阳离子的分离与鉴定
一. 实验目的
1. 掌握用两酸三碱系统分析法对常见阳离子进行分组分离的原理和方法。
2. 掌握分离、鉴定的基本操作与实验技能。
二. 实验原理
阳离子的种类较多，常见的有二十多种，个别检出时，容易发生相互干扰，所以一般阳离子分析都是利用阳离子某些共同特性，先分成几组，然后再根据阳离子的个别特性加以检出。凡能使一组阳离子在适当的反应条件下生成沉淀而与其它组阳离子分离的试剂称为组试剂，利用不同的组试剂把阳离子逐组分离再进行检出的方法叫做阳离子的系统分析。在阳离子系统分离中利用不同的组试剂，有很多不同的分组方案。如硫化氢分组法，两酸、两碱系统分组法。下面介绍一种以氢氧化物酸碱性与形成配合物性质不同为基础，以HCl、H2SO4、NH3 H2O、NaOH、(NH4)2S为组试剂的两酸三碱分组方法。本方法将常见的二十多种阳离子分为六组。
第一组：盐酸组Ag+，Hg22+，Pb2+
第二组：硫酸组Ba2+，Ca2+，Pb2+
第三组：氨合物组Cu2+，Cd2+，Zn2+，Co2+，Ni2+
第四组：易溶组Na+，NH4+，Mg2+，K+
第五组：两性组Al3+，Cr3+，Sb III、V，Sn II、IV
第六组：氢氧化物组Fe2+，Fe3+， Bi3+，Mn2+，Hg2+
用系统分析法分析阳离子时，要按照一定的顺序加入组试剂，将离子一组一组沉淀下来，具体分离方法如下表。
表阳离子分组步骤
试液(用个别检出法鉴定NH4+、Fe2+、Fe3+)
(
Hg
)
(两性组) (氢氧化物组) (第三组硫化物) (第四组易溶组)AlO2?、Cr O42?Fe(OH)3、
K+、Na+、Mg2+、NH4+SbO43?、SnO32?MnO(OH)2、
NaBiO3、HgNH2Cl
每组分出后，继续再进行组内分离，直至鉴定时相互不发生干扰为止。在实际分析中，如发现某组离子整组不存在（无沉淀产生）、这组离子的分析就可省去。从而大大简化了分析的手续。
1. 第一组??盐酸组阳离子的分析
本组阳离子包括Ag+、Hg22+、Pb2+，它们的氯化物难溶于水，其中PbCl2可溶于NH4Ac 和热水中，而AgCl可溶于NH3x H2O中,因此检出这三种离子时，可先把这些离子沉淀为氯化物，然后再进行鉴定反应。
本组阳离子与其它组阳离子的分离
取分析试液20滴，加入6mol L?1 HCl至沉淀完全，离心分离。沉淀用1mol L?1 HCl 数滴洗涤后按下法鉴定Pb2+、Ag+、Hg22+的存在(离心液中含二～六组阳离子，应保留)。
(1) Pb2+的鉴定
将上面得到的沉淀加入3mol L?1 NH4Ac5滴，在水浴中加热搅拌，趁热离心分离，在离心液中加入K2Cr2O7或K2CrO4 2～3滴，黄色沉淀表示有Pb2+存在。沉淀用3mol L?1 NH4Ac 数滴加热洗涤除去Pb2+，离心分离后，保留沉淀作Ag+ 和Hg22+的鉴定。
PbCl2 + Ac? = [PbAc]++ Cl ?
[PbAc]+ + CrO42 ?= PbCrO4↓+ Ac ?
(2) Ag+和Hg22+的分离和鉴定
将上面保留的沉淀，滴加6mol x L?1 NH3x H2O 5～6滴，不断搅拌，沉淀变为灰黑色，表示有Hg22+存在。
Hg2Cl2 + 2NH3 = HgNH2Cl↓+Hg↓+2NH4++ Cl–
离心分离，在离心液中滴加HNO3酸化，如有白色沉淀产生，表示有Ag+ 存在。
AgCl + 2NH3 = [Ag(NH3)2]+ + Cl ?
[Ag(NH3)2]+ + Cl ?+ 2H+ = AgCl↓+ 2 NH4+
第一组阳离子的分析步骤如下表。
表第一组阳离子分析
PbCl2、AgCl、Hg2Cl2
NH4Ac
?
溶液沉淀
[PbAc]+AgCl、Hg 2Cl2
K2CrO4
沉淀
PbCrO4
(黄色) [Ag(NH3)2]+HgNH2Cl+ Hg
HNO3(灰黑色)
沉淀 AgCl (白色)
2. 第二组??硫酸组阳离子的分析
本组阳离子包括Ba2+、Ca2+、Pb2+，它们的硫酸盐都难溶于水，但在水中的溶解度差异较大，在溶液中生成沉淀的情况也不同，Ba2+能立即析出BaSO4沉淀，Pb2+缓慢地生成PbSO4沉淀，CaSO4溶解度稍大，Ca2+只有在浓的Na2SO4中生成CaSO4沉淀但加入乙醇后溶解度能显著地降低。
用饱和Na2CO3溶液加热处理这些硫酸盐时，可发生下列转化。
MSO4 + CO32? = MCO3 + SO42?
虽然BaSO4的溶解度小于BaCO3，但用饱和Na2CO3反复加热处理，大部分BaSO4也可转化为BaCO3。这三种碳酸盐都能溶于HAc中。
硫酸盐组阳离子与可溶性草酸盐如(NH4)2C2 O4作用生成白色沉淀，其中BaC2O4的溶解度较大，能溶于HAc。PbSO4能溶于饱和NH4Ac，利用这一性质，可与Ba2+、Ca2+分离。
本组阳离子与三、四、五、六组阳离子的分离
将分离第一组后保留的溶液，（含二～六组阳离子），在水浴中加热，逐滴加入1mol L?1 H2SO4至沉淀完全后，再过量数滴，加入95%乙醇4～5滴，静置3～5min，冷却后离心分离（离心液中含三～六组阳离子，应予保留）沉淀用混合溶液（10滴1mol L?1H2SO4加入乙醇3、4滴）洗涤1～2次后，弃去洗涤液，在沉淀中加入3mol L?1 NH4 Ac 7～8滴，加热搅拌，离心分离，离心液按第一组鉴定Pb2+的方法鉴定Pb2+的存在。
沉淀中加入10滴饱和Na2CO3溶液，置沸水浴中加热搅拌1～2min，离心分离，弃去离心液，沉淀再用饱和Na2CO3同样处理2次后，用约10滴去离子水洗涤一次，弃去洗涤液，沉淀用HAc数滴溶解后，加入NH3 H2O调节pH=4～5，加入K2CrO4 2～3滴，加热搅拌，生成黄色沉淀，表示有Ba2+存在。
离心分离，在离心液中，加入饱和(NH4)2C2O4溶液2～3滴，温热后，慢慢生成白色沉淀，表示有Ca2+存在。
第二组的阳离子分析步骤如下表。
表第二组阳离子分析
BaSO4、CaSO4
K2CrO4加Na2CO3转化
沉淀?
PbCrO4沉淀
(黄色) HAc
溶液沉淀
(NH4)2C2O4 BaCrO4
(黄色)
沉淀
CaC2O4
(白色)
3. 第三组??氨合物组阳离子的分析
本组阳离子包括Cu2+、Cd2+、Zn2+、Co2+、Ni2+等离子，它们和过量的氨水都能生成相应的氨合物，故本组称为氨合物组。Fe3+、Al3+、Mn2+、Cr3+、Bi3+、Sb3+、Sn2+、Sn4+等离子在过量氨水中因生成氢氧化物沉淀而与本组阳离子分离。由于Al(OH)3是典型的两性氢氧化物，能部分溶解在过量氨水中，因此加入铵盐如NH4Cl使OH?的浓度降低，可以防止Al(OH)3的溶解。但是由于降低了OH?的浓度，Mn2+形成氢氧化物沉淀不完全，如在溶液中加入H2O2，则Mn2+可被氧化而生成溶解度较小的MnO(OH)2棕色沉淀。因此本组阳离子的分离条件为：在适量NH4Cl存在时，加入过量氨水和适量H2O2，这时本组阳离子因形成氨合物而和其它阳离子分离。
本组阳离子与四、五、六组阳离子的分离
在分离第二组后保留的离心液（含三～六组阳离子）中，加入3mol L?1 NH4Cl 2滴，3%H2O2 3～4滴，用浓氨水碱化后，在水浴中加热，并不断搅拌，继续滴加浓氨水，直至沉淀完全后再过量4～5滴，在水浴上继续加热1min，取出冷却后离心分离，(沉淀中含五、
六组阳离子，应予保留)。离心液(含三、四组阳离子)按下列方法鉴定Cu2+、Co2+、Ni2+、Zn2+、Cd2+离子。
(1) Cu2+的鉴定
取离心液2～3滴，加入HAc酸化后，加入K4[Fe(CN)6]溶液1～2滴，生成红棕色（豆沙色）沉淀，表示有Cu2+存在。
(2) Co2+的鉴定
取离心液2～3滴，用HCl酸化，加入SnCl2 2～3滴，饱和KSCN溶液2～3滴，丙酮5～6滴，搅拌后，有机层显蓝色，表示有Co2+存在。
(3) Ni2+的鉴定
取离心液2滴，加二乙酰二肟溶液1滴，丙酮2滴，搅拌后，出现鲜红色沉淀，表示有Ni2+存在。
(4) Zn2+、Cd2+的分离和鉴定
取离心液15滴，在沸水浴中加热近沸，加入(NH4)2S溶液5～6滴，搅拌，加热至沉淀凝聚再继续加热3～4min，离心分离（沉淀是哪些硫化物？为什么要长时间加热？离心液中含第四组阳离子，应予保留）。
沉淀用0.1mol L?1 NH4Cl溶液数滴洗涤2次，离心分离，弃去洗涤液，在沉淀中加入2mol L?1HCl 4～5滴，充分搅拌片刻（哪些硫化物可以溶解？），离心分离，将离心液在沸水浴中加热，除尽H2S后（为什么必须除尽H2S？），用6mol L?1NaOH碱化并过量2～3滴，搅拌，离心分离（离心液是什么？沉淀是什么？）。
第三组阳离子分析步骤如下表。
表第三组阳离子分析
Cu(NH3)42+Ni(NH3)62+Co(NH3)63+
CoS、NiS、2+2+
ZnO22?HCl
二苯硫腙H2S
粉红色溶液黄色沉淀
表示有Zn2+表示有Cd2+取离心液5滴加入二苯硫腙10滴，振荡试管，水溶液呈粉红色，表示有Zn2+存在。沉淀用去离子水数滴洗涤1～2次后，离心分离，弃去洗涤液，沉淀用2mol L?1 HCl 3～4滴搅拌溶解，然后加入等体积的饱和H2S溶液，如有黄色沉淀生成，表示有Cd2+存在。
4. 第四组??易溶组阳离子的分析
本组阳离子包括NH4+、K+、Na+、Mg2+，它们的盐大多数可溶于水没有一种共同的试剂可以作为组试剂，由于本组离子间相互干扰较少，因此可采用分别分析的方法进行个别鉴
定。由于在系统分析过程中，多次加入氨水和铵盐，故要用原试液鉴定NH4+。又因NH4+干扰K+的鉴定，同时要降低Mg2+的检出灵敏度、故检出NH4+后，必先除NH4+，然后再鉴定K+、Na+、Mg2+。
(1) NH4+的鉴定
用两块干燥表面皿在一块表面皿中滴入原试液与6mol L?1NaOH各2～3滴，另一块中以润湿的红色石蕊试纸或滴有奈斯勒试剂的滤纸条，然后将两块表面皿合在一起做成气室，若红色石蕊试纸变蓝或奈斯勒试剂变红棕色，表示有NH4+存在。
NH4++ OH—= NH3 + H2O
Hg
NH4++ 2HgI42? + 4OH ?= O NH2 I↓ + 3H2O + 7I?
Hg
红棕色
(2) NH4+的去除
将分离第三组阳离子后的离心液移入坩埚中蒸发至4～5滴时，滴加浓HNO310滴(因NH4NO3分解温度较低)继续蒸发至干。然后用强火灼烧至不冒白烟，冷却后加水8～10滴制成溶液后，从溶液中检出K+、Na+、Mg 2+。
(3) K +的鉴定
取上述溶液3～4滴，加入4～5滴Na3[Co(NO2)6 ]溶液，用玻棒搅拌，并摩擦试管内壁，片刻后，如有黄色沉淀K2 Na[Co(NO2)6]生成，表示有K +存在。
(4) Na+的鉴定
取上述溶液3～4滴，加入6mol L?1HAc 1滴与醋酸铀酰锌溶液7～8滴，用玻棒摩擦试管内壁，如有黄色沉淀NaAc x Zn(Ac)2x3UO2 (Ac)2 9H2O生成，表示有Na+存在。
(5) Mg 2+的鉴定
取上述溶液1～2滴，加入6mol L?1NaOH及镁试剂各1～2滴, 搅匀后，如有天蓝色沉淀生成，表示有Mg 2+存在。
5 第五组(两性组)和第六组(氢氧化物组)阳离子的分析
第五组阳离子有Al、Cr、Sb、Sn元素的离子，第六组阳离子有Fe、Mn、Bi、Hg元素的离子。这两组离子存在于分离第三、四组阳离子后的沉淀中，利用Al、Cr、Sb、Sn的氢氧化物的两性性质，用过量NaOH可将这两组阳离子进行分离。
(1) 第五组(两性组)与第六组(氢氧化物组)阳离子的分离
在分离第三、四组阳离子后保留的沉淀中加入3% H2O2溶液3～4滴, 6mol L?1 NaOH 15滴，搅拌后，在沸水浴中加热搅拌3～5min，使CrO2?氧化为CrO42?，并破坏过量的H2O2，离心分离，离心液作鉴定第五组阳离子用，沉淀作鉴定第六组阳离子用。
(2) 第五组阳离子的鉴定
① Cr3+的鉴定取离心液2滴，加入乙醚5滴, 逐滴加入浓HNO3酸化，加3%H2O2 2～3滴，振荡试管，乙醚层出现蓝色，表示有Cr3+存在。
② Al3+、Sb V和Sn IV的分离与鉴定将剩余离心液用3mol L?1H2SO4酸化，然后用6mol L?1氨水碱化并多加几滴，离心分离，弃去离心液，沉淀用0.1mol L?1NH4Cl数滴洗涤，加入3mol L?1 NH4Cl及浓氨水各2滴，(NH4)2S溶液7～8滴，在水浴中加热至沉淀凝聚，离心分离(沉淀是什么?离心液是什么?)。
沉淀用含数滴0.1mol L?1 NH4Cl溶液洗涤1～2次后，加入H2SO4 2～3滴，加热使沉淀溶解，然后加入6mol L?1 氨水数滴，铝试剂溶液2滴，搅拌，在沸水浴中加热1～2min，如有红色絮状沉淀出现，表示有Al3+存在。
离心液用HCl逐滴中和至呈酸性后，离心分离，弃去离心液(沉淀是什么?)。在沉淀中加入浓HCl 15滴，在沸水浴中加热充分搅拌，除尽H2S后，离心分离，弃去不溶物(可能为
硫)，离心液供鉴定Sb V 和Sn IV 用。
Sn IV离子的鉴定取上述离心液10滴，加入Al片或少许Mg粉，在水浴中加热使之溶解完全后，再加浓HCl 1滴, 加HgCl2 2滴，搅拌，若有白色或灰黑色沉淀析出，表示有Sn IV 存在.
Sb V离子的鉴定取上述离心液1滴，于光亮的锡箔上放置约2～3min，如锡片上出现黑色斑点，表示有Sb V存在。
(3) 第六组阳离子的鉴定
在第六组沉淀中，加入3mol L?1 H2SO410滴，3%H2O2 2～3滴，在充分搅拌下，加热3～5min，以溶解沉淀和破坏过量的H2O2，离心分离，弃去不溶物，离心液供Mn2+、Bi3+、Hg2+和Fe3+的鉴定。
① Mn2+的鉴定取离心液2滴，加入HNO3数滴，加少量NaBiO3固体，搅拌，离心沉降，如溶液呈现紫红色，表示有Mn2+存在。
② Bi3+的鉴定取离心液2滴，加NaOH碱化，再加入亚锡酸钠溶液(自已配制)数滴，若有黑色沉淀，表示有Bi3+存在。
③ Hg2+的鉴定取离心液2滴，加入SnCl2数滴，白色或灰黑色沉淀析出，表示有Hg2+存在。
④ Fe3+的鉴定取离心液1滴，加入KSCN溶液，如溶液显红色，表示有Fe3+存在。
第五组和第六组阳离子分析步骤如下表。
表第五组和第六组阳离子分析
Al(OH)3、Cr(OH)3、Sb(OH)5、Sn(OH)4、Fe(OH)3、MnO(OH)2、Bi(OH)3、HgNH2Cl
沉淀()
?2? 3 ?2?
O碱化
(紫红色) (黑色) (黑色) (血红色) (蓝色) Al(OH)3、HSbO3 (弃去)
示有Mn2+示有Bi3+示有Hg2+示有Fe3+示有Cr3+H2SnO3
NH4Cl
NH3 .H2O
(NH4)2S
(
(弃去)
Sn箔Al片
黑斑HgCl2
表示有Sb3+白色→黑色，表示有Sn2+
三. 仪器与试剂
仪器：离心机，点滴板。
试剂：固体：NaBiO3。
酸：HCl (2mol L?1)， HNO3(6mol L?1，浓)， HAc(6mol L?1)，H2SO4 (1mol L?1，3mol x L?1)。
碱：NaOH(6mol L?1)， NH3x H2O(2mol L?1，6mol L?1，浓)。
盐：K2Cr2O7，K2CrO4，K4[Fe(CN)6]，SnCl2， Na2S(以上溶液浓度均为0.1mol L?1)，KSCN(0.1mol L?1，饱和)，NH4Ac(3mol L?1)，NH4Cl(0.1mol L?1，3mol L?1 )。
其它：H2O2(3%)，硫代乙酰胺(5%)，乙醇(95%)，丙酮，乙醚，二乙酰二肟，二苯硫腙，镁试剂，铝试剂。
四. 实验步骤
向教师领取混合离子未知液一份。
未知液中可能含Ag+、Pb2+、Cr3+、Mn2+、Fe3+、Co2+、Ni2+、Cu2+、Mg2+、Cd2+、Al3+ 十一种离子，按分离原理列表表示对十一种离子的分析过程，指出具体试剂、试剂量及反应条件。将分析结果交给指导教师，并注明未知液号。
实验指导
1. 试液(20滴)
(
Pb2+将进入
Pb2+ 全部进入溶
Cr3+
①加热促使沉淀溶解，同时将溶液中过量H2O2赶尽，以免妨碍Mn2+ 鉴定。
② 鉴定Mn 2+ 时浓度要稀，如取2滴做不出，取1滴加水稀释后再进行鉴定。
3. 第三、四组的分析
2+2+3+2+
溶液 沉淀
(第四组)
鉴定Mg 2+
(弃去)
鉴定Cd 2+
① 如溶液中含Zn 2+、Cd 2+、Co 2+、Ni 2+离子，使Cu 2[Fe(CN)6 ]沉淀由红棕色变为豆沙色。
Cd 2+
?→???白色沉淀
K 4[Fe(CN)6] Co 2+?→???绿色沉淀
Ni 2+?→
???淡绿色沉淀 ②加入SnCl 2的目的：
a) 使[Co(NH 3)6]3+还原为Co 2+
b) 如溶液中有Cu 2+， 与KSCN 形成 Cu(SCN)42?，在丙酮中为红褐色，SnCl 2可将Cu 2+还原为Cu +，
遇KSCN 形成CuSCN 白色沉淀至无色沉淀Cu(SCN)2?
不干扰了Co 2+的鉴定。因此加入KSCN 必须过量。
③不断搅拌并充分加热至少3～5min ，一方面破坏氨配合物，另一方面改变CoS 、Ni S 的结构，结构改变后的CoS 、Ni S 不溶于稀酸。
④搅拌要充分，至少3～5min ，CdS 溶解而进入溶液。
4. 实验中使用的H 2S 、(NH 4)2S 都具有臭味和毒性，而且制备也不方便，一般可用硫代乙酰胺(CH 3CSNH 2，简称TAA)的水溶液来代替。
硫代乙酰胺是白色鳞片状结晶，易溶于水和酒精。它的水溶液较为稳定，常温下水解很慢，加热则很快水解。它在不同介质中水解反应如下：
在酸性介质中： CH CSNH H H O =CH COOH NH H S 322342++++++2
在碱性介质中： CH CSNH OH CH COO NH H O S 323322+=+++???3
可见生成的S 2?离子浓度，在一定温度下随溶液酸度的大小而改变。故控制适当的酸度就可调节S 2?离子的浓度。
五. 思考题
1. 如果未知液呈碱性，哪些离子可能不存在？
2. 为什么要用稀的NH 4 Cl 溶液洗涤沉淀？
3. 除NH 4+、Fe 2+、Fe 3+离子可用“个别分析法”进行鉴定外，还有哪些离子可以进行个别鉴定？它们个别进行鉴定的条件是什么？
常见离子的检验方法 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998
常见离子的检验方法 一、常见阳离子的检验 1、 Mg2+：加入NaOH溶液，生成白色沉淀［Mg(OH)2］,该沉淀不溶于过量的NaOH溶液。 2、 Al3+：加入NaOH溶液，生成白色絮状沉淀，该沉淀能溶于盐酸或过量的NaOH溶液，但不能溶于氨水。 3、 Ba2+：加入稀硫酸或可溶性硫酸盐溶液，生成白色沉淀（BaSO4），该沉淀不溶于稀硝酸。 4、 Ag+：①加入稀盐酸或可溶性盐酸盐，生成白色沉淀（AgCl），该沉淀不溶于稀硝酸。②加入氨水，生成白色沉淀，继续滴加氨水，沉淀溶解。 5、 Fe2+：①加入少量NaOH溶液，生成白色沉淀［Fe(OH)2］，迅速变成灰绿色，最终变成红褐色［Fe(OH)3］。②加入KSCN溶液，无现象，然后加入适量新制的氯水，溶液变红。 6、 Fe3+：①加入KSCN溶液，溶液变为血红色。②加入NaOH溶液，生成红褐色沉淀。 7、 Cu2+：①加入NaOH溶液，生成蓝色沉淀［Cu(OH)2］。②插入铁片或锌片，有红色的铜析出。 8、 NH4+：加入浓NaOH溶液，加热，产生刺激性气味气体（NH3），该气体能使湿润的红色石蕊试纸变蓝。 9、 H+：①加入锌或Na2CO3溶液，产生无色气体；②能使紫色石蕊试液、pH试纸变红。
10、K+：铂丝蘸其溶液，在无色酒精灯火焰上灼烧火焰呈浅紫色(透过蓝色钴玻璃观察) 12、Na+：铂丝蘸其溶液，在无色酒精灯火焰上灼烧火焰呈黄色 13、Ca2+：铂丝蘸其溶液，在无色酒精灯火焰上灼烧火焰呈砖红色 二、常见阴离子的检验 1、 OH-：能使无色酚酞、紫色石蕊等指示剂分别变为红色、蓝色；能使红色石蕊试纸、pH试纸变蓝。 2、 Cl-：加入AgNO3溶液，生成白色沉淀（AgCl）。该沉淀不溶于稀硝酸，能溶于氨水 3、 Br-：①加入AgNO3溶液，生成淡黄色沉淀（AgBr），该沉淀不溶于稀硝酸。②加入氯水后振荡，滴入少许四氯化碳，四氯化碳层呈橙红色。 4、 I-：①加入AgNO3溶液，生成黄色沉淀（AgI），该沉淀不溶于稀硝酸。②加入氯水和淀粉试液，溶液变蓝。 5、 SO42-：加入BaCl2、硝酸钡溶液，生成白色沉淀（BaSO4），滴加稀硝酸沉淀不溶解。 6、 SO32-：①加入盐酸或硫酸，产生无色、有刺激性气味的气体（SO2），该气体可使品红溶液褪色。②加入BaCl2溶液，生成白色沉淀（BaSO3），该沉淀可溶于盐酸，产生无色、有刺激性气味的气体（SO2）。 7、 S2-：①加入盐酸，产生臭鸡蛋气味的气体，且该气体可以使湿润的 Pb(NO3)2试纸变黑。②能与Pb(NO3)2溶液或CuSO4溶液生成黑色的沉淀（PbS 或CuS）。
酵母菌的分离筛选方法 酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条 件下，液体培养比霉菌快。菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明， 菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色， 圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。 含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。 1.培养基： 葡萄糖 50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L L L MgSO41g/L FeSO4 L 酵母膏 L 孟加拉红 L （富集用） ★乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗 糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布 过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养 用）（富集用） ★麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过 滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤， 10-15波林，氯霉素L 121℃ 20min （分离保存 用） 灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用） ★虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨L 葡萄糖10g/L L L 孟加拉红L 氯霉素L 琼脂15g/L PH自然 （分离纯化用）
★豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L 察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用 蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾L 硫酸镁 L 硫酸亚铁L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然 一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。 2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。若从样品中分离特定种类时先集菌。集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。 实例：将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml 三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28℃2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。镜检：美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。 3.筛选：
酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵 第一部分酵母菌的分离纯化 一、实验目的 应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。 二、实验原理 酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。 三、器材和用品 1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。分装三角瓶；试管斜面1支/组 3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。 4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。 四、实验方法 1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。 2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。 3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。 4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。 5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分
实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 一、目的要求 学习和掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法；了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。 二、实验原理 酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 三、器材与试剂 1〉材料 酵母粉。 2〉器材 乳钵、150ml锥形瓶、水浴锅、量筒、吸管、洗耳球、漏斗、滴管、试管、试管架、烧杯、离心机、滤纸、试管夹。 3〉试剂 (1) 0.04mol/L氢氧化钠溶液。 (2)酸性乙醇溶液：将0.3ml浓盐酸加入30ml的乙醇中。 (3)95%乙醇。 (4)乙醚。 (5)
1.5mol/L硫酸溶液。 (6)浓氨水。 (7) 0.1mol/L硝酸银溶液。 (8)三氧化铁-浓盐酸溶液： 将2ml 10%三氧化铁溶液(用FeCl 3·6H 2O配制)加入到400ml浓盐酸中。 (9)苔黑酚乙醇溶液： 溶解6g苔黑酚于100ml 95%乙醇中。 (10)定磷试剂。 a.17%硫酸溶液： 将17ml浓硫酸(比重 1.84)缓缓加入到83ml水中。 b. 2.5%钼酸铵溶液：将2.5g钼酸铵溶于100ml水中。 c.10%抗坏血酸： 将10g抗坏血酸溶于100ml水中，储于棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则失效。 临用时将上述3种溶液与水按比例混合：17%硫酸溶液︰ 2.5%钼酸铵溶液︰10%抗坏血酸︰水=1︰1︰1︰2(体积分数)。
四、实验步骤 1〉RNA提取 将10g酵母悬浮于90ml 0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml 锥形瓶中。在沸水浴上加热30min后，冷却。(3000r/min)离心10分钟，将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，(3000r/min)离心5分钟。弃去上清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，每次10ml。乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至漏斗中过滤。沉淀即为粗RNA，可在空气中干燥。作鉴定或测定含量用。 2〉鉴定 取200mg提取的RNA，加入 1.5mol/L硫酸溶液10ml，在沸水浴中加热10min制成水解液并进行组分的鉴定。 (1)嘌呤碱： 取水解液1ml加入过量浓氨水，然后加入约1mL 0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。 (2)核糖： 取一支试管加入水解液1mL、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液 0.2ml。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。 (3)磷酸： 取一支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1ml。在沸水浴中加热10min，观察若溶液变成蓝色，说明有磷酸存在。 五、结果处理
(一)常见阳离子的检验方法 离子检验试剂实验步骤实验现象离子方程式 H+①酸度计 ②pH试纸 ③石蕊试 液 ①将酸度计的探头 浸泡在待测液中② 用玻璃棒蘸取少量 待测液滴到干燥的 pH试纸上③取样， 滴加石蕊试液 ①、②pH<7 ③石蕊变红 K+焰色反应①铂丝用盐酸洗涤 后在火焰上灼烧至 原火焰色②蘸取溶 液，放在火焰上灼 烧，观察火焰颜色。 浅紫色（通过蓝色 钴玻璃片观察钾 离子焰色） Na+焰色反应火焰分别呈黄色 NH4+NaOH溶液 (浓) 取少量待测溶液于 试管中，加入NaOH 浓溶液并加热，将 湿润红色石蕊试纸 置于试管口 加热，生成有刺激 性气味、使湿润红 色石蕊试纸变蓝 的气体 Ag+稀HNO3、稀 盐酸（或 NaCl） 取少量待测溶液于 试管中，加入稀HNO3 再加入稀盐酸（或 NaCl） 生成白色沉淀，不 溶于稀HNO3 Ag++Cl－＝AgCl↓ Ba2+①稀H2SO4 或可溶性 硫酸盐溶 液②稀 HNO3 取少量待测溶液于 试管中，加入稀 H2SO4再加入稀HNO3 产生白色沉淀，且 沉淀不溶于稀 HNO3 Ba2++ SO42-=BaSO4↓ Fe3+KSCN溶液 取少量待测溶液于 试管中，加入KSCN 溶液 变为血红色溶液Fe3++3SCN－＝Fe(SCN)3加苯酚 取少量待测溶液于 试管中，加苯酚 溶液显紫色 淀粉KI溶 液 滴加淀粉KI溶液溶液显蓝色2Fe3++2I－＝2Fe2++ I2加NaOH溶 液 加NaOH溶产生红褐色沉淀Fe3++3OH－＝Fe(OH)3↓ Fe2+ ①KSCN溶 液，新制的 氯水 ①取少量待测溶液 于试管中，加入 KSCN溶液，新制的 氯水 ①加入KSCN溶液 不显红色，加入少 量新制的氯水后， 立即显红色。 2Fe2+ + Cl22Fe3+ + 2Cl- Fe3++3SCN－＝Fe(SCN)3
传统酸面团中细菌与酵母菌的分离与鉴定 刘同杰1，李云1，吴诗榕1，金乐天1，2，张国华1，杨浣漪1，何国庆1 （1.浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江省食品微生物技术重点实验室，浙江大学馥莉食品研究院，浙江杭州 310058）（2.朝鲜韩德秀平壤轻工业大学，朝鲜平壤） 摘要：为进一步描述我国传统面食发酵剂的理化性质和菌落组成，收集了北方地区6份发酵剂样品，测定了其酸度和菌落总数，并对分离、纯化、初筛后得到的75株细菌和60株酵母菌进行了测序鉴定。结果显示，样品pH值范围为3.73~5.46，总滴定酸度为8.3~19.8 mL；乳酸菌和酵母菌的计数结果分别为8.35±0.07~9.75±0.12 Log cfu/g，6.31±0.22~8.68±0.04 Log cfu/g。鉴定出包括短乳杆菌 （Lactobacillus brevis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）和旧金山乳杆菌（Lactobacillus sanfranciscensis）在内的乳酸菌8种；酵母菌4种，其中优势菌为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）；其他细菌6种，主要为解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens）、地衣芽孢杆菌（B. licheniformis）和醋杆菌。结果表明，我国传统面食发酵剂菌相复杂，以酵母菌和乳酸菌为主，还包括芽孢杆菌、醋酸杆菌在内的多种其他细菌，甚至可能含有致病菌。通过比较细菌和酵母在不同酸面团样品中的分布，发现不同来源样品的微生物种类组成存在差异。 关键词：酸面团；菌相分析；16S/26S rDNA测序；生物多样性；系统发育树 文章篇号：1673-9078(2014)9-114-120 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.09.020 Isolation and Identification of Bacteria and Yeast from Chinese T raditional Sourdough LIU T ong-jie1, LI Yun1, WU Shi-rong1, JIN Le-tian1,2, ZHANG Guo-hua1, YANG Huan-yi1, HE Guo-qing1 (1.College of Biosystems Engineering and Food Science of Zhejiang University, Zhejiang provincial key laboratory of Food Microbiology, Fuli Institute of Food Science of Zhejiang University, Hangzhou 310058, China) (2.DPRK Han Dexiu Pyongyang University of light industry, Pyongyang, DPRK) Abstract: In this study, the physicochemical properties and microbial profile of traditionally fermented sourdough for Chinese steamed bread were examined. Six samples of sourdough were collected from northern China. Acidity and colony counts were measured. After isolation, purification, and preliminary screening, 75 strains of bacteria and 60 strains of yeasts were obtained and identified by DNA sequencing. The pH was between 3.73 and 5.46 and total titratable acid (TTA) values ranged from 8.3 to 19.8 mL. In all the samples, the number oflactic acid bacteria (LAB) and yeasts ranged from 8.35±0.07 to 9.75±0.12 Log cfu/g and 6.31±0.22 to 8.68±0.04 Log cfu/g, respectively. Eight LAB species, including Lactobacillus brevis, L. plantarum, and L. sanfranciscensis, and six other bacterial species, including Bacillusamyloliquefaciens, Bacilluslicheniformis, and three species of Acetobacter, were identified. Among the four identified yeasts, the dominant species was Saccharomyces cerevisiae. The results indicate that Chinese traditional starter cultures for flour-based food are complex bacterial floras dominated by LAB and yeast, in addition to several other microorganisms, including Bacillus spp., Acetobacter spp., and even pathogenic bacteria. Differences in microbial species compositions among LAB and yeasts in samples from different areas were identified by comparing species distributions in different sourdough samples. Key words: sourdough; elucidation of microbial flora structure; 16S/26S rDNA sequencing; biodiversity; phylogenetic tree 我国传统的面食发酵剂类似于西方发酵面包用的酸面团，在我国一般被称为“老面”、“酵子”、“面收稿日期：2014-04-17 基金项目：国家自然科学基金资助项目（31371826） 作者简介：刘同杰（1989-），男，在读博士，研究方向：传统发酵食品通讯作者：何国庆（1957-），男，博士，教授，研究方向：食品生物技术及发酵工程肥”等[1]，具有悠久的使用历史。上世纪80年代，即发活性干酵母被引入我国，因其使用便捷，传统面食发酵剂逐渐被取代，但直到现在仍有很多地区尤其农村地区，仍然使用其制备馒头等主食，因使用传统面食发酵剂制备的馒头品质更优。究其原因，活性干酵母为单一菌种发酵，与传统发酵剂的混菌体系发酵相比，发酵的馒头风味平淡、香气不佳，总体的感官品 114
※实验六酵母RNA的分离及组分鉴定 【实验目的】 了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。 【实验原理】 酵母核酸种RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。由此即得到RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 鉴定依据：磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。 【实验器材】 150 ml锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶、吸管7、滴管8、试管及试管架9、烧杯、离心机、漏斗 【试剂和材料】 1、0.04 mol/L氢氧化钠溶液； 2、酸性乙醇溶液：将0.3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中； 3、95%乙醇； 4、乙醚； 5、1.5 mol/L硫酸溶液； 6、浓氨水； 7、0.1 mol/L硝酸银溶液； 8、三氯化铁浓盐酸溶液：将2 ml 10% 三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400 ml浓盐酸中； 9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g苔黑酚于100 ml 95% 乙醇中（可在冰箱中保存一个月）； 10、定磷试剂：（1）17% 硫酸溶液：将19 ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 ml 水中（2）2.5% 钼酸铵溶液：将2.5 g钼酸铵溶于100 ml水中（3）10% 抗坏血酸溶液：10 g抗坏血酸溶于100 ml水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸）。临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。17% 硫酸溶液：2.5%
实验二十五常见阳离子的分离与鉴定 一、实验目的： 1、巩固和进一步掌握一些金属元素及其化合物的性质； 2、了解常见阳离子混合液的分离和检出方法。 二、实验内容： （一）、碱金属和碱土金属离子的鉴定 1、Na+的鉴定 Na++Sb（OH）6-====NaSb(OH)6 2、K+的鉴定 K++HC4H4O6-====KHC4H4O6 3、Mg2+的鉴定 Mg2+与对硝基苯偶氮间苯二酚（镁试剂Ⅰ）在碱性介质中反应生成蓝色螯合物沉淀。除碱金属外，其余阳离子都不应存在。 4、Ca2+的鉴定 Ca2++C2O42-=====CaC2O4↓（白色沉淀不溶于6MHAC而溶于2MHCl）5、Ba2+的鉴定 Ba2++CrO42-====BaCrO4↓（黄色）(pH==4) （二）、p区和ds区部分金属离子的鉴定 1、Al3+的鉴定： Al3+与铝试剂（Ⅰ）在pH6---7介质中反应，生成红色絮状螯合物沉淀。 2、Sn2+的鉴定 SnCl2+2HgCl2+2HCl====Hg2Cl2↓（白色）+H2SnCl6 Hg2Cl2+SnCl2+2HCl====2Hg↓（黑色）+H2SnCl6 3、Pb2+的鉴定 2PbCrO4+2H+====2Pb2++Cr2O72-+2H2O PbCrO4+4OH-====[Pb(OH)4]2-+CrO42-
PbCrO4沉淀溶于NaOH（与Ag+、Ba2+、Bi3+不同）及浓HNO3，难溶于稀HNO3，不溶于氨水（与Ag+、Cu2+不同），难溶于稀HAC。 4、Sb3+的鉴定 Sb3++4H++6Cl-+2NO2-====[SbCl6]-+2NO+2H2O [SbCl6]-与罗丹明B反应形成难溶于水的离子缔合物。 5、Bi3+的鉴定 硫脲CS(NH2)2与Bi3+在0.4---1.2MHNO3介质中反应形成鲜黄色络合物， 6、Cu2+的鉴定 K4[Fe（CN）6]与Cu2+在中性或酸性介质中反应，生成红棕色Cu2[Fe(CN)6]沉淀。此沉淀难溶于稀HCl、HAC及稀NH3水，但易溶于浓氨水: Cu2++[Fe(CN)6]4-====Cu2[Fe(CN)6] ↓（红棕色） 7、Ag+的鉴定 [Ag(NH3)2]Cl+2H+====AgCl+2NH4+ 8、Zn2+的鉴定 Zn2++[Hg(SCN)4]2-====Zn[Hg(SCN)4]↓ Zn2+的HAC性试液与(NH4)2[Hg(SCN)4]反应，在稀溶液中生成无色尖劈状和X 形晶体，在浓溶液中形成多枝的羊齿植物形Zn[Hg(SCN)4]晶体。 9、Cd2+的鉴定 Cd2++S2-====CdS↓（黄色） 10、Hg2+ （三）、部分混合离子的分离和鉴定
一、常见离子的检验方法 1.常见阳离子的检验 2.常见阴离子的检验
1．检验溶液中含有Fe3+的实验操作： 取少量溶液置于试管中，滴加几滴KSCN溶液，若溶液变红，则证明溶液中含有Fe3+。2．检验溶液中含有Fe2+的实验操作是： 取少量溶液置于试管中，滴加几滴KSCN溶液，溶液不变色，在加入几滴氯水后溶液变红，则证明溶液中含有Fe2+。 3．验证溶液中不含有铁元素的实验操作是： 取少量溶液置于试管中，滴加几滴KSCN溶液，溶液不变色，在加入几滴氯水后溶液不变红，则证明溶液中不含+铁元素。 4．检验溶液中含有NH4+的实验操作是： 取少量溶液置于试管中，加入氢氧化钠后加热，将湿润的红色石蕊试纸放在试管口，若试纸变蓝则证明溶液中含有NH4+。 5．如何检验SO42- 取少量溶液置于试管中，加入盐酸无现象，在加入BaCl2溶液产生白色沉淀则证明溶液中有SO42- 。（补充：加入盐酸的作用）6．如何检验Cl- 取少量溶液置于试管中，加入AgNO3溶液有白色沉淀产生，再加入H NO3后沉淀不溶解则证明溶液中含有Cl-。
二、实验室常见操作 1． 气密性检验 (1)装置形成封闭体系→操作(微热、手捂、热毛巾捂、加水等) →描述现象→得出结论； (2)微热法检查的关键词是封闭、微热、气泡、水柱； (3)液差法的关键词是封闭、形成液差。 甲 ①实验开始前，某同学对甲实验装置进行了气密性检查，方法是： 关闭活塞，从长颈漏斗加水至浸没长颈漏斗的下端，继续加水形成一段水柱，一段时间水柱无变化则证明装置气密性良好。 ①实验开始前，某同学对乙实验装置进行了气密性检查，方法是： 关闭分液漏斗活塞，将导管插入水中用酒精灯微热烧瓶，导管口有气泡冒出，停止加热导管内出现一段水柱，证明气密性良好。 2．气体的收集 依据：根据气体的溶解性或密度 洗气瓶 球形干燥瓶 U 形干燥瓶 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥
酵母菌的分离与纯化 小组组员: 一、实验目的 1.学习分离纯化酵母菌的技术与方法 2.了解培养基的配置与灭菌技术 3.增强无菌操作技术的意识 二、基本原理 从混杂的微生物群体获得只含某一种某一株微生物的过程叫做微生物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷和镁离子。而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的。 三、实验材料及用具 1.用品：苹果、葡萄糖、琼脂、水、1%孟加拉红水溶液、马铃薯 2.设备与器材：1ml的无菌吸管、无菌培养皿等. 四、实验步骤 1、马铃薯培养基的配置 培养基成分:马铃薯 40克、蔗糖（葡萄糖） 4克、琼脂 4克、水 200毫升、 pH 自然。配置方法: （1）配制20%马铃薯浸汁：取去皮马钓薯40g，切成小块，加水200ml.加热煮游30 min ，用纱布过滤，然后补足失水互所需体积。121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备用。 （2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加入2g蔗糖，加热煮沸后加入4克琼脂，继续加热融化并补足失水。 （3）分装、加塞，包扎。 （4）高压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min
酵母菌的分离与纯化 土壤是微生物生活的大本营，是寻早有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同图样中各类微生物的含量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。放线菌一般在较干燥、偏碱性、有机质较多的土壤中较多；霉菌在含有机质丰富、偏酸性、通气性较好的土壤中较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在酒曲、面肥、水果表皮、果园土壤中数量多些。（一）菌源 1土样用无菌的采样小铲在橘树果园中取土壤表层下1~10cm土壤10g，装入灭菌的牛皮纸袋内。封好袋口，记录取样地点、环境及日期。图样采集后应及时分离，饭不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥的条件下，以减少其中菌相的变化。 2面肥 （1）面粉500克，白酒100克，水250，和好静置发酵就可以了。冬季10个小时。（2）在温水中兑一点酒，倒入适量面粉拌匀后放入绝缘保温盛器（陶瓷，砂锅）中，用布将整个盛器盖好置于温度较高处，6小时后即成面肥。 *以上方法做出的面肥只能保存几天，不宜放置太久。 3水果果皮 桔子和葡萄等的果皮上含有数量较多的酵母菌，既可单独作为菌源也可以和果园土壤作为混合菌源。 （二）酵母菌的分离 1制备菌悬液 称取菌源1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。振荡20min，即成10-2的菌源悬液。再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。 2涂布法分离 取融化并冷却至45~50度左右的豆芽汁葡萄糖培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。呆平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的豆芽汁葡萄糖培养基平板上。每个稀释度做2~3个平行皿。左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，再火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。注意，切忌用力过猛，这样会将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。3培养 接种后，平版倒置于30度恒温箱中，培养2~3天，观察结果。 4纯化 用接种环挑取单个单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。 酵母扩培方案 一、培养基制备 (一)麦芽汁培养基的配制 1．培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2．配制方法 (1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直
酵母菌的分离鉴定、固定化及酒精发酵 吴英玲 10197020 10生物创新班 摘要：酵母菌喜欢酸性环境，可利用乳酸豆芽葡萄糖培养基富集培养酵母菌，然后在YPG培养基上用划线法分离纯化出酵母菌。将分离的酵母菌转接于YPG斜面培养基上培养，待长好后置于冰箱内 4 ℃下保存。用TTC显色剂及杜氏小管观察法筛选出发酵能力高的酵母菌。并通过菌落形态、细胞形态、生化分析及分子生物学手段进行微生物鉴定。采用PVA-海藻酸钠固定化技术固定酵母细胞进行酒精发酵。 关键词：酵母菌分离鉴定固定化酒精发酵 Abstract: Yeast like acid environment, the use of lactic acid glucose medium enrichment culture yeast, bean sprouts and purification by marking method on the YPG culture medium of yeast will transfer separation of the yeast in the YPG cant medium cultivation, staying long placed in the refrigerator after use the TTC chromogenic agent, save and duchenne tubular observation screen high fermentation ability by colony morphology of yeast cell morphological and biochemical analysis and molecular biology means to identify the microorganisms using PVA - sodium alginate immobilized technology fixed yeast cells for ethanol fermentation。 前言 酵母菌（yeast）是一类单细胞真菌。一般呈圆形、卵圆形、圆柱形，其菌落呈乳白色或红色，表面湿润、粘稠，易被挑起。酵母菌多数为腐生，专性或兼性好氧，广泛生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，例如水果、蔬菜、蜜饯的内部和表面以及在果园土壤中最为常见。酵母菌在有氧环境下将葡萄糖转化为水和二氧化碳，主要用于馒头、面包等食品发酵；在工业上，酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）将葡萄糖、果糖、甘露糖等单糖吸
酵母菌的分离纯化 ?实验目的 1.了解培养基的配置与灭菌技术； 2.无菌操作技术； 3.工业微生物的分离与纯化技术； 4.工业微生物的检测及保藏。 ?基本原理 1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。 2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。 3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。此次实验采用梯度稀释涂布平板法。 4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。 实验器材 仪器设备 恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器 玻璃器皿 烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片 试剂与材料 苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液 其它 纱布、滤纸 ?实验内容及操作步骤 (一)、样品的选择 酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。 （二）、样品的处理 制备苹果悬液 1.首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。
阳离子的鉴定 一、铵离子的鉴定 铵离子的鉴定之一 [原理] 铵盐跟碱反应，生成氨气，这是铵盐的共性 NH4++OH—==NH3↑+ H2O [用品] 表面皿、铵盐溶液、6mol/L氢氧化钠溶液、红色石蕊试纸 [操作] 在表面皿的中央滴几滴铵盐溶液，再滴加6mol/L氢氧化钠溶液到碱性。混均匀后用沾有红色湿润石蕊试纸的表面皿覆盖，放在水浴中微热，石蕊试纸变成蓝色，说明原溶液里有NH4+。 铵离子的鉴定之二 [原理] NH3与奈斯勒试剂(K2HgI4)反应，生成橙黄或红棕色（依NH3含量多少）沉淀，NH4+在强碱条件下，能生成NH3。 [用品] 滤纸、毛细吸管、滴管、奈斯勒试剂、10%NaOH溶液 [操作] 在滤纸片上滴一滴10%NaOH溶液，待液滴渗入滤纸中后，再加一滴试液，使其发生沉淀并等待液滴渗入滤纸中。用毛细吸管沾少量水垂直放在斑点中心，将NH4+扩散到周围，在外围的水渍区上加K2HgI4溶液一滴，黄橙或红棕色斑点证明NH4+的存在。 [备注] 本法可检出μg（微克）的NH4+。
二、钠离子的鉴定 钠离子的鉴定之一 [原理] 钠离子的焰色反应为黄色 [用品] 试管或点滴盘、铂丝环、煤气灯或酒精灯、1∶1盐酸、蒸馏水 [操作] 取试液1滴于试管中，加1∶1盐酸2滴，用约1mL水稀释，以铂丝环沾取进行焰色反应，浓烈的黄色火焰表示Na+存在。 [备注] 此反应的灵敏度很大，μg（微克）的Na+就会使火焰呈浅黄色，因此盐酸、蒸馏水及其它试剂中的微量Na+都有反应，必须做空白试验，并火焰的黄色要浓烈，才能确定Na+的存在。 钠离子的鉴定之二 [原理] 锑酸根离子[Sb(OH)6]—和Na+作用，会有白色晶状的锑酸钠沉淀出现Na[Sb(OH)6]。 Na++[Sb(OH)6]—=Na[Sb(OH)6]↓ 利用这种性质可以检验Na+的存在。 [用品] 试管、试管架、滴管、玻璃棒、·L—1NaCl溶液、·L—1K[Sb(OH)6] 溶液。 [操作] 1、在试管中加入·L—1NaCl溶液。
阳离子的分离与鉴定 一. 实验目的 1. 掌握用两酸三碱系统分析法对常见阳离子进行分组分离的原理和方法。 2. 掌握分离、鉴定的基本操作与实验技能。 二. 实验原理 阳离子的种类较多，常见的有二十多种，个别检出时，容易发生相互干扰，所以一般阳离子分析都是利用阳离子某些共同特性，先分成几组，然后再根据阳离子的个别特性加以检出。凡能使一组阳离子在适当的反应条件下生成沉淀而与其它组阳离子分离的试剂称为组试剂，利用不同的组试剂把阳离子逐组分离再进行检出的方法叫做阳离子的系统分析。在阳离子系统分离中利用不同的组试剂，有很多不同的分组方案。如硫化氢分组法，两酸、两碱系统分组法。下面介绍一种以氢氧化物酸碱性与形成配合物性质不同为基础，以HCl、H2SO4、NH3 H2O、NaOH、(NH4)2S为组试剂的两酸三碱分组方法。本方法将常见的二十多种阳离子分为六组。 第一组：盐酸组Ag+，Hg22+，Pb2+ 第二组：硫酸组Ba2+，Ca2+，Pb2+ 第三组：氨合物组Cu2+，Cd2+，Zn2+，Co2+，Ni2+ 第四组：易溶组Na+，NH4+，Mg2+，K+ 第五组：两性组Al3+，Cr3+，Sb III、V，Sn II、IV 第六组：氢氧化物组Fe2+，Fe3+， Bi3+，Mn2+，Hg2+ 用系统分析法分析阳离子时，要按照一定的顺序加入组试剂，将离子一组一组沉淀下来，具体分离方法如下表。 表阳离子分组步骤 试液(用个别检出法鉴定NH4+、Fe2+、Fe3+) ( Hg ) (两性组) (氢氧化物组) (第三组硫化物) (第四组易溶组)AlO2?、Cr O42?Fe(OH)3、 K+、Na+、Mg2+、NH4+SbO43?、SnO32?MnO(OH)2、 NaBiO3、HgNH2Cl
常见离子的检验方法 一、常见阳离子的检验 1、 Mg2+：加入NaOH溶液，生成白色沉淀［Mg(OH) 2 ］,该沉淀不溶于过量 的NaOH溶液。 2、 Al3+：加入NaOH溶液，生成白色絮状沉淀，该沉淀能溶于盐酸或过量的NaOH溶液，但不能溶于氨水。 3、 Ba2+：加入稀硫酸或可溶性硫酸盐溶液，生成白色沉淀（BaSO 4 ），该沉淀不溶于稀硝酸。 4、 Ag+：①加入稀盐酸或可溶性盐酸盐，生成白色沉淀（AgCl），该沉淀不溶于稀硝酸。②加入氨水，生成白色沉淀，继续滴加氨水，沉淀溶解。 5、 Fe2+：①加入少量NaOH溶液，生成白色沉淀［Fe(OH) 2 ］，迅速变成灰 绿色，最终变成红褐色［Fe(OH) 3 ］。②加入KSCN溶液，无现象，然后加入适量新制的氯水，溶液变红。 6、 Fe3+：①加入KSCN溶液，溶液变为血红色。②加入NaOH溶液，生成红褐色沉淀。 7、 Cu2+：①加入NaOH溶液，生成蓝色沉淀［Cu(OH) 2 ］。②插入铁片或锌片，有红色的铜析出。 8、 NH 4+：加入浓NaOH溶液，加热，产生刺激性气味气体（NH 3 ），该气体 能使湿润的红色石蕊试纸变蓝。 9、 H+：①加入锌或Na 2CO 3 溶液，产生无色气体；②能使紫色石蕊试液、pH 试纸变红。 10、K+：铂丝蘸其溶液，在无色酒精灯火焰上灼烧火焰呈浅紫色(透过蓝色钴玻璃观察) 12、Na+：铂丝蘸其溶液，在无色酒精灯火焰上灼烧火焰呈黄色 13、Ca2+：铂丝蘸其溶液，在无色酒精灯火焰上灼烧火焰呈砖红色
二、常见阴离子的检验 1、 OH-：能使无色酚酞、紫色石蕊等指示剂分别变为红色、蓝色；能使红色石蕊试纸、pH试纸变蓝。 2、 Cl-：加入AgNO 3 溶液，生成白色沉淀（AgCl）。该沉淀不溶于稀硝酸，能溶于氨水 3、 Br-：①加入AgNO 3 溶液，生成淡黄色沉淀（AgBr），该沉淀不溶于稀硝酸。②加入氯水后振荡，滴入少许四氯化碳，四氯化碳层呈橙红色。 4、 I-：①加入AgNO 3 溶液，生成黄色沉淀（AgI），该沉淀不溶于稀硝酸。 ②加入氯水和淀粉试液，溶液变蓝。 5、 SO 4 2-：加入BaCl2、硝酸钡溶液，生成白色沉淀（BaSO4），滴加稀硝酸沉淀不溶解。 6、 SO 32-：①加入盐酸或硫酸，产生无色、有刺激性气味的气体（SO 2 ），该 气体可使品红溶液褪色。②加入BaCl 2溶液，生成白色沉淀（BaSO 3 ），该沉淀可 溶于盐酸，产生无色、有刺激性气味的气体（SO 2 ）。 7、 S2-：①加入盐酸，产生臭鸡蛋气味的气体，且该气体可以使湿润的 Pb(NO 3) 2 试纸变黑。②能与Pb(NO 3 ) 2 溶液或CuSO 4 溶液生成黑色的沉淀（PbS或 CuS）。 8、 CO 32-：①加入CaCl 2 或BaCl 2 溶液，生成白色沉淀（CaCO 3 或BaCO 3 ），将 沉淀溶于强酸，产生无色、无味的气体（CO 2 ），该气体能使澄清的石灰水变混 浊。②加入盐酸，产生无色、无味的气体，该气体能使澄清的石灰水变浑浊；向 原溶液中加入CaCl 2 溶液，产生白色沉淀。 9、 HCO 3 -：加入盐酸，产生无色、无味的气体，该气体能使澄清的石灰水变 浑浊；向原溶液中加入CaCl 2 溶液，无明显现象。 10、NO3-：向浓溶液中加入铜片、浓硫酸加热，放出红棕色、有刺激性气味 的气体（NO 2 ）。 11、PO 43－：AgNO 3 溶液、稀硝酸生成黄色沉淀，加硝酸沉淀溶解
实验六、常见非金属阴离子的分离与鉴定 一、实验目的：学习和掌握常见阴离子的分离与鉴定方法，以及离子检出的基本操作。 总结说明：从IIIA族到VIIIA族的22种非金属元素在形成化合物时常常生成阴离子。形成阴离子的元素虽不多，但是同一元素常常不止一种阴离子。阴离子多数是由两种和两种以上元素构成的酸根或碱离子，同一种元素的中心原子能形成多种阴离子在非金属阴离子中，有的与酸作用生成挥发性的物质，有的与试剂作用生成沉淀，也有的呈现氧化还原性。利用这些特点，根据溶液中离子共存情况，应先通过初步试验或进行分组应产生气体的试验，各种阴离子的沉淀性质，氧化还原性质。预先做初步检验，可以排除某些离子存在的可解性，从而简化分析步骤，初步检验包括以下内容： （一）、试液的酸碱性试验。 若试液呈强酸性，则易被分解的离子如：CO32-、NO2-、S2O32-等。 （二）、是否产生气体的试验。 若在试液中加入稀H2SO4或稀HCL溶液，有气体产生，表示可能存在CO32－、SO32－、 S2O32－、S2－、NO2－等离子。根据生成气体的颜色和气味以及生成气体具有某些特征反应，确证其含有的阴离子，如由NO2－被酸分解生成红棕色NO2气体，能将湿润的碘化钾淀粉试纸变蓝；由S2－被酸分解产生H2S气体，可使醋酸铅试纸变黑，可判断NO2－和S2－离子分别存在于各自反应溶液中。 （三）、还原性阴离子的试验。 在酸化的溶液中，加入KMnO4稀溶液，若紫色褪去，则可能存在S2－、SO32－、S2O32－、BR－、I－、NO2－等离子，若紫色不褪去，则上述离子都不存在。试液经酸化后，加入I2－淀粉溶液，蓝色褪去，则可能存在SO32－、S2O32－、S2－等离子。 （四）、氧化性阴离子的试验。 在酸化的试液中加入KI溶液和Ccl4，振荡后Ccl4层呈紫色，则有氧化性阴离子存在，如NO2－离子。 （五）、难溶盐阴离子试验。 ①钡组阴离子。 在中性或弱碱性试液中，用Bacl2能沉淀SO42－、SO32－、S2O32－、CO32－、PO42－、等阴离子。 ②用AgNO3能溶液Cl－、Br－、I－、S2－、S2O32－等阴离子，然后用稀HNO3酸化，沉淀不 溶解。 可以根据Ba2+和Ag+相应盐类的溶解性，区分易溶盐和风化溶盐。加入一种阳离子可以试验整组阴离子是否存在，这种试剂就是相应的组试剂。 二、实验用品： ①仪器：试管（离心）、点滴板、离心机。 ②固体药品：硫酸亚铁。 ③液体药品：Na2S（0.1mol/L）、Na2SO3（0.1mol/L）、Na2S2O3（0.1mol/L）、Na3PO4 （0.1mol/L）、Nacl（0.1mol/L）、NaBr（0.1mol/L）、NaI（0.1mol/L）、NaNO3（0.1mol/L）、 Na2CO3（0.1mol/L）、NaNO2（0.1mol/L）、(NH4)2MoO4（0.1mol/L）、Bacl2（0.1mol/L）、 KMnO4（0.1mol/L）、ZnSO4(饱和)、K4[Fe(CN)6]（0.5mol/L）、AgNO3（0.1mol/L）、 H2SO4（浓1mol/L）、HNO3（6mol/L）、HCL（6mol/L）、NaOH（2mol/L）、Ba(OH)2 （饱和氨水）或新配制的石灰水（氨水6mol/L）、H2O2（3%）、氯水、Ccl4、对氨 基苯碘酸（1%）、2－苯胺（0.4%）、亚硝酸铁氰化钠（9%）。 ④材料：Pb(AC)2试纸、玻璃棒。