藏鸡蛋卵白蛋白酶解制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性

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酶解大豆乳清蛋白制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性评价

林彦君，刘杨静，曲肖凤，等. 酶解大豆乳清蛋白制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性评价[J]. 食品工业科技，2023，44（20）：230−238. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022120012LIN Yanjun, LIU Yangjing, QU Xiaofeng, et al. Antioxidant Peptides Prepared by Enzymatic Hydrolysis of Whey Soy Proteins and Their Antioxidative Activities in Vitro [J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(20): 230−238. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022120012· 工艺技术 ·酶解大豆乳清蛋白制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性评价林彦君，刘杨静，曲肖凤，杜媛媛，房文硕，尹艺童，李　瑞*（济宁医学院生物科学学院，山东日照 276826）摘　要：为了提高大豆乳清废水中大豆乳清蛋白的应用价值，以大豆乳清蛋白为原料采用酶解法在自制的超声-恒温反应体系中制备抗氧化肽。

以总还原力、DPPH 自由基清除率和羟基自由基清除率为指标，结合单因素实验和响应面法优化大豆乳清蛋白的酶解工艺。

随后，利用超滤法（截留分子量30 kDa ）回收水解液中的抗氧化肽，并以抗坏血酸为参照，评价其体外抗氧化活性。

结果表明：中性蛋白酶和胃蛋白酶组合最适于大豆乳清蛋白的水解；在此基础上，确定的最佳工艺条件为酶-底物比5000 U/g 大豆乳清蛋白、酶解时间6 h 和大豆乳清蛋白浓度9.0 mg/mL ，所得大豆乳清蛋白水解液的DPPH 自由基清除率为62.3%±1.1%。

鸡蛋清卵白蛋白酶解工艺优化及其结构性质

鸡蛋清卵白蛋白酶解工艺优化及其结构性质刘丽莉;王焕;李丹;尹光俊;康怀彬【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2016(037)010【摘要】研究鸡蛋清卵白蛋白的酶解工艺及其结构性质,以水解度为指标,确定最佳酶源为碱性蛋白酶,其水解度为26.55％,显著优于其他蛋白酶(P＜0.05).以碱性蛋白酶酶解鸡蛋清卵白蛋白,采用单因素和五元二次正交旋转试验研究酶解工艺;针对酶解前后卵白蛋白的功能特性进行分析,并采用紫外扫描、傅里叶红外变换光谱、差示扫描量热针对卵白蛋白及其酶解产物进行结构表征.结果发现,碱性蛋白酶酶解鸡蛋清卵白蛋白最佳工艺条件为反应温度52.5℃、反应时间5h、pH 8.25、酶用量5 500 U/g、底物添加量5％,此条件下水解度为27.88％.酶解后产物表面巯基含量降低了3.6 mol/ (L·g),溶解度大幅度提高,起泡性降低了18.18％,泡沫稳定性降低了20.24％,乳化活性指数升高了13.56 m2/g,乳化稳定性提高了10.46％.同时,酶解后的卵白蛋白肽链发生了裂解,有序的二级结构被破坏,暴露出更多氨基酸残基,α-螺旋略有减少,β-转角相应增加,亲水基团也相应的增加.【总页数】8页(P54-61)【作者】刘丽莉;王焕;李丹;尹光俊;康怀彬【作者单位】河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳 471003;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳 471003;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳 471003;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳 471003;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳 471003【正文语种】中文【中图分类】TS253.1【相关文献】1.藏鸡蛋卵白蛋白酶解制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性 [J], 池福敏;水雨航;江帆;刘柳;辜雪冬;罗章2.盐析法快速分离鸡蛋清卵白蛋白 [J], 傅冰;季秀玲;俞汇颖;魏云林3.鸡蛋清蛋白酶解肽和大豆蛋白酶解肽的协同抗氧化活性 [J], 饶胜其;徐美玲;高璐;杨振泉;方维明4.盐析鸡蛋清制取卵白蛋白课外活动实验 [J], 刘琳琳;马青;杨天林5.鸡蛋清卵白蛋白与溶菌酶的两步超滤法分离 [J], 黄群;马美湖;黄茜;耿放;贺梦丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡蛋清蛋白酶解物中抗氧化多肽的纯化与特性描述

《食品化学》, 188（2015）467-472鸡蛋清蛋白酶解物中抗氧化多肽的纯化与特性描述吴健平（笔者）摘要蛋白被认为是一个富含优质蛋白质与各种小分子生物活性肽片段，酶解蛋白法用来释放蛋白中不同的生物活性的小分子肽，这取决于不同的酶在释放这些生物活性肽时有不同的酶活力。

在这项研究中,测定了几种蛋白酶从鸡蛋白中释放抗氧化肽的能力，蛋白酶P是根据抗氧化活性和粗蛋白水解物的消化率而选择。

结合几个净化步骤包括与低分子量截止膜超滤阳离子交换色谱和反相高效液相色谱法等用于净化蛋白酶P的水解产物，来自卵白蛋白的16个抗氧化肽,卵转铁蛋白和半胱氨酸蛋白酶抑制物与有效部位是相隔离的。

这些多肽的氨基酸序列的测定使用LC- MS，短链多肽的自由基吸收能力(ORAC)值用来决定合成多肽。

两个肽AEERYP 和DEDTQAMP(Ala-Glu-Glu-Arg-Tyr-Pro和Asp-Glu-Asp-Thr-Gln-Ala-Me t-Pro)显示ORAC值最高。

这项研究的结果表明,鸡蛋清蛋白富含抗氧化肽，使用酶解纯化技术可将鸡蛋清蛋白作为制备生物活性成分的潜在来源。

关键词：鸡蛋白；酶解；超滤作用；层析分离；抗氧化肽1.背景介绍食源性的生物活性化合物,如生物活性肽,ω- 3脂肪酸,类黄酮、酚类化合物等,是一项主要集中在食品科学领域和营养科学领域的研究。

这些化合物具有抗高血压、抗氧化,抗炎,抗菌,免疫调节和其他生物相关活动，很可能有利于人类的健康和幸福(刘,2004;锅。

赖,Dushenkov & Ho 2009;Sacks等,2006)。

因为氧化应激相关的各种慢性疾病的发生和发展,抗氧化剂已经被普遍的探索，以期成为一个可能降低慢性疾病的风险的治疗物。

尽管生理上控制自由基的生产对许多信号通路和正常功能来说是必不可少的，自由基的形成之间的不平衡和内源性抗氧化系统将诱导氧化损伤生物分子，导致细胞的损伤和疾病(哈利维尔,1994;Pacifici&戴维斯,1994;Sarmadi &伊斯梅尔,2010;Soobrattee,Neergheen,Luximon-Ramma,Aruoma,& Bahorun,2005)。

蛋清蛋白酶解物的抗氧化_抗凝血酶活性及生化特性的研究

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｅｇｇｗｈｉｔｅｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｉｎｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｆｏｕｒｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｓｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ（ＤＨ）ｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｕｓｉｎｇＡｌｃａｌａｓｅ２．４ＬａｎｄＰｒｏｔｅａｓｅＮｂｙｐＨ－ｓｔａｔｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ａｌｓｏ，ｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｉｔｈｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＰｒｏｔｅａｓｅＮｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓａｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆＡｌｃａｌａｓｅｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ，ｗｉｔｈｔｈｅｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ（ＤＨ１５％）ｈａｖｉｎｇｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎａｃｔｉｖｉｔｙ．ＴｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｓｅｖｅｎｅｓｓｅｎｔｉａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｉｔｈＤＨ１５％ａｒｅ４８．１１％ａｎｄ４５．８０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｍｕｃｈｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔ３５．６５％ｏｆｎａｔｉｖｅｅｇｇｗｈｉｔｅｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｗｏｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｉｔｈＤＨ１５％ｈａｖｅｓｉｍｉｌａｒｐｅｐｔｉｄｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｎａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｓｄｕｅｔｏｅｎｚｙｍｅｓｐｅｃｉｅｓｕｓｅｄｉｎｔｈｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｆｏｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇｐｅｐｔｉｄｅｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｅｇｇｗｈｉｔｅ；ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｅｐｔｉｄｅｓ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ；ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ中图分类号：ＴＳ９３６．１６文献标识码：Ａ文章编号：１００２－６６３０（２００８）０６－０２０２－０６

酶解动物蛋白制备抗氧化多肽研究进展

５０～５％，底物浓度比（／）０Ｕｇ水解８。５酶ＥＳ８００／、ｈ在此条件下，解率（Ｈ）２．０，溶解指数水Ｄ达４５％氮
１动物血液蛋白
Ｃａｇ２０）２将猪血红蛋白先用碱性蛋白酶ｈｎ（０７［３Ａｃｌｅ再用复合风味蛋白酶（ｌｖｕｚｍｅ进行水ｌａ，ａｓＦａｏｒｙ）
除能力４．４。根据蛋白构成的分析结果，水解１９％将产物分成３类。高分子量、巾分子量和低分子量。还原能力和铁离子清除能力与高分子量的比例呈正
相关，与低分子量负相关。研究显示，解产物的抗水
是最早研究中使用的制取原料。我国动物蛋白资源丰富，酶法水解动物蛋白不仅能够丰富抗氧化多肽的种类，同时也有利于充分利用畜禽副产品，加其增
附加值。
氧化能力依赖于水解产物的蛋白质构成。于美娟（０７Ｅ用精制木瓜蛋白酶（得活力２０）３３测为３０万个单位）Ａ１３８中性蛋白酶两酶复合水和Ｓ．９解猪血红蛋白的最适条件为：Ｈ值为７５温度为ｐ．，
ＲｅｅｒｈｒｇｅｓｏｆａｉｘｄａｉｅｉｅｒｄｓａｃｐｏｒｓｎｔｏｉｔｖｅｐｐｔｄｅｐｒｐａｅｆｏｎｉａｏｅｎｓｂｙｅｚｍａｃｈｙｏｙｓｓｒｍａｍｌｐｒｔｉｎｙｉｔｄｒｌｉＡｂｓｒｃＡｎｍａｒｔｉｓａｅｒｃｎＣｈｉ．Ｂｅａｓｆｈｖｎｕｔｐｅｐｙｉｌｇｃｌｆｃｉｎ，ｔｅｔａｔｉｌｐｏｅｎｒｉｈｉｎａｃｕｅｏａｉｇｍｌｌｈｓｏｏｉａｕｎｔｏｓｈｉａｔｘｄｔｖｅｔｄｒｍｎｍａｒｔｉｓｂｎｚｍａｉｙｒｌｓｓｈｓｂｅｈｅｅｒｈｈｔｐｔｆｒｍａｙｎｉｉａｉｅｐｐｉｅｆｏａｉｌｐｏｅｎｙｅｙｔｃｈｄｏｙｉａｅｎｔｅｒｓａｃｏｓｏｏｎｏｙａｓＩｈｓａｔｃｅ，ｔｅａｏｅ — ｍｅｔｏｅｎｔｘｄａｉｅｐｅｔｄｓｒｖｅｄｔｏｉｅｔｅｒｔａａｉｅｒ．ｎｔｉｒｉｌｈｂｖｎｉｎｄａｉｉｔｖｐｉｅｗａｅｉｗｅｏｐｒｖｄｈｏｅｉｌｂｓｓｏｃｏｎｒａｉｇｔｅｖｌｅｏｎｍｌｂｆｒｉｃｅｓｎｈａｕｆａｉａｙ —ｐｒｄｃｓｏｕｔ．Ｋｅｏｄａｔｏｉａｉｅｐｐｉｅ；ａｍａｒｔｉｙｗｒｓｎｉｘｄｔｖｅｔｄｎｉｌｐｏｅｎ；ｅｚｍａｉｙｒｌｓｓｎｙｔｃｈｄｏｙｉ

一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010873922.9(22)申请日 2020.08.26(71)申请人杭州佰倍优生物科技有限公司地址 310000 浙江省杭州市江干区庆春东路66-1号1301室-1(72)发明人余钧　(74)专利代理机构北京国贝知识产权代理有限公司 11698代理人柯俊(51)Int.Cl.C07K 14/77(2006.01)C12P 21/06(2006.01)A61K 38/01(2006.01)A61P 37/04(2006.01)A61P 1/16(2006.01)A61K 36/074(2006.01)(54)发明名称一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种卵白蛋白酶解物及其制备方法和应用，该卵白蛋白酶解物由木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶三种酶组合酶解而得，该卵白蛋白酶解物在改善肝功能方面具有较好的效果；本发明将该卵白蛋白酶解物与灵芝提取物进行复配，能够协同增效增强免疫力。

权利要求书1页说明书6页CN 111961129 A 2020.11.20C N 111961129A1.一种卵白蛋白酶解物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)将卵白蛋白粉溶解于蒸馏水中，得到卵白蛋白溶液；(2)将步骤(1)得到的卵白蛋白溶液的pH值调节为7-10，加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和短小芽孢杆菌蛋白酶的混合物，在搅拌状态下进行酶解反应，得到酶解液；(3)将步骤(2)得到的酶解液在90-100℃下灭酶；(4)将灭酶后的酶解液进行离心，收集上清液，将上清液灭菌、浓缩、干燥后得干粉，即为所述卵白蛋白酶解物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中卵白蛋白粉与蒸馏水的质量比为1:1-1:10；优选地，所述卵白蛋白粉与蒸馏水的质量比为1:2.5。

藏鸡蛋卵白蛋白酶解制备抗氧化肽ぜ捌涮逋饪寡趸活性-精品文档

藏鸡蛋卵白蛋白酶解制备抗氧化肽ぜ捌涮逋饪寡趸活性收稿日期：2016-08-03基金项目：西藏自治区自然科学基金（编号：2015ZR-14-30）；国家自然科学基金地区科学基金（编号：31560492）。

藏鸡生活在我国青藏高原海拔2 200～4 100 m的半农半牧区、雅鲁藏布江中游流域河谷区、藏东三江中游高山峡谷区等区域，其生活环境相对封闭，几乎无污染，因此藏鸡蛋具有天然绿色的优势。

巴桑等、陈烽烽等研究表明，藏鸡蛋中粗蛋白质、粗脂肪、铁、锌、钙的含量均高于普通鸡蛋，具有比普通鸡蛋更高的营养价值[1-2]。

藏鸡蛋具有绿色天然、营养价值高等优点，开发利用前景广阔。

卵白蛋白是鸡蛋蛋清中一种重要的蛋白质，占蛋清中蛋白质的50%以上，含人体必需的8种氨基酸，是获得抗氧化肽、抗菌肽、免疫肽、降血压肽等生物活性肽的良好资源[3-6]。

其中，抗氧化肽不?H具有多肽产品的营养作用，还具有抗氧化和清除体内自由基的功能，可增强人体抗衰老、抗疾病的能力[7-8]。

目前，国内外已有关于卵白蛋白抗氧化肽的研究报道。

Davalos等研究发现，采用胃蛋白酶水解卵白蛋白可得到4种抗氧化肽，且4种肽的序列均包含在卵白蛋白序列中[9]。

徐明生系统研究了卵白蛋白的提取和酶解制备抗氧化肽的工艺条件，并首次采用多种抗氧化活性试验，全面研究了鸡蛋卵白蛋白酶解物的抗氧化活性[10]。

沈勇根等用胃蛋白酶水解卵白蛋白，采用超滤、离子色谱、反相高效液相色谱法从卵白蛋白酶解液中分离制备抗氧化肽，得到抗氧化力较强的3个肽[11]。

Chen等研究了不同酶酶解鸡蛋清获得水解物的抗氧化活性，发现木瓜蛋白酶的酶解物具有最强的DPPH自由基清除力[12]。

薛海燕等采用胃蛋白酶水解卵清蛋白，通过单因素和正交试验确定了酶解的最佳条件[13]。

然而目前，有关藏鸡蛋卵白蛋白抗氧化肽的研究尚未见报道。

本试验以藏鸡蛋卵白蛋白为材料，采用碱性蛋白酶水解藏鸡蛋卵白蛋白制备抗氧化肽，探讨最佳的水解条件，同时对其抗氧化活性进行测定，以期为以藏鸡蛋卵白蛋白为原料的抗氧化肽及其他生物活性肽的进一步研究提供依据。

酶解法制备豌豆抗氧化肽及其稳定性的研究

生物活性肽是提高豌豆附加值和扩大应用范围的豌豆蛋白粉加入１Ｌ蒸馏水搅拌均匀，加入１ｍｏｌ／Ｌ
途径之一。豌豆蛋白经过蛋白酶水解后，多肽链被ＮａＯＨ调节ｐＨ至９．０，搅拌３０ｍｉｎ。将该悬浮液
ｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅＤＰＰＨｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｒａｔｅａｓａｎｉｎｄｅｘ．Ｔｈｅｅ虢ｃｔｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．
ｐＨａｎｄｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｄｉｇｅｓｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｅａａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐｅｐｔｉｄｅｓｗａｓｒｅｓｅａｒｃｈｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＤＰＰＨｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｒａｔｅｏｆｐｅａａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
豆的２３％～２５％Ｊ，豌豆蛋白是一种比较理想的植（３２６３６．３６Ｕ／ｇ）、胰蛋白酶（１２７４５４．５５Ｕ／ｇ）：
物蛋白，组成比较平衡，特别是赖氨酸的含量高达诺维信有限公司；ＤＰＰＨ（１，１一二苯基．２．三硝基
１．５％Ｊ。目前，我国对豌豆的深加］二主要是利用其苯肼）：Ｓｉｇｍａ公司；其他试剂均为分析纯。
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｅａｐｒｏｔｅｉｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐｅｐｔｉｄｅ；ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
中图分类号：ＴＳ２０１．１文献标识码：Ａ文章编号：１００８—９５７８（２０１８）０１—００１６—０３
豌豆是优良的植物蛋Ｆ｛资源，其蛋白质占干豌司；碱性蛋白酶（２０９４５４．５５Ｕ／ｍＬ）、胃蛋白酶

酶解卵白蛋白

酶解卵白蛋白运用当代新科技把卵清开展生物化学酶解，获得具备很强生物活性的小分子多肽便是酶解卵白蛋白。

活性多肽因构成构造的不一样而对身体具备不一样的作用，归纳起來为抑止、激话、修补和推动。

抑止体细胞变病，提高人体免疫力；激话体细胞特异性，消除对身体危害的氧自由基；修补身体早已变病的体细胞，改进基础代谢；推动身体蛋白、酶和水果酵素的生成与管控。

下边就来了解一下有关的专业知识。

生理学特异性与应用研究酶解卵白蛋白活性多肽做为一种生物活性肽，具备抗突然变化、防电磁辐射、缓解疲劳、保护肝脏、抗氧化性、降低血脂、降血压等内分泌系统，在食品、护肤品、诊疗、化工厂等行业有极大的开发设计和运用使用价值。

其关键的生理学特异性作用为：抗突然变化身体时时刻刻都会产生突然变化每一个平常人的体细胞内，都存有一种独特的遗传基因—癌基因，在一般状况下，它是关掉的、沉寂的，或是是以低作用、低激活状态下存有的。

但是，假如人到自然环境的上千百种污染物中遭受例如有机化学因素、化肥、添加剂、添加剂和诊疗上X射线、Y放射线、微波加热等损害，身体的DNA分子便会遭受危害，它的分子式的转变会造成遗传特性的改变，这就是说白了的“突然变化”。

突然变化是病变（肿瘤、败血症）的原曲，突然变化会激话体细胞内的癌基因，使体细胞不断瓦解和繁衍，进而产生恶变肿瘤。

酶解卵白蛋白活性多肽抗突然变化原理酶解卵白蛋白小分子多肽能持续消除人体内的致突然变化因素，大大减少突然变化的几率；活性多肽进到身体，能合理地持续激话免疫监视系统中的T体细胞、B体细胞和NK体细胞，NK体细胞是身体免疫监视系统职高杀肿瘤细胞的体细胞，就可以鉴别、捕获、吞食和破坏力肿瘤细胞，避免病变。

抗氧化性防辐射酶解卵白蛋白活性多肽不但能够立即捕捉不一样管理体系造成的特异性氧自由基，还能够根据激话机体内降低胆固醇的抗氧化酶，抑止空气氧化酶的活性，及其鳌合金属离子等多种多样方式来阻隔过氧化物反映。

研究表明活性多肽构造与抗氧化高矮有密切相关。

响应曲面法优化卵白蛋白抗氧化肽制备工艺研究

响应曲面法优化卵自蛋白抗氧化肽制备工艺研究
徐明生，戴浩亮，吴少福，华英杜
（江西农业大学食品科学与工程学院，江西南昌３０４）３０５摘要：为优化酶解卵白蛋白制备抗氧化肽的工艺条件。以酶解物羟自由基（ＨＯ・）清除率为指标，单因素实在验的基础上选取实验因素和水平，根据Ｂｘ—Ｂｈｋｎ设计原理采用三因素三水平的响应面分析法，ｏｅｎｅ研究底物浓度，添加量和水解时间工艺的影响，酶对酶解条件进行优化研究。结果胃蛋白酶酶解卵白蛋白制备抗氧化肽的最优条件为：物浓度３２％、底．４胃蛋白酶添加量１３．２Ｕｇ白、１３２１／蛋水解时间７８ｈ．。酶解液的羟自由基清
ｔｐｔｚｈｅｔｃｎｃｌｐｒｍｅｅｓｏｏｉｅｔｅｈｉａａａｔｒ．Ｔｈｐｔｍｄｏｙｉｏｄｉｏｓｗｅｅｓｂｔａｅｃｎｅｔａｉｎ３．４％ｍｉｅｏｉｍｕｈｙｒｌｔｃｎｔｎｒｕｓｒｔｏｃｎｒｔｏ２ｃｉ
江西农业大学学报
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α-乳白蛋白酶解物体外抗氧化及活性氧清除作用

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｉｎｖｉｔｒｏａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｃａｐａｃｉｔｙａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔａｇａｉｎｓｔｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｊｕｒｙｉｎＨ２０２一ｗｅａｔｅｄＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｏｆｂｏｖｉｎｅ
ＯＬ—ｌａｃｔａｌｂｕｍｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｕｓｉｎｇａｌｋａｌｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅ．
ｖ，、Ⅳ、Ⅳ．ｃｈｉｎａｄａｉｒｙ．ｎｅｔ
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中国乳品工业
￣ｑ／ｒｙＩＮＤＵＳＴＲＹ
０Ｌ。。—。乳白蛋白酶解物体外抗氧化及活性氧清除作用
吴相佚，宋罄然，刘斯，李天歌，毛学英
（中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京１０００８３）
０引言
氧化应激是指机体在有害刺激条件下产生活性氧自由基，使机体处于易损状态，从而引起一系列疾病，如肿瘤、老年性痴呆症、炎症、动脉粥样硬化、糖尿病等ｎ。寻求天然、安全、高效的食源抗氧化功能因子，改善氧化应激和抗氧化防御之间的不平衡，营养干预氧化损伤具有重要意义。天然乳源抗氧化肽可通过清除自由基、螯合金属离子或直接消除活性氧等方式发挥其功能作用，从而提高机体的抗氧化能力，缓解氧化应激状态。。一乳白蛋白作为乳清蛋白中的一种重要组分，不仅能为机体提供丰富的营养，而

一种具有抗氧化性活性的乳清蛋白活性肽及其制备方法[发明专利]

(10)申请公布号 CN 101928742 A(43)申请公布日 2010.12.29C N 101928742 A*CN101928742A*(21)申请号 200910053596.0(22)申请日 2009.06.23C12P 21/06(2006.01)C07K 2/00(2006.01)A23L 1/305(2006.01)A61K 8/64(2006.01)A61K 38/01(2006.01)A61P 39/06(2006.01)(71)申请人光明乳业股份有限公司地址201103 上海市吴中路578号(72)发明人刘志东王荫榆郭本恒刘振民吴正鈞周方方(74)专利代理机构上海智信专利代理有限公司31002代理人薛琦朱水平(54)发明名称一种具有抗氧化性活性的乳清蛋白活性肽及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种具有抗氧化活性的乳清蛋白活性肽及其制备方法。

该制备方法包括以下步骤：(1)将蛋白酶加入乳清蛋白溶液中进行酶解，其中酶解温度为40～60℃，pH6.0～8.0；(2)酶解完成后，灭活蛋白酶；(3)将酶解液中未水解的乳清蛋白沉淀去除，取上清液；(4)上清液用截留分子量≤10,000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集分子量≤10,000道尔顿的肽的滤液；(5)滤液浓缩；(6)浓缩液脱盐；(7)浓缩脱盐后的溶液，然后冷冻干燥。

本发明获得的乳清蛋白活性肽具有显著的抗氧化功能特性且功能特性专一，质量稳定，可广泛应用于食品、化妆品和医药等领域。

其生产工艺简单，便于规模化生产，乳清蛋白原料利用率高，生产成本低。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页说明书 8 页附图 1 页权利要求书CN 101928742 A1/1页1.一种具有抗氧化性活性的乳清蛋白活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将蛋白酶加入乳清蛋白溶液中进行酶解，其中酶解温度为40～60℃，pH6.0～8.0；(2)酶解完成后，灭活蛋白酶；(3)将酶解液中未水解的乳清蛋白沉淀去除，取上清液；(4)上清液用截留分子量≤10,000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集分子量≤10,000道尔顿的肽的滤液；(5)滤液浓缩；(6)浓缩液脱盐；(7)浓缩脱盐后的溶液，然后冷冻干燥。

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定。水解度的计算公式为：
水解度
=
氨基态氮总氮
×
100
%
。采用
甲醛滴定法［10］进行氨基态氮测定，采用凯氏定氮法［17］进行
总氮测定。
水平
1 2 3
表 1 卵白蛋白碱性蛋白酶酶解试验因素水平
因素
A：底物质量分数（ % ）
2 3 4
B：酶解时间（ h）
3 4 5
C：加酶量（ U /g）
7 000 8 000 9 000
器（合肥金尼克机械制造有限公司），ZD － F12 型冷冻干燥机
（郑州比朗仪器有限公司），UV － 2102 PCS 型紫外可见分光
光度计［尤尼柯（上海）仪器有限公司］，99 － 1 型大功率磁力
搅拌器（常州国华电器有限公司）。
1． 3 方法
1． 3． 1 卵白蛋白的制备按照傅冰等的方法［14］从藏鸡蛋中
关键词：藏鸡蛋；卵白蛋白；多肽；抗氧化活性；碱性蛋白酶中图分类号： TS253． 1 文献标志码： A 文章编号： 1002 － 1302（ 2017） 03 － 0144 － 04
藏鸡生活在我国青藏高原海拔 2 200 ～ 4 100 m 的半农半高等优点，开发利用前景广阔。
牧区、雅鲁藏布江中游流域河谷区、藏东三江中游高山峡谷区
自然科学基金地区科学基金（编号： 31560492）。
抗氧化肽，且 4 种肽的序列均包含在卵白蛋白序列中［9］。徐
作者简介：池福敏（ 1985—），女，硕士研究生，讲师，主要从事高原特色食品加工研究。E － mail： chifumin2008@ 163． com。
明生系统研究了卵白蛋白的提取和酶解制备抗氧化肽的工艺条件，并首次采用多种抗氧化活性试验，全面研究了鸡蛋卵白
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［15］国家烟草质量监督检验中心．烟草及烟草制品总植物碱的测定连续流动法： YC / T 468—2013［S］．北京：中国标准出版社，
量：分别设定酶的添加量为 6 000、7 000、8 000、9 000、
10 000 U / g，在底物质量分数为 3% 、时间为 4 h 的条件下进
行酶解。
在单因素试验结果的基础上，对 3 个因素进行 L9 （ 34 ）正
交设计试验（表 1），确定最佳酶解参数。
1． 3． 3 检测指标 O2－·清除率采用任娜等的方法［16］进行测
1． 3． 4 最优组合验证对“1． 3． 2”节正交试验中最优组合得到的产物进行验证，检测指标包括O2－·清除率、DPPH 自由
基清除率、·OH 清除力、还原力、抗脂质过氧化能力。其中， O2－·清除率采用任娜等的方法［16］进行测定，DPPH 自由基清除率、抗脂质过氧化能力采用秦婧的方法［15］进行测定，· OH 清除力采用杨红澎等的方法［18］进行测定，还原力采用许效群等的方法［19］进行测定。
效果的影响。单因素试验中各因素的具体情况如下。底物质
量分数：分别设定底物质量分数为 2% 、3% 、4% 、5% 、6% ，在
酶解时间为 4 h、加酶量为 8 000 U / g 的条件下进行酶解。酶
解时间：分别设定水解时间为 2、3、4、5、6 h，在底物质量分数
为 3% 、加酶量为 8 000 U / g 的条件下进行酶解。酶的添加
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AL104 型电子分析天平［梅特勒－托利多仪器（上海）有
限公司］，UPH － II － 10L 型实验室超纯水机（成都优越科技
有限公司），电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司），
Ｒ134a 型冷冻离心机（德国艾本德股份公司），KPN 型凯氏定
氮仪（浙江托普仪器有限公司），JK － 500DB 型数控超声清洗
其中，抗氧化肽不仅具有多肽产品的营养作用，还具有抗氧化和清除体内自由基的功能，可增强人体抗衰老、抗疾病的能力［7 － 8］。
收稿日期： 2016 － 08 － 03
目前，国内外已有关于卵白蛋白抗氧化肽的研究报道。
基金项目：西藏自治区自然科学基金（编号： 2015ZＲ－ 14 － 30）；国家 Davalos 等研究发现，采用胃蛋白酶水解卵白蛋白可得到 4 种
櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄
质量较好。
［9］梁贵安，彭金辉，苏四清，等． 84 kW 微波烟梗膨胀生产试验装置
参考文献：
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2 结果与分析
2． 1 碱性蛋白酶水解单因素试验结果 2． 1． 1 底物质量分数对酶解效果的影响由图 1 可知，随着底物质量分数的增加，酶解产物的 O2－· 清除率先逐渐上升，在 3% 时达到最大值后下降，此后又逐渐上升，整体呈现不规则的形式。随着底物质量分数的增加，酶解产物的水解度则呈先增加、后减小的趋势，当底物质量分数为 3% 时水解度最大。综合两者进行分析，3% 为最佳的底物质量分数，此时 O2－·清除率为 50． 35% ，水解度为 59． 64% 。
提取卵白蛋白，制成藏鸡蛋卵白蛋白冻干粉，保存备用。
1． 3． 2 碱性蛋白酶酶解试验设计参照秦婧的前处理方
法［15］，主要对碱性蛋白酶水解藏鸡蛋卵白蛋白时的底物质量
分数、水解时间、酶的添加量进行单因素试验和正交试验，通
过测定酶解液的 O2－· 清除率和水解度来判断各因素对酶解
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卵白蛋白是鸡蛋蛋清中一种重要的蛋白质，占蛋清中蛋
等区域，其生活环境相对封闭，几乎无污染，因此藏鸡蛋具有白质的 50% 以上，含人体必需的 8 种氨基酸，是获得抗氧化
天然绿色的优势。巴桑等、陈烽烽等研究表明，藏鸡蛋中粗蛋肽、抗菌肽、免疫肽、降血压肽等生物活性肽的良好资源［3 －6］。
白质、粗脂肪、铁、锌、钙的含量均高于普通鸡蛋，具有比普通鸡蛋更高的营养价值［1 － 2］。藏鸡蛋具有绿色天然、营养价值
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江苏农业科学 2017 年第 45 卷第 3 期
47． 11% ，水解度为 49． 83% 。 2． 1． 3 加酶量对酶解效果的影响由图 3 可知，随着酶添加量的增加，酶解产物的 O2－· 清除率和水解度均呈先增加、后减小的趋势，两者均在加酶量为 8 000 U / g 时达到最大值，此时O2－·清除率为 55． 86% ，水解度为 55． 31% 。
2． 2 碱性蛋白酶正交试验结果碱性蛋白酶酶解卵白蛋白正交试验结果见表 2。O2－·清
［7］周森，傅怀云，常跃．烟梗微波膨胀预处理工艺的探讨［J］．
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连续流动法： YC / T 161—2002 ［S］．北京：中国标准出版
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社，2002．
江苏农业科学 2017 年第 45 卷第 3 期
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蛋白酶解物的抗氧化活性［10］。沈勇根等用胃蛋白酶水解卵白蛋白，采用超滤、离子色谱、反相高效液相色谱法从卵白蛋白酶解液中分离制备抗氧化肽，得到抗氧化力较强的 3 个肽［11］。Chen 等研究了不同酶酶解鸡蛋清获得水解物的抗氧化活性，发现木瓜蛋白酶的酶解物具有最强的 DPPH 自由基清除力［12］。薛海燕等采用胃蛋白酶水解卵清蛋白，通过单因素和正交试验确定了酶解的最佳条件［13］。然而目前，有关藏鸡蛋卵白蛋白抗氧化肽的研究尚未见报道。本试验以藏鸡蛋卵白蛋白为材料，采用碱性蛋白酶水解藏鸡蛋卵白蛋白制备抗氧化肽，探讨最佳的水解条件，同时对其抗氧化活性进行测定，以期为以藏鸡蛋卵白蛋白为原料的抗氧化肽及其他生物活性肽的进一步研究提供依据。