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高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素_段淑娥

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高效液相色谱法测定食品添加剂环已基氨基磺酸钠中氨基磺酸的

高效液相色谱法测定食品添加剂环已基氨基磺酸钠中氨基磺酸的

高效液相色谱法测定食品添加剂环已基氨基磺酸钠中氨基磺酸的残留量陈妙兰、蔡佳梓、李燕华（广东省江门市质量计量监督检测所邮编：529000）[摘要]目的：建立高效液相色谱法定量测定食品添加剂环已基氨基磺酸钠中氨基磺酸的残留量的方法。

方法:采用C18色谱柱，流动相为5%乙腈：95%磷酸二氢铵(20 mmol/L)，流速为0.5 mL/m in，检测波长为210 nm，进样容积为10μL，柱温为25℃。

结果：氨基磺酸在0.02g/L~0.30 g/L范围内线性关系良好，r = 0.9998( n= 6)；氨基磺酸平均回收率为90.20% ~94.00%。

结论:高效液相色谱法准确、可靠、重复性好，检测方便。

可用于食品添加剂环已基氨基磺酸钠中氨基磺酸的残留量定量测定。

[关键词] 环已基氨基磺酸钠；氨基磺酸；高效液相色谱法[Abstract]Objective:To establish a method to quantitative determine the aminosulfonic acid residues from sodium cyclohexyl aminosulfonic of food additives by high performance liquid chromatography method.Method:C18 chromatography column, flow phase is 5% acetonitrile:95% ammonium dihydrogen phosphate (20 mmol/L), flow rate is 0.5mL/min, detection wavelength is 210 nm, sampling volume is 10 μL, column temperature is 25℃. Result: Aminosulfonic acid keeps linear relationship in 0.02g/L~0.30g/L range, r=0.9998(n=6); Average recovery rate of aminosulfonic acid is 90.20%~94.00%.Conclusions:high-performance liquid chromatographic method is accurate, reliable, and repeatability, easy for measurement, and can be used for quantitative determination of aminosulfonic acid residues in food additives sodium cyclohexyl aminosulfonic.[Keywords]sodium cyclohexyl aminosulfonic;aminosulfonic acid;high performa nce liquid chromatography氨基磺酸的分子式为NH2S03H。

高效液相色谱法（HPLC）在食品添加剂检测中的应用

高效液相色谱法（HPLC）在食品添加剂检测中的应用

T logy科技食品科技1　高效液相色谱法理论概述和工作原理高效液相色谱法（HPLC）属于色谱分析法重要的组成部分。

高效液相色谱法的优点包括检测时间短、灵敏效果好、分离效能高等等。

主要包括柱色谱、纸色谱和薄层色谱。

高效液相色谱分离是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换的过程，借助溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

以液体为流动相，在高压输液系统的作用下，对混合溶剂或者单一溶剂进行成分分离，之后再对其展开检测，这样便可以完成试样分析，其具体原理如图1所示。

贮液瓶高压泵进样器记录仪检测器废液信号分离柱图1　HPLC的工作原理2　高效液相色谱仪的基本构造高效液相色谱仪的构造比较复杂，其部件包括检测器、高压输液泵等。

2.1　高压输液泵高压输液泵要耐高压和耐化学腐蚀，恒流泵以及恒压泵决定了高压输液泵具有耐化学腐蚀以及耐高压的特性。

一般泵体材料为耐酸不锈钢材料，其材料质量相对较好。

高压输液泵可以在40～50 MPa/cm2压力下工作，且连续工作时间通常不会低于9 h，与此同时高压输液泵还可以保证输出流量稳定。

2.2　色谱柱色谱柱的主要部件为柱管与固定相。

柱壁材料一般选择不锈钢、铜等材料，分离效果和色谱柱的长度有直接关系，色谱柱长度通常在5～30 cm范围内，其内径通常为5 μm～5 mm。

2.3　检测器检测器的作用是可以对完成色谱柱分离后的组分随洗脱液流出的浓度变化进行检测，并由相关设备绘制出色谱图。

由此可见检测器需要具备灵敏性高、使用范围广的特性。

目前可供选择的检测器有很多，但是不同检测器所检测的物质也是不同的，这些检测器都是具有针对性的，因此检测不同物质要挑选不同的检测器。

3　高效液相色谱在食品检测中的应用3.1　营养成分的检测对于糖类来说其检测不能根据一般检测来操作，因为糖类的还原性较强。

维生素是人体必需的营养物质，先提取再展开检测的操作存在一定的弊端，会造成维生素结构的变化，从而影响检测结果。

高效液相色谱在食品添加剂检测中的应用

高效液相色谱在食品添加剂检测中的应用

高效液相色谱在食品添加剂检测中的应用 陈慧贞 甘肃省定西市食品检验检测中心随着居民生活水平的不断提高，在生产食品的过程中食品添加剂的作用非常明显，一旦出现食品生产者随意使用食品添加剂的情况，就会对消费者的生命健康造成非常严重的损害。

现阶段我国已经研制出了多种手段来监测食品添加剂的含量，但是近些年食品安全问题日益严峻，所以要高度重视食品添加剂的问题，因此高效液相色谱越来越多的应用在食品添加剂的检测中。

在食品中对于甜味剂的检测在食品的检测过程中，最为重要的就是对于甜味剂的检测，甜味剂的检测一般情况下是通过使用高效液相色谱的方法，检测过程需要的色谱柱一般是C18柱和NH2柱。

在检测甜味剂的过程中，如果选择使用C18色谱柱，可以使用乙酸铵缓冲液，将其作为流动相，能够有效的将酒水中的指标含量有效的检测出来，比如说安赛蜜的具体含量。

根据检测的结果，安赛蜜的含量在1.7～1.8 mg/kg，当使用次氯酸钠时，在酸性的条件下能够有效的将食品当中的甜蜜素转换成氯基环乙烷，正乙烷萃取，当流动相选择乙腈 - 水和 ODS-C18 柱，通过紫外线光进行有效的检测，使用外标法进行有效的定量测量，这样可以保证检测对象不被影响和干扰，还能够有效的降低问题的发生。

在食品中对于防腐剂的检测在食品中对于防腐剂的检测过程，检测人员传统的检测方式一般是通过分光光度法和气相色谱法来进行，但是这样的检测过程需要经过非常复杂的预先处理过程。

现阶段来说，通过使用高效液相色谱检测的方法，只需要经过非常简单、快件的预先处理过程，就能够直接进行检测过程，从而确定检测结果。

举例来说，通过高效液相色谱来检测饮料中存在的防腐剂含量，可以直接将饮料进行过滤，然后将其放到液相色谱系统当中，经过十几分钟的时间，就能够有效的检测出饮料中所包含的防腐剂的含量。

在食品中对于色素的检测在食品中经常会使用食用色素来改变食品的色泽，从而达到丰富产品颜色的目的。

通过高效液相色谱这一方法检测食品中的色素含量，整体检测的操作过程十分简单、快捷，并且检测效率非常高效。

高效液相色谱法测定食品中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠

高效液相色谱法测定食品中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠

高效液相色谱法测定食品中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠作者：冯民贤来源：《现代食品》 2018年第2期摘要：建立了同时检测食品中4 种添加剂的高效液相色谱法。

选用岛津C18 色谱柱，以甲醇和0.2 mol/L乙酸铵为流动相，体积比为8 ∶ 92，检测波长230 nm，流速为1.0 mL/min，进样量10 μL，通过二极管阵列检测器进行检测。

该方法在0.01 ～ 0.10 mg/mL 线性良好，相关系数r ≥ 0.999，检出限（S/N=3）分别为0.004、0.001 8、0.001 2、0.003 g/kg，相对标准偏差（n=6）为1.13% ～ 2.13%，回收率为86.7% ～ 100.0%。

该方法精密度和准确度较好，样品处理简单，适用于食品中多种添加剂的测定。

关键词：高效液相法；食品；安赛蜜；苯甲酸；山梨酸；糖精钠Abstract：A high performance liquid chromatography (HPLC) method for the simultaneous detection of4 additives in food in this paper. Selection of SHIMADZUC18 column, with methanol and 0.2 mol/L ammoniumacetate as mobile phase, the volume ratio is 8 ∶ 92, detection wavelength 230 nm, the flow rate is 1.0 mL/min,sample size 10 μL, detection by diode array detector. This method is well linear in the range of 0.01 ～ 0.10 mg/mLcon centration, the correlation coefficient of r ≥ 0.999, the detection limits (S/N=3) were 0.004, 0.001 8, 0.001 2,0.003 g/kg, respectively, The relative standard deviation (n=6) is 1.13% ～2.13%, the recovery rate is86.7% ～ 100.0%. The precision and accuracy of this method are better, the sample treatment is simple andsuitable for the determination of a variety of additives in food.Key words：High performance liquid phase method; Food; Acesulfame; Benzoic Acid; Sorbic acid;Saccharin sodium中图分类号：TS262.3食品是人类赖以生存和发展的物质基础，食品安全则是影响人体健康和国计民生的重大问题。

高效液相色谱法测定果汁中甜蜜素的含量

高效液相色谱法测定果汁中甜蜜素的含量
* 唐庆强 ，吕园园，庄健业，傅爱华，李敏新
（ 三明出入境检验检疫局，三明 365000 ） 摘 要： 甜蜜素在紫外可见光范围内不被吸收，但加入次氯酸钠后，次氯酸钠 N中的氯将甜蜜素的氨基置换， 生成 N， 二氯环己胺， 再被正己烷萃取出来， 在
ODSC18 柱上，以 乙 腈 （ V ） ∶ 水 （ V ） = 70 ∶ 30 为 流 动 相 进 行 分 离，检 测 波 长 314 nm，外标法定量。方法检测限为 2 mg / kg，回收率 71. 0% ～ 110. 5% ，方法 适用于果汁中甜蜜素的测定。 关键词： 高效液相色谱法； 果汁； 甜蜜素（ 环已基氨基磺酸钠） 甜蜜素的化学名称为环己基胺基磺酸钠，是 一种高甜 度 的 甜 味 剂，其 甜 度 为 蔗 糖 的 30 ～ 80 倍，具有水溶性好，甜味清爽，稳定性好，热量低 等特性，而且风味自然，后苦不明显，是一种在我 国广泛使用的甜味剂。甜蜜素的安全性一直受到 很大的争议，美国曾大量使用甜蜜素，但由于其 会导致膀胱癌的 报 道，美 国 自 1969 年 起 全 面 禁 用，至今世界上仍有包括美国、英国、日本等国在 内的 40 多个国家禁止使用甜蜜素作为食品甜味 剂，但也有我国、欧盟、澳大利亚、新西兰在内的 80 多个国家允许在食品中添加甜蜜素 。 目前我国对 食 品 中 甜 蜜 素 检 验 方 法 的 主 要 是气相色 谱 法 、分 光 比 色 法 和 薄 层 层 析 法 ，国 标采用气相色谱 法 ，其 最 低 检 测 限 为 4 g （ 相 当 于400 mg / kg ） ，难以 达 到 日 本 等 进 口 国 对 食 品 中甜蜜素不得 检 出 的 要 求 ，而 且 采 用 气 相 色 谱 法检测要使用 冰 浴 进 行 温 度 控 制 ，很 容 易 因 为 季节和 环 境 温 度 的 影 响 导 致 实 验 失 败 ，因 此 ， 本文参考北欧 食 品 分 析 委 员 会 的 相 关 研 究 ，用 高效液相色谱法对 果 汁 中 的 甜 蜜 素 进 行 快 速 的 分离和检测 。 1 材料与方法 1. 1 仪器 Agilent 1100 型 高 效 液 相 色 谱 仪，配 有 DAD 溶液 = 1∶ 1 ； 次氯酸钠水溶液 = 1 ∶ 1 ； NaOH 溶液： 0. 5 mol / L。 1. 3 色谱条件 150 × 4. 6 mm（ I. D. ） ，粒 色谱柱： Suplco C18 ， 径 5 μm ； 流动相： 乙腈 ∶ 水 = 70 ∶ 30 ； 检测波长：

高效液相色谱法测定葡萄中甜蜜素的残留量

高效液相色谱法测定葡萄中甜蜜素的残留量

高效液相色谱法测定葡萄中甜蜜素的残留量张晓燕;崔晨;夏光辉【摘要】建立了高效液相色谱法测定葡萄中甜蜜素残留量的方法.采用InertsilC18(4.6×250mm)色谱柱,柱温25℃,乙腈:水=60:40作流动相,检测波长为313nm,流速0.8mL/min的条件测定.甜蜜素标准品以不同体积进样,获得标准曲线=360.86-106.89,其相关系数R2=0.9999,在2~50μg范围内呈良好的线性关系.实验建立的甜蜜素测定方法稳定可靠,可快速检测葡萄中的甜蜜素残留量.【期刊名称】《中国果菜》【年(卷),期】2016(036)008【总页数】4页(P26-28,32)【关键词】甜蜜素;高效液相色谱;葡萄;残留量【作者】张晓燕;崔晨;夏光辉【作者单位】通化师范学院,吉林通化134002;通化师范学院,吉林通化134002;通化师范学院,吉林通化134002【正文语种】中文【中图分类】TS255.7甜蜜素，别名环己基氨基磺酸钠，化学分子式C6H11NHSO3Na，白色，粉末状结晶，主要由环己胺和氨基磺酸等化学物质经过一系列反应后通过氢氧化钠处理，重结晶产生的物质［1，2］。

它是一种人工合成食品添加剂，无味，无营养［3］。

因其可以增加食品口感，价格低廉，具有低热，易溶于冷水、热水，无异味，对热、酸、碱稳定以及不易变质和不吸潮等特点而被广泛应用于食品行业中，其中不乏饮料、西瓜、糕点、罐头、酱菜、蜜饯、葡萄、香瓜、菠萝等多种食品［4］。

但甜蜜素的致癌作用一直存在争议，早在1960年就有人报告其代谢产物环己胺对心脑血管系统和睾丸有毒理作用而被美国食品与药品管理局（FDA）禁用［5］。

后来经过多方研究证实，摄入过量甜蜜素确实有损害肾脏功能甚至致畸、致癌等副作用，因此很多食品生产大国，例如美国、日本、加拿大等发达国家，都明令禁止食品生产商在食品中添加甜蜜素，从根本上阻止甜蜜素流入市场［6］。

但仍有许多国家允许甜蜜素作为食品添加剂活跃在市场中，例如中国、澳大利亚等国家和地区，只是针对甜蜜素的使用范围和使用量做出了相应的控制，因此大量的含有甜蜜素的食品在市场上流通［7］。

高效液相色谱法测定食品中甜味素

2019年10月高效液相色谱法测定食品中甜味素高晶晶（天津艾尔森生物科技有限公司，天津300384）摘要：高效液相色谱法是一种比较精准的分离分析技术，在医学、工业、化学等领域中都有着广泛的应用。

将其应用食品中甜味素的测定正能发挥技术优势，提升检测结果的精确性。

文章就此展开了论述，先是简单分析了甜味素性质、高效液相色谱法原理，然后结合试验详细分析了如何用高效液相色谱法测定食品中甜味素。

关键词：高效液相色谱法；测定；食品；甜味素1甜味素甜味素是一种常见的食品添加剂。

最早是在1965年由Seark 公司开发的。

这种物质是由L-天冬氨酸和L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐缩合合成而得。

化学名为天冬酰苯丙氨酸甲酯，俗称阿斯巴甜。

据有关研究表明，甜味素的成分之一苯丙氨酸无论多少都会对脑部化学环境造成负面影响。

而另一种成分天门冬氨酸，是由麸氨酸合成的。

而麸氨酸是脑部兴奋传达的关键物质当苯丙氨酸在降低“血清素”浓度时会进一步刺激大脑。

另外，甜味素被人体代谢后还会产生甲醇。

甲醇属于有毒物质，且被人体吸收后很难在排出。

尤其是在甜味素被加热到30℃以上时甲醇的产生量会进一步加大。

也就是说，甜味素对人体是有一定伤害的。

但这种伤害需要经过多年的日积月累才会表现出来。

2高效液相色谱法高效液相色谱法属于色谱法，主要就是以液体为流动相采用高压系统将不同极性的混合溶剂、缓冲液等泵入到固定相的色谱柱中，在柱内进行溶液分离，并进入检测器进行检测，最后再进行试样分析。

该检测方法的特点包括：高压、高速、高效、高灵敏度、应用范围广、色谱柱可重复使用、容易回收、所需样品量少。

所谓高压是指必须对载液施加高压，这样流动相才能迅速通过色谱柱。

高速是指检测效率非常高，有些样品5分钟就能完成检测。

高效是指检测效率非常高、分离效能也比较高。

3高效液相色谱法测定食品中甜味素3.1测定原理主要就是利用高效液相色谱仪对不同种类的食品进行检测，确定不同种类食品中的甜味素含量。

高效液相色谱法测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢


测方法一起检测 5 个项目。当然色谱
柱的选择很关键，色谱柱选择不当，
就不能一起检测 5 个项目。
以 上 内 容 对 食 品 中 安 赛 蜜、 苯 甲
酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸含量
测 定， 采 用 国 家 标 准 需 要 分 3 次 检
测，费时费力，成本高，5 个项目同
时测定的高效液相色谱法非常有实用
标准溶液的配制 分 别 准 确 吸 取 安 赛 蜜、 苯 甲 酸、
山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸标准储备 液（1 000 mg/L）各 10 mL 于 50 mL 容量瓶中，用水定容成混合标准中间 溶液（200 mg/L）。分别吸取混合标 准 中 间 溶 液 0.0、0.05、0.25、0.50、 1.00、2.50、5.00 mL 及 10.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，用水定容至刻度， 成质量浓度分别为 0.00、1.00、5.00、 10.0、20.0、50.0、100 mg/L 及 200 mg/L，经 0.45 µm 水系滤头过滤后上 机检测，绘制标准曲线。 试样制备
价值，试样前处理简单，定量测定的
灵敏度和准确度高，完全能满足三个
国 家 标 准 要 求（GB5009.28-2016、
GB5009.121-2016、GB/T5009.140-
2003），非常值得本专业人士参考。
35 Jun. 2019 CHINA FOOD SAFETY Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
质量控制
高效液相色谱法测定食品中安赛蜜、苯甲酸、 山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸含量
□ 翟崇华 玉溪市质量技术监督综合检测中心
材料与方法
仪器
①日本岛津 LC-20AT 高效液相色 谱 仪（ 带 紫 外 检 测 器）； ② AS-A 型 系列超声波清洗器（天津奥特赛恩斯 化器有限公司）；③超纯水机（台湾 艾柯仪器公司）；④分析天平，感量 0.1 mg；⑤恒温水浴锅；⑥匀浆机。 试剂

高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素


Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ：ｓ ｄ ｕ ｃ ｃ ａ ｔ ｄｓ ｏ ｉ ｍ ｙ ｌｍａｅ：ＨＰＬ Ｃ；ｆ ｏ ０ ｄｓ
甜蜜素 ， 化学名称 为环 己基氨 基磺 酸钠 ， 是一 种非营养 型合 成甜味剂 ， 其甜度 为蔗糖 的 ３ ０倍 ， 口感 比糖 精好 ， 而价格仅 为蔗 糖的 ３倍 ， 曾经作 为一种 通用 的食 品添加 剂 而广泛 使 用。但甜 蜜素 的致癌作用 一直 为人们所 争议 … 。 目前欧 美 、 日本等 发达 国家禁止在食 品中使用甜 蜜素 ， 包括 我 国在 内的许 多国家 仍然 允许在食 品中添加甜蜜素 。国标对甜 蜜素在各类 食品 中的最大 使用量做 了严格规定 ’ ， 但市 场上 超量 、 范围使 用甜蜜 素 的 超 情况经常发生 。 目前我 国对 食 品 中 甜蜜 素 的 测 定 方 法 主 要 有 气 相 色谱 法 Ｊ比色 法 ” 和 薄层 层 析 法 等 。操 作 繁 琐 、 扰 因素 多 、 、 干 不易控制 ， 本文所 述方法 采用高效 液相 色谱法 成 功地检测
响。
图 ４ 山梨酸标准色谱 图
Ｆ ｇ ４ Ｃｈ ｏ ｔｇ ａ ｏ ｔ ｎ ａ ｄ ｓ ｒ ｉ ｃｄ ｉ． ｒ ｍａ ｏ ｒ ｍ ｆｓａ ｄ ｒ ｏ ｂ ｃ ａ ｉ
图 ５ 海天酱油色谱图
Ｆ ｇ ５ Ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｍ ｆＨａ —ｔａ ｏ ａ ｓ ｕ ｅ ｉ． ｈ ｏ ｔｇ ａ ｏ ｉ ｉｎ ｓ ｙ ａ ｃ
ａ ｓｒ ｎｇ ａ ｉ ｎ ｉｏ ｍｅ ｔａ ｄ ｅ ｔａ ｔ ｄ ｗｉ ｔｏ ｃｄ ｅ ｖ ｒ ｎ ｎ ｎ ｘｒ ｃｅ ｔ ｎ—ｈ ｘ ｎ ｈ ｅ ａ ｅ，ｗｈｉｈ ｈ ｄ ｈｉｈ ｒ ＵＶ ｅ ｐｏ ｓ ．Ｔｈ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｈ ｔａ Ｓ ｉ ｃ ａ ｇ ｅ ｒｓ ｎ ｅ ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｈ ｍ

柱前衍生-高效液相色谱法测定甜蜜素的实验研究

图1　标准曲线图
由图2可以看出，不同浓度的吸收峰重叠性很好，几乎完全重合。

同时，吸收峰的保留时间均是在合理
图2　不同浓度甜蜜素的谱图
加入0.4 mg/mL的标准溶液衍生化后进行方法精密度的测定，进样6针，精密度好，标准偏差小于0.001，
（1）本试验色谱最优化条件为：乙腈与水的比例添加0.02 mol/L乙酸铵缓冲系作为流动相，在波长314 nm处、柱温33 ℃、流量1.0
进样量10 µL的条件下，对甜蜜素标准品的衍生物进行测定效果最佳，精密度和回收率较高，且没有其他
图3　测定甜蜜素样品的谱图。

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第 40 卷第 7 期
段淑娥等： 高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素
137
中，加入 2 mL 1 ∶1 的硫酸溶液，振荡，使溶液混合均匀，加入 5 mL正己烷溶液，再加入 2 mL 次氯酸钠溶液（ 有效氯≥10% ） ， 剧烈振荡 1 min 后，将分液漏斗置于铁架台上静置分层，除去下 层水相； 加入 5 mL 0． 5 moL / L 的氢氧化钠溶液，再次剧烈振荡 1 min，静置分层后除去下层溶液； 向上层溶液再加入 5 mL 超纯 水，水洗 1 min 后用一次性滤膜（ 0． 22 μm） 过滤，以供高效液相 色谱分析用。
1 实验部分
1． 1 仪器与试剂
高效液相色谱仪（ LC － 20 A 型） ，日本岛津； 紫外检测器； 离 心机（ TGL － 16 G） ，湖南星科科学仪器公司； 电子天平 T － 214， 赛多利斯科学仪器（ 北京） 有限公司； 0． 45 μm 微孔滤膜； Milli － Q 超纯水系统； 120 D 超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有
限公司。 甜蜜素标准溶液（ 1000 μg / mL） ： 准确称取甜蜜素标准物质
0． 1001 g，置于 100 mL 容量瓶，加少量超纯水溶解，稀释、定容， 配成浓度为 1． 00 mg / mL 的标准溶液。使用时，用超纯水稀释成 所需要浓度的标准使用液 （ 0． 22 μm 滤膜过滤） 。
乙腈、甲醇、正己 烷 均 为 色 谱 纯，硫 酸，次 氯 酸 钠，碳 酸 氢 钠 等均为分析纯，实验用水为 Milli － Q 超纯水。
138
广州化工
2012 年 4 月
600 μg / mL范围内线性良好。
图 7 甜蜜素标准曲线图 Fig． 7 The standard curve of sodium cyclamate
2． 4 流动相
分别以不同比例的乙腈 － 水、甲醇 － 水、乙腈 － 磷酸二氢 钠、甲醇 － 乙酸铵、乙腈 － 乙酸铵、等作流动相进行测定，发现当 乙腈 － 水体系中体积比为 97∶3 时，分离度和色谱峰形好，测量 的稳定性和重现性也较好，故选择乙腈 － 水（ 体积比为 97∶3） 作 为流动相。乙腈 － 磷酸二氢钠体系无法将安赛蜜，苯甲酸钠，山 梨酸和甜蜜素相互分离开来； 甲醇 － 乙酸铵体系中安赛蜜，苯甲 酸钠和山梨酸三 者 能 够 相 互 分 开，但 山 梨 酸 与 甜 蜜 素 保 留 时 间 几乎一样。在乙腈 － 乙酸铵体系中，安赛蜜、苯甲酸钠和山梨酸 与甜蜜素保留时间均相近，无法分离。
生成 N，N － 二氯环己胺，后者在紫外区具有较大吸收，用正己烷进行萃取后经过高效液相色谱分离，314 nm 检测定量。结果表明：
Shim － pack VP － ODS（ 4． 6 mm × 150 mm） ； 流动相为乙腈∶超纯水 97∶3； 流速 1． 0 mL / min； 柱温 30 ℃ ； 检测波长 314 nm； 进样量 20 μL，食品中的安赛蜜、苯甲酸钠、山梨酸等不影响测定。甜蜜素含量在 2 ～ 600 μg / mL 之间时，呈现良好的线性关系，相关系数为 0． 9979，加标回收率为 97． 24% ～ 104． 09% 。
439320 426396 427584 421480 433345 426870
1． 46
2． 7 回收试验
根据甜蜜素的标准曲线，由测量结果可知，每毫升的菊花茶 中大约含有甜蜜素 10 μg。准确吸取 10． 00 mL 的菊花茶样品溶
液置于 125 mL 的分液漏斗中，再准确吸取 10． 00 mL 50 μg / mL 的甜蜜素标准溶液与之混合均匀，稀释至 25 mL 定容，仍然按照 1． 3． 2 的方法进行衍生化处理。将最终得到的上层有机相经 0． 22 μm滤膜过滤，按以上色谱条件测定后，以测得值计算回收 率，结果列于表 2。由表 2 可知，甜蜜素的回收率为 97． 24% ～ 104． 09% ，实验结果表明该法测量的准确度较高。
关键词： 甜蜜素（ 环己基氨基磺酸钠） ； 高效液相色谱； 食品
中图分类号： TS264． 9
文献标识码： A
文章编号： 1001 － 9677（ 2012） 07 － 0136 － 03
Determination of Sodinum Cyclamate in Foods by HPLC
DUAN Shu － e，ZHANG Chang － hu，QU Ying － juan，WANG Jing （ Department of Chemistry and Chemical Engineering，Xi’an University
2． 3 标准曲线
准确 吸 取 1． 00 mg / mL 甜 蜜 素 标 准 储 备 液 0． 20 mL， 0． 50 mL，1． 00 mL，5． 00 mL，20． 00 mL，60． 00 mL，分 别 置 于 100 mL容量瓶中，用超纯水逐级稀 释 配 制 成 浓 度 为 2 μg / mL， 5 μg / mL，10 μg / mL，50 μg / mL，200 μg / mL，600 μg / mL 的一系列 标准溶液。将上述标准溶液按 1． 3． 2 的方法处理后进样分析， 以峰面积对质量浓度作图，得到标准曲 Y = 23340x － 163207，相 关系数 R2 = 0． 9979，环 己 基 胺 基 磺 酸 钠 （ 甜 蜜 素 ） 在 2 ～
图 3 苯甲酸钠标准色谱图 Fig． 3 Chromatogram of standard sodium benzoate
图 4 山梨酸标准色谱图 Fig． 4 Chromatogram of standard sorbic acid
图 1 甜蜜素标准色谱图 Fig． 1 Chromatogram of standard Sodium Cyclamate
of Arts and Science，Shaanxi Xi’an 710065，China）
Abstract： A rapid determination method of sodium cyclamate in foods by high performance liquid chromatography （ HPLC） was established． N，N － Dichlorocyclohexylamine was produced by sodium cyclamate with sodium hypochlorite in a strong acid environment and extracted with n － hexane，which had higher UV response． The results showed that a Shim － pack VP － ODS C18 column was 4． 6 mm × 150 mm and VCH3 CN∶VH2 O was 97∶3，the flow rate was 1． 0 mL / min and the detection wavelength was 314 nm with injection volume 20 μL in the HPLC system． The determination was not affected by acesulfame potassium，sodium benzoate，and sorbic acid． The calibration curve was linear over the range 2 μg / mL ～ 600 μg / mL with a correlation coefficient of 0． 9979，the recovery was 97． 24% ～ 104． 09% ．
Key words： sodium cyclamate； HPLC； foods
甜蜜素，化学名称为环己基氨基磺酸钠，是一种非营养型合 成甜味剂，其甜度为蔗糖的 30 倍，口感比糖精好，而价格仅为蔗 糖的 3 倍，曾经作为一种通用的食品添加剂而广泛使用。但甜 蜜素的致癌作 用 一 直 为 人 们 所 争 议［1］。目 前 欧 美、日 本 等 发 达 国家禁止在食品 中 使 用 甜 蜜 素，包 括 我 国 在 内 的 许 多 国 家 仍 然 允许在食品中添加甜蜜素。国标对甜蜜素在各类食品中的最大 使用量做了严格规定［2，3］，但市场上超量、超范围使用甜蜜素的 情况经常发生。
2． 5 检出限
以 3 倍信噪比求得甜蜜素的检出限为 1 μg / mL。
2． 6 精密度试验
准确吸取菊花茶 10． 00 mL 置于 125 mL 分液漏斗中，按照 1． 3． 2 的方法进行处理后，平行测定 6 次，计算测得值的相对标 准偏差； 按照同样方法测定海天酱油的相对标准偏差，结果同样 列于表 1。由表 1 可知，本法测得的结果精密度良好。
甜蜜素标准溶液的处理同样品溶液。
2 结果与讨论
2． 1 测定波长
对环己基胺基磺酸钠的衍生物 N，N － 二氯环己胺进行波长 扫描，在 210 nm、314 nm 处有两个吸收峰，但 210 nm 处会产生溶 剂和流动相的吸收干扰，而 314 nm 处的干扰少，基线稳定，实验 选择 314 nm 为检测波长。
2． 2 色谱图
图 1 ～ 图 4 分别为甜蜜素、安赛蜜、苯甲酸钠和山梨酸的标 准物质色谱图，图 5 为酱油样品的色谱图，图 6 为菊花茶样品色 谱图。在色谱条件下，甜蜜素的保留时间约为 6． 551 min，食品 中常见的添加剂安赛蜜，苯甲酸钠，山梨酸等对甜蜜素测定均不 产生干扰。安赛蜜的保留时间约为 1． 998 min，苯甲酸钠的保留 时间约为 2． 354 min，山梨酸的保留时间约为 2． 498 min。三种添 加剂的保留时间均在 2． 5 min 以内，对甜蜜素的测量不会造成影 响。
目前我 国 对 食 品 中 甜 蜜 素 的 测 定 方 法 主 要 有 气 相 色 谱 法［4 － 6］、比色法［7 － 8］和薄层层析法［9］等。操作繁琐、干扰因素多、 不易控制，本文所述方法采用高效液相色谱法［10 －12］成功地检测 了饮料中的甜蜜素，方法简单、快速、检出限低，能满足检测要求。