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幽门螺杆菌的SDSP-AGE及免疫印渍分析幽门螺杆菌（Helicobacterpylorida, Hp）现被公认为是慢性胃炎（CG）及消化性溃疡（PU）的致病因素之一。
测定血清Hp抗体方法简便，敏感性高，特异性强，故日益受到关注。
有关抗Hp-IgG检测的酶联免疫吸附试验（ELISA）已有报道，但Hp抗原中，哪一部分是免疫反应中抗原的决定簇，目前各家均在探讨。
因此我们对Hp抗原作了十二烷基磺酸纳一聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和用人抗血清Hp和兔抗Hp血清作免疫印渍（Western blot），现报告如下。
1 材料和方法1.1 SDS-PAGE①Hp抗原：为本室1989～1990年间分离培养的3株Hp抗原混合物。
②CT抗原，由上海市卫生防疫站惠赠。
③分子量标准蛋白。
④电泳方法：分离胶和浓缩胶的聚丙烯酰胺浓度分别为10%和5%，分离胶的pH为8.8，浓缩胶的pH为6.8。
电泳前先将Hp、CJ全菌经超声粉碎，然后离心（2000r/min）15min，除去沉淀，经紫外线检测，上清液中蛋白含量为2mg/ml左右，加拌量为60μl，上样前加20μl的样品处理液，然后将标本煮沸5min。
相对分子量标准蛋白分别为磷酸化酶94000，牛血清蛋白67000，卵蛋白43000，碳酸酐酶30000，大豆胰蛋白酶抑制剂20000，溶菌酶14000与样品作同步电泳。
1.2 免疫印渍分析①兔抗人Hp抗体：由本室免疫新西兰大白兔制成。
②阳性血清：1989～1990年胃镜检查患者血清，1:100稀释后经ELISA后于波长490nm测定吸光度（A490）＞0.6者。
同时，胃镜或胃粘膜病理证实有炎症或溃疡。
尿素酶试验阳性。
③阴性血清：选10岁以下正常儿童血清。
1:100稀释后经ELISA测定后A490＜0.3者。
④酶标羊抗人IgG的制备：按改良的过碘酸钠法，由本室制备。
⑤酶标猪抗兔IgG：丹麦Daco公司产品，由上海市卫生防疫站生化免疫室惠赠。
幽门螺杆菌的鉴定分析关键词幽门螺杆菌鉴定分析幽门螺杆菌(Hp)是从胃黏膜中分离出的幽门弯曲菌(CP)。
幽门螺杆菌在胃黏膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。
在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状。
幽门螺杆菌是微需氧菌，环境氧要求5%～8%，在大气或绝对厌氧环境下不能生长。
细菌学检验检验人员必须第一时间与临床科室联系沟通，增加检验科与临床的沟通机会幽门螺杆菌是一种呈弧形，螺旋形或“S”形，革兰染色阴性，检验人员必须第一时间与临床科室联系沟通，增加检验科与临床的沟通机会。
微需氧菌，菌体两端钝圆，长4～5mm，直径0.5～0.7μm,有2～6根鞭毛，菌体有脂多糖，凝集素，并能分泌活性很高的脲酶，研究表明，Hp是慢性活动性胃炎的病原菌，并与消化性溃疡及胃癌关系密切。
形态学检查：将采集的胃活检标本制成薄片，染色后镜检，发现阳性标本，作出初步诊断。
Hp的染色方法很多，就各种染色法对Hp检验的敏感性，特异性等，国内外有诸多报道，其中HE染色使Hp呈淡红色，敏感性较低，常用的Gram染色法，其方法简易，且组织印片，切片均可使用，敏感性较高，但易与革兰阴性杆菌混淆，是其缺点。
Warthin-Starry镀银染色，上皮细胞核呈棕黄色，而Hp呈黑色，易于辨认；灵敏度及特异性均达95%左右，但其操作繁琐，要求技术熟练度高，价格贵，耗时长等大大限制了了其应用。
而石炭酸复红染色使Hp呈深红色，背景淡红色，易辨认，与培养法相比，特异性100%，预测值100%，敏感性也达到了92%，该法简单价廉，快速，最适宜常规应用，还有Gimenez 染色，阿的平荧光染色，间接免疫荧光检查法，无标本标记PAP染色等应用于Hp检查的报道。
分离培养：细菌培养是确诊的依据，且又能进行药敏试验，虽然敏感性较低，但特异性100%，此外细菌培养也常用于对快速诊断的评估。
Hp的pH耐受范围4～10，培养基的pH 5.5～8.5均宜生长，最适生长温度35～37℃，27℃以下不能生长，气体环境温度5% O2，10% CO2，85% N2的环境下培养3～4天，阳性率较高。
Advances in Clinical Medicine 临床医学进展, 2016, 6(4), 191-196Published Online December 2016 in Hans. /journal/acm /10.12677/acm.2016.64036文章引用: 柳晖, 白建文. 免疫印迹法测定健康体检人群幽门螺旋杆菌抗体及毒性分型结果分析[J]. 临床医学进展,Using Western Blod Assay to Analyze H. pylori Antibody and Toxicity Typing of Health Check-Up GroupHui Liu, Jianwen BaiDepartment of Physical Examination, Shanghai East Hospital, Tongji University School of Medicine, ShanghaiReceived: Nov. 15th , 2016; accepted: Dec. 16th , 2016; published: Dec. 19th, 2016Copyright © 2016 by authors and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY)./licenses/by/4.0/AbstractObjective: To analyze the infection types of Helicobacter pylori in different age groups from December 2014 to December 2012, i.e. antibodies and characteristics of toxicity distribution after infection. Me-thods: We use Western blotting method to detect and classify the immunophenotype of serum of physical examination population. Age is used as the statistical unit, results are tested and analyzed by χ2, and P < 0.05 means that the difference has statistical sense. Results: The positive rate of type II Hp infection of A urease or/and urease B for the check-up was 33.27% (5674/17,052), and age distribu-tion ranging from 30 to 69 enjoys the highest positive rate; the positive rate of type I Hp infection of cytotoxin A or/and vacuolate cytotoxin A was 10.58% (1804/17,052), and age ranging from 30 - 49 enjoys the highest positive rate. In different age groups of I and II, there exist differences (P < 0.05): low age group (18 - 30 years old) and old age group (>70 years) have lower possibilities to infect Hp. Conclusion: Among physical examination population, the rate of Hp infection and the immune typing results after infection, compared with clinical cases, both have some differences. Hp infection, as well as immune typing, exists special distribution characteristics among physical examination population.KeywordsHelicobacter pylori , Health Check-Up Group, Immune Phenotype, Immune Typing免疫印迹法测定健康体检人群幽门螺旋杆菌 抗体及毒性分型结果分析柳 晖，白建文柳晖，白建文同济大学医学院附属上海市东方医院体检科，上海收稿日期：2016年11月15日；录用日期：2016年12月16日；发布日期：2016年12月19日摘要目的：本文回顾性分析2012年12月至2014年12月健康体检人群不同年龄段幽门螺旋杆菌感染类型的情况，即感染后产生的抗体及毒性的分布特征。
·综述·幽门螺杆菌及其分型与消化道疾病关系的研究进展王芯郑世勤付青海何旭东【摘要】幽门螺杆菌（Hp）是国际公认的Ⅰ类致癌物，研究表明Hp感染与胃炎、消化性溃疡和胃癌等多种消化道疾病有关。
Hp的主要毒力因子是细胞毒素相关蛋白A（CagA）和空泡细胞毒素A（V acA），依据基因表达的不同可将Hp分为Ⅰ型和Ⅱ型。
Hp分型与多种疾病进展有关，对其进行基因型检测有助于精准诊疗。
该文就Hp及其分型与消化道疾病关系的研究进展作一综述，以期为临床诊疗提供参考。
【关键词】幽门螺杆菌；幽门螺杆菌分型；消化道疾病DOI: 10. 3969/j. issn. 1673-534X. 2023. 06. 003幽门螺杆菌（Hp）是一种存在于人体胃黏膜的微需氧革兰阴性菌，有较强的传染性和较高的感染率[1-2]。
据研究报道，全球范围内的Hp感染率约为50%，中国的Hp感染率为40%～70%，WHO 已将其列为Ⅰ类致癌物[3]。
Hp的主要毒力因子是细胞毒素相关蛋白A （CagA）和空泡细胞毒素A（VacA），据此可分为HpⅠ型[CagA和（或）VacA阳性]和HpⅡ型（CagA 和VacA均阴性）[4]。
王菲等[5]的研究表明，Hp毒力的差异可能是导致Hp感染者发病和出现临床症状的重要原因。
刘卫东等[6]发现HpⅠ型的毒力较强，有诱发恶变风险，HpⅡ型则可引起炎症性改变。
本文就Hp及其分型与消化道疾病关系的研究进展作一综述，以期为疾病诊治提供参考。
1 Hp的概述Hp经口进入机体胃内，一部分可被胃酸杀灭，另一部分则可利用其鞭毛穿过黏液层定植于胃窦黏膜表面，通常不侵入胃腺和固有层内。
Hp能产生CagA、VacA、血型抗原结合黏附素（BabA）、上皮接触毒性蛋白（IceA）、十二指肠溃疡诱导因子（DupA）和尿素酶（Ure）等多种直接或间接参与Hp致病过程的毒力因子[7]。
Hp分泌的CagA和VacA等毒力因子可直接损伤机体胃黏膜；此外，基金项目：湖北省卫生健康委指导性项目（WJ2021F048）作者单位：442000 湖北十堰，湖北医药学院附属国药东风总医院消化内科通信作者：何旭东，Email:*****************Hp产生的氨可导致黏膜细胞损伤，促进炎症介质释放，且Hp菌体细胞壁的Lewis X和Lewis Y抗原可引发自身免疫反应，进一步加重机体的损伤[8]。
应用免疫印迹法探讨血清幽门螺杆菌抗体谱与上消化道疾病的关系目的：用免疫印迹法检测幽门螺杆菌（Hp）感染中不同血清分型与慢性浅表性胃炎（CSG）、慢性萎缩性胃炎（CAG）、消化性溃疡（PU）和胃癌（GC）的关系。
方法：选取确诊为Hp感染的上消化道疾病患者205例，用Western blot 法（免疫印迹法）测血清幽门螺杆菌抗体谱，检测Hp抗体分型，分析CagA和/或VacA抗体阳性的表达情况。
结果：在Hp现症感染中，CSG、CAG、PU、GC 患者的HpⅠ型感染比例明显高于Ⅱ型感染（P＜0.01）；PU及GC中HpⅠ型感染率高于CSG（P＜0.05）。
不同年龄段及不同性别中HpⅠ型感染比例均高于Ⅱ型感染（P＜0.01）。
各组的Hp I型感染者中以CagA+VacA抗体为主，检出率为77.4%；其中以CSG组最低（70.4%）、GC组最高（81.8%）。
各组CagA+VacA 抗体检出率显著高于单一CagA/VacA抗体检出率（P＜0.01）。
结论：应用免疫印迹法进行幽门螺杆菌血清学分型检测对于上消化道疾病的判断有临床指导意义，Ⅰ型Hp感染更需要进行根治。
标签：幽门螺杆菌；免疫印迹法；分型；CagA；VacA幽门螺杆菌（Hp）是一种人类最常见的慢性致病菌。
目前已经确认Hp与4种上消化道疾病疾病有密切关联：（1）慢性胃炎；（2）消化性溃疡病；（3）胃癌；（4）胃黏膜相关性淋巴样组织（mucosa-associated lymphoid tissue MALT）淋巴瘤[1]。
目前认为细胞毒素相关蛋白A（Cytotoxin associated gene A，CagA）、空泡毒素（Vacuolating cytotoxin A，VacA）与Hp的致病力密切相关[2]。
本研究使用免疫印迹法对确诊Hp感染的上消化道疾病患者进行血清Hp抗体检测，并进行分型，探讨血清幽门螺杆菌抗体谱与上消化道疾病的关系。
1 资料与方法1.1 一般资料收集2013年2-12月因上腹痛、饱胀、纳差、黑便等症状在本院消化内科门诊就诊及住院的患者205例。
两种方法检测幽门螺旋杆菌抗体及其分型的比较目的为考核南京大渊生物技术工程有限责任公司生产的蛋白芯片法检测幽门螺杆菌（Hp）抗体及其分型试剂的敏感性和特异性，从而判断其在临床诊断中的应用价值。
方法临床上采用经SFDA注册的深圳市伯劳特生物制品有限公司的幽门螺杆菌抗体分型检测试剂盒（免疫印迹法）检测幽门螺杆菌抗体及其分型（分为CagA、VacA和Urease），共检测血清476份，检测结果与对比试剂不同的标本用第三方经SFDA认证的试剂进行复核，对于Urease不符合的病例，采用北京康美天鸿生物科技有限公司的幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒（胶体金法）进行检测，对于CagA和VacA不一致的标本，则采用上海研域生物科技有限公司提供的ELISA试剂盒进行检测。
结果南京大渊生物技术工程有限责任公司生产的蛋白芯片法检测幽门螺杆菌抗体及其分型试剂CagA阳性符合率94.5%，阴性符合率96.5%，总符合率95.8%（P>0.05）；Urease阳性符合率95.1%，阴性符合率92.7%，总符合率95.4%（P>0.05）；VacA阳性符合率91.6%，阴性符合率97.1%，总符合率95.2%（P>0.05）；两种方法结果经统计学检验差异无统计学意义。
结论经以上结果的分析，本次临床试验的有效病例476例，大渊Hp 分型检测试剂盒（蛋白芯片法）与伯劳特幽门螺杆菌抗体分型检测试剂盒（免疫印迹法）的一致率均在90%以上，产品质量达到临床使用要求。
标签：幽门螺杆菌抗体；分型；蛋白芯片法；免疫印迹法幽门螺旋杆菌（helicobacter pylori，Hp）是一种革兰氏阴性杆菌，是能够在人的胃中生存的唯一微生物种类。
幽门螺旋杆菌外形为S形或弧形弯曲，细菌可以穿过胃黏膜而定居至胃上皮细胞，又能产生大量尿素酶，分解尿素在菌体周围形成一股碱性的“氨云”，可以抵抗胃中的酸性环境，免受胃酸杀死。
1 材料与方法1.1 研究对象随机选取2013年1月～2013年2月本院门诊及住院患者476例。
免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体及其分型的结果分析杨燕;单万水;韩红星;李小勇;李志明【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2013(10)A01【摘要】目的本文通过检测患者血清中幽门螺旋杆（Hp）抗体及分型，分析Hp 抗体分型在临床上的感染情况，为临床诊断与治疗提供依据。
方法随机选取该院门诊及住院患者476例，取空腹血用免疫印迹法检测Hp抗体谱，分析相应的Hp 细胞毒素相关蛋白（CagA）、空泡毒素（VacA）、尿素酶（UreaseA、B）在不同人群中的表达情况。
结果各年龄组对比年龄越大Hp感染率越高，疾病组对比胃炎，胃溃疡组Hp感染率最高，其他疾病，乙肝及体检患者感染率在40％～50％之间，差异无统计学意义。
结论应用免疫印迹法可一次性检测Hp抗体谱，进行HP抗体分型有利于临床对上消化道疾病病情的判断和治疗；免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体具有较高的敏感性和特异性。
方法简单，时间短，对临床治疗有重要指导意义。
【总页数】3页(P28-30)【作者】杨燕;单万水;韩红星;李小勇;李志明【作者单位】深圳市第三人民医院,广东深圳518000【正文语种】中文【中图分类】R725.7【相关文献】1.间接免疫荧光法检测抗核抗体与免疫印迹法检测抗核抗体谱结果分析 [J], 田巧2.免疫印迹法测定健康体检人群幽门螺旋杆菌抗体及毒性分型结果分析 [J], 柳晖;白建文;;3.间接免疫荧光法检测抗核抗体与免疫印迹法检测抗核抗体谱结果分析 [J], 田巧;4.886例体检者幽门螺杆菌抗体分型检测结果分析 [J], XU Jin-xia;LU Yun;LIU Lai;XU Zhong5.免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体结果分析 [J], 郑海玲;莫成锦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫印迹法检测幽门螺杆菌及其分型的意义的开题报告一、研究背景和意义：幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是一种革兰阴性杆菌，它生长在人体胃黏膜表层，是人类常见的胃肠疾病的一种重要致病菌。
据统计，全球约有一半以上的人群感染Hp，而我国感染率更高，据报道，我国家庭感染率约为70%以上。
Hp感染可导致胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病，Hp感染与胃癌的关系已成为世界上公认的医学事实。
因此，对Hp 的快速检测和分型具有重要的临床意义。
幽门螺杆菌的分型主要有两种，即根据细菌的 Virulence factor cagA 基因分型和 vacA 基因分型。
cagA 是Hp独有的基因，在Hp感染期间，cagA的表达会导致上皮细胞炎症反应并使其代谢紊乱，而vacA是编码Hp分泌毒素的基因之一，具有毒性和免疫学效应。
cagA 阳性和 vacA s1 型菌株与 Hp 感染相关性最高，引起患者严重胃病的风险最高。
因此，为了准确、快速地检测和分型Hp，研究实验室常用的技术——免疫印迹法在Hp的检测和分型中的应用，具有重要的临床意义。
二、研究内容和方法：本研究将采用免疫印迹法来检测 Hp 的存在以及分型。
具体研究内容包括：1. 建立免疫印迹法检测 Hp 存在的适宜条件2. 用免疫印迹法检测 Hp 的分型（cagA、vacA s1/s2）并比较其结果与 PCR 实验结果的一致性3. 分析免疫印迹法检测 Hp 存在及分型与患者临床病情的相关性，探讨其临床应用前景。
研究方法：选取 Hp 标准菌株和 50 份临床患者样本，采用免疫印迹法检测 Hp 的存在及分型，下一步将与 PCR 实验结果进行比对，同时记录患者的临床资料，在对免疫印迹法和 PCR 检测的结果进行数据分析后，探讨免疫印迹法在 Hp 检测和分型中的应用。
三、预期效果：本研究采用免疫印迹法检测 Hp 及其分型的方法，具有操作简单、结果准确、敏感度高、特异性强等优点，是一种可靠的 Hp 检测方法。
