维护，确保其正常工作状态；e) 实验后，对仪器进行彻底清洁和消毒。

液相色谱质谱联用仪的操作流程液相色谱质谱联用仪（LC-MS）是一种常用的分析仪器，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。

本文将介绍液相色谱质谱联用仪的操作流程，以保证准确的实验结果和最佳的分析效果。

1. 仪器准备在进行操作之前，需要先进行仪器的准备工作。

首先，确保仪器处于正常工作状态，检查液氮和氮气等供应是否充足。

检查并调整离子源的温度，通常设置在250-350摄氏度之间。

接下来，检查和校准离子注入器和内部标准品的浓度。

2. 样品准备将待测样品进行适当的前处理工作，如提取、稀释等。

确保样品处理的步骤符合分析要求，并且不会对仪器造成损坏。

如果需要，可以进行样品的保护，避免样品因为长时间接触大气而发生变化。

3. 仪器设置打开液相色谱质谱联用仪的软件，并进行仪器参数的设置。

根据分析的需要，选择适当的色谱柱和流动相组合。

确保流动相的纯度和质量，并根据实验要求调整流速、温度和梯度程序等参数。

在设置离子源参数时，根据样品的性质选择合适的离子化方式和离子源温度。

4. 校准和质控进行仪器的校准和质控工作，以验证仪器的准确性和灵敏度。

校准通常使用标准品进行，根据标准曲线来确定待测物的浓度。

质控工作包括运行质控样品，监测仪器的性能和稳定性，以及进行数据的准确性和可重复性评估。

5. 样品进样将经过准备的样品注入到液相色谱质谱联用仪中。

通常使用自动进样器来进行样品进样，确保样品进样的精确性和稳定性。

根据样品的性质和分析的要求，选择合适的进样方式和进样体积。

6. 分析运行根据实验需要启动分析运行，控制仪器按照预设的方法进行分析。

需要注意的是，在分析过程中要监测仪器的工作状态，确保仪器正常运行。

同时，对于出现异常的情况，要及时采取措施进行排除，并记录相关信息。

7. 数据处理实验完成后，对得到的数据进行处理和分析。

通常使用液相色谱质谱联用仪软件或其他统计软件进行数据处理。

可以根据实验要求进行峰面积、保留时间等参数的计算和结果的评估。

高效液相色谱质谱联用仪使用说明书一、产品概述高效液相色谱质谱联用仪（以下简称LC-MS/MS）是一种用于分析和检测样品中化合物的仪器。

其基本原理是将样品经过高效液相色谱分离后，再通过质谱进行定性和定量分析，以实现对复杂样品的快速、高灵敏度的检测。

二、安装与调试1. 确保LC-MS/MS仪器平稳放置在水平台面上，并与电源连接。

2. 连接色谱泵、进样器、柱温箱和质谱仪等相关部件，确保连接不松动。

3. 检查气源供应是否稳定，并根据实际情况调整气流流量。

4. 打开仪器电源并按照说明书的步骤进行调试，确保仪器各部件正常工作。

三、仪器操作1. 打开LC-MS/MS软件，在仪器连接界面选择相应的设备并连接。

2. 启动色谱泵和进样器，并设置相关参数，如流速、样品进样体积等。

3. 设置柱温箱温度，并等待温度稳定。

4. 运行质谱仪，设置离子源温度、离子源极性等参数，并选择合适的离子化模式。

5. 在软件界面上设定分析方法，包括色谱梯度程序、离子扫描范围、碰撞能量等。

6. 进行样品进样，并开始运行分析方法。

7. 分析结束后，关闭仪器设备，保存相关数据和设定信息。

四、维护与保养1. 每天检查色谱泵、进样器、柱温箱等部件的连接是否松动，如有松动及时紧固。

2. 每周对色谱柱进行检查和保养，根据使用情况进行废弃柱更换。

3. 定期对离子源进行清洗和校准，确保质谱仪的灵敏度和稳定性。

4. 定期进行仪器的保养和维护，如更换气源过滤器、检查电源线等。

5. 注意将仪器放置在稳定的环境中，避免受到振动和温度波动的影响。

五、故障排除1. 如遇到设备故障，请先检查电源、连接线和气源是否正常。

2. 根据故障代码或警报信息，在说明书或技术支持中心查找相应的解决方案。

3. 如果无法解决故障，请联系售后服务中心进行维修或更换故障零部件。

六、安全注意事项1. 仪器操作应在专业人员指导下进行，严禁非专业人士操作。

2. 在使用仪器时，应佩戴适当的个人防护设备，如实验手套、护目镜等。

高效液相色谱质谱联用仪的使用方法高效液相色谱质谱联用仪（LC-MS）是一种广泛应用于生化分析、药物代谢研究、环境监测等领域的分析工具。

本文将详细介绍高效液相色谱质谱联用仪的使用方法，包括样品准备、设备操作和数据分析等方面。

一、样品准备1. 样品的选择与制备在进行LC-MS分析前，首先需要选择适合的样品进行测试。

样品的选择应基于实验的目的和研究对象。

样品制备要注意避免污染和失真，一般要进行样品提取、纯化和浓缩等步骤。

2. 样品溶解与稀释对于固体样品，可以选择合适的溶剂将其溶解，并根据需要进行稀释。

溶解和稀释过程中要注意保持样品的稳定性和一致性，避免对分析结果产生影响。

二、设备操作高效液相色谱质谱联用仪的操作步骤如下：1. 仪器开机与系统准备打开仪器电源，同时进行系统的准备工作。

包括启动色谱柱热箱和质谱仪，检查气源和溶剂供应等情况。

2. 参数设置与方法建立根据实验需要，设置合适的色谱条件和质谱参数。

包括进样量、流动相组成、流速、柱温等参数。

方法建立时要充分考虑分析物的性质和要求，确保分离和检测的准确性。

3. 样品进样与洗脱将预处理好的样品注入进样器进行进样。

根据方法要求进行样品洗脱，通常包括梯度洗脱、等温洗脱等步骤。

注意控制流速和温度，保证洗脱效果和色谱分离的质量。

4. 质谱检测与数据采集确保质谱仪的工作状态正常，进行质谱检测和数据采集。

根据实验要求选择合适的离子模式和检测模式，确保检测的准确性和灵敏度。

三、数据分析完成LC-MS分析后，需要对数据进行处理和分析，以获得所需的结果。

数据分析的步骤主要包括质谱图解析、峰识别和峰面积积分等。

1. 质谱图解析根据样品的特点和分析目的，对质谱图进行解析。

观察和分析相应的质谱峰，确定目标化合物的质量信息和碎片产物等。

2. 峰识别与峰面积积分通过峰识别算法，识别出样品中的不同成分并测量其峰面积。

根据峰面积可以计算出物质的相对含量。

3. 结果分析与报告根据实验目的和要求，对数据进行进一步的分析和解释。

LC/MS液质联用经验手册液质使用经验与禁忌一、酸性物质适合做负离子检测，所以流动相偏碱性较合适，促使其解离，碱性物质适合做正离子检测，流动相中适当的加入酸，促使其形成正离子，流动相中适当加一些醋酸钠（或者醋酸铵），可形成加钠的正离子或加铵的正离子。

液质分析中推荐使用的流动相和添加剂推荐使用不使用/尽量不使用有机溶剂反相：乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、二氯甲烷正相：吐仑、己烷、苯、环己烷、四氯化碳四氢呋喃缓冲液乙酸铵、甲酸铵磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐酸乙酸、甲酸、三氟乙酸（正离子）硫酸、高氯酸、磷酸、盐酸、磺酸碱氨水季铵、强碱、三乙胺其它清洁剂、表面活性剂、离子对试剂、不挥发盐二、糖苷类的物质在做FAB和ESI+时，[M+Na]峰往往比[M+H]峰要强，此为经验，原因只是推测可能和天然产物的提取过程有关；盐类化合物如盐酸盐、硫酸盐在质谱中酸的部分一般不会出现；二羧酸盐（esi 负离子模式）除了分子离子峰外，会出现连续掉44的两个峰，为失去羧酸根的离子，这三个峰非常特征，但是会受锥孔电压的影响，调低电压谱图会更漂亮。

三、胺类物质做ESI质谱时要注意进样量要少，因为很容易离子化，不易冲洗干净，会影响后面样品的测定。

像三乙胺在液质联用时不能用于调节流动相pH值。

若不慎引入三乙胺，在正离子检测时总会出现很强的102峰（三乙胺的[M+H]）。

四、质谱用水一般用娃哈哈纯净水之类的就很好；质谱用甲醇和乙腈，换用了很多品牌，发现Merck的还是稍微好一些；Finnigan用的氮气不一定要用到液氮瓶，用普通的钢瓶气就可以了，可能还省钱些；建议大家买一个好一点的手电筒和一个放大镜，手电筒用来看源里面，放大镜看你割的毛细管平整。

五、质谱的基线其实跟液相的紫外检测器和荧光检测器一样，基线高的原因不外乎内部和外部的原因。

①你选择的流动相在质谱的响应比较高，比如水相比较多的时候，噪音比较大些；还有如果盐含量比较大的时候，噪音更大些。

你有在使用LC-MS吗？LC-MS常见使用经验教训汇总！食品实验室服务液相色谱-质谱联用技术又叫液质联用（LC-MS），它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。

液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。

液—质联用接口技术主要是沿着三个分支发展的：（1）流动相进入质谱直接离子化，形成了连续流动快原子轰击（continuous-flowfast atom bombarment，CFFAB）技术等。

（2）流动相雾化后除去溶剂，分析物蒸发后再离子化，形成了“传送带式”接口（moving-beltinterface）和离子束接口（particle-beam interface）等。

（3）流动相雾化后形成的小液滴解溶剂化，气相离子化或者离子蒸发后再离子化，形成了热喷雾接口（thermospray interface）、大气压化学离子化（atmospheric pressurechemical ionization, APCI）和电喷雾离子化（electrosprayionization, ESI）技术等。

*液质联用分析技术的发展取决于液质联用接口技术和质谱分析仪技术的共同发展。

通过合适的接口将液相色谱与质谱仪联接，会获得具有特殊分析性能的液质联用仪器，另外通过接口将质谱与质谱进行串联，可以弥补各种质谱仪的不足，达到取长补短，协同提高的效果。

为达到液相与质谱联接使用这一目的需要一个起“接口”作用的装置将液相与质谱联接起来。

这个接口要解决三个主要的问题：（1）液相色谱中使用的流速较大，而质谱需要一个高真空环境工作。

（2）要从流动相中提供足够的离子供质谱分析。

（3）去除流动相中杂质对质谱可能造成的污染。

分析特点HPLC-MS除了可以分析气相色谱—质谱（GC-MS）所不能分析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物之外，还具有以下几个方面的优点：①分析范围广，MS几乎可以检测所有的化合物，比较容易地解决了分析热不稳定化合物的难题。

液相色谱质谱联用仪操作说明书使用液相色谱质谱联用仪（LC-MS）可以同时实现对样品的分离和检测，具有广泛的应用领域，如生物医药、环境分析和食品安全等。

本操作说明书将详细介绍液相色谱质谱联用仪的操作步骤和使用注意事项，以便用户能够正确高效地操作该仪器。

1. 仪器准备在操作液相色谱质谱联用仪之前，需要进行一些准备工作：1.1 检查仪器是否正常，如电源是否连接、设备是否完好等；1.2 准备好样品和溶液，确保其符合实验要求；1.3 检查流体系统，确保流体通路没有堵塞或泄漏。

2. 开机和校准2.1 将电源插头插入电源插座，打开电源开关；2.2 打开计算机，运行液相色谱质谱联用仪的控制软件；2.3 按照软件提示进行系统自检和故障排除；2.4 进行校准，包括质谱校准和色谱校准，根据实验需要进行相应的校准操作。

3. 样品加载3.1 准备好样品及其溶剂，保证其浓度和体积符合实验要求；3.2 打开样品进样口，使用微量注射器将样品注入进样口；3.3 完成进样后，关闭样品进样口，并确保其密封。

4. 柱温控制柱温会直接影响样品的分离效果和质谱信号，因此需要根据实验要求进行柱温的控制：4.1 打开柱温控制软件，设置柱温的温度范围和稳定时间；4.2 将柱温控制器连接到液相色谱系统，根据实验要求进行柱温的调整和稳定。

5. 色谱分离5.1 打开色谱软件，设置分离柱类型和流速等相关参数；5.2 启动液相色谱泵，确保流速稳定；5.3 根据实验要求，进行梯度洗脱或等温分离等操作。

6. 质谱检测6.1 转换至质谱检测模式，选择质谱监测器和检测参数；6.2 设置离子源参数，例如电压和电流等；6.3 运行质谱软件，开始质谱检测。

7. 数据处理7.1 质谱软件会自动记录和保存检测到的质谱数据；7.2 使用数据处理软件，对质谱数据进行分析和解读；7.3 根据实验要求，导出和保存处理后的数据。

8. 仪器关闭8.1 关闭色谱软件和质谱软件；8.2 停止质谱检测和液相色谱泵；8.3 关闭计算机和液相色谱质谱联用仪。

液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)设备安全技术措施液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）是一种用于物质分析的高级技术设备，通常被广泛应用于医药化学、环境检测、化妆品、食品生产等领域。

由于其高效、高精度、高灵敏度等特点，它已成为许多实验室不
可或缺的分析仪器。

然而，随着LC-MS在实验室中的广泛应用，关于LC-MS设备的安
全问题也越来越受到关注。

考虑到设备的安全性对实验室员工和设备
的运行都是非常重要的，本文将着重介绍液相色谱-质谱联用仪LC-MS
设备安全技术措施。

疏散计划
首要的安全问题是如何疏散实验室人员，在发生突发事态时如火灾、气体泄漏等，必须有清晰的疏散计划。

疏散计划应该包括疏散路线、
疏散目的地等关键信息。

疏散计划需要针对不同的紧急情况做出不同
的应对措施。

设备维护
设备维护对于设备的安全运行也非常重要。

实验室操作人员必须定
期进行设备维护，检查设备的机械和电气部件是否正常，清洁设备等。

此外，在维护过程中，如果发现任何设备问题，要及时进行解决。

如
何快速排查问题和解决问题对于设备和实验室运行是至关重要的。

液相色谱质谱联用仪操作流程液相色谱质谱联用仪（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS）是一种结合了液相色谱分离技术和质谱检测技术的分析仪器。

它具有高分离能力和高灵敏度的特点，被广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。

下面将介绍液相色谱质谱联用仪的操作流程。

1. 样品准备a. 确定分析对象和样品类型，确定所需的前处理方法（例如提取、稀释、纯化等）。

b. 根据实际需要，适当调整分析方法的参数，如流速、柱温等。

c. 准备好所需要的仪器和耗材，包括注射器、采样瓶、进样器、柱子等。

2. 仪器准备a. 打开液相色谱质谱联用仪，确保其正常启动。

b. 根据分析需要选择合适的离子源和检测模式，例如正电离或负电离，电喷雾离子源或者大气压化学电离源。

c. 对仪器进行系统检漏和漂移校准，确保仪器的性能和稳定性。

3. 样品进样a. 将待分析样品按照预处理方法制备好，确保样品稳定性。

b. 使用自动进样器或手动进样器将样品注入进样口，控制进样量和进样速度。

c. 检查进样系统是否完好，防止样品污染或采样误差。

4. 柱温控制与分离a. 设置柱温，根据样品特性和分析方法选择合适的柱温。

b. 将预处理好的样品进入色谱柱中，进行样品分离。

c. 控制流速和梯度条件，以实现最佳的分离效果。

5. 质谱检测a. 确保离子源温度和电压稳定，以保证质谱的准确性和灵敏度。

b. 设置质谱仪器的扫描范围和扫描速度，根据分析需要选择合适的检测模式。

c. 监测检测信号，记录质谱图谱和峰图。

6. 数据分析与处理a. 使用专业的数据处理软件，导入质谱数据和色谱数据。

b. 对数据进行峰识别、定量分析和质谱解析。

c. 生成结果报告和数据图表，并进行数据的解释和评估。

7. 仪器维护与清洗a. 使用完毕后，关闭液相色谱质谱联用仪，进行仪器的常规维护。

b. 清洗进样口、柱子和离子源，以防止样品残留和交叉污染。

c. 对仪器进行定期的校准和保养，以保证仪器的稳定性和准确性。

LCMS操作操作注意事项LC/MS操作操作注意事项首先确定LC分析条件包括: mobile phase,gradient及column 等,并自备solvents,solvent/waste bottles,sample vials (1.8 ml).每次操作时: 分析前及完成后,需清洗管线至少半小时以上,确保无残留污染.MS分析条件已知或已找到相关参考资料.进入chemstation后,首先需check tune为pass才可进行以后之操作,否则立即通知仪器中心助理.条件设定,质谱解析及报告A. LC设定1. Column2. 液相条件 - 移动相的选择3. Set up Pump4. Set up Injector5. Set up DAD SignalsB. MS设定条件参考1.电喷雾(ESI)之3个基本步骤2.化学电离(APCI)之3个基本步骤:3.MS 雾化室(MSD spray chamber)4. Set up MSD signals 1- MSD Control (方框左方)5.Set up MSD Signals 2 - MSD Signal Settings (方框右方)6.选择离子检测(SlM)/ 扫描(scan)模式C. MS说明与解析:1.四极杆质量分析器有两种扫描方式:2.质谱常用术语3.质谱图相关概念4. LC-API/CID/MS5. MS解析规则与条件说明6. API电离步骤及过程:7. ESI 及APCI 最佳化条件8.将现有的LC方法改编为LC/API-MS方法9.萃取离子层析图(EIC)10. 建立校正表D. ReportA. LC设定1. Column :(1)通常填充物质的粒径3-10 μm的管柱是可用的.(2)大於10 μm的填充物不适合LC/MS分析,因为峰扩散很大.(3)粒径3-5 μm的填充物是较理想的.5 μm管柱可能更适合扫描模式,其峰宽度会比较小粒径的管柱宽.峰出现花费较少时间,可以有足够扫描速度和扫描整个峰.如果数据采集太快,损失谱图质量.3.5 μm管柱具有增加层析分辨率和灵敏度的优点.提高的分辨能力可更可靠地分离同分异构体.(4)根据实验需要选择Column的长度,对高流量简单分析用短Column.总分析时间会较短,当为复杂样品时,需要较长Column的分离能力.2. 液相条件 - 移动相的选择(1) 非挥发性的酸,碱,盐 => 挥发性的酸,碱,盐(2) Positive Ion ( pH 5.0 ; 9 preferred)●Acetic acid●Formic acid●Tri-fluoroacetic acid●Ammonium hydroxide●TEA(3) Post-column addition of acid or base may be used to adjust the pH if the chromatography won't work at the desired pH(4) 溶剂适用性Suitable for ES and APClSuitable for only APCIMethanoIAcetonitriIe ;*WaterEthanol ; Propanol ; lsopropanoI ; ButanoIDMF(1) ; DMSO(1)Acetic Acid ; Formic AcidAcetoneCH2C12 ; CHCI3THFTolueneBenzeneHydrocarbons (e.g Hexane)StyreneCCl4CS2Cyclic Hydrocarbons(e.g Cyclohexane)(5)许多常规的HPLC溶剂适合於API-MS.较好的电喷雾溶剂将在溶液中保持离子.因此,如甲苯这样的溶剂,在溶液中不会保持离子,不能用於电喷雾.虽然水是对离子极好的溶刹,但它的溶剂化能太高,去溶剂困难.(6)常用的LC/MS溶剂一般为高质量的甲醇,乙睛,水和挥发性添加剂,如甲酸,乙酸,甲酸铵和乙酸铵等.如果这些常规溶剂能满足分析的需要,可不考虑其他溶剂.(7)层析类型与离子源适用性ESIAPCIReversed phase*****Normal phase****p.s. Main compatibility problems: ions in solution are favorable for electrospray, but may lead to poor retention in reversed phase. High ionic strength and/or nonvolatile buffers may be hard to electrospray(8)ESI/APCI与HPLC的移动相之正反模式的相容性:(a)电喷雾有利於溶液中的离子.但是反相液相层析条件通常会抑制离子化,增加分子疏水性质.之后添加可用於克服这种类型的不相容性.样品通常挥发性低.(b)电喷雾对正相分离不是很有用,因为在正相移动相中通常不会形成离子.而APCI可处理非极性移动相,非极性样品通常较易挥发,因此正相层析可用於APCI.(c)以凝胶过滤形式的体积排阻层析与电喷雾相匹配.水相移动相和蛋白质样品是很好的匹配.凝胶过滤层析不适合APCI.通常样品不易挥发,而且缓冲液会引起APCI问题.然而,凝胶渗透层析由於移动相为有机性的,不太适合於电喷雾.3. Set up Pump(1)流速(flowrate) :流速就是溶剂沿著管柱流动的速度.保持流动速度为常数对确保精确的保留时间和峰面积测量是很重要的.(2)溶剂(solvent) :设定分析的溶剂组成.可选择一元分析或梯度流洗分析.设定通道B 的百分比为从0到100%的任何值.通道A为剩下的体积100-(%B).当运行反相层析分析时,建议把水相放在通道A.(3)压力界限(pressure limit) :设定压力限制的上限和下限,最高压力限是pump的自行停止的界限,保持分析系统压力避免过大.如果压力低於最低限以下,例如移动相走空以后,pump也将自动停止.(4)停止时间(stop time) :设定一个分析的时间.停止时间后,所有的梯度都会停止,并且pump 参教返回初始值.pump是一个完整分析系统停止时间的掌握者.(5)驻留时间(post time) :驻留时间是分析结束和下一个分析开始之间的最小时间间隔,可以利用驻留时间在改变移动相组成后平衡Column,例如梯度流洗以后.(6)时间表(time table) :时间表用於建立pump的梯度洗脱程序.pump时间表的值从时间表中定义的终值应随时间线性地变化.4. Set up Injector(1)标准的进样体积为0.1~100μL(标准配置).如果使用洗针功能,指定洗针所用的溶剂瓶号即可.其余参数一般不需要改变.(2)选择Use Injection programs可以按照使用者要求,安排程序进样.(3)如果希望两次进样取样间隔时间,可以选择Optimization选项:(a)Overlap Injection cycle:在前一针样品进行时,就提前把下一针的样品吸入定量瓶中,做好进样准备.要注意一定要改变后面的时间内定值,以保证前一针样品能够顺利进入液相系统,同时保证下一针样品的扩散最小.一般建议该时间选择在上一针样品进行停止之前1~2min.(b)Prefetch Sample Vial:在前一针样品进行时,就提前把下一针的样品抓取到针座上等候,做好进样准备.此时预约的时间要比上种选项要少,但没有样品扩散的风险.此时也要注意一定要改变后面的时间内定值,以保证前一针样品能顺利进入液相系统,一般建议该时间选择在上一针样品进行停止之前1~2min.(4)注意要保证Agilent 1200各个模式的Stop Time和Post Time的设定要一致,内定为As pump,即在pump的参数设定画面规定这两个时间即可.5. Set up DAD Signals(1) Signals :规定采集层析图所需的参数,要求样品的检测步长Wavelength(Sam.)设在化合物的最大吸收步长处,且大於溶剂的截止步长20nm以上.参考步长Wavelength(Ref)应设在样品没有吸收的地方,且越靠近样品的侦测步长越好.另外,要求BW(Ref)>BW(Sam.)>Slit,其中样品的谱带宽度Band Width(Sam.)应约等於其紫外吸收峰的半峰宽.注意记得保存所需通道的层析图,否则层析数据将不被保存.(2)Spectrum:规定采集吸收光谱时所需的参数.可保存所需张数的光谱图None, Apex + Baselines, Apex+Slopes+Baselines, Ail in Peak, Every 2nd Spectrum或All.若需要进行峰纯度检测或最佳化完全未知的样品检测条件,建议选择All模式.(3)Peakwidth:设定影响层析图的数据采集频率,Peakwidth应略小於层析上最窄的层析峰的半峰宽.数据采集速率太快,则层析图的毛刺过多,数据采集速率太慢,则所采集的数据点过少,造成层析峰变形,无法进行准确定量.B. MS设定条件参考1.电喷雾(ESI)之3个基本步骤: 喷雾及带电→去除溶剂→离子蒸发.ESI之雾化气压力,乾燥气流速及温度取决於流动相组成及流速,如流速越快,含水量越高即需越多乾燥气辅助去除液滴中溶剂.ESI需考虑(1)样品 :(a)在溶液中为离子态:儿茶酚胺,硫酸酯共轭物,丁基胺(b)有可诱导电离的化合物:甲醇(c)含杂原子的化合物:氨基甲酸酯类,苯并二氮杂原子类(含O, S, N)(d)溶液中带多电荷:蛋白质,多肽,低聚核甘酸(2)溶液化学参数 :(a)流速(b)样品的pKa,溶液pH(c)溶液导电性(3)应避免的样品 : 尤其非极性的样品PAHs,PCBs2.化学电离(APCI)之3个基本步骤: 雾化→蒸发液滴→气相电离.即蒸发后再进行离子化,用於可被蒸发之样品,且此过程只产生单电荷离子.APCI需考虑(1)样品(a)分子量和极性中等的化合物:PAHs, PCBs,脂肪酸,邻苯二甲酸酯类(b)不含酸性和碱性位点的化合物: 酮,酯,醇,醛,碳氢化合物(c)含有杂原子的化合物:脲,氨基甲酸酯等(d)对电喷雾响应不好的样品(2)溶液化学参数(a)较ES对溶液化学作用不灵敏(b)较ES更耐大的流速(c)适用ES不宜的一些溶剂(3)应避免的样品 : 在气化过程中热不稳定的化合物3.MS 雾化室(MSD spray chamber)(1) Method: API-ES ; APCI(a)乾燥气流速(drying gas flow, L/min) : 范围0-13即最高限值13 L/min.ESI通常为8-10 L/min;APCI通常为4.(b)喷雾气压力(Nebulizer pressure, psig) :APCI:60 psi;ESI与流速有关,最高限值60 psi.(c)乾燥气温度(drying gas temperature) :与流动相和流速有关,通常为300 ℃以上.水相比较多或高流速时要求较高的乾燥气温度.最高限为350 ℃(d)蒸发温度(Vaporizer temperature)(限於APCI) :与溶剂和流速有关,通常为350 ℃.水或高流速时要求较高的蒸发温度.最高限为500 ℃.(e)毛细管电压(Capillary voltage) : 最高限为6000 V正模式(V) 负模式(V)ESI 4000 3500APCI 4000 4000注: ESI模式负极性时,在高电压时全发生喷针放电.(f)电晕电流(Corona current, μA) (限於APCI) :对正极性: 通常为4 μA;对负极性: 通常为25 μA.(2) Method: MM-ES + APCI 复合源(a)注意charging voltage : 影响ESI区域离子化重要参数.4. Set up MSD signals 1- MSD Control (方框左方)(1) Use MSDMSD将被用作检测器.在standby状态,不会被作为检测器.(2)停止时间(Stop Time): 质谱停止采集的时间.(a)一般设为As pump:按照LC pump中所设的停止时间,(b)若使用者输入时间:当选到指定时间时,MSD数据采集将停止.(3)FlA状态: 选择FlA时,会显示FIA enabled.非FlA时,显示FIA disabled.(4)调整档案(tune file): 指定采集数据时MSD采用那个调整档案里的参数(5)峰宽度(Peak width): 输入预期的层析峰半宽度 (用分钟表示).典型的层析峰宽为0.05-0.15 min.不确定时使用较小的值.内定值为0.1 min.(6)循环时间(Cycle time): 完成一次所有活性信号扫描的时间(秒).也可想像层析图上一个采样点的时间.循环时间的计算与所输入峰宽有关.(7)快速扫描(Fast scan):(a)当设定的质谱信号参数(如峰宽,质量范围和步长)会导致采集数据点过少时,软体会提醒改变参数或选择快速扫描方式.(b)如果参数设定不需要快速扫描,即使选择快速扫描也不会被执行.在VL系统中没有这个选项.(c)在最佳化扫描速度时,会损失一些灵ㄧㄥㄣㄚㄚ陌性敏度和分辨率.因为四极柱的离子传输效率较低.Data reconstruction (selectable)可选,在此设定下采集的数据进行重组以提高电荷和多电荷质谱图的分辨率.某些需要快速扫描速度的应用,不一定要重组数据.对於这些应用,不选择数据重组.数据重组时应用一个移动平均过滤器以减少由快速扫描引起的质谱杂讯.(8)时间过滤器(Time Filter): 内定为选择时间过滤器.建议使用时间过滤器.(9)扫描数据存档(Scan Data Storage):(a)建议选择保存压缩数据(Condenced),即棒状质谱图,节省磁碟空间.(b)对多电荷样品使用完全数据 (连续质谱图),其它使用压缩数据.(c)Deconvolution只能在完全数据上进行.如果试图在压缩数据或SIM数据上使用Deconvolution,将会产生错误.5.Set up MSD Signals 2 - MSD Signal Settings (方框右方)(1)极性(Polarity):指定MSD检测离子的极性(positive/negative).必须先进行MSD tune.(2)模式(Mode): 采集质谱数据的方式.(3)扫描(Scan):从高到低指定的质量范围,并且以指定的间隔(步长)检测强度.在过程中这个程序不断重覆.适於定性分析,例如未知物的鉴定,峰纯度或多电荷样品分子量的确定.(4)碎裂器(ramp):适用於Scan模式和定义ramp.不同的质量数离子可应用不同的碎裂电压.(5)时间(Time): 进样后质谱参数开始进行生效的时间(min)如果第一行是非零时间,MSD不会采集,直到这个时间到达.质谱选择阀也会将LC流路送到废液瓶,直到开始数据采集.(6)质量范围(Mass range): MSD扫描的质量范围.范围越大,MSD须扫描得越快.要得到高品质数据,应扫描所需范围.(7)增益(Gain): 增益是MSD信号放大因子,将信号强度电子倍增器的电压相关联,增益5会得到增益为1时的信号强度的5倍.通常,检测器会在较低的增益值对工作即能产生合适的离子强度.高增益值同时会增加噪音,产生较差的信噪比.通过增加增益值来提高EMV电压会缩短电子倍增器的寿命.(8)碎裂器电压(Fragmentor voltage): 设定碎裂电压.当进行一个方法(Method)时,控制碎裂器电压优先是:(a)选择FIA时,包括碎裂电压的FIA表;(b)当选择碎裂器ramp时,碎裂器ramp表(FIA未选择);(c)如果以上的都没有选择时,参考下列信号设定表.(9)阀值(Threshold): 阀值是强度值.只有强度等於或大於这个值的数据点才被保留在每个扫描的质谱中.内定值150.(10)步长(Step size): 步长是设定扫描数据点之间步幅的大小.这个参数影响扫描速率.典型的值是0.1,范围为0.05到0.4.Fragmentor值与化合物性质有关: 不同化合物使用不同的Fragmemtor值CompoundMax. Mol. Ion2nd. M/z >50%Acid Red 4 (-) 100 130Alprazolam (+) 100 140Caffeine (+) 70 100Methamphetamine (+) <50 70Nitrophenol (-) 70 100Quinine (+) 90 130Quinine (++) 50 60Reserpine (+) 130 170Salbutamol (+) 200注: 最佳化碎裂电压: 表中数据表示不同化合物获得最强的准分子离子和第一个碎裂离子达到其50%强度的碎裂器电压值.每个化合物均通过FlA模式在碎裂电压50到200 V范围内进行分析的.6.选择离子检测(SlM)/ 扫描(scan)模式(1)Scan采集在特定范围中每个质量上的数据.对定性分析通常采用scan模式采集,例如确定样品的分子量或纯度.(2)SlM只采集预先设定离子的数据.此采集方式具灵敏度和专一性.定量分析通常选择SlM模式.Greater sensitivityBetter peak shapeTrace levels easily detected in complex matricesUsed for routine quantificationUseful when precise ion ratios are desired(a)SlM参数: SlM有三个可用自订的参数# of ionsm/z of each ionDwell time(b)每组可检测30个离子,每次采集可分50组.(c)每组检测最少数目的离子可获得最大的信噪比和准确度.(d)驻留时间(Dwell Time)是对每个离子检测的时间段.该时间取决於峰宽选择(17+2 cycles/peak).S/N正比於Dwell Time.(e)可以设定同组中每个离子驻留相同时间或设定每个离子相对驻留时间:*组内(group)为同时SIM的离子,组间为不同对SIM的离子.*组内SIM的离子越多,每个离子的驻留时间就越少.*操作者可根据层析峰的分离情况将不同离子设为组内,或组间SIM.*驻留时间是用於采集每个离子的时间.驻留时间与MSD参数对话框中设定的峰宽度值有关系.软体会根据峰宽度值,然后根据每个峰要有17+2个循环的需要以确定驻留时间.除非使用者指定相对的驻留时间,否则驻留时间会在组内的离子间平均分配.(3)选择 SlM 离子(a)定量离子:该离子的响应用於计算待测物的含量.(b)限定离子:该离子的响应值与定量离子响应值之比值用来确认待测物质化合物,以避免假检出.(c)选择相对强度较高的离子可以提高灵敏度.(d)选择质量数高的离子可以避免干扰.(e)选择唯一性高的离子.(f)尽量避免选择基质或背景中存在的离子.(g)如果可能,每个化合物选择多个离子.离子间的比例可以帮助判别化合物,特别是同位素族.(h)对於SIM定量,可以对每个层析峰选择一个定量离子.这个离子应该峰高且唯一.不要选择在基体或背景中相同的m/z.(i)为确定层析峰,选择一或两个限定离子.这些离子也应该峰高且唯一.在LC/MSD分析中,离子的出现和峰高度,缓冲液和碎裂器相关.(4)选择定量/限定离子(a)应用精确质量,不要用名义质量(例如195.2而不用195).(b)为得到最佳效果,用动态校正,即选择如括弧所示的样品质量(195.0,195.1,195.2,195.3,195.4)以选择响应值最佳的离子.(c)为长期的效果,检测前要对质量轴进行校正.(5)定量方法建立首先要扫描采样以确定在SIM分析中所要使用的离子.使用扫描采样数据,得到谱图列表展示有一位近似值的精确质量并输入到SIM表中.使用者应使用列表中的质量,例如195.2,而不是名义上的质量195.如果所选择的SlM质量偏差0.3daltons,则灵敏度会有70%的损失.另一方面,找到SlM分析的最佳m/z,要避免所有离子的SlM实验产生一位近似值.这就是所谓的动态调整.(6)动态SIM校正动态SIM校正可以获得最佳的SIM灵敏度.做SIM 试验:(a)以0.1 dalton为间隔采集多个质量例如:Caffeine 195.2 : 195.0 ; 195.1 ; 195.2 ; 195.3 ; 195.4(b)积分SIM数据并且选出响应值最大的离子作为定量离子(c)进行动态调整,此例子中,全扫描质谱图在195.2 daltons处有离子.(d)咖啡因的SIM实验将包括一组具有五个离子:195.0,195.1,195.2,195.3和195.4 daltons.评估各质量的离子EIC 积分结果,或直接看质谱图以找到最大强度的离子.这就是SIM定量的最佳离子.C. MS说明与解析:1.四极杆质量分析器有两种扫描方式:(1)全扫描方式(scan) : 主要用於定性分析,未知化合物的鉴定;(2)选择离子监测(SIM) : 主要用於已知化合物的定量分析.2.质谱常用术语1.分子离子(molecular ion)自由基 (radical)离子M.+.很活泼,易碎裂而产生广义的碎片离子.2.准分子离子*(quasi-molecular ion)由软电离技术产生的质子或其他阳离子加合离子以及去质子化或其他阴离子加合离子.3.碎片离子(fragment ion)电离后具有过剩内能的分子离子以多种方式裂解生成碎片离子.4.奇电子离子(odd-electron ion, OE);偶电子离子(even-eIectron ion, EE)OE含未配对电子,有较高的反应 (碎裂)活性,易生成碎片离子.5.多电荷离子(multiply-charged ion)6.同位素离子(isotopic ion)3.质谱图相关概念(1)总离子层析图(Total Ion Chromatogram, TIC)(2)质谱图 (Mass Spectrum, MS)(3)选择离子监测图 (Selected Ion Monitor, SlM)(4)萃取离子层析图 (Extract Ion Chromatogram, EIC)(1)总离子层析图(Total Ion Chromatogram, TIC)将质谱图上每一个离子的强度的总合对应扫描时间作图产生的.TIC层析图上每一个采样点都对应一张质谱图.(2)准分子离子当用大气压电离技术分析小分子时,通常在质谱中主要的峰是质子化准分子离子.例如苯基保泰松的实际质量308,在质谱图中其基峰即最大强度峰是准分子离子[M+H]+峰,m/z为309.(3)萃取离子层析图(EIC) : 可以(a)提高S/N去除背景(b)分离共流出峰(c)主要用於:寻找目标峰,准确定量注意:EIC是在数据采集后分析时生成的;而SIM是实际信号.4. LC-API/CID/MS :(1)通过调节毛细管出口电压,在毛细管出口处可发生碰撞诱导解离(Collision Induced Dissociation, CID)而产生碎片.利用碎片信息,有助於定性;利用碎片离子定量,可提高方法的专属性.(2)范例:甘油三酸脂的碎裂电压75V可得谱图中m/z 684.65呈现准分子离子峰[M+NH4]+.当碎裂电压升高到175V,可用碎片离子m/z 467或439表示.(3)API是一种相对的软电离技术,产生的主要是准分子离子.CID是用中性气体分子去碰撞离子产生碎片的过程,对定性分析和定量分析都很有用.(4)CID可以通过选择离子传输毛细管出口和第一级分离器之间的离子能量来控制.离子能量可以通过改变软体(chemstation)中所谓的碎裂参数来改变.5. MS解析规则与条件说明(1) [M+H]+离子的氮规则分子量为奇数[M+H]+ 为偶数的离子有奇数个N分子量为偶数[M+H]+ 为奇数的离子有偶数个N或不含N例1. m/z 300的[M+H] + 离子: mw = 299 ; 即化合物一定有奇数个氮例2. m/z 301的[M+H] + 离子: mw = 300 ; 即含有偶数个氮(0,2,4….)(2)API质谱图解释电喷雾和APCI是可提供分子量信息的软电离技术.检测到的离子种类与溶剂添加剂和分析所用的条件相关.正离子检测负离子检测-[M+H]+ 酸性条件-[M+Na]+ , [M+K]+ (有盐时)-[M+NH4]+ 有铵盐缓冲溶液-[M+X]+, x=溶剂或缓冲溶液中的阳离子-[2M+H]+在高浓度时形成的二聚体-[M+H+S]+ 溶剂添加剂-[M+H]- 碱性条件-[M+X]- , x=溶剂或缓冲溶液中的阴离子-[M-H+S]- 溶剂添加剂(3)样品的储存,准备,移动相和添加剂都将影响最后结果.当建立一个新方法时要注意这些因素.(4)CID (Collision-Induced Dissociation )通过与中性气体分子碰撞将能量传递给离子产生碎片的过程.能量传递足以导致断键和所选离子重排.对定性分析和定量分析都很有用.定性提供有关分子的结构信息.定量特性由限定离子的存在而增强.70年代初McLafferty (JACS,95,3886,1973)证明ClD使键断开和离子重排,产生离子代表中性分子的结构.结构解析:API过程中,准分子离子以偶电子离子形式出现.通过CID合产生碎片,碎裂过程如下:ABCD+→ ABC+ + D (中性碎片)电荷保留在质子亲和势较高的碎片上(5)ClD 质谱图解析: 常见中性损失( Even LOSS)(M+X)+-18水(M+X)+-H2O(M+X) +-20氟化氢(M+X)+-HF(M+X) +-28一氧化碳或乙烯(M+X)+-CO or (M+X) +-C2H4(M+X) +-30甲醛(M+X)+-H2CO(M+X) +-31甲胺(M+X)+-CH3NH2(M+X) +-32甲醇(M+X)+-CH3OH(M+X) +-36氯化氢(M+X)+-HCI(M+X) +-44二氧化碳(M+X)+-CO2(M+X) +-46二氧化氮(M+X)+-NO2(M+X) +-60乙酸(M+X)+-CH3CO2H(M+X) +-90硅醇(M+X)+-HO-Si-(CH3)36. API电离步骤及过程:(1)溶液中电离(样品pKa,溶液pH)→(2)喷雾(表面张力及黏度,气动辅助)→(3)去溶剂(乾燥气温度及流速,热容量Hvap)→(4)离子从溶液中解析(溶解能)→(5)气相中的离子反应(质子亲合力,电荷交换)(1)当分析物在溶液中以离子存在时得到最佳的电喷雾灵敏度对中性分子,离子相互作用比非离子相互作用大103至104倍(例如:凡得瓦力,氧键).因此分析物离子可以克服液滴的溶解能,从带电液滴中解析出来.(2)在溶液中如何产生离子(a)酸/碱化学性质: M - NH2 + 酸→ [M-NH3]+ +酸-M - COOH + 碱→ [MCOO]- + 碱+(b)螯合(对类似糖的中性物质): M.+ Na+ [M + Na]+ (碱金属,如20 M乙酸钠)(c)衍生化: 形成离子或酸/碱产物当分析物溶解在酸或碱之极性溶剂中时,可被离子化或具有强偶极距.对於电离的分析物,ESI通常简单且具有高灵敏度.不存在其它离子-离子相互作用干扰,离子在喷雾前已经存在於溶液中.在喷雾中这些离子易於从液滴中蒸发出来,得到较高的分析物离子强度.形成强偶极距但没有被电离的分析物也可分析.喷雾室中的强电极场驱动离子化过程.这些电场促使喷雾液滴带电荷,使液滴表面引起分析物分子离子化.通过使用特定的化学物质的交互作用,这些分析物也可被化学电离.(3)对电喷雾使用典型缓冲液产生离子的问题 - 离子对的形成(a)对正离子检测,由於离子对的形成,使溶液中或气相中的离子中和![M + H]+ + A- [M + H + A]o ;A = B, S, P : 有利於中性样品; A = 甲酸盐,乙酸盐: 有利於带电物质*离子对强度: B,S,P > 三氟乙酸>乙酸盐,甲酸盐 (B, S, P) = 硼酸盐,硫酸盐,磷酸盐(b)对负离子检测,由於离子对形成,使溶液或气相中离子的中和![M-H]- + C+ [M-H + C]0 ; C = Na,K,Li (中性产品); C = NH4+(带电物质)(4)气相中的离子反应(a)通过离子传输区域时从大气压喷雾室的反应中会产生质子转移和电荷交换反应.这个高压区允许发生1000次离子/分子反应.(b)质子转移:与HPLC添加剂相比,如:氨,三乙胺 (质子亲合力分别为206和232 kcal/mole),样品具有较低质子亲和力的会失去一个质子,变成中性或形成复合离子如[M+NH4]+.(c)溶液碱度在气相中会导致分析物离子的去质子化,致使分析物没有电喷雾信号.添加剂如三乙胺这样强气相碱的使用,会导致[M+H]+离子损失.添加剂(乙酸铵,甲酸铵,乙酸,甲酸和氢氧化氨)的使用会减少这些反应.(5)比较电喷雾电离源(ESI)大气压化学电离源(APCI)离子在溶液中已生成离子在气态条件中生成化合物无需具有挥发性化合物需具有一定的挥发性是分析热不稳定化合物的首选方法化合物必需是稳定的生成单电荷离子外亦可生成多电荷离子只生成单电荷离子7. ESI 及APCI 最佳化条件(1)APC-MS添加剂(a)调整PH : 使用乙酸,甲酸,TFA,氨氧化胺(b)一般的缓冲液/离子配对试剂 :乙酸铵/甲酸铵 ; 三氟乙酸(TFA) ; 七氟丁酸(HFBA) ;四乙基或四丁基氢氧化铵(TBAH)(c)阳离子化试剂 : 20-50 M的乙酸钠或乙酸钾(d)一般考虑:挥发性 (污染喷雾室,堵塞喷嘴)导电性 (对离子气化过程减少小液滴的形成)离子配对 (进入气相时中和预带电离子)(e)不能使用在HPLC中常使用的磷酸盐,硫酸盐或硼酸盐(f)在APl-ES中影响添加剂选择的主要因素是离子配对和挥发性.(g)对APCI添加剂选择的主要因素是挥发性.8. 将现有的LC方法改编为LC/API-MS方法(1)溶剂:(a)非挥发性缓冲盐 => 挥发性缓冲盐(b)浓度<10 mM(对於ES)或<100 mM(对於APCI)用醋酸鞍,甲酸,三氟乙酸 (TFA),七氟丁酸(TFBA),羟基四丁基胺取代磷酸盐,硫酸盐和硼酸盐.(Formic acid, acetic acid, TFA, ammonium hydroxide)如果必须使用非挥发性缓冲盐,使用仅阳离子或阴离子部分不挥发性缓冲盐,例如用醋酸钠而不用磷酸钠.(c)挥发性离子对试剂可以使用.(2)样品制备: 通常样品制备或没有样品制备会严重影响API-MS分析.很多情况下APl-MS技术的失败源於样品前处理.前处理不当会导致信号衰减或共同离子干扰.前处理需要考虑以下因素,其为分析成败关。