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动脉粥样硬化高脂饲料对小鼠糖脂水平的作用研究

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· 论著 ·

动脉粥样硬化高脂饲料对小鼠糖脂水平的作用研究

王　品，齐　齐，郑斯莉，徐浩展，缪朝玉 （海军军医大学药理学教研室，上海 200433）

［摘要］　目的　研究动脉粥样硬化高脂饲料对小鼠体重、血糖血脂水平及动脉粥样硬化斑块形成的作用，并且明确禁食时间对血脂检测结果的影响。方法　对10周龄雄性ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠分别给予高脂饲料及普通饲料，4个月后观察动脉粥样硬化斑块情况；对10周龄雄性C57BL/6J小鼠分别给予普通饲料4周、普通饲料2周+高脂饲料2周、高脂饲料4周，考察动物的体重、肝脏、血糖、血脂水平，并分析正常饮食条件下取材前禁食12、6 h及不禁食条件下对血脂检测结果的影响。结果　给予高脂饲料的ApoE-/-小鼠动脉斑块面积显著增加（P<0.01）；给予高脂饲料的C57BL/6J小鼠的体重增加（P<0.01），肝脏脂肪样变；血糖、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）水平显著升高（P<0.01），而三酰甘油(TG)水平明显下降（P<0.01）。相比于禁食12 h，禁食6 h及不禁食条件下检测到的三酰甘油水平明显升高（P<0.01）。结论　动脉粥样硬化高脂饲料可加速ApoE-/-小鼠形成动脉粥样硬化斑块，显著升高血糖、TC及LDL-c水平，但明显降低TG值。禁食时间可影响血清TG的检测结果。［关键词］　高脂饲料；动脉粥样硬化；血糖；三酰甘油；胆固醇［中图分类号］　R965 ［文献标志码］　A ［文章编号］　1006-0111（2021）02-0121-05［DOI］　10.12206/j.issn.1006-0111.202012002

Effect of atherosclerotic high-fat diet on the level of glucose and lipid in miceWANG Pin，QI Qi，ZHENG Sili，XU Haozhan，MIAO Chaoyu（Department of Pharmacology, Naval Medical University, Shanghai200433, China）

［Abstract］ Objective　To study the effects of atherosclerotic high-fat diet on body weight, blood glucose, blood lipidlevels and atherosclerotic plaque formation in mice, and to determine the effect of fasting time on the results of blood lipid testing.Methods　10-week-old male ApoE knockout (ApoE-/-) mice were given high-fat diet and normal diet. The atherosclerotic plaqueswere observed four months later. 10 week old C57BL/6J male mice were given regular diet for 4 weeks, regular diet for 2 weeks +high-fat diet for two or four weeks. Body weight、liver、glucose, and the serum lipid levels were examined. The influence of fastingfor 12 h, 6 h or no fasting on blood lipid detection results before sacrificing were studied. Results　The atherosclerotic plaque areaof ApoE-/- mice given high-fat diet increased significantly (P<0.01). C57BL/6J mice given high-fat diet gained weight (P<0.01). Theglucose, TC, LDL-c and HDL-c were also increased in C57BL/6J mice with liver fat accumulation while the level of TG wassignificantly decreased(P<0.01). Compared with the fasting 12 h group, serum triglyceride (TG) was significantly increased(P<0.01）in fasting 6 h and no fasting groups. Conclusion　The atherosclerotic high-fat diet can accelerate the formation ofatherosclerotic plaques in ApoE-/- mice, significantly increase blood sugar, TC and LDL-c levels, but significantly reduce TGvalues.. The fasting time can affect serum triglyceride (TG) level.［Key words］　high fat diet；atherosclerosis；glucose；triglyceride；cholesterol

动脉粥样硬化以慢性血管炎症及大中动脉内皮下脂质斑块形成为主要特征，内皮细胞、平滑肌细胞、免疫细胞等均参与动脉粥样硬化的过程，随着斑块的积累，累及多种器官导致其病变[1]。动脉粥样硬化是由多种因素共同作用而形成，由脂质代谢紊乱所引起的血脂异常发挥着重要的作用，其中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)升高已被证实是动脉粥样硬化的独立危险因素，低密度脂蛋白氧化后可诱导内皮细胞激活和功能障碍，促进泡沫细胞形成等[2]。随着现代生活方式及膳食营养结构的改变，高脂血症的发病率呈逐年上升，并加重了动脉粥样硬化等心脑血管疾病的进展[3]。因此，进一步研究高脂饮食所引起的动脉粥样硬化性心血管疾病具有极其重要的意义。与以人体为研究对象相比，动物具有易于管理、饮食和环境危险因素可控 ［基金项目］ 国家自然科学基金资助项目（81730098）［作者简介］ 王　品，硕士研究生，研究方向：动脉粥样硬化，Email：****************［通信作者］ 缪朝玉，教授，博士生导师，研究方向：心脑血管药理，Email：***************.cn 药学实践杂志　2021 年 3 月 25 日第 39 卷第 2 期 Journal of Pharmaceutical Practice，Vol. 39，No. 2，March 25，2021121 的优点。动脉粥样硬化的动物模型是基于高脂饮食，同时操纵胆固醇代谢的相关基因，并且引入动脉粥样硬化的额外危险因素，加速动脉斑块形成。各种动物模型现均已被用于动脉粥样硬化研究，其中鼠类和兔子的模型使用最多，其次是猪和非人灵长类动物，每种模型都有优点和局限性。由于小鼠繁殖速度快、经济成本较低以及较为容易监测动脉粥样硬化的发生，它已成为研究动脉粥样硬化的优势物种[4]。目前，高脂饲料已被广泛用于包括肥胖症、糖尿病等多种代谢性疾病的研究中，高脂饮食也可造成高脂血症，进而促进脂质在血管内膜堆积形成动脉粥样硬化。市场上存在着不同配方的高脂饲料，造模效果参差不齐，主要作用需进一步探讨。我们首先验证了一种较为常用的由普路腾公司生产的动脉粥样硬化高脂饲料对ApoE-/-小鼠动脉斑块形成的作用，并且在正常C57BL/6J小鼠上研究其对血糖血脂的影响，最后分析了不同禁食时间对正常饮食条件下血脂检测结果的影响。通过对高脂饲料对血糖血脂作用的深入研究，为小鼠动脉粥样硬化模型提供理论基础。1 材料与方法1.1 动物与饲料配方SPF级10周龄雄性C57BL/6J及ApoE-/-小鼠，购于西普尔-必凯实验动物有限公司。动物自由饮水进食，在明暗交替、温度（25±1）℃、相对湿度40%～60%、噪音≤60 dB的环境饲养。动物实验方案与操作均按照国家规定进行，符合动物福利及“3R”原则。国产鼠用动脉粥样硬化高脂饲料购于普路腾公司，配方：基础饲料（58.1%）、猪油（16.6%）、蔗糖（10.6%）、麦芽糖糊精（3%）、胆固醇（1.3%）、胆盐（0.3%）、预混料（1.6%）。正常鼠用饲料配方：水分（≤10%）、蛋白质（≥20.5%）、粗脂肪（≥4%）、蛋氨酸+胱氨酸（≥0.78%）、精氨酸（≥1.32%）、钙（1.0%～1.8%）、粗纤维（≥5%）、粗灰分（≤8%）、磷（0.6%～1.2%）、氯化钠（0.4%）。1.2 动物分组与造模1.2.1 考察高脂饲料对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的作用取雄性ApoE-/-小鼠8只，分为2组，每组4只，分别给予动脉粥样硬化高脂饲料和普通饲料喂养，4个月后观察动脉粥样硬化斑块形成情况。1.2.2 其他指标考察取雄性C57BL/6J小鼠50只，随机分为5组，每组10只，即：①普通饲料4周，不禁食组；②普通饲料4周，禁食6 h(8:00至14:00)组；③普通饲料4周，禁食12 h（20:00至次日8:00）组；④高脂饲料2周(HFD 2W)组，先以普通饲料喂食2周，再喂食高脂饲料2周，禁食12 h（20:00至次日8:00）⑤高脂饲料4周(HFD 4W)组，以高脂饲料喂食4周，禁食12 h（20:00至次日8:00）。分别考察禁食时间对正常饮食（ND）条件下血脂检测结果的影响，以及高脂饲料饮食（HFD）对小鼠体重、肝脏及血糖血脂水平的影响。1.3 取材方法及检测指标1.3.1 ApoE-/-主动脉粥样硬化斑块面积测定①主动脉分离：小鼠称量体重(g)，1%戊巴比妥钠（100 mg/kg）腹腔注射完全麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用1 ml注射器自上下腔静脉汇合处缓慢抽取血液。冰水混合物灌流心脏，分离主动脉及与其相连的心脏和双肾，用直径0.2 mm的不锈钢针固定于装满冰浴PBS的硅胶皿中，剪去心脏和双肾及多余脂肪组织。②主动脉油红O染色：取两根钢针固定住头尾，开始慢慢地沿主动脉纵向剪开，边剪边增加固定钢针，最终使主动脉整个内腔面平铺朝上。用现配好的油红O溶液对主动脉内腔面进行染色：倒掉皿中PBS溶液，加入油红O溶液浸没主动脉，静置15 min，倒掉油红O溶液，加入75%乙醇浸没主动脉，再静置10～15 min，倒掉75%乙醇，用数码相机拍摄图像。使用ImageJ软件测量整个主动脉内腔面的面积和斑块面积。每个样品的粥样斑块比例=粥样斑块总面积/主动脉内腔面积×100%。1.3.2 血糖测量实验前将动物单笼饲养于安静无打扰的环境中，自由活动，2 h后开始禁食（可自由饮水），禁食时间为12 h(20:00至次日8:00)。测血糖时，剪去尾巴末端1～2 mm，轻轻挤出两滴血，采用GA-3型血糖仪及试纸条进行血糖测定，取两次测量的平均值。1.3.3 C57BL/6J小鼠肝脏取材及血脂检测麻醉方法同上，打开胸腔，用1ml注射器自上下腔静脉汇合处缓慢抽取血液收集至EP管中，血液室温静置2 h后，离心取血清。用干冰冻存送至武汉塞维尔生物科技有限公司，应用Chemray240全自动生化分析仪检测三酰甘油(TG)、血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-c)、高密度脂蛋白(HDL-c)、游离脂肪酸(NEFA)水平。打开腹腔，取小块肝组织用4%多聚甲醛溶液固定，固定好的肝组织用于制作冰冻切片，分别进 药学实践杂志　2021 年 3 月 25 日第 39 卷第 2 期 122Journal of Pharmaceutical Practice，Vol. 39，No. 2，March 25，2021

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二甲双胍对高脂血症大鼠降血脂的作用机制研究

二甲双胍对高脂血症大鼠降血脂的作用机制研究

二甲双胍对高脂血症大鼠降血脂的作用机制研究

【摘要】目的探讨二甲双胍（MF）对高血脂症大鼠的降血脂作用。方法将60只适龄健康大鼠通过随机数字法分成空白对照组、模型对照组、二甲双胍组，每组20只。除空白照组外，其余2组大鼠均喂养高脂饲料 6 周进行造模。造模成功后，模型组每日高脂饲料喂养，蒸馏水灌胃;二甲双胍组每日以高脂饲料喂养，二甲双胍 150mg.kg-1.d-1灌胃; 空白对照组每日普通饲料喂养，灌胃蒸馏水。4 组均灌胃 4 周，记录各组大鼠造模前、造模 6

周后、灌胃 4 周后的体重，检测各组大鼠造模 6 周后及灌胃 4 周后血清中HDL-C、LDL-C、AST、ALT水平。结果与对照组大鼠比较，模型组大鼠LDL-C 增高，LDL-C 降低( P＜0.05或

P＜ 0.01)；二甲双胍组大鼠与模型组大鼠相比，LDL-C降低，HDL-C 增高( P＜ 0.05 或 P＜0.01) ；模型组大鼠与对照组大鼠相比，ALT、AST升高，差异有统计学意义( P ＜ 0. 05

或 P ＜0. 01)；与模型组比较，二甲双胍组大鼠 ALT 和 AST 降低，差异有统计学意义( P＜ 0.05 或 P ＜0.01) ；结论 二甲双胍对高血脂大鼠具有降血脂作用，对其肝功能也具有一定的保护作用。

关键词：二甲双胍；高血脂症；大鼠；胆固醇；心血管疾病

中图分类号: Q813.7 文献标识码：A

第一作者：梁会超，2019级临床医学本科专业在读本科生

*通讯作者: 王俞杰，E-mail:*****************

基金资助：山东第一医科大学校级大学生创新创业训练计划项目（No.2022104391048）

1. 前言

高脂血症( HLP)是指由于脂质代谢异常导致血液中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇过高和(或)高密度脂蛋白胆固醇过低而引发的一种疾病[1]。到目前为止，临床上没有合适的治疗方案，且发病机制尚未明确。因此，寻找更有效、副作用小的治疗方案显得尤为重要[2]。

白芍总苷对动脉粥样硬化大鼠保护作用及血脂调节作用研究

白芍总苷对动脉粥样硬化大鼠保护作用及血脂调节作用研究

白芍总苷对动脉粥样硬化大鼠保护作用及血脂调节作用研究

李环;谢明君;焦亚斌

【期刊名称】《江西中医药》

【年(卷),期】2017(048)004

【摘 要】目的:研究白芍总苷对动脉粥样硬化大鼠保护作用及其对血脂的调节作用.方法:采用维生素D3配合高脂饲料法制备动脉粥样硬化(AS)大鼠模型,预防性给予实验动物白芍总苷,8周后HE染色法观察实验动物AS病变状况;心脏取血,ELISA法检测AS大鼠血清中脂类物质血清总胆固醇(TC)、高密度与低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C和LDL-C)及三酰甘油(TG)的含量.结果:白芍总苷能够减轻AS大鼠动脉硬化的病变程度,降低TC、LDL-C和TG的水平,差异与模型组比较具有统计学意义,P<0.01.结论:白芍总苷对于动脉粥样硬化大鼠具有保护作用并降低血脂水平.

【总页数】3页(P56-58)

【作 者】李环;谢明君;焦亚斌

【作者单位】深圳大学 广东 深圳 518060;深圳大学 广东 深圳 518060;深圳大学

广东 深圳 518060

【正文语种】中 文

【中图分类】R285.5

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瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠主动脉α—SMA表达的影响

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瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠主动脉α—SMA表达的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠主动脉粥样硬化及α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin， α-SMA）表达的影响。研究瑞舒伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）降脂外的可能机制。方法 将20只6 w龄雄性ApoE基因缺陷小鼠随机分为两组：阳性对照组10只，予高脂饲料和饮水；瑞舒伐他汀组10只，予高脂饲料、饮水和瑞舒伐他汀10 mg/Kg/d； 另设同周龄野生雄性小鼠10只作为阴性对照组：予普通饲料、饮水喂养。三组小鼠喂养13 w后，摘出眼球并测定血清中总胆固醇（TCH）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）的水平等生化指标。然后处死小鼠并取出主动脉（从主动脉弓起始到腹主动脉分支处），常规HE染色及免疫组织化学染色，观察主动脉形态学变化和血管壁斑块组织变化，定量分析斑块面积与管腔面积之比（PA/LA）、血管内膜厚度（IMT），定性分析α-SMA表达强度的变化。结果 6 w龄ApoE基因缺陷雄性小鼠喂养13 w后，与阳性对照组比较，瑞舒伐他汀组血清TCH、TG、LDL-C水平显著降低，两组差别有统计学意义；病理测定PA/LA及IMT，瑞舒伐他汀组较阳性对照组明显减小，差别有统计学意义；与阳性对照组比较，瑞舒伐他汀组血管壁组织α-SMA表达减少有统计学意义。结论 瑞舒伐他汀可减少动脉粥样硬化病变中α-SMA表达，其抗动脉粥样硬化降脂外作用可能为阻止血管平滑肌细胞向动脉粥样硬化斑块中迁移有关。

标签：瑞舒伐他汀，ApoE基因缺陷小鼠，AS，α-平滑肌肌动蛋白

动脉粥样硬化（AS）是众多心脑血管疾病共同的病理生理基础，也是心血管系统疾病中最常见的疾病，严重危害人类疾病。目前他汀类药物已被公认为具有抗AS作用，越来越多的研究表明它在抗AS的形成和发展方面，除了降脂作用外还有很多调脂外的抗AS机制，如抑制血管平滑肌细胞（VSMC）的迁移和增殖。血管a-SMA属于细胞骨架微丝的基本成分之一，特异性的在VSMC中表达， 其相对含量是判断VSMC表型的重要指标。收缩表型細胞中主要以α-SAM为主，VSMC中α-SAM的减少提示细胞由收缩表型向增殖表型转化。本实验通过观察瑞舒伐他汀对AS板块中α-SAM表达的影响，进一步探讨其抗AS的降脂外作用。

开菲尔对小鼠血清胆固醇水平的影响

开菲尔对小鼠血清胆固醇水平的影响

开菲尔对小鼠血清胆固醇水平的影响

摘要 开菲尔是一种饮用历史悠久的功能性发酵乳制品，为探讨开菲尔对小鼠血清胆固醇水平的影响，将小鼠随机分成3组：对照组、高脂模型组和开菲尔组。对照组饲喂基础饲料，高脂模型组和开菲尔组饲喂高脂饲料，开菲尔组每日灌胃开菲尔发酵乳，对照组和高脂模型组给予无菌蒸馏水，连续灌胃28 d。结果表明，开菲尔组与高脂模型组相比，小鼠血清总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量明显降低（P0.05），动脉粥样硬化指数（AI）极显著降低（P0.05），血清TC含量升高，且差异极显著（P0.05）；血清TC含量降低，且差异显著（P0.05）；血清LDL-C含量降低，且差异显著（P<0.05）。由此说明，同高脂模型组相比，小鼠灌胃开菲尔发酵乳后，可通过降低血清TC和LDL-C含量来降低血清胆固醇水平，从而达到预防高胆固醇血症的作用，进而降低心血管疾病的发生率。2.3 开菲尔对AI和AAI的影响

动脉粥样硬化指数AI值，是衡量心血管疾病易患程度的一个重要指标，该指数的增加意味着血液循环中的胆固醇量增加，从而导致心血管疾病的易患程度增加。而抗动脉粥样硬化指数AAI值反映的是HDL-C在TC中所占的比例，HDL-C能把身体各个部位的胆固醇运回肝脏进行处理，从而降低心血管疾病发生的危险，故其又被称作“好”的胆固醇，AAI值越高对健康越有利。根据TC、HDL-C、LDL-C含量分别计算各组AI和AAI值，结果见表3。

由表3可知，小鼠灌胃28 d后，开菲尔组与高脂模型组相比，AI值下降极显著（P<0.01），AAI值升高极显著（P<0.01）。由此表明，开菲尔发酵乳对高胆固醇血症小鼠动脉粥样硬化的抑制效果非常显著。

3 结论与讨论

全球许多国家和地区已把开菲尔作为一种食疗产品，如俄罗斯在当地普遍使用Kefir，特别用于胃肠病、糖尿病、高血压、肥胖症等一些慢性病患者的饮食治疗[4]，国内外专家学者已通过大量试验充分证实了这些功能特性[5-8]，此外，开菲尔还表现出了免疫调节作用、抗氧化、抗肿瘤、抗过敏等功效[9-12]。本文通过构建高胆固醇血症模型小鼠，评价了开菲尔发酵乳对小鼠血清胆固醇水平的影响，发现其能显著降低模型小鼠血清TC和LDL-C水平（P<0.05），同时AI值极显著降低（P<0.01），AAI值极显著升高（P<0.01），由此说明开菲尔发酵乳在降低胆固醇作用上起到了积极作用，这与Liu et al[8]的研究结果类似。