中药化学试验黄柏中生物碱的提取

氧化铝柱色谱纯化 三
洗脱
用滴管吸取乙醇，绕管壁轻轻加入柱内，开启 活塞，控制流速20-30滴/min，不断加入乙醇， 保持色谱柱内乙醇不低于2-3cm高度，待氧化铝 柱上呈现不同颜色的色带时，继续冲洗，使其 彼此分离，并收集开始流出的鲜黄色带，此段 为盐酸小檗碱，其余色带为其他成分。
鉴定实验一
鉴定实验二
特殊鉴别反应
取盐酸小檗碱少量，加稀盐酸2ml溶解后，加漂 白粉少许，振摇后观察颜色变化。
取盐酸小檗碱50-100mg，溶于50ml热水中，加 入10%氢氧化钠2ml，混合均匀后，于水浴中加 热至50℃，加热丙酮5ml，放置，观察有无沉淀 析出及颜色变化。
鉴定实验三
薄层色谱鉴别
在提取中药其他成分时，少量粘液质的存在 使其水提取液粘稠性较大而极难过滤
稀醇沉淀或加入石灰水形成钙盐沉淀
提取分离的基本原理
小檗碱为季铵碱，其游离型在水中溶解度较 大，其盐酸盐在水中溶解度较小。利用小檗 碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，首先 用石灰乳沉淀黏液质，用碱水提出小檗碱， 再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。
生物碱碱性理论要点复习
一般来说双键和羟基的吸电诱导效应使生物碱的碱 性减小。但具有氮杂缩醛结构的生物碱常易于质子 化而显强碱性。
O
O
N OH
O
O
N + OH -
OMe
OMe
OMe
OMe
粘液质基本知识点复习
定义：与树胶结构相似的多糖类物质 ，多 存于植物薄壁组织的粘液细胞内
基本性质：干燥粘液质为白色粉末，有强烈 的吸湿性，在水中能迅速膨胀，溶解形成粘 稠的胶浆，不溶于有机溶剂。分子中含有酸 性基团——游离的羧基。
中药黄柏主要化学成分简介
药根碱 盐酸盐为黄色结晶， HO mp206℃，在冷水中溶解 MeO 度比盐酸小檗碱大，易溶于 热水和乙醇。
巴马丁 盐酸盐为黄色针晶， MeO mp241℃，在冷水中溶解 度比盐酸小檗碱大，பைடு நூலகம்溶于 MeO 热水和乙醇。
+
N OMe OMe
+
N OMe OMe
生物碱碱性理论要点复习
生物碱的一般鉴别反应
取少量精制盐酸小檗碱，用酸水溶解，分成4份， 分别滴加以下试剂，观察有无沉淀析出及颜色 变化，记录所观察到的现象和反应结果，并根 据现象得出结论。
碘化铋钾( Dragendorff )试剂 碘化汞钾( Mayer )试剂 碘化碘钾( Wagner )试剂 硅钨酸( Bertrand )试剂
氧化铝柱色谱纯化 二
湿法上样：
取50-100mg盐酸小檗碱粗晶，加少量乙醇于水 浴上加热溶解，用滴管沿色谱柱管壁小心加入， 勿使氧化铝柱面受到振动，开启活塞，当液体 表面下降接触到氧化铝柱面时，关闭活塞。用 少量乙醇淋洗柱内壁，将沾于管壁周围的样品 液轻轻洗人柱面上，至洗净后关闭活塞，准备 进行洗脱。
提取分离实验一
黄柏粗粉300g
加入240ml石灰乳①拌湿②，溶胀 30min③， 加入8倍量水浸渍60min ④ ，渗漉⑤
渗漉液
药渣
加入总体积5%的食盐⑥
提取分离实验二
渗漉液
加入总体积5%的食盐， 静置，抽滤⑦
沉淀
滤液
溶于20倍量沸水中，趁热抽滤⑧
不溶物
滤液
加浓HCI调pH2左右⑨， 放置，抽滤
应用：湿热泻痢、黄疽、带下、热淋、脚气、 骨蒸劳热、盗汗、遗精、疮疡肿毒、湿疹骚 痒；盐黄柏滋阴降火，用于阴虚火旺，盗汗 骨蒸。
中药黄柏主要化学成分简介
小檗碱(berberine)，含量为1.4%-4%(川黄柏含量较高)
性状：黄色结晶，有5.5个结晶水，mp145℃
溶解性：
O
能缓缓溶于冷水中（1∶20）
取中性氧化铝（100—200目)约35g于烧杯中，加入一定体积 的乙醇调成浆状，赶尽气泡，然后经小玻璃漏斗将浆状氧化 铝徐徐注人柱中，当氧化铝到达柱底时，打开活塞，让洗脱 剂缓缓流出，并不断用手轻轻振动色谱柱，使氧化铝沉降均 匀，当柱内液面接近氧化铝柱时，关闭活塞。再轻轻盖上一 层大小合适的滤纸，加上几颗玻璃珠。
提取分离中的应用。 掌握小檗碱的理化性质和鉴别方法
中药黄柏简介
芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid及黄檗Phellodendron amurense
Rupr．的干燥树皮，前者习称“川黄柏”，
后者习称“关黄柏”。
性能：苦，寒。 功效：清热燥湿、泻火解毒、退虚热。
沉淀
氧化铝柱色谱纯化 一
湿法装柱
取一根直径约1.5cm，长约40cm带玻璃活塞的色谱柱，在柱 子的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉，将其垂直地固定在 铁架台上
柱内先加入一定体积的洗脱剂(实验中使用的是乙醇)，打开 活塞，放出柱内乙醇，将色谱柱下端的空气泡充分赶尽，然 后再加入乙醇至距色谱柱的下端1-2cm处，关闭活塞
微溶于冷乙醇（1∶100）
+
N
易溶于热水和熱乙醇
O
微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮
OMe
硝酸盐极难溶于水
盐酸盐微溶于冷水（1:500）但较易溶于沸水
OMe
硫酸盐和枸橼酸盐在水中溶解度较大（1 ∶30）
盐酸小檗碱为黄色结晶，含2分子结晶水，220℃时 分解并转变为棕红色小檗红碱，285℃时完全熔融
碱性是生物碱最重要的化学性质，也是提取、 分离和结构鉴定的理论依据
生物碱的碱性大小与pKa的关系：pKa＜2为 极弱碱，pKa2~7为弱碱，pKa7~11为中强碱， pKa11以上为强碱
生物碱分子中碱性基团的pKa值大小顺序一 般是：胍基＞季铵碱＞N-烷杂环＞脂肪胺＞ 芳香胺≈N-芳杂环＞酰胺≈吡咯
样品：①自制盐酸小檗碱甲醇溶液。②盐酸小檗碱对照 品甲醇溶液。
吸附剂：硅胶G—CMC板，湿法铺板，105℃活化30min。 展开剂：①正丁醇—冰醋酸—水(7∶1∶2，上层)
中药化学实验
黄柏中生物碱的提取、分离和鉴定 虎杖中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 槐米中黄酮类成分的提取、分离和鉴定 陈皮挥发油的提取及鉴定 甘草中甘草酸和甘草次酸的提取、分离和鉴定
实验一 黄柏中生物碱的提取、分离和鉴定
目的要求
掌握从黄柏中提取小檗碱的原理和方法。 掌握柱色谱的基本操作以及在中药有效成分