放线菌抗菌谱的测定

放线菌筛选的一般方法

1.放线菌样本的收集：可以从自然环境中收集土壤、植物、水体等样本，也可以从实验室中保存的菌种库中选取菌种作为筛选对象。

2.放线菌的分离：将收集到的样本通过稀释涂布、均匀涂布等方法进行分离。将分离出的放线菌菌落定植于选择性培养基上，利用差异营养需求、抗生素抑制等原理，筛选出纯培养基。

3.放线菌培养：将分离出的纯净菌株接种到适宜的培养基上进行培养，包括液体培养和固体培养。液体培养可以用于代谢产物的筛选，固体培养主要用于菌株保存和鉴定。

4.代谢产物的筛选：通过对放线菌培养液或菌体提取物的分离、纯化和结构鉴定，筛选出具有生物活性的代谢产物。常用的筛选方法包括生物测定法、波谱分析法等。其中，生物测定法是通过对目标活性的生物测定，如抗菌活性、抗肿瘤活性、抗炎活性等，筛选出具有生物活性的化合物。

5.进一步筛选与优化：在获得具有初步生物活性的代谢产物后，可以进一步对其进行筛选与优化。可以通过改变培养条件（如培养基、温度、pH值等）、发酵工艺等方式提高活性代谢产物的产量和纯度。

6.结构鉴定：对优选的生物活性代谢产物进行结构鉴定，通常使用核磁共振谱、质谱、红外光谱等波谱技术进行分析。结构鉴定有助于揭示生物活性物质的药理作用机制，为后续研究提供基础。

7.生产量扩大与优化：当获得了具有潜在药用价值的放线菌菌株和代谢产物后，可以进行大规模的发酵生产以提高产量。在此过程中，需要不断优化发酵工艺、培养基成分和培养条件，以提高产量和纯度。 综上所述，放线菌筛选的一般方法包括放线菌样本的收集、放线菌的分离、放线菌培养、代谢产物的筛选、进一步筛选与优化、结构鉴定和生产量扩大与优化。这些方法的应用能够帮助科学家发现新的放线菌菌株和生物活性化合物，并为新药研发提供重要的基础信息。

土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取

实验目的：

1、从土壤中分离产抗生素的放线菌

2、放线菌的培养

3、放线菌的发酵产生活性物质

4、放线菌产生的活性物质提取。

实验原理：

放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖。放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约80%是各种放线菌所产生的。

许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。采用选择培养基可分离土壤中的放线菌。产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌，并对其进一步培养，繁殖，发酵，最终提取我们所需的抗生素。

实验器材：

1、土壤

2、培养基：高氏一号培养基、种子培养基、发酵培养基

3、其他：重铬酸钾、培养皿、牛津杯、接种环、酒精灯，无菌涂棒、三角锥瓶、高压蒸汽灭菌锅、天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、试管、牛皮纸、线绳等。

实验步骤： 一、土壤放线菌株的采集

采集样品：选定取样点（最好是有机质含量高的菜地），按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。

样品（土壤）处理：室温风干

二、土壤中放线菌的分离、培养

1、配制淀粉培养基

淀粉琼脂培养基（高氏培养基）

可溶性淀粉2g；硝酸钾0.1g；磷酸氢二钾0.05g；氯化钠0.05g；硫酸镁0.05g；硫酸亚铁0.001g；琼脂2g；水100ml.

先把淀粉放在烧杯里，用5ml水调成糊状后，倒入95ml水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整PH到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。

2、土壤悬液梯度稀释

① 将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。

盗盗　ｌ＿＿一　

ＥＸＰＲ　ＥＳＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　海洋放线菌对大黄鱼病原弧菌的拮抗作用和抗菌谱女　

王　军　鄢庆枇　苏永全　梁桂洪　麦添成　

（　厦门大学海洋学系、厦门大学亚热带海洋研究所３６１００５）　

（　集美大学水产生物技术研究所、水产学院３６１０２１）　

提要　在大黄鱼（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａ—ｃｍ）病原弧菌的拮抗放线菌筛选和人工诱变基础上，选择　

出对溶藻弧菌（Ｖ￣ｂｎｏ　ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｆＵＳ）和副溶血弧菌（Ｖ．ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）同时具有较强拮抗作用　

的４株放线菌。采用琼脂块法测定４株放线菌的抗菌谱，并检测４株放线菌分别在固体和液体　

培养液中的拮抗作用。结果表明：４株放线菌的抗菌谱均较窄，在固体和液体培养基中对２种　

病原弧菌都有较强的拮抗作用。　

关键词　大黄鱼（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａ　ｃｒｏｃｅａ），病原弧菌，放线菌，拮抗作用，抗菌谱　

放线菌是自然环境中常见的一类丝状原核微生　

物，能产生多种抗生素。在医药和农业领域中利用放　

线菌进行病害防治已有报道“＿　，但国内在筛选海洋　

放线菌进行水产养殖疾病的防治方面尚未见报道，本　

文在大黄鱼病原弧菌的拮抗放线菌筛选和人工诱变　

基础上［１】，进一步对溶藻弧菌和副溶血弧菌同时具有　

较强拮抗作用的４株放线菌进行抗菌谱和拮抗作用　

的深入研究，以期为大黄鱼养殖病害探索一条生物防　

治的新路。　

１　材料与方法　

１．１　试验菌株　

１．１．１　病原菌　溶藻弧菌和副溶血弧菌从福　

建省连江县厦宫乡新辉养殖渔排的患病大黄鱼分离，　

并经回归感染确认为大黄鱼弧菌病病原　『。　

１．１．２　拮抗放线菌　在大黄鱼病原弧菌拮抗　

放线菌的筛选和人工诱变　的基础上，挑取对溶藻弧　

菌和副溶血弧菌同时具较强拮抗作用的４株放线菌，　

编号分别为：００２，００２１０，０１８０７０４０５和０１８０７０７０９。　

１．２　指示菌　大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、金黄色葡萄球菌　

江苏农业科学２０１４年第４２卷第１期　

康敬芹，吕跃东，王　勇，等．拮抗农业致病真菌放线菌菌株ＣＴＦ６１９一Ｄ的分离、筛选及初步鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（１）：８６—８９　

拮抗农业致病真菌放线菌菌株ＣＴＦ６１９一Ｄ的　

分离、筛选及初步鉴定　

康敬芹，吕跃东，王　勇，刘　杨，张　良　

（辽宁科技大学，辽宁鞍山１１４０５１）　

摘要：从黄河中分离筛选出若干放线菌菌株，并对放线菌菌株进行分离纯化，采用琼脂块法进行初筛，用纸片扩散　

法和生长速率法对抑菌效果较好的菌株进行抑菌活性复筛，发现菌株ＣＴＦ６１９一Ｄ的发酵产物对番茄炭疽病菌、黄瓜　

炭疽病菌、苹果腐烂病菌等１Ｏ多种真菌均有不同程度的抑制作用，其中对番茄炭疽病菌的抑菌圈最大能达到２．８　ｃｍ。　

通过对ＣＴＦ６１９一Ｄ菌株形态特征、培养特征、生理生化特征、１６Ｓ　ｒＤＮＡ序列及系统发育分析等方面的研究发现，　

ＣＴＦ６１９一Ｄ菌株与淡紫灰链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｌａｖｅｎｄｕｌａｅ）ＦＳＨＪ９菌株的序列同源性达１００％，但在形态特征、培养特征　

和生理生化特性方面与其存在差异，因此初步确定ＣＴＦ６１９一Ｄ为淡紫灰链霉菌的一个新变种。　

关键词：放线菌；拈抗；生理生化；１６Ｓ　ｒＤＮＡ　

中图分类号：Ｓ１８２　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—１３０２（２０１４）０１—００８６—０４　

放线菌是一类具有广泛实际用途和巨大经济价值的微生　

物资源。它突出的特性之一是能产生大量的、种类繁多的抗　

生素，是生产抗生素的主要菌群，是研制新医药、新农药和生　

物防治活菌剂的源头…。据估计，在全世界发现的８　０００多　

种生物活性物质中，近７０％是由放线菌产生的　。因此，为　

了达到高效、环保的生物防治目的，筛选和利用拮抗放线菌已　

收稿日期：２０１３—０６—０６　基金项目：辽宁省教育厅项目（编号：２００９Ａ３７４）。　作者简介：康敬芹（１９８７一），女，山东乐陵人，硕士研究生，研究方向　为生物制药及剂型加工与应用。Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉａｏｋａｎｇ５８６＠１２６．ｃｏｍ。