ms培养基配方

1 实验八 MS培养基的配制和灭菌 一、实验目的： 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。 二、实验材料： 天平、牛角匙、量筒、烧杯、搅拌机、胶桶、组培瓶、6种母液、白沙糖、活性炭、卡拉胶。 三、方法步骤 1、母液配制 大量元素(母液Ⅰ) mg／L 100ml。 (2) 微量元素(母液Ⅱ) (3) 铁盐(母液Ⅲ) (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(2，4-D，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为10倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。 其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。 母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。 各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。 2、培养基配制 （1）配制培养液用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为100 ml，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各10ml。再取2，4-D 10ml、NAA 2ml，与各种母液一起放入烧杯中。 （2）称取54g卡拉胶；300g蔗糖；活性炭1g。 （3）在胶桶中加入规定量的各种母液，包括生长调节物质。 （4）加水定容至1升，开搅拌机，搅匀混合液。定容至10升，搅匀。 2 （5）向母液混合物加入白沙糖，继续搅拌；然后停一下搅拌机再加卡拉胶，开搅拌机混匀；接着再停搅拌机加活性炭，开搅拌机搅匀。 （6）调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.4～7.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8) （7）将培养基分装到所选用的培养容器中，约30ml/瓶。 （8） 盖住瓶口 （9）灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 ℃下，灭菌20 min。 灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。 四、分析 1.MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来。另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累。 2. 在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分。例如能用卡拉胶就不用琼脂。 3.用搅拌机比较方便。但要人工不好，分配溶液缺乏量化。 4.加入活性炭可使培养基变黑，有利于离体生根，还可以降低分泌物的毒害作用。 3 附：MS培养基配方： 成分 分子量 使用浓度 (mg/L) 大量元素（母液Ⅰ） 硝酸钾 101.11 1900 硝酸铵 80.04 1650 磷酸二氢钾 136.09 170 硫酸镁 246.47 370 氯化钙 147.02 440 微量元素（母液Ⅱ） 碘化钾 166.01 0.83 硼酸 61.83 6.2 硫酸锰 223.01 22.3 硫酸锌 287.54 8.6 钼酸钠 241.95 0.25 硫酸铜 249.68 0.025 氯化钴 237.93 0.025 铁盐（母液Ⅲ） 乙二胺四乙酸二钠 372.25 37.3 硫酸亚铁 278.03 27.8 有机成分（母液Ⅳ） 肌醇 100 甘氨酸 2 盐酸硫胺素 VB1 0.1 盐酸吡哆醇 VB6 0.5 烟酸 VB5 或 VPP 0.5 蔗糖 342.31 30g /L 琼脂 7 g /L 文 - 汉语汉字 编辑词条 文，wen，从玄从爻。天地万物的信息产生出来的现象、纹路、轨迹，描绘出了阴阳二气在事物中的运行轨迹和原理。 4 故文即为符。上古之时，符文一体。 古者伏羲氏之王天下也，始画八卦，造书契，以代结绳(爻)之政，由是文籍生焉。--《尚书序》 依类象形，故谓之文。其后形声相益，即谓之字。--《说文》序》 仓颉造书，形立谓之文，声具谓之字。--《古今通论》 (1) 象形。甲骨文此字象纹理纵横交错形。"文"是汉字的一个部首。本义:花纹;纹理。 (2) 同本义 [figure;veins] 文，英语念为:text、article等，从字面意思上就可以理解为文章、文字，与古今中外的各个文学著作中出现的各种文字字形密不可分。古有甲骨文、金文、小篆等，今有宋体、楷体等，都在这一方面突出了"文"的重要性。古今中外，人们对于"文"都有自己不同的认知，从大的方面来讲，它可以用于表示一个民族的文化历史，从小的方面来说它可用于用于表示单独的一个"文"字，可用于表示一段话，也可用于人物的姓氏。 折叠编辑本段基本字义 1．事物错综所造成的纹理或形象：灿若～锦。 2.刺画花纹：～身。 3．记录语言的符号：～字。～盲。以～害辞。 4．用文字记下来以及与之有关的：～凭。～艺。～体。～典。～苑。～献（指有历史价值和参考价值的图书资料）。～采（a．文辞、文艺方面的才华；b．错杂艳丽的色彩）。 5．人类劳动成果的总结：～化。～物。 6．自然界的某些现象：天～。水～。 7．旧时指礼节仪式：虚～。繁～缛节（过多的礼节仪式）。 8．文华辞采，与“质”、“情”相对：～质彬彬。 9．温和：～火。～静。～雅。 10．指非军事的：～职。～治武功（指礼乐教化和军事功绩）。 11．指以古汉语为基础的书面语：552～言。～白间杂。 12．专指社会科学：～科。 13．掩饰：～过饰非。 5 14．量词，指旧时小铜钱：一～不名。 15．姓。 16． 皇帝谥号，经纬天地曰文；道德博闻曰文；慈惠爱民曰文；愍民惠礼曰文；赐民爵位曰文；勤学好问曰文；博闻多见曰文；忠信接礼曰文；能定典礼曰文；经邦定誉曰文；敏而好学曰文；施而中礼曰文；修德来远曰文；刚柔相济曰文；修治班制曰文；德美才秀曰文；万邦为宪、帝德运广曰文；坚强不暴曰文；徽柔懿恭曰文；圣谟丕显曰文；化成天下曰文；纯穆不已曰文；克嗣徽音曰文；敬直慈惠曰文；与贤同升曰文；绍修圣绪曰文；声教四讫曰文。如汉文帝。 折叠编辑本段字源字形 字源演变与字形比较 折叠编辑本段详细字义 〈名〉 1．右图是 “文”字的甲骨文图片，资料来源：徐无闻主编：《甲金篆隶大字典》，四川辞书出版社。1991年7月第一版。 “文”字的甲骨文字绘画的像一个正面的“大人”，寓意“大象有形”、“象形”；特别放大了胸部，并在胸部画了“心”，含义是“外界客体在心里面的整体影像、整体写真、整体素描、整体速写”。 许慎《说文解字》把“文”解释为“错画也”，意思是“对事物形象进行整体素描，笔画交错，相联相络，不可解构”，这与他说的独体为文、合体为字的话的意思是一致的。“说文解字”这个书名就表示了“文”只能“说”，而“字”则可“解”的意思。“文”是客观事物外在形象的速写，是人类进一步了解事物内在性质的基础，所以它是“字”的父母，“字”是“文”的孩子。“文”生“字”举例（以“哲”为例）：先对人手摩画，其文为“手”；又对斧子摩画，其文为“斤”。以手、斤为父母，结合、生子，其子就是“折”（手和斤各代表父母的基因）。这个“折”就是许慎所谓的“字”。“字”从宀从子，“宀”表示“独立的房子”，子在其中，有“自立门户”的意思。故“字”还能与“文”或其他“字”结合，生出新“字”来。在本例，作为字的“折”与作为文的“口”结合，就生出了新的字“哲”。 2． 同本义 [figure;veins] 文，错画也。象交文。今字作纹。——东汉·许慎《说文》 五章以奉五色。——春秋·左丘明《左传·昭公二十五年》。注：“青与赤谓之文，赤与白谓之章，白与黑谓之黼，黑与青谓之黻。” 6 美于黼黼文章。——《荀子·非相》 茵席雕文。——《韩非子·十过》 织文鸟章，白旆央央。——《诗·小雅·六月》 斑文小鱼。——明· 刘基《诚意伯刘文成公文集》 3．又如：文驾（彩车）；文斑（杂色的斑纹）；文旆（有文彩的旗帜）；文绣（绣有彩色花纹的丝织品；刺花图案）；文织（有彩色花纹的丝织品）；文鳞（鱼鳞形花纹）。 4．字，文字（“文”，在先秦时期就有文字的意思，“字”，到了秦朝才有此意。分别讲，“文”指独体字；“字”指合体字。笼统地说，都泛指文字。） [character] 饰以篆文。——南朝宋·范晔《后汉书·张衡传》 分文析字。——东汉·班固《汉书·刘歆传》 夫文，止戈为武。——《左传·宣公十二年》 距洞数百步，有碑仆道，其文漫灭。——王安石《游褒禅山记》 文曰“天启壬戌秋日”。——明· 魏学洢《核舟记》 文曰“初平山尺”。 5．又如：甲骨文；金文；汉文；英文；文迹（文字所记载的事迹）；文书爻（有关文字、文凭之类的卦象）；文异（文字相异）；文轨（文字和车轨）；文狱（文字狱）；文钱（钱。因钱有文字，故称）；文状（字据，军令状）；文引（通行证；路凭）；文定（定婚）。 6．文章（遣造的词句叫做“文”，结构段落叫做 “章”。） [literary composition] 故说诗者不以文害辞。——《孟子·万章上》 好古文。——唐· 韩愈《师说》 属予作文以记之。——宋· 范仲淹《岳阳楼记》 能述以文。——宋· 欧阳修《醉翁亭记》 摘其诗文。——清· 纪昀《阅微草堂笔记》 7．又如：文价（文章的声誉）；文魔（书呆子）；文会（旧时读书人为了准备应试，在一起写文章、互相观摩的集会）；文移（旧时官府文书的代称）；文雄（擅长写文章的大作家）；文意（文章的旨趣）；文义（文章的义理）；文情（文章的词句和情思）；本文（所指的这篇文章）；作文（写文章；学习练习所写的文章）； 7 文魁（文章魁首）；文价（文章的声价）；文什（文章与诗篇）。 8．美德；文德 [virtue] 圣云继之神，神乃用文治。——杜牧《感怀诗一首》 9．又如：文丈（对才高德韶的老者的敬称）；文母（文德之母）；文武（文德与武功）；文命（文德教命）；文惠（文德恩惠）；文德（写文章的道德）；文薄（谓文德浅薄）；文昭（文德昭著）。 10.文才；才华。亦谓有文才，有才华 [literary talent] 而文采不表于后世也。——汉· 司马迁《报任安书》 11．又如：文业（才学）；文英（文才出众的人）；文采风流（横溢的才华与潇洒的风度）；文郎（有才华的青少年）；文彦（有文才德行的人）；文通残锦（比喻剩下不多的才华）。 12．文献，经典；韵文 [document;classics;verse] 儒以文乱法。——《韩非子·五蠹》 言必遵修旧文而不穿凿。——《说文解字·叙》 13．辞词句。亦指文字记载 [writings;record]。如：文几（旧时书信中开头常用的套语。意为将书信呈献于几前）；文倒（文句颠倒）；文过其实（文辞浮夸，不切实际）；文义（文辞）；文辞（言词动听的辞令）；文绣（辞藻华丽）。 14．自然界的某些现象 [natural phenomenon] 经纬天地曰文。——《左传·昭公二十八年》 15．又如：天文；地文；水文；文象（日月星辰变化的迹象）；文曜（指日月星辰；文星）；文昌（星座名）。 16．文治；文事；文职。与“武”相对。 [achievements in culture and education；civilian post] 文能取胜。——《史记·平原君虞卿列传》 文不能取胜。 文武并用。——唐· 魏征《谏太宗十思疏》 精神折冲于千里，文武为宪于万邦。――明《袁可立晋秩兵部右侍郎诰》 17．又如：文臣，文吏（文职官吏）；文席（教书先生的几席）；文品（文官的品阶）；文帅（文职官员出任或兼领统帅）；文烈（文治显赫）；文员（文职吏员）；文阶（文职官阶）；文道（文治之道）；文业（文事）；文僚（文职官吏）。