活性低聚糖及活性多糖的测定(精)

苯酚-硫酸法测多糖含量一、原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。

再以比色法测定。

二、试剂1、浓硫酸：分析纯，95.5%2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。

3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。

（每次测定均需现配）4、标准葡聚糖（Dextran,Pharmacia）或分析纯葡萄糖。

5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml 水。

8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

2、样品含量测定1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。

最后一次将残渣一起到入离心管。

注意：总的溶液不要超出10毫升。

（既不要超出离心管的容量）。

2）离心，转速3000转/分钟，共三次。

第一次15分钟，取上清液。

后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。

最后滤液保持18毫升左右。

3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。

4）定容取样。

水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。

定容至25毫升的容量瓶中。

功能各章重点提纲参考答案第一章1.功能食品的定义及其内涵。

（1）定义：以调节生理活动、促进健康为主要目的的食品。

具有特定保健功能的食品，即适宜于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的的食品，不同于一般食品，与药品也严格区别。

（2）内涵：1．功能食品除了具有一般食品皆具备的营养功能和感官功能(色、香、味、形)外，还具有一般食品所没有的或不强调的调节人体生理节律、预防疾病、促进健康的第三功能。

这个第三功能来源于某些具有调节人体生理节律的功能成分。

2．这类食品是以具有某一功能的动物、植物或天然物作原料，在“医学上或营养学上具有特殊要求的待定功能的食品”。

而不是以医疗为目的的药品。

2.为什么说功能食品是21世纪食品工业发展的重点行业功能食品能够称为21世纪的食品，总结来说有以下四点原因：第一，随着社会经济的飞速发展，社会生活各方面的现代化程度更加完善，高度紧张的生活节奏无形中给人们造成更大的压力，迫使人们越来越追求身体健康，提高生活质量。

在饮食方面，具有调节生理节律和机体功能的保健食品将成为越来越重要的选择。

第二、高龄化社会的形成，各种老年病发病率的上升以及少年儿童成人病的增加更加引起人们的恐慌，人们期望通过饮食控制这些病的发生和发展。

第三，工业化的高度发展对环境造成的负面影响给人类的身体健康带来严重的威胁。

空气和水质污染、生态恶化、食品中农药残留，严重影响了人们的身体健康，人们将更加注意选择更安全、有益于健康的食品。

第四，科学技术的飞速发展，从理论上探明了许多有益于人体健康的食物成分，弄清了健康与膳食的关系，使人们懂得如何通过饮食来调节机体功能和预防疾病增进健康，从而比较自觉地选择对自己有益的保健食品。

同时，随着人们生活水平的提高，在饮食和保健方面的投入也将相应增大，“花钱买健康”将会逐渐变为21世纪的一种时尚。

3.功能食品、功能因子及功能食品载体的关系（三者关系没找到）（1）功能因子定义：具有确切保健功能的成分，一般不包括营养成分，也称功能成分、活性成分、功效成分。

天然产物活性多糖结构与功能研究进展一、本文概述天然产物活性多糖是一类具有广泛生物活性的天然高分子化合物，其结构与功能的深入研究对于生命科学、医药学、食品科学等领域的发展具有重要意义。

本文旨在全面综述近年来天然产物活性多糖结构与功能研究的主要进展，包括多糖的提取分离、结构解析、生物活性评价以及应用前景等方面。

通过对相关文献的梳理和分析，本文旨在为读者提供一个清晰、系统的天然产物活性多糖研究框架，为推动该领域的进一步发展提供参考和借鉴。

本文首先介绍了天然产物活性多糖的基本概念和研究背景，阐述了多糖在生物体内的分布、种类和生物活性。

接着，重点综述了多糖的提取分离方法，包括传统方法和现代生物技术的应用，如超声波辅助提取、微波辅助提取、酶解法等。

在结构解析方面，本文详细介绍了多糖的化学结构、高级结构及其与生物活性的关系，包括糖链的连接方式、糖苷键类型、分支结构等。

本文还综述了多糖的生物活性评价方法，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等，并探讨了多糖在医药、食品、化妆品等领域的应用前景。

天然产物活性多糖的研究已经成为当前生命科学领域的一个热点，其结构与功能的深入研究对于揭示生命现象的本质、开发新型药物和功能性食品具有重要意义。

本文希望通过对天然产物活性多糖研究进展的综述，为相关领域的研究者提供有益的参考和启示。

二、天然产物活性多糖的结构特征天然产物活性多糖是一类具有复杂结构的生物大分子，其结构特征包括一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。

这些结构层次共同决定了多糖的生物活性。

一级结构是指多糖中单糖的组成、糖苷键类型、连接方式以及异头碳构型等。

天然产物活性多糖的一级结构多种多样，单糖组成可能包括葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖等，糖苷键类型可能是α型或β型，连接方式有线性或分支状等。

这些一级结构特征对多糖的生物活性具有重要影响。

二级结构是指多糖链内或链间通过氢键形成的规则构象。

多糖链上的羟基和羰基可以形成分子内的氢键，使多糖链呈现特定的弯曲或螺旋结构。

灵芝菌生物活性多糖与总糖的测定622001,V ol,22,No9《食品科学》※分析检验灵芝茵生物活性多糖与总糖的测定苏亚玲程发良李纠阮湘元东莞理工学院应用化学系523106白燕暨南大学广卅1510632摘要以75%乙醇水溶赦分离可溶性单糖和低聚糖.在35mol/LHSO溶液中和100%下水解90rain,使活性多糖r8一D一聚葡萄糖J水解成葡萄糖,然后用兰一埃农氧化还原滴定挂滴定,终点颜色为浅棕色.较液相色谱法,,下仅精密度明显高,而曙删定值高出约四个百讣点,更吻合实际组成:该方法生产商采用为生产工艺控制和产品质量认定的分析方法.关键词灵芝萌生物活性多糖化学分析AbstractSamplesofganederraalucidummycelimn(GLM)weretreatedwith75%alcoholsol utiontoseparatewater—solublesaccharidesfrompolysaccharideandthendissoIY edin35mol/LH2SO,solutionund er100.Cforabout90rain.andproduct.Theglucosebrokenfrombio～activepolysacchafideinGLM.wasdeterminedwithLandandEgnon'sMethodbased011oxidation—reductiontitrationEndpointinthetitrationcouldbefoundwhencolorofsolutionWaS sudde~ychangedfromviolettoUghtbrown. KeywordsGanoderrnalncidummyceliumBio—actlvepol~IrsaccharideChemicalanalysis从灵芝中提取的B—D一葡萄糖,杂多糖及糖蛋自对肿瘤有明显的抑制作用,灵芝提取物能明显增强人体的免疫能力,.因此,对灵芝菌丝体多糖的研究颇受关注,文献报道的发酵灵芝菌丝中生物活性多糖含量的测定方法是采用化学分离,水解后以高效液相色谱测定.但测定结果的精密度和重现性不高(相对偏差约6%～8%),多糖测定值与其他组分含量合并并与总量对照时,有约有4.1%～4.9%的物质质量消失",故该方法可能存在较大的系统误差,而灵芝菌丝粉多糖含量约10%～11%,含量范围适合化学分析.根据多糖B～D一葡萄糖所组成的特性,本文建立的化学分析法,相对标准偏差优于1.3%,测定值高出液相色谱法测定值约为4～5个百分点,而与其他组分含量测定值合并时与(蛋白质,水分,灰分,单,低聚糖)样品总质量基本吻合;可在3—35h完成一个样品的测定.1试验1.1仪器与试剂HP一1100型高效液相色谱仪(HP公司)i发酵灵芝菌丝粉样品为东莞某合资公司提供,呈棕黄色.经重量干燥法测定水分后进一步研细,过100目筛,置干燥器中保存备用,优级纯葡萄糖(上海试剂厂分装)先经50～60℃干燥30min,然后升温至98.C干燥60min, 冷至后配制葡萄糖标准溶液.其他试剂为分析纯,1.2测定原理与方法灵芝菌丝粉主要组成为蛋白质(43%～45%),活性多糖,单糖,水溶性低聚糖,纤维素,水分,无机盐,少量脂类等,其中活性多糖为B—D一葡萄糖】.用乙醇水溶液抽提出单糖,低聚糖后,残留物以稀硫酸水解,使活性多糖水解成单糖,过滤分离除去蛋白质和纤维素等残留物,滤液中的可溶性蛋白质以醋酸锌盐析法沉淀分离之,最后所得样品溶液用经典还原糖法测定水解产物葡萄糖并换算成多糖";样品不经乙醇溶液抽提分离,直接以相同方法水解,分离除去蛋白质和纤维素,还原糖法测定结果即为总糖值".1.3测定操作步骤1.3.1试剂溶液的配制:参照文献所述方法配制裴林氏溶液,标准葡萄糖溶液,醋酸锌溶液及亚铁氰化钾溶液.1.3.2样品姓理:准确称取灵芝菌丝粉约3.2～3.4kg于100ml烧杯中,以l50m175%乙醇水溶液分三次抽提除去可溶性单糖和低聚糖,过滤后用约100lI1l 乙醇水溶液分数次洗涤残留物.残留物转移至150ml 烧瓶中,并以90ml蒸馏水分数次仔细清洗滤纸上粘附的残留物于烧瓶中,加入适量9.3mol/LH:SO!溶液,水浴中进行水解,转移至250ml容量瓶中,加人醋酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液各5ml,加水至刻度,摇匀后静置10min,经定量滤纸过滤,弃初始滤液约lOml, 收集其余滤液供滴定用2结果与讨论※分析检验《食品科学》2001,V oL22..9632.1乙醇水溶液提取分离对多糖测定结果的影响表1所列实验结果表明,乙醇水溶液提取分离操作对多糖测定值影响明显.乙醇含量低于60%时,乙醇含量越低,测定值越低,可能是有部分活性多糖溶解,乙醇含量太于70%,多糖测定值达最大且基本稳定.因此,我们拟用75%乙醇水溶液提取分离单,低聚糖.表1乙醇水溶液组成对多搪涌定值的影响至蔓墨塑多糖%7.928.699369.919979.9910.710.21052.2酸水解条件对测定结果的影响酸水解条件(如酸的种类)对测定结果影响明显且十分复杂酸的强度,浓度不足,或水解温度过低,水解时间不足,都可因水解不完全而产生负误差;但浓度过大,水解温度过高或水解时间过长,可能因纤维素部分水解而产生正误差,可能因酸催化使水解的单糖脱水产生糖醛并重新聚合成褐焦糖l,失去还原性,而产生负误差实验表明,在常用的HCI.SO,HNO3,H3POd,HC104,HAC中,以HC1或H2SO4水解所得测定值的重现性较好,其中以稀HSO水解所得结果的重现性最好,故选用稀SO.按表2及表3所示的三因素三水平的k(3)正交试验实施测定条件的选择.由表3可粗略看出,水解条件为BC,,AzBzC,A:B3C,A,&C等,多糖测定值在998%～10.7%之间,重现性较好.若将9组测定作为一个总体考虑,其总体平均值为10.4%,标准偏差为1.2%,用t一检验法计算各组平均值的t值分别为:4.I3(A1lJ-c);2.88(A-B2C2J,1.28(A1B3C3),2.04(A2C2C3),0.49fA2B3C1J,3.20(A3BIC]),0.74(A3B2Ct),0.51(BC),而t=2.31,to.B=1.86因此,置信度为95%时,方案A.c,,A:BC,,ABC,A3BC等无系统误差我们确定使用方案AB,C-,即酸水解条件为:3.5mol/L,H2SO4,100.C,90rain2.3其他测定条件的影响用醋酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋自质的条件较宽表2正交试验因素及水平因素试验号ABc多糖含量%相对平均偏差%★平行三次测定平均值醋酸锌溶液和10.6%亚铁氰化钾溶液各5ml,稀释至25Oral即可.2.4样品测定结果样品测定结果列于表4化学分析法测定结果的精密度明显优于液相色谱法,测定值显着高于液相色谱法,其原因可能是因为液相色谱法是依据糖的醛基或酮基的紫外吸收而测定的,而多糖被酸水解成单糖时,部分单糖结构发生了变化.紫外吸收性质(如最大吸收波长和吸光系数等)发生了变化导致测定结果偏低.生产商提供的灵芝菌丝粉其他主要组分的参考含量为:粗蛋白43%～45%;粗纤维素7%一8%;水分22%一23%;无相盐3%一3.5%:脂类1.5%～1.8%.因此,加上化学分析法测得总糖值后,总含量为95%～98%,接近100%;而加上用色谱法测得的总糖值总含量仅为90%一94%,明显偏低.参考文献松,对测定结果影响很小,实测时,向样品溶液加22%I梁宗岩,张翼伸生物化学和生物物理,1993,25:59表4样品测定结果★皆为三扶平行测定平均值;★★以HP一1100液相色谱莹仪所得撙I定值642001,V ot.22,No.9《食品科学》※分析检验SaitoKMi~akiT,(;hem.PhannBull,1989,37:3134关洪昌,丛铮药学通报,1982,l749林志椎.药学通报,1979,14:183.张利娜,丁琼,张平义高等学校化学,1997,18:990.6陈敬华,张利娜,余登寿,朱荣萍.高等学校化学,2000,21:9617大连轻工学院编食品分析北京:中国轻工业出版社,1994,1578郑集普通生物化学.北京:人民教育出版杜,1982,27.校正曲线法测定食品中山梨酸的含量王文博吕潇陈子雷张卉陈琦李瑞菊山东省农业科学院中心实验室250100摘要本文应用气相色谱测定食品中山梨酸,应用校正曲线对测定结果进行校正^山梨酸回收率由80%提高到95%～110%.本方法简单,定量准确,能够满足食品中山梨酸舍量测定的要求.关键诃山梨酸气相色谱校正曲线法AbstractThispaperintroduceagaschromatographymethodtodeterminesorhieacidinfood, AcalibrationcurveinusedforquantJtation.IthasthecharacteristicsofeasyopemtMn,a~ucac.yandhirecovery(95—110%),whjchmeetstheI1eedoffoodtest. KeywordsSorbieacidGaschromatographyCalibrationcurve山梨酸是食品中常用的有机酸类防腐剂,可抑制微生物生长,防止食品腐败变质.山梨酸对光,热稳定,山梨酸水溶液加热时可随同水蒸汽一起挥发[110我国食品中最大允许使用量0.6%一1.O%g/kg】.其检测方法有比色法,薄层色谱法,气相色谱法,液相色谱法等I.国家标准采用乙醚提取,4%氯化钠溶液净化,无水硫酸钠脱水,气相色谱定量.在分析中,我们发现国标法回收率低(O%),尤其在低含量『青况下回收率仅为362%,本文采用酸化提取后直接浓缩进样的方法,减少组分在处理过程中的损失,采用内标法和校正曲线法进行定量,使山梨酸的回收率达95%一l10%1实验部分11仪器:HP6890气相色谱仪带氢火焰离子化检测器.高速离心机1.2试剂:乙醚(AR);盐酸6mol/L;无水硫酸钠(ARJ;4%氯化钠水溶液1.3标准品:山梨酸纯品(日本进口上海化学试剂公司分装);标准溶液的配制:准确称取山梨酸,乙酸正戊酯(色谱纯)标样,精确到0.O01g,用石油醚——乙醚(3:1)混合溶剂溶解,稀释,定容,乙酸正戊酯作内标.14色谱条件:OV一10115mx0.53ram石英毛细管柱(中国科学院大连化物所国家色谱研究分析中心提供);2.3ml/min;线速度:25era/s;柱温:180℃1.5样品苹果泥,苹果洗净去皮,去核,煮烂捣碎;菠萝汁,从超市购得,不含山梨酸.1.6样品处理1.6.1国标法:见GB5009.29—19961.6.2改进后方法:称取样品lOs加人不同浓度的山梨酸标样,同时加人己酸正戊酯作内标.用2ml6nol/L 盐酸酸化,lore1乙醚提取,舒,台并提取液,浓缩定容至2ml进样,气相色谱测定,分别用外标法和内标法定量. 2结果与讨论2.1国标法测定苹果泥中山梨酸的添加回收率结果见表1.山梨酸在三个舔加量下回收率都低于60%,添加量越小回收率越低.山梨酸色谱图见图1-乙醢正戊酯2山梨酸3苯甲酸图1山梨酸色谱图2.2通过简化前处理操作步骤,得到不同添加量下山梨酸的回收率(见表2).在不同添加浓度下,浓度愈。

一、实验目的1. 了解活性多糖的基本性质和生物学功能。

2. 掌握活性多糖的提取方法。

3. 学习活性多糖的鉴定和分析技术。

4. 分析活性多糖在不同植物中的分布和含量。

二、实验原理活性多糖是一类具有特殊生物学功能的高分子碳水化合物，广泛存在于植物、真菌和微生物中。

它们在免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗衰老等方面具有重要作用。

本实验主要采用水提法提取活性多糖，并利用紫外-可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）等手段进行鉴定和分析。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：香菇、枸杞、松花粉、海带等植物样品。

2. 实验试剂：蒸馏水、无水乙醇、浓硫酸、蒽酮、硫酸钠、氢氧化钠、碘液、氯化钠等。

3. 仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、紫外-可见分光光度计、薄层色谱仪、高效液相色谱仪等。

四、实验方法1. 活性多糖的提取（1）将植物样品研磨成粉末，过筛。

（2）取适量粉末，加入蒸馏水，于60℃下搅拌提取1小时。

（3）过滤，收集滤液，浓缩至一定体积。

（4）加入无水乙醇，静置过夜，离心分离。

（5）取沉淀，用蒸馏水洗涤，干燥，得到活性多糖。

2. 活性多糖的鉴定（1）紫外-可见分光光度法：测定提取液在特定波长下的吸光度，计算活性多糖含量。

（2）薄层色谱法（TLC）：将活性多糖样品点于薄层板上，与标准样品进行对比，鉴定活性多糖的种类。

3. 活性多糖的分析（1）高效液相色谱法（HPLC）：分析活性多糖的纯度和分子量。

（2）凝胶渗透色谱法（GPC）：分析活性多糖的分子量分布。

五、实验结果与分析1. 活性多糖的提取根据实验结果，香菇、枸杞、松花粉、海带等植物样品中均含有活性多糖，提取率分别为10%、8%、6%、5%。

2. 活性多糖的鉴定通过紫外-可见分光光度法和薄层色谱法，鉴定出香菇、枸杞、松花粉、海带等植物样品中的活性多糖为香菇多糖、枸杞多糖、松花粉多糖、海带多糖。

3. 活性多糖的分析（1）高效液相色谱法：香菇多糖、枸杞多糖、松花粉多糖、海带多糖的纯度分别为95%、90%、85%、88%。

功能食品中功能因子及作用1功能因子根据国家标准GB16740-1997,能通过激活酶的活性或其他途径,调节人体机能的物质,称为功能因子。

功能食品中功能因子是功能食品真正起生理作用的活性成分,是生产功能食品的关键。

功能食品必须有明确的天然功效成分即功能因子,并被科学证实具有调节人体生理功能的作用。

2功能因子的分类从目前国内外关于食品功能因子的分类方法来看,主要有以下2种分类方式:根据食品功能因子的化学结构分类和根据食品功能因子的生理功能分类。

目前主要按其化学结构进行分类,已确认的功效因子主要包括以下11类:(1)活性多糖:如香菇多糖、槐耳多糖、魔芋葡甘聚糖、壳聚糖等;(2)功能性低聚糖、功能性单双糖:如低聚果糖、低聚木糖、低聚纤维糖等;(3)功能性脂类:如ω-3多不饱和脂肪酸、ω-6多不饱和脂肪酸、亚油酸、α-亚麻酸、卵磷脂等;(4)糖醇类:如木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、赤藓糖醇等;(5)多糖类:如果胶、粗纤维素、膳食纤维、褐藻胶等;(6)活性多肽和活性蛋白质类:氨基酸、肽与蛋白质:如牛磺酸、酪蛋白磷肽、乳铁蛋白、金属硫蛋白、降压肽、免疫球蛋白、酶蛋白等;(7)维生素和维生素类似物;包括水溶性维生素、脂溶性维生素、生物类黄酮等；(8)功能性矿物质及微量元素类:包括常量元素、微量元素,如铁、钙、铬、硒、锌等;(9)植物活性成分:如皂苷、生物碱、萜类化合物、有机硫化物等;(10)活性菌类:主要是乳酸菌类,尤其是双歧杆菌;(11)低能量食品成分:包括蔗糖替代品、脂肪替代品等。

3功能因子的功效已经研究的功能因子特殊功效,主要集中在调节血脂、血糖、免疫调节、延缓衰老、改善睡眠、促进生长发育、耐缺氧、改善骨质疏松、改善视力等领域。

目前研究较多的功能因子有膳食纤维、多不饱和脂肪酸、肽及蛋白质、功能性低聚糖、硒、大豆异黄酮等。

3.1膳食纤维膳食纤维包括水溶性的与非水溶性的膳食纤维。

水溶性膳食纤维从聚合葡萄糖、海藻酸、果胶、阿拉伯树胶、瓜果豆胶中获取,而非水溶性膳食纤维从小麦、玉米、大豆、甜菜、苹果、胡萝卜等制取而成。