医学形态与机能实验技术实验报告
中山医学院 09393184 林永东
一：实验综述
本次实验包括2个实验：家兔急性呼吸衰竭实验和肝性脑病实验，通过制作兔的闭合性气胸及开放性气胸，复制呼吸衰竭模型。做气管内插管并连接呼吸传感设置，记录家兔呼吸运动的变化，以及记录注射不同剂量的氯化铵对家兔的影响，结合组织制片和显微照相等技术，从器官层次到细胞层次了解肺，肝急性衰竭前后结构组织变化的情况。
二：目的和原理
1：呼吸衰竭是指由于外呼吸功能的严重障碍，以致动脉血氧分压低于正常范围，伴有或不伴有二氧化碳分压增高的病理过程。肺通气障碍或（和）肺换气功能障碍都可引起呼吸衰竭。
本实验通过复制呼吸衰竭病理模型，观察呼吸和血气的变化并分析其机制，学习动脉采血的方法，了解血气测定方法。
2：正常情况下，血氨的来源与清除保持动态平衡，而氨在肝脏中合成尿素是维持此平衡的关键。通过结扎大部分肝脏造成急性肝功能不全，然后经消化道输入碱性氯化铵溶液，导致肠道中氨生成增多并吸收入血，引起实验动物血氨迅速升高，出现震颤、抽搐、昏迷等类似肝性脑病症状，证明氨在肝性脑病发病机制中起主要作用。
本次实验的目的是学习复制急性肝功能不全造成急性肝功能不全模型的方法，了解氨在肝性脑病发病机制中的作用，通过制作组织切片了解肝组织损伤的形态学改变。
三：实验对象
家兔
四：手术器材和药品
兔手术台、实验手术器械一套、气管插管（两侧管套有橡皮管）、连接静脉插管的输液装置、连接三通的动脉插管、注射器（1ml、2ml、10ml、50ml）、软木塞、滤纸、血气酸碱分析仪。离心机、分光光度计、水浴锅、电炉、注射器（5ml）、输液瓶、胶管、螺旋夹、滴管、吸管、离心管、试管、试管夹、试管架、酒精灯、手术器械一套、输尿管塑料插管、显微镜、玻片。
20％乌拉坦、1％肝素生理盐水溶液、生理盐水、0.1％肾上腺素， 2.5%氯化铵，1%普鲁卡。
五：实验步骤
肺衰竭：
1．取家兔一只，称重，从耳缘静脉注射20％乌拉坦溶液5ml/kg。将家兔仰卧固定于兔台上。
2．沿颈部正中切开皮肤，分离气管，插入气管插管。分离左侧颈总动脉，插入充满肝素生理盐水的动脉插管。分离右侧颈外静脉，插入静脉插管，连接输液装置，并缓慢输入生理盐水（4～5滴/min）。
3．用注射器抽出动脉插管内的死腔液，然后用充有肝素生理盐水溶液的注射器与动脉插管相连，让血液自动流入注射器内（切勿进入气泡），取血2ml，迅速套上带软木塞的针头，作血气分析，同时观察家兔的呼吸频率及深度。
4．打开胸腔，观察家兔的呼吸频率和深度。
5：用止血钳夹住气管，处死动物，打开胸腔，在气管分叉处结扎气管以防止水肿液流出，取出一部分肺组织。
注意事项：
1、穿刺胸腔时，针头应与胸壁垂直，顺肋骨上缘插入以免损伤肋间动脉，注意不要插得太深或太浅（0.5cm左右）进针时不可用力够猛以免穿破胸膜脏层。
肝衰竭：
1：取兔一只，称重后仰卧固定于兔台上，剪去腹部正中兔毛，在上腹部正中用1%普鲁卡因作浸润性局麻。
2：从胸骨剑突起作上腹部正中切口（长约5-6cm），打开腹腔后，即可见到肝脏。用手轻轻向下压肝脏，切断肝与横膈之间的镰状韧带。
3：将肝脏各叶向上翻，除与胃连接紧密的肝尾叶外，用粗棉线自根部将其余各部结扎。
4：顺着胃幽门部找出十二指肠，在其表面作一荷包缝合。用眼科剪剪一小口，插入一导尿管，结扎固定，然后关闭腹腔，然后关闭腹腔，松绑，放于实验桌上进行观察和实验。
5：观察家兔的一般情况，角膜反射及对刺激的反应。
6：每隔5min向十二指肠内注入2.5%氯化铵混合液5ml。仔细观察动物的一般情况、角膜反射及对刺激反应的变化。注意有无反应性增高，直至出现痉挛发作为止。记录从给药开始到痉挛抽搐发作时间以及用药总量。
7：切下一小块肝尾叶组织和一小块之前结扎的正常肝脏组织，制成组织切片并进行观察。
注意事项：
1、勿将药液漏入腹腔。
2、用生理盐水纱布覆盖伤口，避免体热及水分丢失。
3、手术操作要轻，因肝脏软易破。切断镰状韧带时要小心勿损伤其后方的下腔静脉。
4、动物行局麻时，有时会挣扎，要与氨引起的强直性痉挛相区别。
六：实验结果
肺呼吸衰竭
（一）呼吸曲线描记
1.正常呼吸
2.闭合性气胸呼吸幅度降低
3.闭合性气胸抢救后
4.开放性气胸呼吸曲线很快便接近一条直线
（二）病理切片
气胸模型肺组织的组织切片
10*10倍肺整体支气管腔内空气充满
40*10倍支气管腔支气管腔增大
40*10倍可见肺脏萎缩
肝急性衰竭
（一）、每隔5min注入5ml的氯化铵混合液，并观察兔子的一般情况，角膜反射，
次数时间一般情况角膜反射刺激反应10min正常存在（+++）灵敏（+++）25min正常存在（+++）灵敏（+++）310min正常存在（+++）灵敏（+++）415min正常存在（++）灵敏（++）520min从21min开始抽搐，22min出现角弓反张
（二）、病理切片
1、肝尾叶
10倍肝小叶中央静脉可见部分肝细胞呈空泡样
门管区有炎症细胞浸润
40倍肝尾叶肝细胞部分肝细胞受损，肝细胞肿胀呈球形有些可见炎
症细胞
肝窦内淤血
门管区
2、正常的肝组织切片