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MiniSeq™系统指南ILLUMINA 所有材料号 20014309文档号 1000000002695 v01 CHS2016 年 12 月使用自定义操作流程选择器定制简而全的工作流程指南/custom-protocol-selector.html本文档及其内容归Illumina,Inc.及其附属公司（“Illumina”）所有，并且仅供其客户用于与本文档内所描述的产品用途相关的合同用途，不得用于其他任何目的。
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ii材料号20014309文档号1000000002695v01CHS修订历史记录MiniSeq系统指南iiiiv材料号20014309文档号1000000002695v01CHS目录修订历史记录iii目录v 第1章概述1简介2更多资源3仪器组件4测序耗材概述7预装的数据库和基因组9第2章入门11启动仪器12自定义系统设置13配置分析设置15用户自备的耗材和设备18第3章测序19简介20测序工作流程21准备耗材23制备供测序的文库24设置测序运行25监控运行进度33运行后自动清洗35从位置9处取下用过的槽37第4章维护39简介40执行手动仪器清洗41软件更新45附录A故障诊断47故障诊断文件48自动检查错误50RTA错误52再次杂化工作流程53系统检查55网络配置设置58自定义基因组59关闭仪器60附录B实时分析61实时分析概述62输入和输出文件63实时分析工作流程64附录C输出文件67测序输出文件68 MiniSeq系统指南v测序输出文件夹结构69分析输入文件要求70索引71技术协助75vi材料号20014309文档号1000000002695v01CHS第1章MiniSeq 系统指南1概述简介2更多资源3仪器组件4测序耗材概述7预装的数据库和基因组9概述2材料号20014309文档号1000000002695v01CHS简介Illumina ®MiniSeq ™系统是一款简单易用、具成本效益的便捷桌面系统，提供高品质的行业标准Illumina 测序技术。
酵母菌生态学研究及其在产业中的应用论文素材酵母菌生态学研究及其在产业中的应用酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的各种生态系统中，并且在生物与环境间的相互作用中发挥着重要的角色。
近年来，酵母菌的生态学研究逐渐受到关注，并在各个领域中得到广泛应用。
本文将探讨酵母菌生态学研究的重要性，以及酵母菌在产业中的应用。
一、酵母菌生态学研究的重要性1. 生态位的研究酵母菌生态位的研究对于了解其在自然界中的分布和生境适应能力具有重要意义。
通过对酵母菌的生态位分布状况和生境要求的深入研究，可以揭示其在自然界中的种类和数量分布规律，为维持生态平衡和资源管理提供科学依据。
2. 生态功能的研究酵母菌在生态系统中具备多种生态功能，如有机物分解、生物酶的产生、环境污染物的降解等。
通过对其生态功能的研究，可以深入了解酵母菌在生物地球化学循环中的作用以及相应的调控机制，并为生态修复和污染治理提供新思路和方法。
3. 生物多样性保护酵母菌作为真核生物的一种重要组成部分，在维持生物多样性和生态系统健康方面发挥着至关重要的作用。
通过对酵母菌的生态学研究，可以揭示其在保护野生动植物、维持物种多样性和生态系统稳定性方面的潜在作用，并在生物多样性保护中发挥积极作用。
二、酵母菌在产业中的应用1. 食品工业酵母菌在食品工业中有着广泛的应用。
首先，酵母菌可以作为面包、蛋糕等烘焙食品的发酵剂，促进面团的发酵和体积膨胀；其次，酵母菌还可以用于酿造啤酒、葡萄酒等酒精饮品；此外，酵母菌还可以提取酵母蛋白，用于增加食品的营养价值。
2. 生物能源产业酵母菌被广泛应用于生物质能源产业。
通过利用酵母菌的发酵能力，可以将生物质废弃物转化为生物乙醇、生物柴油等可再生能源，实现资源的可持续利用。
3. 医药和生物制药工业酵母菌在医药和生物制药工业中也有着重要的应用。
例如，酵母菌被广泛用作药物的生产工具，能够高效合成各种蛋白质和抗生素；此外，酵母菌还可以用于疫苗的生产，为人类健康做出贡献。
酵母扩培管理员是负责在生产型酿酒、烘焙或其他需要使用到酵母的工业中，进行酵母的培养、扩大培养以及保藏等工作。
酵母扩培的目的是提供足够数量和高质量的酵母细胞，以确保生产过程中发酵步骤的顺利进行。
以下是酵母扩培管理员的一些主要岗位职责：1. 酵母菌株管理- 负责选择和维护适宜的酵母菌株。
- 定期检查并保证酵母菌株的纯度和活性。
- 实施酵母菌株的更新和优化工作。
2. 扩培操作- 根据生产需求计划和执行酵母的扩培工作。
- 监控扩培过程中的关键参数，如温度、pH值、氧气供应等。
- 确保扩培过程符合制定的操作规程和质量标准。
3. 酵母培养基制备- 准备和优化用于酵母扩培的培养基。
- 确保培养基成分的正确性和一致性。
4. 设备操作与维护- 操作扩培相关的设备，如发酵罐、生物反应器等。
- 定期进行设备的清洁、消毒和维护工作。
- 监测设备的运行状态，及时排查故障。
5. 质量控制- 执行酵母细胞计数、活力测试和其他相关的质量检测。
- 记录和分析数据，确保酵母的质量符合生产要求。
- 与质量保证部门合作，确保扩培过程遵循良好的制造实践（GMP）。
6. 记录和文档管理- 详细记录每次扩培的操作过程、使用的配方及结果。
- 编制和管理相关的SOPs（标准操作程序）和记录表格。
7. 酵母储存与运输- 确保扩培后的酵母以正确的方式储存和运输。
- 采取措施防止酵母在储存和运输过程中的污染和活性下降。
8. 安全与环境管理- 遵守安全操作规程，保障个人和同事的安全。
- 实施环境保护措施，减少生产过程中对环境的影响。
9. 研发支持- 协助研发团队进行酵母应用方面的实验和研究。
- 提供技术支持和建议，帮助改善产品性能。
10. 团队协作与培训- 与生产、质保、研发等部门紧密合作，确保工作流程的顺畅。
- 培训新员工或现有员工关于酵母扩培的知识和技能。
11. 持续改进- 参与持续改进活动，提出提高扩培效率和酵母质量的建议。
- 关注行业动态和技术进步，不断引入新的方法和工具。
生物发酵系统与设备的URS随着我国生物医药技术的蓬勃进展，生物发酵系统（也称之生物培养）项目越来越多，不管是工业化大发酵，如抗生素原料药的发酵、氨基酸与有机酸（柠檬酸，乳酸）的发酵、酶制剂、酵母或者淀粉糖的发酵，还是各类生物疫苗、动植物细胞的发酵等。
品种众多，生产规模大小也不一，大到几百立方米容积，小到几千升容积的发酵罐，在项目的实施过程中都要系统或者设备的需求标准的建立。
对URS而言，生物发酵系统设备的URS编写就越显其重要性。
因此，如何切合生产实际、结合发酵的品种与培养工艺的要求，编写出既合理又有用的URS是生物发酵系统项目能够顺利实施的第一步，这也是生物发酵项目的招投标、设备制造、工程系统安装调试的基本根据条件。
1 生物发酵系统设备URS的范围生物发酵系统设备的URS文件能够分两个部分，即生物发酵主系统设备与与之配套的辅助系统设备（亦称发酵支持系统）构成。
其中，生物发酵主系统由菌种储存、解冻复活、移种、生物培养器（发酵罐）及其支持操纵系统、培养基的配制与灭菌与输送系统构成；生物发酵的辅助系统是由与之有关联的工艺用水系统（纯化用水及注射用水）、无菌压缩气体系统（空气，氮气，CO2气体等）、固液分离系统（如离心分离、膜过滤、板框过滤等）、发酵液的收集系统、发酵液的贮存与冷藏等构成。
2生物发酵主系统设备URS的编制根据2.1发酵流程生物发酵的过程是一组涉及多相、多组分、非线性的生物化学反应，也是一组群体性的生物生长过程，是人们把预先选定的微生物或者动植物细胞在一组密闭的系统中按其生长规律与生长发育条件的代谢过程，常见的流程见图1 。
2.2 GMP对生物发酵设备的要求结合GMP对设备的要求与生物发酵本身的特点,在编制生物发酵系统设备URS文件时应具备下列几个条件：(1)设备(发酵罐)的材质要求。
与培养基(包含补料物质) 、发酵液(微生物、细菌、疫苗、细胞等)相接触的材质务必是无毒性、耐腐蚀、不汲取上述物质、不与上述物质发生化学反应的材料制成。
酿酒酵母26SrDNAD1／D2区域序列分析及其系统发育研究第34卷第1期2007年1月酿LIQUOR酒MAKING文章编号:1002—8I10(2007)0I一0037-03酿酒酵母26SrDNAD1/D2区域序列分析及其系统发育研究★李金霞,刘光全,程池(rfI国1r业微生物菌种保藏管理中心,中冈食品发酵T业研究院,北京100027)V o1.34.№.1JlTJ.,2007摘要:利用26SrDNADI/D2区序列分析法对中国_Z-,lk微生物菌种保藏管理中心(cIcc)保藏的22株酿酒酵母(Sacchatomycescerevisiae)和】株威尔酵母fs.willianus)进行了复核鉴定,通过序列比对及构建系统发育树分析后,结果显示:2l株菌株与原名称一致,与酿酒酵母CBS117序列相似性在99.0%以上;CICC1313原定名为威尔酵母.此次鉴定结果为酿酒酵母,与酿酒酵母CBS117IT序列相似性为99.8%:C1CC1859与异常毕赤酵母fPichiaanomala)CBS5759T相似性为100%,鉴定为异常毕赤酵母.进一步对酿酒酵母与酵母属内其他种之间的发育关系进行了分析,通过构建酵母属内各菌种模式林的26SrDNADI/D2区系统发育树,发现酿酒酵母与属内其他菌种间差异均大于1%,表明26SrDNAD1/D2区域序列分析方法能够应用于酿酒酵母的分子生物学鉴定.关键词:酿酒酵母;26SrDNADI/D2区;序列分析;系统发育树中图分类号:TS26111文献标识码:A酿酒酵(Saccharomycescerevisiae)是人类应用于T业发酵最早的一种微生物,至今仍广泛应用于各种酒的酿造,制作面包及生产单细胞蛋白等,是一种重要的丁业微生物资源啦J.酿酒酵母在分类学上隶属于真菌界(Fungi),子囊菌门(Aseomyeot~,半子囊菌剁(Hemiascomyeetes),酵母目(Saecharomycetales),酵母科fsa(,char(】mycetaceae),酵母属(Saeeharomyees),是酵母属的的模式种.由于酵母属菌种菌落形态相似,显微形态主要以单细胞形式存在,且细胞形状很接近,凶此形态学观察不能提供的有效分类学信息.对于种级水平的分类来说,一一般以菌种对各种糖类的发酵和对不同碳源,氮源等化合物的同化能力以及在不同温度下的生长能力等生理学特征为依据.但是,酵母属各种间生理生化差异有限,而且这些菌种的表型性状不稳定,Seheda和Y arrow(1968)比较研究了酵母属中几个种的同一株菌的冷冻干燥保藏备份和斜面保藏备份的发酵和同化碳源性状,发现经长期的麦芽汁斜面保藏后,有些菌株可获得国家科技基础平台建设项目(2005DKA21204)收稿日期:2006—12—10作者简介:李金霞(1977-),女,硕士,~-3-4L.,L,工程师,现工作于中国食品发酵工业研究院中国工业微生物菌种保藏管理中,,12.发酵或同化某些糖的能力,而根据这些发酵或同化性状,有时甚至可将同一菌株的冷冻干燥保藏株和经多代斜面保藏株鉴定为不同的种,因此,仅将生理生化特征差异作为酵母属各种问的分类依据有时是不可靠的.近些年来,应用于酵母菌分类的快速鉴定系统不断面市,目前常用的有Biolog系统,API20C,ATB32C,VitekYBC和APICandida系统,在这些快速鉴定系统中,Biolog系统以其数据库大,鉴定范围广,鉴定快速等优点,日前已成为国际上酵母菌多相分类鉴定常用的技术手段[.已有文献表明,Biolog系统对于酿酒酵母的鉴定具有很好效果,鉴定准确率可达looq~驯.但对于某些单倍体菌株和基因工程菌株,由于菌种生长较弱,基因工程改造可能会改变其对某些碳源的利用能力,因此造成鉴定结果的偏差.为了弥补传统分类方法和快速鉴定系统对酿酒酵母鉴定的不足,新的分类技术,尤其是分子生物学技术,被不断的应用到酵母菌的分类研究中.随着DNA序列分析技术的日趋成熟和简易化,rRNA基因(rDNA)的序列分析被越来越多的应用于酵母菌的分类学研究中.Kuttzman&Robnett(1998)~tJ定了大约500种酵母的大亚基(26S)rDNADI/D2町变区的序列,包括假丝酵母和其他有性BlendingandFlavorAdjustmentofBandongjingLiquorW ANGFeng-liAbstract:Asafalnoti8distilledspiritsinNorthChina,Band0ningIiqu0risweIIs0Id0verthec ountryforitsgoodflavor,softtasteandrefreshingfeeling,ThereasonforsellingwellisduetothefinebIendingtechn010gy.Blendingandnav0r adjustmentisthebasisofimprovingBandongjingIiqu0rquaIityc0nsistentIy.Keywords:Bandongjingliquor,blending,nav0radjustmenI37?第一期雨良酒2007型及无性型子囊菌酵母几乎所有已知种的模式菌株,发现用这段序~J(5oo600bp)可以将绝大部分种区分开,同一种内不同菌株问D2区的核苷酸差异不超过1%J.由于这些序列均已公布在CenBank等国际核酸序列数据库中,因此给酵母菌的分子生物学分类研究提供了很大方便.本研究利用26SrDNAD1/D2区序列分析法对CICC保藏的22株酿酒酵母和l株威尔酵母进行了复核鉴定,进一步对酿酒酵母与酵母属内其他种之间的系统发育关系进行了比对分析.1材料和方法1.1菌种来源和培养条件实验所用菌株共23株,均来自CICCl11J'有明确来源登记或经生理生化等鉴定为酿酒酵母.实验菌株培养所用培养基为5Be'麦芽汁培养基.保藏菌种经平板划线分离后,挑取单菌落接种到5ml液体培养基中,28℃200rpm条件下培养12h.1.2试剂Taq酶,dNTP,DNAmarker购自天为时代生物有限公司; GoldView购白北京塞百盛基因技术有限公司;其他试剂均购自北京华绿渊生物技术发展公司.】.3基因组DNA提取和26SrDNAD1/D2区序列的扩增及检测基因组DNA提取方法参照文献141.26SrDNAD1/D2区序列扩增引物由上海生物工程有限公司合成.38?引物序列如一F:正向弓I物NL..1:5I_GGATA TCAATAAGCGGAGGAAAAG-3', 反向引物NL一4:5'-GGTCCGTGmCAAGACGG一3?1101.反应条件:94℃for1min,52℃for1min,72℃for1rain30see,36cycles;4℃保存.1.4序列测定,比较分析及系统发育树的构建将PCR产物纯化后直接由上海基康生物工程有限公司用ABI3700基因测序仪进行测序,测序结果用Chromas参照正反序列图谱人工校对.用校正后的26SrDNAD1/D2区序列在GenBank数据库中进行同源序列搜索(BLAST),比较供试菌株与已知酵母菌相应序列的同源性.为进一步显示实验菌株与已知酵母菌的亲缘关系及其分类地位,根据同源序列搜索结果,下载相关酵母菌菌种的26SrDNAD1/D2区序列,与实验菌株序列一起用ClustalX软件进行匹配排列(a1ign),用MEGA3.1软件中的neighbor-joining分析法构建系统发育树,并进行1000次Bootstraps检验.下载酵母属14个相关菌种模式株的26SrDNAD1/D2区序列,采用同样方法进行序列分析和系统发育树的构建.2结果与讨论2.1实验菌株的序列分析和系统发育树的构建构建了包括23株实验菌及相关菌种模式株在内的26SrDNAD1/D2区序列系统发育树(见图1),系统发育树以粟酒裂T————————0.02图1基于26SrDNAD1/D2区域序列和neIghbor-jong分析法绘制的酿酒酵母和相关菌种模式株系统发育树第一期李金霞,等:酿酒酵母26SrDNAD1/D2区域序列分析及其系统发育研究200768f--,Sbc~llanJnL"…1V"(!IS!17fLⅢscBS432,L."sc日∞'∞I,2-9astorianusGB81538厂一.....100L-SumsporusCBS398一scastel#iCBS430996L—一sdairenen$i,sCBS421一SmsmiiC88712747L——————一SspencemnmCBS3019L一～…s一m{厂__SbamettiiCBS6946————一cBs379r—_---Sk/u/yenC883082图2基于26SrDNAD1/D2区域序列和neighbor-joining分析法构建的酵母属菌种间系统发育树殖酵母(schizosacchammvcespombe)26SrDNAD1/D2区序列作为外群,序列一致长度为571bp.由图1系统树可以看出2l株酿酒酵母和1株威尔酵母被聚在以酿酒酵母CBSl171T为代表的分枝中,其中CICC1794与CICCl369与模式株的距离较远,其同源性分别为99.0%和99.2%,符合Kuttzman&Robnett所定的同种内不同菌株问差异不超过1%的标准.c1CC1916fMata,ura3,tri)l,ile2—111为基因1-程改造的单倍体菌株,在文献【2忡曾提到朋Biolog系统鉴定没有结果,但经26SrDNADl/D2区序列鉴定后为酿酒酵母,不受其是否为单倍体或基因工程菌的限制.CICC13l3与酿酒酵母模式株CBS1171T的同源率为99.8%,鉴定结果为酿酒酵母,原来经生理生化鉴定定名为威尔酵母CletusP.Ku~zman和JackW.Fell所着的第4版{TheY easts,a TaxonomicStudy>>(1998)中威尔酵母被作为是酿酒酵母的同物异名,因此认为与原鉴定结果一致.CICCl859与异常毕赤酵母(Pichiaanomala)CBS5759T相似性为100%,鉴定结论为异常毕赤酵母,进一步需以其他鉴定方法进行验证.2.2酿酒酵母与酵母属内其他种问26SrDNADI/D2区序列系统发育树的构建为进～一步分析酿酒酵母与酵母属内其他种问26SrDNAD1/D2区序列的进化关系,构建了酵母属内各菌种间遗传进化关系的系统发育树(见2).由图中呵以看出酵母属14个种主要分为7个分支,其中S.eerevisiae和S.pm'adoxus,S.bayanus,S.pastorianus为一个大分支,S.cerevisiae与S.paradoxus亲缘关系最近,同源率为98,8%,与其他模式株问的差异性均大于2%,㈥此根据Kuttzmaiq&Rolmett所定的同种内不同菌株间差异一般不超过1%的标准,完全可以Ⅲ26SrDNADI/D2区域序列分析法将酿酒酵母与酵母属内其他种区分开来.【参考文献】【1]H.J.法犬等.酵母菌的生活fM].王民俊等译.贵阳:《酿酒科技》编辑部,l984.程池,李金霞,姚粟,胡海蓉.Biolog微生物自动分析系统往酿酒酵母攘定中的应用.酿酒科技IJ).2006,145(7):58—643CletusP.Kurtzman,JackW.Fel1.TheYeasts,aTaxonomieStudy(4thedi fion)[M].1998.[4]自逢彦,贾建华,梁慧燕.假丝酵母属疑难菌株大亚基rDNADI/D2区域序列分析及其分类学意义【J1.2002,21(1):27—32.W.Praphaihmg,M.V anGestel,G.H.Fleet,G.M.Heard.Evaluationofthe Bilolgsystemfi)rtheidentifieatignoffoodandbeverageyeasls【JJ.Letters inAppliedMicrobiology,1997,24:455—459.I6]6王丽敏,李军,胡小松.苹果原料中酵母菌的分离鉴定【Jj.中网农业大学,2004,9(41:14-17.[7]Shan—HuaY ang,Pi-llanWang.ThreespeciesofyeastsnewstoTaiwanⅢ.Taiwania,2003.48(2):99—105.[8]Kang,Heui—Ytin,Y ong—SungKim,GCUB—JoongKim,Jin—HoSet,, Y eon—WooRyuScreeningant]characterizationoffloeeulentyeast.Candidasp.HY200,fortheproduetianofxylitolformD-xylose『J1.J.Microbio1.Bioteehno1.,2005,15(21:362—367.[9]李运,盛慧,赵荣华.Biolog微生物鉴定系统在菌种鉴定c}l的应用酿酒科技,2005133(71:84—85.[10]CletusP.Kurtzman&ChristieJ.Ro}mett.Identificationandphylogenyof aseonqycetousyeastsfromanalysisofnuelearlargesubunit(26S)rilu)so realDNApartialseqlleneeslJ1.AntonievanI~euwenhoek.1998,73:331-371.【11]中国微生物菌种保藏管理委员会:业微生物菌种保藏管理中心.巾国工业微生物菌种目录,食品与发酵'1:业,2001增刊,第二一t±:卷:23—34 TheIdentificationofSaccharomycescerevisiaebySequenceAnalysisof26SrDNAD1/D2DomainGeneLlfln-xia,LIUGUANG——qlzall,~CHENGChi(CICC,ChinaNationalReseaI℃hInstituteofF00dandFermentationIndustries.Beijing100027.China)Abstract:22Saccharomyeescerevisiaestrainsand1Swillianuswereidentifiedby26SrDNA D1/D2domainsequencesallalysis.whichwere depositedinChinaCenteroflndustrialCultureCollectionfcmc)Thesimilaritiesof2.1strains withthetypestrainofS.cerevisiaeCBS1171Tarefrom99.0%to100%Theresultindicatedthatthe21strainssuppofltheoriginalidentifieati0nr esuits:CICC1313.whichwasnamedasS.willianusoriginally,wasclusteredwithS.cerevisiaecloselyinthephlogenetictreeandexiblt ed99.8%similaritywithtypestrainC13S1171TThesimilarityofCICC1859andPichiaanomalaCBS5759Twas100%.Fherelationshipof26 SrDNAgeneDI/D2domainsequencesamong SaccharomycesstrainswasanalyzedfurthermoreandthedivergenceofS.cerevisiaewiththe otherSaecharomycesstrainsweregreaterthanl%.whichindicated26SrDNAD1/D2domainsequencesanalysisisfitforS.cerevisiaeidenti fication.Keywords:Saceharomyeescerevisiae;26SrDNAD1/D2domaingene;sequenceanalysis;p hylogenetietree39?。
1.目的使用糖化醪，在密闭罐内接入酵母菌种，通入微量的无菌空气，保压培养，获得发酵力强的纯酒母醪，供酒精发酵。
2.扩培工艺流程3.工艺数据复活温度：35℃—38℃。
培养温度：28℃—30℃。
分割时，留种量：15%左右。
酒母培养时间：8小时。
通风量：观察罐内液体翻动即可，每两小时开一次，每次15分钟左右。
4.要点配料：酒母糖液罐全容积为18m3，实装容积为80%，计算15.0m3。
配方：糖化醪15m3，尿素0.15%（12kg），青霉素50g。
5.看罐值班人员每小时检查一次酒母罐温度，做好原始记录，发现异常及时调整，至培养成熟为止。
6.生产工艺6.1 破碎工艺破碎颗粒直径：1.5mm—1.8mm；拌料温度：70℃—75℃；拌料加水比：1：2.5—2.8；添加耐高温α-淀粉酶：用量0.8ц/g—1.2ц/g淀粉。
6.2 蒸煮糖化蒸煮温度为81℃—83℃，蒸煮时间为90min，用酶量为90单位/g—120单位/g，控制糖化时间在60℃±2。
6.3 发酵糖化醪入二分之一，加入青霉素1ц/mL，入罐温度32℃—34℃，主发酵期34℃—36℃，发酵周期60小时。
7.结论7.1 扩培后使用，干酵母的用量较少，并减少了传统酵母多级培养中小酒母前的操作环节，便于控制酒母质量。
7.2 扩培中，糖液是直接由糖化锅泵入，省去了传统酵母培养中对醪液的杀菌过程，从而节约了水、电、汽。
7.3 发酵成绩提高，发酵醪酒精浓度提高1%，吨酒精节省蒸汽消耗约300kg，降低生产成本约50元。
同时，吨酒精节省工艺用水1.2t—1.5t，减少酒糟排放量1.5t—2t。
汉生罐留种扩大培养酵母的控制点击数：199 发布时间：2009年11月1日来源：中国发酵在线进入论坛交流使用汉生罐留种扩大培养酵母不但可以使酵母长期驯养在现场麦汁中，减少实验室复杂培养工作，还对保持酵母性能稳定有重要意义。
汉生罐酵母留种扩大培养必须对麦汁营养、扩大倍数、无菌操作等进行严格控制，从而保证啤酒酵母的质量。
1汉生罐留种方式的选择汉生罐留种方式按扩培周期长短可分为两种方式。
其一为扩培周期较长的留种方式，当汉生罐的酵母培养液进入旺盛发酵期时，使用无菌压缩空气搅拌均匀后，将85%左右的酵母培养液移至已灭菌冷却的一级酵母扩大培养罐，逐级进行扩大培养。
保留的15%酵母培养液再加入灭菌冷却的麦汁，待起发后迅速降温至2℃－3℃，低温保存至下次扩培使用。
汉生罐内保存的种酵母应定期排放锥底的死酵母，至少每月换一次麦汁。
其二为扩培周期短、频率高的留种方式，可采用一级酵母扩大培养罐的酵母培养液转入下一级扩大培养前，将其酵母液压入汉生罐内高位，并迅速降温至2℃－3℃进行留种，然后根据生产需要可迅速进入一级酵母扩大培养罐开始新一轮的扩培。
采用第二种方式的优点是提高扩培效率、减少添加麦汁操作带来污染的风险，可在短时间内扩培出大量的酵母供生产使用，一般在生产旺季时采用此种方式。
2实验室扩培实验室要重视菌种的保存，常用的菌种保藏方法有麦芽汁保藏法、固体斜面保藏法、液体石蜡保藏法、真空冷冻干燥法等。
菌种保藏过程中必须做好详细记录，做好标识，避免混淆。
经常检查酵母的保存条件，定期进行菌种鉴定，防止酵母的变异和退化。
应适时地从原菌种或生产现场进行分离纯化工作，以保持菌种的纯粹。
实验室扩培阶段应在洁净室内完成菌种转接及培养，保证操作过程不受污染。
各培养阶段一般都依靠定时摇动来使酵母液与氧接触，往往效果不理想，所以最好选择可进行充氧操作的卡氏罐和摇床培养。
3扩大倍数在汉生罐以前各级，由于培养温度较高、酵母倍增时间短、无菌操作条件好，可采用扩培比1：10－20。
汉生罐以后各级，温度逐渐降低，扩培比一般控制在4－6，汉生罐留种的比例以1：5为宜。
在实际生产中，一般通过液位控制来调整扩培比，生产车间的转种尽量采用自动液位控制，以使每次扩培比稳定。
4麦汁营养与通风扩培麦汁的氨基氮以大于180mg/L为宜，还要提高麦汁澄清度。
我公司利用中试车间的糖化设备生产实验室所用的扩培麦汁，较好地保证了扩培麦汁的营养。
采用不洗糟的头道麦汁作为扩培麦汁也是目前被广泛采用的有效措施。
扩培麦汁的灭菌操作十分重要。
很多啤酒厂采用薄板冷却后的低温麦汁作为扩培麦汁，麦汁入汉生罐后再升温至100℃以上进行灭菌，使麦汁的热负荷加大而造成营养的损失。
最好将扩培麦汁的取样点移至薄板冷却器入口前，直接采用糖化热麦汁入扩培罐，经短时间升温即可至100℃灭菌，15分钟后，立即降温至扩培温度。
也可以配备1个专用冷却器，使灭菌后的高温麦汁在短时间内降温。
酵母扩大培养过程需要通风，可在通风管末端装空气分布器（鼓泡管或鼓泡球），使通入空气分布成细小气泡，在汉生罐留种过程追加麦汁时，需少量通风。
5酵母扩大培养过程中的检验从实验室扩培至酵母大生产被使用，应对酵母形态、悬浮酵母数及增殖情况、降糖速度、双乙酰还原、风味物质形成等进行跟踪检测，同时对酵母扩培液、麦汁、无菌空气、清洗水等进行微生物检查，以保证扩培酵母啤酒酵母的管理和使用点击数：236 发布时间：2009年11月1日来源：中国发酵在线进入论坛交流“酵母是啤酒酿造的灵魂！”啤酒生产不仅要有优质的原料、先进的生产工艺，更要有优良的酵母菌种。
如何做好菌种的保存，以及酵母的正确使用、回收、排放等管理工作，对促进企业产品质量有着极其重要的作用。
一、菌种保存1.建立菌种管理档案建立原始酵母菌种的档案，例如菌种的编号、使用状态、转接时间、菌种来源等，定期进行原菌的活化、转接、筛选等工作，做好菌种跟踪检测。
检测项目包括满罐酵母数、死亡率、发芽率、降糖速度、还原降双乙酰情况、酵母凝聚性、酵母回收质量等。
2.原始菌种的保存方法2.1 固体斜面保存法将保存的酵母接种到麦汁琼脂培养基斜面上，25℃保温培养2至3天，待酵母繁殖成菌落，经检查无污染后，即放入4℃的冰箱中保存。
每年移接3至4次。
2.2 液体石蜡斜面保存法酵母菌种接在培养基的斜面试管中，加入已灭菌的不含水分的液体石蜡，防止培养基水分蒸发，并隔绝与空气的接触，然后置于2℃—4℃下保存。
2.3 液体试管保存将要保存的酵母接种到10%的灭菌蔗糖溶液中，25℃培养24小时后，置于2℃—4℃下保存。
二、酵母扩培1.编制扩培计划1.1 每次扩培前，编写详细的扩培计划，安排、协调好车间糖化生产，提供组分合理的扩培麦汁，有利于菌种的扩培质量。
1.2 建立扩培各阶段的质量控制点，及时依据实测数据掌握酵母转接的时机。
2.啤酒酵母的实验室扩培斜面试管（原菌）→20毫升试管→500至1000毫升三角瓶→卡氏罐。
步骤：取适量麦汁于试管内灭菌，将斜面原菌接种到试管内，在25℃—27℃保温下，培养2至3天，每天定期摇动，使沉淀的酵母细胞重新分布到培养基中。
无菌条件下，将试管中的酵母液接种到500mL—1000mL的灭菌麦汁中，25℃培养2至3天，每天检查培养情况。
无菌条件下，将三角瓶中的酵母液接种到10L—20L的灭菌麦汁中，混合均匀于15℃—20℃保温培养3至5天，即可接入生产现场扩培。
3.啤酒酵母的扩培三、酵母生产现场保存1.保存要求在酵母菌种的保存中，由于贮存时间长，酵母会因长期处于饥饿状态，造成酵母细胞营养不良。
为恢复酵母细胞活力，麦汁生产使用的辅料比例不能超过30%，麦汁浓度不低于10°P，有利于提高酵母活性。
2.保存方法2.1 种子罐酵母菌种的保存种子罐保存菌种要注意事项：（1）种子罐保种前，酵母扩培室内墙、地面要清洗、杀菌，设备罐体、管道要严格彻底地清洗灭菌。
（2）种子罐菌种起发后，当糖度降至7.5°P（以10°P麦汁为例），酵母数在40×106 个/mL左右时，即可降温至3℃保压在0.01Mpa—0.02Mpa下保存菌种。
2.2 锥形罐保存种酵母2.2.1 保种酵母的温度控制发酵罐种酵母在贮存期间，发酵罐上、中、下温度要控制在0℃—-1℃，控温要平稳，不能忽高忽低，更要谨防因供冷过低造成罐内壁结冰，这样会使锥底保存酵母细胞的生理受损、性能退化。
2.2.2 锥形罐保存种酵母的选择标准（1）选主酵期间发酵正常，双乙酰还原速度快的罐。
（2）杂菌和厌氧菌指标合格的罐。
（3）选择酵母色泽洁白、无异味、无酸味，外观黏稠，死亡率低的罐（酵母泥死亡率要低于6%，pH值不高于5）。
2.2.3 压榨酵母保存法将酵母泥洗涤，压榨去水，破碎成块状，低温保存。
2.2.4 酵母泥保存法用酵母回收罐保存酵母泥，回收的酵母泥在4℃的低温下，可保存1至3天。
四、酵母回收使用1.回收酵母的质量要求1.1 回收使用的酵母泥，必须色泽洁白、无异味、无酸味，外观黏稠；细胞形态大小均匀、饱满、液泡小，细胞壁薄，内容物不明显，无异形细胞等。
1.2 微生物检验不合格的罐不能作为种酵母使用，应进行废弃处理。
1.3 酵母回收要选择发酵性能良好、无异常情况的罐，酵母泥的死亡率要低于6%、pH值不能高于5，pH值若高，说明酵母有自溶现象，这样的酵母泥不应再回收使用。
1.4 酵母回收代数应控制在6代以内，以保证酵母的强壮及良好的活性，保持啤酒的风味，同时也降低酵母被杂菌污染的几率。
2.回收酵母的使用发酵过程中，酵母的沉降是有梯度的，下层多为衰老、死亡的细胞，并掺杂有大量冷凝固物等；中层则是在发酵旺盛期繁殖的、最具有活力的、强壮的、发酵力高的酵母；上层是较为轻质的酵母，并混有酒花树脂等杂质，质量较中层差。
在选用酵母时，要采取“掐头去尾，取中间”的方法。
实践证实，当10°P发酵液外观糖度降至4.5°P时，开始封罐保压（0.08Mpa—0.10Mpa），升压2至3天后开始回收酵母是最好的。
这时沉降的酵母多是活性高、发酵旺盛的、强壮的。
这种回收的优点是：酵母细胞不经过停滞期，直接进入快速生长期，所以起发快，发酵旺盛，降糖、还原双乙酰速度快，可缩短发酵周期，加快设备周转，降低生产成本，更能保证啤酒质量风味的稳定。
2.1 回收酵母时，应对酵母压送车备压，压送车压力略低于锥形罐罐压，压送车排气阀适当放气，使酵母泥缓慢流入，以稳定酵母的有效回收量，确保满罐酵母数的准确添加。
要防止回收时骤然泄压，影响细胞活性。
2.2 满罐酵母数控在1.5—2.0×107个/mL之间，酵母的接种量控制在0.8%为好，酵母接种量较少（低于1.0×107个/mL），会增加酵母细胞的繁殖时间，延长发酵周期；接种量过高，会使新生的酵母细胞减少，最终影响酵母的回收质量。
3.酵母进罐温度和满罐时间的控制3.1 锥形罐刷洗完后，空罐的温度控制应该与主发酵温度保持一致，避免罐温对酵母起发温度产生影响。
3.2 麦汁接种温度一般应低于主发酵温度2℃—3℃，满罐温度应低于主酵温度1℃为宜，麦汁在分锅次进罐中，麦汁的冷却温度应遵循先低后高，最后达到满罐温度的原则。
