细胞工程技术ppt精品课程课件讲义
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细胞工程精ppt课件
• 基因水平：基因转化；
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8
开展细胞工程的意义
• 研究各种细胞、组织和器官所需的生理条件及 其特点；
• 有利于改变物种的遗传种性，加快选育优良品 种的步伐；
• 可大量、不受季节限制地工厂化生产所需的组 织或生物；
• 有利于某些药物、抗体及次生代谢物的生产；
• 可获得脱毒植物；
可编辑课件PPT
使鸡胚心脏细胞传代3400次，生存34年，可无限 生长；
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14
动物细胞工程
• 1940 Earle建立可无限传代的小鼠结缔组 织L系；
• 1951 Gay建立第一个永生人宫颈癌Hela 细胞系；
• 1958 冈田善雄用灭活仙台病毒诱发腹水 瘤细胞融合；
• 1960s 童第周和牛满江进行鱼和蛙的核移 植，获核质杂种鱼；
社，2003 • 李志勇编著. 细胞工程. 科学出版社，
2003
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4
探究式自主学习计划
• 自愿组成学习小组，3人左右，选出组长； • 每组选一个主题，时间约10 min； • 各组需准备PowerPoint; • 各组最高可得8分； • 其他同学可提问、补充或更正； • 教师讲评和讨论；
• 1958 Steward进行胡萝卜细胞悬浮培养，还长成胚状体 和植株；
• 1953 Muir成功对烟草细胞进行悬浮液体培养；
• 1960 英国Cocking用纤维素酶制备番茄根细胞原生质体；
• 1964 印度Maheshwari以花药培养出单倍体组织；
• 1968 Reinhard用植物细胞悬浮培养生产出哈尔碱；
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2
《细胞工程》主要内容（2）
➢ 动物细胞与组织培养 ➢ 动物细胞融合 ➢ 细胞重构与动物克隆 ➢ 淋巴细胞杂交瘤与单克隆抗体 ➢ 染色体转移与基因转移 ➢ 人类干细胞研究 ➢ 原核细胞的原生质体融合 ➢ 真菌细胞的原生质体融合
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8
开展细胞工程的意义
• 研究各种细胞、组织和器官所需的生理条件及 其特点；
• 有利于改变物种的遗传种性，加快选育优良品 种的步伐；
• 可大量、不受季节限制地工厂化生产所需的组 织或生物；
• 有利于某些药物、抗体及次生代谢物的生产；
• 可获得脱毒植物；
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使鸡胚心脏细胞传代3400次，生存34年，可无限 生长；
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14
动物细胞工程
• 1940 Earle建立可无限传代的小鼠结缔组 织L系；
• 1951 Gay建立第一个永生人宫颈癌Hela 细胞系；
• 1958 冈田善雄用灭活仙台病毒诱发腹水 瘤细胞融合；
• 1960s 童第周和牛满江进行鱼和蛙的核移 植，获核质杂种鱼；
社，2003 • 李志勇编著. 细胞工程. 科学出版社，
2003
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4
探究式自主学习计划
• 自愿组成学习小组，3人左右，选出组长； • 每组选一个主题，时间约10 min； • 各组需准备PowerPoint; • 各组最高可得8分； • 其他同学可提问、补充或更正； • 教师讲评和讨论；
• 1958 Steward进行胡萝卜细胞悬浮培养，还长成胚状体 和植株；
• 1953 Muir成功对烟草细胞进行悬浮液体培养；
• 1960 英国Cocking用纤维素酶制备番茄根细胞原生质体；
• 1964 印度Maheshwari以花药培养出单倍体组织；
• 1968 Reinhard用植物细胞悬浮培养生产出哈尔碱；
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2
《细胞工程》主要内容（2）
➢ 动物细胞与组织培养 ➢ 动物细胞融合 ➢ 细胞重构与动物克隆 ➢ 淋巴细胞杂交瘤与单克隆抗体 ➢ 染色体转移与基因转移 ➢ 人类干细胞研究 ➢ 原核细胞的原生质体融合 ➢ 真菌细胞的原生质体融合
细胞工程第一章PPT课件
细胞培养技术需要提供适宜的环 境条件，包括温度、湿度、气体 组成等，以维持细胞的正常生理
状态。
细胞培养技术分类
原代细胞培养
直接从生物体内取出的细胞进行的培养。
传代细胞培养
将原代细胞经过分裂、生长，形成细胞系或细胞株，再进行的培养。
细胞系
从原代细胞培养中获得的具有特定生物学特征的细胞群体。
细胞株
通过选择和克隆化获得的具有特定生物学特征的细胞群体。
细胞工程应用领域
农业、医学、生物制药、生物能源等领域。
细胞工程应用
农业领域
通过细胞工程改良作物品种， 提高产量和抗性，培育抗虫、
抗病、抗旱等新品种。
医学领域
用于疾病治疗、药物研发和人 体组织工程，如干细胞治疗、 基因治疗和人工器官等。
生物制药领域
通过细胞培养技术生产疫苗、 抗体、干扰素等生物药物，提 高药物产量和纯度。
技术难题
加强基础研究，提高细胞工程技术的稳定性 和安全性。
成本与普及度
降低细胞工程技术成本，使其更广泛地应用 于临床治疗。
安全性与长期影响
加强长期追踪观察，确保细胞工程技术对人 类健康无不良影响。
细胞工程对人类社会的影响
医疗保健
细胞工程技术将为疾病治疗提供更多有效手 段，提高人类健康水平。 Nhomakorabea生物技术产业
细胞工程第一章
目录
• 细胞工程简介 • 细胞培养技术 • 干细胞研究 • 基因编辑技术 • 细胞工程展望
01
细胞工程简介
细胞工程定义
细胞工程定义
细胞工程是一门应用细胞生物学和分子生物 学原理与方法，在细胞水平上改变生物遗传 特性的技术。
细胞工程原理
通过细胞培养、细胞融合、染色体操作和基因转移 等技术，实现对细胞遗传特性的改造和优化。
细胞工程简介PPT课件
基因编辑的基本原理
基因编辑是一种通过修改生物体 的基因序列来改变其遗传信息的
精确技术。
它利用特定的核酸酶，如 CRISPR-Cas9系统，来识别和 切割DNA的特定位点，以达到
修改基因序列的目的。
基因编辑技术可以用于纠正缺陷 基因、引入有益基因或删除有害 基因，以改善生物体的性状或治
疗遗传性疾病。
利用干细胞的免疫调节功能 ，可以用于治疗各种免疫系 统疾病，如系统性红斑狼疮 、类风湿性关节炎等。同时 ，通过基因编辑技术可以将 干细胞改造为能够治疗遗传 性疾病或癌症的细胞。
干细胞的抗衰老作用为其在 美容和保健领域的应用提供 了可能，如用于生产美容护 肤品或开发抗衰老疗法。
04
基因编辑与细胞治疗
在适宜的环境和营养条件下，细胞能够进行自我复制和分化，形 成新的组织和器官。
细胞对环境敏感
细胞对周围环境中的物理、化学和生物因子非常敏感，这些因子可 以影响细胞的生长、分裂和分化。
细胞间的相互作用
细胞之间存在相互作用，可以通过信号传递等方式影响彼此的生物 学行为。
细胞培养的方法与技术
原代细胞培养
传代细胞培养
细胞工程简介
目录
• 细胞工程概述 • 细胞培养技术 • 干细胞工程 • 基因编辑与细胞治疗 • 细胞工程的前景与挑战
01
细胞工程概述
定义与分类
定义
细胞工程是以细胞为基本单位，在体 外或体内通过人工操作获得细胞、组 织或器官的技术。
分类
根据操作对象和应用目的，细胞工程 可分为动物细胞工程和植物细胞工程 两大类。
可以模拟体内环境，研究细胞的生物学行为；可以大量生产细胞和蛋白质；可 用于药物筛选和毒理学研究等。
缺点
细胞工程主要技术PPT课件
基因修饰技术
通过基因敲除、基因转录和基 因编辑等技术对动物基因进行 修饰，以获得具有特定性状的
动物个体。
植物克隆技术
组织培养技术
将植物的离体组织或细胞培养成植株 的技术。
植物基因转化技术
将外源基因导入植物细胞或组织中， 再通过组织培养获得转基因植株。
植物细胞悬浮培养技术
将植物细胞悬浮在培养基中，进行大 规模培养，以生产次生代谢产物或培 育新品种。
基因敲除技术
基因敲除技术是指通过特定的方法将 生物体中的某个基因敲除或沉默，以 研究其功能的一种技术。
基因敲除技术可以用于研究基因的功 能和作用机制，以及用于治疗某些遗 传性疾病。
该技术通过同源重组或CRISPR-Cas9 等技术，将靶基因敲除或使其失效， 以研究其对生物体生长发育和代谢等 方面的作用。
成体干细胞在医学上具有广泛的应用前景，可用于治疗心肌梗死、脑梗塞等疾病。
诱导多能干细胞（iPS）
诱导多能干细胞（iPS）是通过 基因工程技术将成体细胞诱导 回转录为胚胎干细胞样细胞的 干细胞。
iPS细胞的产生避免了胚胎干细 胞的伦理道德问题，同时具有 与胚胎干细胞相似的多能性。
iPS细胞在医学上具有巨大的应 用潜力，可用于疾病模型的建 立、药物筛选和个性化治疗等 领域。
过程
02
将两个待融合的细胞用聚乙二醇处理，使细胞膜表面张力降低，
细胞膜相互靠近并融合。
应用
03
用于制备杂交瘤细胞、基因转导等。
细胞生物融合
01
02
03
原理
利用病毒或细菌等生物因 子诱导细胞融合。
过程
将病毒或细菌与待融合的 细胞共培养，病毒或细菌 会吸附在细胞表面并诱导 细胞融合。
通过基因敲除、基因转录和基 因编辑等技术对动物基因进行 修饰，以获得具有特定性状的
动物个体。
植物克隆技术
组织培养技术
将植物的离体组织或细胞培养成植株 的技术。
植物基因转化技术
将外源基因导入植物细胞或组织中， 再通过组织培养获得转基因植株。
植物细胞悬浮培养技术
将植物细胞悬浮在培养基中，进行大 规模培养，以生产次生代谢产物或培 育新品种。
基因敲除技术
基因敲除技术是指通过特定的方法将 生物体中的某个基因敲除或沉默，以 研究其功能的一种技术。
基因敲除技术可以用于研究基因的功 能和作用机制，以及用于治疗某些遗 传性疾病。
该技术通过同源重组或CRISPR-Cas9 等技术，将靶基因敲除或使其失效， 以研究其对生物体生长发育和代谢等 方面的作用。
成体干细胞在医学上具有广泛的应用前景，可用于治疗心肌梗死、脑梗塞等疾病。
诱导多能干细胞（iPS）
诱导多能干细胞（iPS）是通过 基因工程技术将成体细胞诱导 回转录为胚胎干细胞样细胞的 干细胞。
iPS细胞的产生避免了胚胎干细 胞的伦理道德问题，同时具有 与胚胎干细胞相似的多能性。
iPS细胞在医学上具有巨大的应 用潜力，可用于疾病模型的建 立、药物筛选和个性化治疗等 领域。
过程
02
将两个待融合的细胞用聚乙二醇处理，使细胞膜表面张力降低，
细胞膜相互靠近并融合。
应用
03
用于制备杂交瘤细胞、基因转导等。
细胞生物融合
01
02
03
原理
利用病毒或细菌等生物因 子诱导细胞融合。
过程
将病毒或细菌与待融合的 细胞共培养，病毒或细菌 会吸附在细胞表面并诱导 细胞融合。
细胞工程 ppt课件
ppt课件
7
系等，如对地中海贫血症、唐氏综合症、血友病等的诊断。此外，
单克隆抗体（简称单抗）的问世是医学史上的一个里程碑，它促进
了医学基础研究和临床应用的发展，提高了疾病诊断水平，对治疗 诸如癌症等疑难病发挥了特殊的作用。单抗是特异性极高的蛋白质，
定性或定量检测病人血、尿及分泌物中各种特殊蛋白质或病原体，
1982 年 ， 美 国 药 品 与 食 品 管 理 局 （ Food and Drug Administration，简称FDA ）批准Elilly（礼来制药）公司的人 胰岛素遗传工程产品上市，使基因工程产品正式商品化。至今全 世界已有1000多家生物技术公司，其中大多数都在进行基因工程 药的开发，现已有近20种基因工程药品投放市场，如治疗糖尿病 的人胰岛素，抗肿瘤的人白细胞介素-2，防治肾衰引起贫血的—
比传统方法的准确率大大提高，可快速检测到常规方法下不能检测 的病原体。目前有不少诊断用单抗试剂盒已商品化，如血型A、B及
AB分型的诊断试剂，各种疾病如乙肝、各种性病、肿瘤等的免疫试
剂 盒 。 我 国 现 已 研 制 出 的 单 抗 制 品 有 几 十 种 。
ppt课件
8
（三）基因工程药物
1977 年，科学家 Itakura （板仓）将人生长激素释放抑制因 子基因转入大肠杆菌，生产出有活性的生长激素释放抑制因子， 标志着生物工程制药工业的开始。在此之前，除了抗生素可用生 物发酵大规模生产外，绝大多数生化药物主要从组织或体液中提 取，这种制备方法产量低，成本高。例如，要获得1mg生长激素 释放抑制因子传统方法：要从10万头羊脑中提取。用基因工程方 法只需10L发酵液便可。
ppt课件 5
（一）医学基础研究
应用基因工程技术，可进行如下几个础；②分析基因的结构与功能，如对一些重要的细胞因子、生长因 子等基因进行克隆与表达，表达产物为研究这些蛋白质的功能及其 相互作用关系提供了实验资料；③探讨疾病发生、发展及治疗的分 子机制，如从基因水平研究肿瘤、心血管、神经系统疾病的发生发 展机制，了解各类感染因子的致病机制，探讨细胞生长、分化及死 亡的分子机制，为人类疾病的基因治疗提供理论和技术基础。DNA 体外重组技术对医学科学渗透，促进了医学科学发展，形成了分子 生物学、分子遗传学、分子免疫学、分子药理学、分子病理学、分 子流行病学、分子肿瘤学等分支学科。
7
系等，如对地中海贫血症、唐氏综合症、血友病等的诊断。此外，
单克隆抗体（简称单抗）的问世是医学史上的一个里程碑，它促进
了医学基础研究和临床应用的发展，提高了疾病诊断水平，对治疗 诸如癌症等疑难病发挥了特殊的作用。单抗是特异性极高的蛋白质，
定性或定量检测病人血、尿及分泌物中各种特殊蛋白质或病原体，
1982 年 ， 美 国 药 品 与 食 品 管 理 局 （ Food and Drug Administration，简称FDA ）批准Elilly（礼来制药）公司的人 胰岛素遗传工程产品上市，使基因工程产品正式商品化。至今全 世界已有1000多家生物技术公司，其中大多数都在进行基因工程 药的开发，现已有近20种基因工程药品投放市场，如治疗糖尿病 的人胰岛素，抗肿瘤的人白细胞介素-2，防治肾衰引起贫血的—
比传统方法的准确率大大提高，可快速检测到常规方法下不能检测 的病原体。目前有不少诊断用单抗试剂盒已商品化，如血型A、B及
AB分型的诊断试剂，各种疾病如乙肝、各种性病、肿瘤等的免疫试
剂 盒 。 我 国 现 已 研 制 出 的 单 抗 制 品 有 几 十 种 。
ppt课件
8
（三）基因工程药物
1977 年，科学家 Itakura （板仓）将人生长激素释放抑制因 子基因转入大肠杆菌，生产出有活性的生长激素释放抑制因子， 标志着生物工程制药工业的开始。在此之前，除了抗生素可用生 物发酵大规模生产外，绝大多数生化药物主要从组织或体液中提 取，这种制备方法产量低，成本高。例如，要获得1mg生长激素 释放抑制因子传统方法：要从10万头羊脑中提取。用基因工程方 法只需10L发酵液便可。
ppt课件 5
（一）医学基础研究
应用基因工程技术，可进行如下几个础；②分析基因的结构与功能，如对一些重要的细胞因子、生长因 子等基因进行克隆与表达，表达产物为研究这些蛋白质的功能及其 相互作用关系提供了实验资料；③探讨疾病发生、发展及治疗的分 子机制，如从基因水平研究肿瘤、心血管、神经系统疾病的发生发 展机制，了解各类感染因子的致病机制，探讨细胞生长、分化及死 亡的分子机制，为人类疾病的基因治疗提供理论和技术基础。DNA 体外重组技术对医学科学渗透，促进了医学科学发展，形成了分子 生物学、分子遗传学、分子免疫学、分子药理学、分子病理学、分 子流行病学、分子肿瘤学等分支学科。
细胞工程PPT教学课件
1
细胞工程
细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的
原理和方法，通过某种工程学手段，在细胞整体水平 或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞 内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。
理论基础 操作水平
目的
细胞生物学和分子生物学 细胞整体水平或细胞器水平 改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品
体细胞：分化程度低的>分化程度高的
细胞分裂能力强的>细胞分裂能力弱的
幼嫩的>衰老的
5
（5）为什么体内细胞没有表现出全能性， 而是分化成为不同的组织、器官？
基因在特定空间和时间条件下选择性表达的结果。 在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达 的基因是不同的，合成的蛋白质也不一样，从而形成 了不同的组织和器官。
①无菌、无毒的环境
离体培养的细胞对 微生物和有毒物质 没有防御能力
（灭菌，添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
②营养（液体培养基）
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、
微量元素等） ③温度和PH
含未知成分，促进细 胞顺利的生长、增殖
温度：36.5+0.5℃，pH：7.2～7.4
④气体环境
能否用胃蛋白酶
细胞分裂素 较高 生长素
有利于芽的产生
细胞分裂素 较低 生长素
有利于生根
12
植物组织培养中的条件控制
离体的植物器官、组织或细胞（外植体）
遮光
脱分化
①无菌
愈伤Hale Waihona Puke 织②营养 ③一定的外界条件
④植物激素
再分化 一定的光照
根、芽
芽发育成叶， 叶肉细胞中叶 绿素的合成需 要光照
植物体 13
细胞工程
细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的
原理和方法，通过某种工程学手段，在细胞整体水平 或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞 内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。
理论基础 操作水平
目的
细胞生物学和分子生物学 细胞整体水平或细胞器水平 改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品
体细胞：分化程度低的>分化程度高的
细胞分裂能力强的>细胞分裂能力弱的
幼嫩的>衰老的
5
（5）为什么体内细胞没有表现出全能性， 而是分化成为不同的组织、器官？
基因在特定空间和时间条件下选择性表达的结果。 在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达 的基因是不同的，合成的蛋白质也不一样，从而形成 了不同的组织和器官。
①无菌、无毒的环境
离体培养的细胞对 微生物和有毒物质 没有防御能力
（灭菌，添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
②营养（液体培养基）
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、
微量元素等） ③温度和PH
含未知成分，促进细 胞顺利的生长、增殖
温度：36.5+0.5℃，pH：7.2～7.4
④气体环境
能否用胃蛋白酶
细胞分裂素 较高 生长素
有利于芽的产生
细胞分裂素 较低 生长素
有利于生根
12
植物组织培养中的条件控制
离体的植物器官、组织或细胞（外植体）
遮光
脱分化
①无菌
愈伤Hale Waihona Puke 织②营养 ③一定的外界条件
④植物激素
再分化 一定的光照
根、芽
芽发育成叶， 叶肉细胞中叶 绿素的合成需 要光照
植物体 13
生物技术概论 第四章 细胞工程PPT课件
第四章 细胞工程
Cell Engineering
1
内容
(1)细胞工程概念 (2)细胞工程的发展 (3)细胞工程基本大技术 (4)细胞工程的操作流程 (5)细胞工程技术的应用
2
一、细胞工程的概念
1、细胞工程在现代生物技术中的作用 2、细胞工程的概念 3、细胞工程的范畴 4、细胞工程的理论基础
3
1、细胞工程在现代生物技术中的作用
12
大规模的细胞培养可分为三个层次： 单个细胞培养、组织培养和器官培养。植 物细胞和原生质体培养技术可以用于育种， 也可用于各类植物的快速繁殖，在培养无 毒苗、长期贮存种子和生产次生代谢产物 等方面发挥作用。动物细胞培养技术可用 于制取许多有应用价值的细胞产品，如疫 苗和生长因子等。利用细胞培养系统可进 行毒品和药物检测；一些培养细胞可用于 治疗。
9
(2)染色体组工程
染色体组工程是整个改变染色体组数 的技术。自从1937年秋水仙素用于生物学 后，多倍体的工作得到了迅速发展，例如 得到四倍体小麦，八倍体小黑麦等。
10
(3)细胞质工程
又称细胞拆合工程，是通过物理或化 学方法将细胞质与细胞核分开，再进行不 同细胞间核质的重新组合，重建成新细胞。 可用于研究细胞核与细胞质的关系的基础 研究和育种工作。
36
32
2、细胞培养技术
细胞培养是指动物、植物和微生物细胞在体 外无菌条件下的保存和生长。细胞培养技术包括：
1）取材除菌； 2）配制培养基； 3）对培养基除菌或灭菌； 4）采用无菌操作进行接种； 5）在培养室培养，并控制种类细胞生长所 需的最佳培养条件，如温度、湿度、光照、氧气、 二氧化碳等；当细胞达到一定生物量时应及时收 获或传代。
5
3、 细胞工程的研究范畴
Cell Engineering
1
内容
(1)细胞工程概念 (2)细胞工程的发展 (3)细胞工程基本大技术 (4)细胞工程的操作流程 (5)细胞工程技术的应用
2
一、细胞工程的概念
1、细胞工程在现代生物技术中的作用 2、细胞工程的概念 3、细胞工程的范畴 4、细胞工程的理论基础
3
1、细胞工程在现代生物技术中的作用
12
大规模的细胞培养可分为三个层次： 单个细胞培养、组织培养和器官培养。植 物细胞和原生质体培养技术可以用于育种， 也可用于各类植物的快速繁殖，在培养无 毒苗、长期贮存种子和生产次生代谢产物 等方面发挥作用。动物细胞培养技术可用 于制取许多有应用价值的细胞产品，如疫 苗和生长因子等。利用细胞培养系统可进 行毒品和药物检测；一些培养细胞可用于 治疗。
9
(2)染色体组工程
染色体组工程是整个改变染色体组数 的技术。自从1937年秋水仙素用于生物学 后，多倍体的工作得到了迅速发展，例如 得到四倍体小麦，八倍体小黑麦等。
10
(3)细胞质工程
又称细胞拆合工程，是通过物理或化 学方法将细胞质与细胞核分开，再进行不 同细胞间核质的重新组合，重建成新细胞。 可用于研究细胞核与细胞质的关系的基础 研究和育种工作。
36
32
2、细胞培养技术
细胞培养是指动物、植物和微生物细胞在体 外无菌条件下的保存和生长。细胞培养技术包括：
1）取材除菌； 2）配制培养基； 3）对培养基除菌或灭菌； 4）采用无菌操作进行接种； 5）在培养室培养，并控制种类细胞生长所 需的最佳培养条件，如温度、湿度、光照、氧气、 二氧化碳等；当细胞达到一定生物量时应及时收 获或传代。
5
3、 细胞工程的研究范畴
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一.建立突变细胞系
• 1.Mutant Cell Line：指人为培养获得的突变性质 一致，性状均一，可离体培养增殖 • ，遗传的细胞群。 • 2.突变细胞系的来源： • *自然突变：机率低，方向不定。可从突变 个 体分离培养突变体细胞，扩增建系。 • *人工诱变：可定向诱变，突变率较高。筛 选 突变细胞扩增培养。如：
图6-13
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
*哺乳动物克隆技术及研究进展
• 1.概念： • *Clone: 译意为无性繁殖系。
• *Cell Clone:混合细胞群→筛选靶细胞→克 隆扩增遗传性状完全一致的细胞群。
• *Molecular Clone: 目的基因转化受体细胞→筛选 转化细胞→克隆扩增转化细胞获得大量目的基因 拷贝。 • *Animal Clone:指人为通过无性繁殖技术，繁育 遗传性状完全一致的动物。
（C核融合 ）
• →杂种细胞克隆扩增。
• 3.杂种细胞的筛选：
c甲
• 甲C
BrdU
( HGPRT+ /TK- )
x→ (HGPRT- /TK+ )
c甲同核体
c甲乙同核体 c乙同核体 c乙
[ 诱变] • 乙C
MNNG
• HAT培养基筛选————→
c甲乙同核体
（杂种细胞基因互补）
三.杂交瘤单克隆抗体制备技术
PPT内容可自行编辑
细胞工程技术
主讲：XX XX
凡大医治病，必当安神
定志，无欲无求，先发大慈恻 隐之心，誓愿普救含灵之苦。
- - 孙思邈
PPT内容可自行编辑
开始上课！
• *细胞工程（Cell Engineering):指应用细胞生物学和分子 生物学技术，人为改变细胞的结构和性状，使之满足某 种研究和应用的需要。（P199)
• 2.细胞脱核方法：
• *紫外照射法：可使细胞核萎缩，获胞质体。 • *显微手术法：在显微操作器控制下，用微吸管 从细胞中吸取核质体。 • *松胞菌素质B（CB)法:用低浓度（1~5ug/ml) CB 试剂作用于培养中细胞群，可诱导细胞核分裂而 细胞质不分裂，形成多核细胞，引起细胞膜破裂， 离心后获取细胞核和胞质体。
• HGPRT +
TK+
BrdU
甲基硝基亚硝基胍
HGPRT
—
（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷）
TK—
(胸苷激酶缺陷）
定向诱变剂的发现具有重要意义。
• 3.突变细胞的筛选与克隆扩增------人工选择培养 基技术 *HAT培养基可筛选保留HGPRT+和TK+细胞 （H:次黄嘌呤，A:氨基喋呤，T:胸腺嘧啶） *含MP(6-巯基嘌呤）和AG(6-杂氮鸟嘌呤）的培养 基可筛选保留HGPRT--细胞。
• 2.哺乳动物克隆繁殖技术的生物学意义：
• 1）是人为创造的超自然的无性繁殖技术，无生
物进化意义*。 • 2）利用动物体细胞核与卵细胞质体杂交，由杂 交体发育成胚体。该技术可以大量复制遗传性状 完全一致的动物个体，这是自然界高等生物有性
繁殖所不能及的。（克隆低等动物70年代就问世
了） • 3）高等动物高分化态的体细胞核基因组，仍可 去分化，重新启动胚胎发育，重现细胞的全能性，
• 1.概念：P219 • *细胞拆合：是把细胞核与胞质分离，然后 用显微操做技术把不同来源细胞质，细胞核配合， 形成有增殖活力核-质杂交细胞。 • *显微操作技术：指在高倍显微镜下，利用显微 操作器进行细胞工程操作的方法。显微操作器是 用来控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械 装置。
• *细胞脱核技术：把细胞核从细胞中分离出来， 获得无核的胞质体和无细胞质的核质体的技术。
• 3.单克隆抗体制备技术路线：P208图6-8 • 目的抗原A • 免疫 x 诱变处理 [ 突变骨髓瘤C] （ 不能分泌抗体 体外增殖旺，可传代 HGPRT- 或TK)
• [致敏小鼠脾C] • (可分泌抗A抗体 • 体外增殖力差 • HGPRT+ ,TK+ ）
细胞融合所获混合C群
小鼠脾C
• HGPRT+ • TK+
• 3.CB法细胞脱核实验：见P221 实验过程。 • 4.显微注射法核移植实验：
• 核移植:是通过显微操作技术将一个细胞的细胞核,移植到去 核的
• 受体 卵母细胞或卵子内,组建成新的重组细胞,然后移植于
•
动物,在其体内发育成一新个体.
• 核移植实验步骤:见P222实验。 • 1）同步化大鼠成纤维细胞（供核C)制备： • 2）从供卵母鼠收集卵母细胞： • 3）卵母细胞的盲吸法去核（获胞质体）： • 4）显微注射法核移植（获核质杂交体） ：P222 图6-11 • 结果分析：p223图6-12
（原理见P191鄂著）
二.细胞融合技术
• 1.细胞杂交（Somatic Cell Hybridization): • 指两个或两个以上的细胞融合成一个杂种细胞 (hybrid cell)的过程。P199 • 2.原理：p203图6-3 • 同或异种C
促融剂
异核体
C分裂
同核体
筛选
聚乙二醇 （c质融合）
• *范例：基因诱变→筛选，扩增突变细胞系。
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细胞杂交→筛选，扩增杂种细胞株。
转基因技术→转基因生殖细胞→转因生物。 克隆动物技术→细胞拆合，核-质杂交→杂交体发育 →克隆动物。 干细胞培育人工器官→分离干细胞→体外培养诱导 目 的组织器官生成→回植体内。 基因敲除技术→从细胞中敲除目的基因→检测效应。
骨髓瘤C
HGPRT或TK-
杂交瘤C
HGPRT+ TK+
同核杂种C
无力传代 自然消除
HAT 筛除
HAT 筛留
杂交瘤细胞克隆培养 （目的抗体鉴定） 杂交瘤单克隆抗体
细胞株（抗A)
冻存留种。 C扩增培养， 杂交瘤C液注入 收集C提取液， 小鼠腹水扩增 获高纯抗体。 获低纯抗体。
四.细胞拆合与显微操作技术
• 1.概念：该技术综合运用了多项细胞生物学方法， 可针对各种有抗原活性的物质制备所需要的特异 抗体，是细胞工程学的一项杰出成就。一旦一种 杂交瘤单克隆抗体细胞系建成，即可长期保存， 大量扩增，用于生产目的抗体。
• 2.原理：用目的抗原致敏的脾细胞（B淋巴细胞） 能分泌特异抗体，但不能在体外长期培养增殖。 骨髓瘤细胞可在体外大量长期增殖，但不能分泌 抗体。将骨髓瘤细胞与脾细胞融合，所获杂交细 胞既可体外大量长期增殖，又可分泌抗体。克隆 扩增的杂交细胞系是能分泌针对单一抗原决定簇 的单克隆抗体。P207