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本科毕业设计（论文）说明书PCR生物仪控温系统设计学院理学院专业光信息科学与技术学生姓名姜天林指导教师姜小波程静提交日期2010年6月5日华南理工大学毕业设计（论文）任务书兹发给理学院06级光电一班学生姜天林毕业设计（论文）任务书，内容如下：1.毕业设计（论文）题目：PCR生物仪控温系统设计2.应完成的项目：（1）开发相应的控制电路，pt100温度测量电路, 加热器驱动电路，电源，PID控制算法；采用单片机做为系统核心，采用模块化设计，整个系统包括一个主MCU模块和一个或者多个从MCU模块；（2）一个从MCU可以同时控制四个加热模块（可以考虑多个单片机核心）；（3）每块从MCU模块为一独立电路，通过插拔或者连线方式与主MCU 模块连接，可以不支持热插拔；（4）每次系统启动，巡检从MCU模块的数量和连接状态（是否连接正常），也检查每个从MCU模块中的加热模块数量和状态（是否能够正常），状态不正常的从MCU模块和加热模块编号禁止显示或者灰色处理，程序界面禁止对该模块处理；(5)根据从MCU的性能（计算速度）决定每个从MCU模块可以驱动加热器的数量；(6)对温度控制的理论精度小于0.1℃，实际控温精度达到 0.1℃（恒温工作状态下，温度传感器测量的温度在设定温度上下波动范围小于0.1℃），建议采用PID/PWM算法；(7)在模块降温阶段，控制电路能提供一个控制信号，驱动加热模块的冷却风扇，达到所需温度时，风扇停止工作（四个模块，对应四个散热风扇）；(8)当某个模块工作时，面板上对应的LED灯亮（绿色）。
3.参考资料以及说明：（1）PCR芯片控温系统研究，徐静平，黎沛涛，甘侠林，钟德刚（2）PCR生物仪项目开发说明书（3）飞阳公司PCR生物仪控制功能框图（4）Luminary半导体ARM微控制器选型指南（5）《IAR 5.11使用指南》(EasyARM1138)（6）EasyARM1138——内嵌USB仿真器的Cortex-M3开发板（说明书）（7）4.本毕业设计（论文）任务书于2010年3月10日发出，应于2010年6月11日前完成，然后提交毕业考试委员会进行答辩。
利用微滴数字PCR方法快速分析转基因玉米中外源基因的拷贝数姜志军;江颖;徐摇光;张立全;张晓东【摘要】以玉米自交系501幼胚为受体材料,首先将来自球形节杆菌的EPSPS基因(G23V)按玉米密码子偏爱性进行优化与人工合成,并且将其克隆到表达载体pBAC9200中;然后利用农杆菌介导法将质粒载体转入玉米自交系501的幼胚中.经过愈伤诱导、草甘膦抗性筛选和分化培养最终获得14株转化再生植株.经PCR、RT-PCR检测表明,其中5株目的基因G23V-EPSPS稳定整合且在转录水平获得表达.随后,利用微滴数字PCR技术对外源基因拷贝数进行了检测分析,分析结果表明在5株阳性转基因植株中,外源基因G23V-EPSPS拷贝数分别为0.12、1.0、0.9、1.89和0.66,介于0~2之间.成功建立了草甘膦抗性基因G23V-EPSPS在玉米中的遗传转化体系,为以新型高抗草甘膦G23V-EPSPS基因作为转基因玉米筛选标记基因奠定了基础;而且以微滴数字PCR技术代替传统的Southern Blot简便快速的完成外源基因拷贝数的分析,为微滴数字PCR技术在转基因外源基因拷贝数检测上的广泛应用做了初步的探索.【期刊名称】《生物技术进展》【年(卷),期】2016(006)004【总页数】7页(P288-294)【关键词】转基因玉米;G23V-EPSPS基因;抗草甘膦;ddPCR【作者】姜志军;江颖;徐摇光;张立全;张晓东【作者单位】北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心,北京100097;首都师范大学生命科学学院,北京100037;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心,北京100097;首都师范大学生命科学学院,北京100037【正文语种】中文玉米(Zea mays L.)是世界三大粮食作物之一，在农业、畜牧业和工业中占据重要地位，全球对玉米的需求量正在不断攀升。
中国农业科技导报,2009,11(6):30-36Journa l o f Ag ricu ltura l Sc ience and T echno l ogy收稿日期:2009-03-25;修回日期:2009-10-28基金项目:国家863计划项目(2006AA10A111,2007AA10Z119);国家转基因重大专项(2008ZX0809-001);/十一五0国家科技支撑计划项目(2007BAD59B02)资助。
作者简介:胡瑞波,博士研究生,研究方向为植物发育分子生物学。
E-m ai:l rayhu@yahoo .cn 。
通讯作者:傅永福,研究员,主要研究方向为植物发育分子生物学。
Te:l 010-********;E -ma i :l f u f u19c n@163.co m植物实时荧光定量PCR 内参基因的选择胡瑞波, 范成明, 傅永福(中国农业科学院作物科学研究所,国家农作物基因资源与遗传改良重大科学工程,北京100081)摘 要:实时荧光定量RT-PCR (rea -l ti m e quantitati ve reverse transcripti on PCR,qRT-PCR )具有定量准确、灵敏度高和高通量等特点,已被广泛应用于基因的表达分析。
常规q RT-PCR 采用相对定量进行分析,其关键步骤是选择合适的稳定内参基因进行校正和标准化。
持家基因被广泛用作内参基因,但在所有生理条件下均稳定表达的理想内参基因并不存在。
大多数传统内参基因已不能满足qRT-PCR 准确定量的要求。
基于基因芯片表达数据和EST 数据库并结合qRT-PCR,可以筛选稳定性好的新的内参基因。
简要综述了植物qRT-PCR 内参基因的研究进展,并就内参基因的选择中应注意的问题进行了探讨。
关键词:实时荧光定量RT -PCR;内参基因;ge N o r m;基因表达中图分类号:Q 789 文献标识码:A 文章编号:1008-0864(2009)06-0030-07R eference G ene Selecti on i n P l ant R ea-l ti m e QuantitativeR everse Transcri pti on PCR (q RT -PCR )HU Ru-i bo ,FAN Cheng -m i n g ,F U Yong -fu(Instit u t e of C rop Science ,N ati on alKey Facilit y of C rop Gen e Res ou rce and Genetic I m prove m en t ,Ch i n ese Acade m y ofAgricultura lS ci en ces ,B eiji ng 100081,Ch i na)Abstract :R ea-l ti m e quantitati v e RT-PCR (q RT-PCR )techno l ogy ,w ith quantitati ve accuracy ,h i gh sens i tiv it y andhi gh -throughput character i sti cs ,has been w i de l y used in gene expression analysis .Based on t he re l a tive quan tita ti ve ana l ys i s ,q RT-PCR data must be norma li zed w ith one o r mo re proper and stab le i n ternal reference genes .H ouse -keepi ng genes are custo m ar il y used as endogenous references for re lati ve quan tificati on .But no t a si ng le g ene can act as a un i v ersal reference reported so far .M ost o f the trad iti ona l housekeepi ng genes a re unab le to ensure accurate norma li zati on i n q RT-PCR.Based on t he trem endous gene -chip expressi on da ta and public deposited EST data ,ne w reference genes w ith superior stab ilit y w ere selected and ver ifi ed w ith q RT-PCR.T he research progress of reference genes in plant q RT-PCR w as rev ie w ed and aspects t o be consi dered i n f u t ure reference gene se lecti on were a lso discussed .K ey words :rea-l ti m e quanti tati ve reverse transcr i pti on PCR;reference genes ;ge N o r m;gene expression实时荧光定量RT-PCR (rea-l ti m e quantitative reverse transcri p ti o n PCR,qRT-PC R )是在传统PCR 技术基础上发展起来的一种新的核酸定量技术,具有定量准确、灵敏度高、重复性好、高通量等特点,已被广泛应用于基因的表达分析[1,2]。
半定量RT-PCR法分析猪肌肉组织细胞谷胱甘肽过氧化物酶mRNA表达水平徐春兰;汪以真【摘要】细胞谷胱甘肽过氧化物酶(cGPX)是动物体内一种重要的抗氧化酶.本实验室构建一优化的半定量RT-PCR法,以18s rRNA为内标,研究猪肌肉组织中cGPX 基因 mRNA表达水平.提取猪肌肉组织总RNA,经反转录后进行扩增,先寻求PCR 线性扩增范围,确定RT-PCR的最佳循环次数和Mg2+浓度,扩增后用VDS摄像系统扫描PCR扩增产物的电泳条带灰度.通过cGPX PCR产物的灰度与18s rRNA PCR产物的灰度之比,即可计算出cGPX mRNA的相对含量.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2005(039)008【总页数】5页(P3-6,23)【关键词】RT-PCR;cGPX;猪;肌肉【作者】徐春兰;汪以真【作者单位】浙江大学饲料科学研究所,浙江杭州,310029;浙江大学饲料科学研究所,浙江杭州,310029【正文语种】中文【中图分类】Q503谷胱甘肽过氧化物酶（EC1.11.1.9，glutathione peroxidase，GPX）是在哺乳动物中发现的，通过还原态谷胱甘肽催化还原过氧化物和有机过氧化氢物，从而保护细胞及其他如DNA、蛋白质及脂质体等敏感生物分子免受氧自由基的损害［1］。
目前已知人GPX家族有五个成员，即胞质内GPX（classic or cytosolic GPX，GPX1）、胃肠道特异性GPX（gastrointestial-specific GPX，GPX2）、血浆GPX（plasma GPX，GPX3）、磷脂过氧化氢GPX（phospholipid hydroperoxide GPX，GPX4）以及附睾特异性GPX（epididymis-specific GPX，GPX5）。
GPX作为细胞内重要的抗氧化剂正日益受到医学界的重视。
细胞内谷胱甘肽过氧化物酶（cellular glutathione peroxidase，cGPX）是一种含硒酶［2］，作为动物体内重要的抗氧化酶，对预防多种动物疾病如仔猪白肌病、桑椹心、雏鸡渗出性素质和家畜产仔率下降等有重要作用［3］。
分析检测生姜蛋白酶基因的克隆及在原核细胞中的表达卢 瑛（莱芜职业技术学院，山东莱芜 271100）摘 要：提取莱芜生姜总RNA，采用RT-PCR技术扩增出生姜蛋白酶（Ginger protease）基因GP2和GP3，经序列比对，发现莱芜生姜蛋白酶基因GP2在945位的碱基与Gene bank中生姜蛋白酶的序列GP2b（GI:57118006）有差异，GP3在451、700和804这3个位置的碱基与GP3b（GI:57118011）有差异，在翻译后的氨基酸也不同，表明了不同生姜品种生姜蛋白酶基因的多样性。
将克隆的GP2片段GPII重组到带有His-tag的原核表达载体pET30a（+）中，构建重组表达载体pET-GPII。
将重组pET-GPII转化到大肠杆菌BL21（DE3）中构建工程菌株，工程菌株用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，在诱导6 h，IPTG浓度为0.1 mmol/L时，重组GPII表达量最高。
SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明蛋白大小约为21 kDa。
该实验结果表明生姜蛋白酶能够在原核表达系统进行大量表达，为生姜蛋白酶工程化生产奠定了基础。
关键词：莱芜生姜；生姜蛋白酶；克隆；原核细胞；表达生姜蛋白酶（Ginger protease/Zingibain,EC 3.4.22.67）是存在于生姜块状根茎中的一种巯基蛋白酶，有两种GP-I和GP-II（GPI和GPII分别与GenBank中GP3和GP2同源性较高），均含有221个氨基酸，含有6个Cys形成3个二硫键为糖蛋白，具有蛋白水解活性。
生姜蛋白酶能够水解胶原蛋白，可用于肉类嫩化、酒类澄清，乳制品凝固等［1］，以姜汁为添加剂开发的具有新型保健功能的凝固型酸奶，在广东地区颇受欢迎，因此该酶具有良好的工业化应用前景［2］。
生姜蛋白酶的分离纯化工艺操作复杂，而且生姜蛋白酶的含量在不同生姜品种、不同栽培地区及不同气候条件下差异非常大，甚至同一品种的干姜与生姜之间的含量也不相同，导致生姜蛋白酶的提取率不稳定［3］。
恒温隔绝式PCR快速检测蜡样芽孢杆菌方法的建立及应用寇肖迪1，孟含1，苏雅航1，汤承2，胡瑜3，唐俊妮1,2*（1.西南民族大学食品科学与技术学院，四川成都 610225）(2.青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室，四川成都 610041）（3.康美包（苏州）有限公司，江苏苏州 215021）摘要：该研究以编码旋转酶B亚基的gyrB基因为靶基因，利用恒温热隔绝式PCR（Insulatedisothermal PCR，IiPCR），建立一种快速检测蜡样芽孢杆菌的方法。
同时，将建立的方法与聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）和实时荧光定量PCR（SYBER GreenⅠ荧光染料法和TaqMan探针法）检测方法相比较，并应用于不同类型零售食品中的蜡样芽孢杆菌检测。
结果表明建立的检测方法能在40 min内迅速判定出结果（+、-、？）；与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、肠炎沙门氏菌等均无交叉反应，显示出良好的特异性；方法的最低检出限为1.5×102 CFU/mL，优于普通PCR，与实时荧光定量PCR检出限相当；对42份零售食品进行检测，共发现45.23%的样本被蜡样芽胞杆菌污染（19/42）。
这一结果与常规PCR检测结果一致，但检测时间至少节省了4 h以上。
该研究为蜡样芽孢杆菌提供了一种快速、便捷、特异性强、灵敏度高、适用于现场实时检测的检测方法。
关键词：蜡样芽孢杆菌；恒温隔绝式PCR；gyr B基因文章编号：1673-9078(2024)04-287-295 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2024.4.0230Development of an Insulated Isothermal PCR-based Method for RapidDetection of Bacillus cereusKOU Xiaodi1, MENG Han1, SU Y ahang1, TANG Cheng2, HU Yu3, TANG Junni1,2*(1.College of Food Science and Technology, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610225, China)(2.Ministry of Education Key Laboratory of Conservation and Utilization of Animal Genetic Resources on theQinghai-Tibet Plateau, Chengdu 610041, China)(3.SIG Combibloc (Suzhou) Co. Ltd., Suzhou 215021, China) Abstract: Specific primers and probe were designed for the gyr B gene of Bacillus cereus encoding the gyrase B subunit, and a method based on insulated isothermal polymerase chain reaction (iiPCR) was established for the rapid detection of B. cereus and subsequently validated. The efficacy of this method was compared with that of traditional PCR and real-time fluorescent quantitative PCR (SYBER Green I fluorescent dye and TaqMan probe methods) detection methods, and applied in the detection of B. cereus in different types of retail food. The results revealed that the newly developed method引文格式：寇肖迪,孟含,苏雅航,等.恒温隔绝式PCR快速检测蜡样芽孢杆菌方法的建立及应用[J] .现代食品科技,2024,40(4): 287-295.KOU Xiaodi, MENG Han, SU Y ahang, et al. Development of an insulated isothermal pcr-based method for rapid detection of Bacillus cereus[J] . Modern Food Science and Technology, 2024, 40(4): 287-295.收稿日期：2023-02-28基金项目：国家重点研发计划重点专项（2018YFD0500500）；西南民族大学研究生创新型科研项目（ZD2022257）作者简介：寇肖迪（1999-），女，硕士研究生，研究方向：食品加工与安全，E-mail：通讯作者：唐俊妮（1971-），女，博士，教授，研究方向：食品安全与食品微生物，E-mail：287facilitated the rapid detection of B. cereus within 40 min. Moreover, there was no cross reaction with other bacteria, including Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, and Salmonella enteritidis, thereby indicating good specificity. The minimum detection limit of the method was 1.5×102 CFU/mL, which was significantly superior to that of the traditional PCR method, and equivalent to that of quantitative PCR. Of the 42 retail food samples assessed, 19 (45.23%) were found to be contaminated with B. cereus. The results obtained for method validated were completely consistent with those obtained using traditional PCR detection, although test results were available within a considerably shorter timeframe, saving at least 4 h. The method developed in this study provides a rapid, convenient, specific, and sensitive procedure that is suitable for the real-time on-site detection of B. cereus.Key words: Bacillus cereus; insulated isothermal PCR; gyr B gene蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）是一种常见的食源性致病菌，广泛存在于土壤、空气、水、动物的肠道以及植物源和动物源食品中，尤其是蛋白质和碳水化合物含量丰富的食品，如粮食制品、乳制品、肉类制品和豆制品等[1-3] 。
