糖尿病模型大鼠表征及其证候动态演变研究_吴晏
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糖尿病模型大鼠表征及其证候动态演变研究吴晏，韩静，黄黎明，郭淑贞，王伟（北京中医药大学，北京100029）摘要：目的：观察2型糖尿病大鼠的表征变化及证候动态演变。
方法：将38只SD 大鼠随机分为正常对照组和模型组。
模型组给予高脂饲料喂养3周后皮下注射甲状腺素（T4）0.2mg /（kg ·d ）1周，后腹腔注射链脲佐菌素（STZ ）35mg /kg 。
连续采集两组大鼠的表征及体重、24h 饮水量、进食量；并测定空腹血糖（FBG ）、空腹胰岛素（FIN ）、总胆固醇（TG ）、甘油三酯（TC ）、葡萄糖耐量（OGTT ）。
结果：模型组大鼠FBG 、TG 、TC 、OGTT 、24h 饮水量、进食量均明显升高；体重均明显降低。
模型组大鼠在注射STZ 后3 7周出现：活动次数增加、背温升高、各自爬卧、舌色鲜红、舌干少津、大便干硬比率升高；在注射STZ 后9 11周出现：活动次数减少、舌色鲜红、舌干少津、爪色青紫比率升高。
结论：判定模型大鼠在STZ 注射后3 7周为阴虚内热证型，在STZ 注射后9 11周为气阴两虚证型。
关键词：2型糖尿病；大鼠；表征；证候中图分类号：R －332文献标识码：A文章编号：1000－1719（2011）11－2279－05Research on Characteristic and Syndrome Dynamic Succession of Type －2Diabetic RatsWU Yan ，HAN Jing ，HUANG Li-ming ，GUO Shu-zhen ，WANG Wei （Beijing University of Chinese Medicine ，Beijing 100029，China ）Abstract ：Objective ：To explore the characteristic and syndrome dynamic succession of type －2diabetic rats．Methods ：38rats were randomly divided into two groups in terms of control group and model group．The rat models were injected T40．2mg /（kg ·d ）for a week．The rat models were built up with STZ （35mg /kg ）once intra －peritoneally after feeding with high fat chow for 4weeks．The characteristic was collected successively ，as well as the amount of food ，water ，and weight．The OGTT ，FBG ，FIN ，TG ，TC were also detected．Results ：The amount of food ，water ，and OGTT ，FBG ，TG ，TC were obviously increased．The amount of weight was obviously decreased．After 3－7weeks of injection of STZ ，the rate of characteristics of increase in times of activity ，in-crease in temperature of back ，lying down respectively ，bright redness of tongue ，dry tongue ，and dry stool were increased．After 9－11weeks of injection of STZ ，the rate of characteristics of decrease in times of activity ，bright redness of tongue ，dry tongue ，and cyanosis of claws were increased．Conclusion ：The rat models were syndrome of yin deficiency with internal heat in time of 3－7weeks after injection of STZ ，and were syndrome of dual deficiency of qi and yin in time of 9－11weeks after injection of STZ．Key words ：type 2Diabetes Mellitus ；rats ；characteristic ；syndrome．收稿日期：2011－03－30基金项目：科技部重大新药创制（2009ZX09502）作者简介：吴晏（1978－），女，辽宁沈阳人，助理研究员，博士，研究方向：糖尿病药理学。
高脂喂养合并腹腔注射小剂量链脲佐菌素（STZ ）是目前应用较多的2型糖尿病大鼠模型的制备方法。
前人研究结果提示：采用T4皮下注射，引起动物肾阴虚，再用STZ 一次性腹腔注射诱发糖尿病，可以使造模动物表现出阴虚型糖尿病的证候［1－2］。
本研究复制此种动物模型，设计观察量表，连续11周全面、动态的观察动物的表征变化并判定其证候属性，以判断此种动物疾病模型在不同病变阶段是否存在不同的表征和证候特点，为探索糖尿病病证结合动物模型的研究方法提供依据。
1材料与方法1.1动物健康雄性5周龄SD 大鼠38只，体重（120ʃ10）g ，由北京维通利华实验动物中心提供，许可证号为SCXK （京）2006－0001，饲养于北京中医药大学清洁级实验动物中心，室温18 25ħ，相对湿度50% 60%，大鼠适应性饲养1周。
1.2饲料普通饲料和高脂饲料均由中国医学科学院实验动物研究所加工提供。
高脂饲料配方：猪油12%、蛋黄粉10%、大豆油2%、蔗糖10%、酪蛋白20%、蛋氨酸0.3%、淀粉26.7%、糊精10%、纤维素7.5%、胆碱0.3%、多维预混料0.1%、多矿预混料0.8%、胆酸钠0.3%。
1.3试剂柠檬酸（批号：0602102），柠檬酸钠（批号：20070403），购自北京化学试剂公司；STZ ，甲状腺素，购自Sigma 公司。
1.4方法1.4.1STZ 配制配制0.1mol /L 柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液，调节pH 为4.4；配制1%STZ 溶液，溶于柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液，在冰浴中操作。
1.4.2分组按体重将38只大鼠随机分为两组：正常对照组20只，模型组18只。
1.4.3造模方法正常对照组给予普通饲料。
模型组适应性饲养1周后，给予高脂饲料喂养。
3周后，模型组每日皮下注射甲状腺素（T4）0.2mg/（kg·d），连续注射1周［1］。
高脂饲料喂养4周后，模型组1次性腹腔注射STZ溶液35mg/kg；模型对照组腹腔注射同等剂量0.1mol/L柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液。
注射STZ后第7天模型组大鼠尾静脉采血测定空腹血糖（FBG），并进行口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tol-erance test，OGTT）［3］，凡空腹血糖值≥7.8mmol/L者纳入实验［4］。
空腹血糖值＜7.8mmol/L者按照原剂量再腹腔注射一次STZ。
1.4.4指标检测（1）表征采集：课题组根据大鼠表征采集表（表1）对2组大鼠逐一观察并判断，从STZ 注射前1周开始每周观察1次。
如遇分歧，采用其中2人的相同观点。
表1大鼠表征观察量表观察项目分级1234行为敏感性听到轻微响声即抬头听到响亮的声音才抬头触之亦不动活动度活动增加无明显变化活动减少轻轻抓取时是否反抗反抗剧烈，攻击观察者反抗，但不攻击观察者基本无反抗温度背温升高无明显变化降低尾温升高无明显变化降低是否扎堆各自爬卧两三只叠在一起全部聚拢在一起呼吸频率增加无明显变化减少眼睛神采红亮有神黯淡无神唇颜色白胜于红淡红色或桃红色深红色紫黑色润泽有光泽，湿润少光泽，不润干涩舌颜色白胜于红淡红色鲜红青紫舌体肥大适中瘦小润泽舌润滑舌少津液舌干糙无津齿痕无有1个有2个齿痕耳朵瘀点无有1 2个有3 4个鼻颜色淡白淡白淡红鲜红黯红润泽有光泽，湿润少光泽，不润干涩分泌物有黏稠分泌物有清稀分泌物无分泌物毛颜色白白中少有黄色满目皆有黄色整齐均匀细密稍乱毛糙润泽干燥柔顺潮湿爪红色淡白粉红或鲜红黯红色青紫色润泽有光泽，湿润少光泽，不润干涩或脱屑尾颜色黄色黄中有白淡白润泽有光泽，湿润少光泽，不润干涩小便颜色稍黄淡于黄色无黄色可见尿量增加无明显变化减少大便黏滞不沾于地上轻擦即可抹去重擦仍黏于地硬度成型，硬松软，成型不成型颜色黄色褐色黑色肛周污染有无拉尾排便率增加无明显变化减少（2）观察指标：各组每2周测量1次体重、24h饮食量、饮水量；注射STZ前1天各组经尾静脉采血测定空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FIN）、总胆固醇（TG）、甘油三酯水平（TC），并测定OGTT。
注射STZ后第5，9周各组大鼠尾静脉采血测定FBG，并测定OGTT。
注射STZ后第11周测定各组动物的OGTT，然后经腹主动脉取血检测FBG、FIN、TG、TC水平，并处死所有动物。
血糖采用美国强生公司的onetouch随手测血糖仪及血糖试纸测定。
血清胰岛素采用中国原子能科学研究院I1252胰岛素放射免疫分析药盒测定，用大鼠标准品绘制标准曲线。
血清TC、TG由全自动生化分析仪完成测定。
（3）OGTT：大鼠禁食15h后，灌胃给予20%的葡萄糖溶液2g/（kg·kg）。
检测0min及葡萄糖灌胃后30、60、120min的血糖，计算葡萄糖曲线下面积（AUC）=（血糖值0min+血糖值30min）ˑ0.5ː2+（血糖值30min+血糖值60min）ˑ0.5ː2+（血糖值60min+血糖值120min）ˑ1ː2。
1.5统计学方法采用SPSS13.0统计软件处理。
数据用（珋xʃs））表示，组间比较用One Way Anova方差分析。
1.6表征属性判断标准大鼠表征属性判断标准参照《中医诊断学》［5］。
2结果2.1糖尿病大鼠的一般特征注射STZ之前，模型组大鼠FIN、TG水平明显高于正常对照组大鼠水平（P＜0.05）；同正常对照组相比，模型组大鼠FBG、空腹血清TC水平无明显差异（P＞0.05）。
注射STZ7天后、第5周、第9周，模型组大鼠FBG 值均显著高于正常对照组大鼠水平（P＜0.01）。
