关于己酸菌的培养及其应用

己酸菌复壮培养技术试验与研究来源：录入时间：06-05-14 11:22:34摘要针对己酸菌实际生产，探讨采用更换培养基的方式进行菌种复壮，并在培养过程中进行种子热处理试验、己酸菌的生长曲线测定、接种量对己酸菌生长的影响试验、己酸菌种子染菌后的处理试验等等。

通过大量试验分析，得出较优的培养和检测方案，并将优良种子直接用于大生产。

实践证明，具有很强的实用性和较大的技术参考价值。

关键词：己酸菌复壮培养己酸菌培养是各大白酒企业近年来重要的科研项目，是窖池养护和人工窖泥培养的基础，也是提高白酒质量的重要环节。

但在其生产及应用过程中，工艺还不是非常成熟，存在很多需要探讨研究的问题，需要寻找更佳的培养方案，以提高质量，降低成本。

在实际生产过程中，我们对己酸菌培养前期的各个环节进行了认真、多次的反复的研究，总结出了一套经济有效的己酸菌菌种复壮方法，通过种子热处理试验、接种量对己酸菌生长影响试验、进行己酸菌生长曲线测定，得出了最佳方案，并探讨出较好的检测记录方法。

1培养方案1.1培养基的制备1.1.1蛋白胨培养基1.1.1.1蛋白胨1.5%，乙酸钠0.5%，葡萄糖0.5%，牛肉膏0.2%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸铵0.03%，硫酸镁0.01%，调节PH7.0~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。

1.1.1.2称1%碳酸钙单独灭菌，接种前连同2%乙醇一并加入。

1.1.2乙酸钠培养基1.1.2.1乙酸钠1%，酵母膏0.1%，硫酸铵0.05%，磷酸氢二钾0.04%，硫酸镁0.02%，调节PH6.9~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。

1.1.2.2称1%碳酸钙单独灭菌，接种前一并加入2%乙醇。

1.2己酸菌种子培养方式1.2.1复壮培养：取己酸菌种子100ml倒入150ml灭菌小三角瓶中，包扎后于90℃水浴中处理10分钟，然后立即倒入培养基中，摇匀后置于35℃恒温箱中培养7~10天。

1.2.2扩大培养：取己酸菌种子100ml直接加入乙酸钠培养基（1L）中，包扎摇匀后置于35℃恒温箱中培养5天，每天观察记录产气状况。

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究引言己酸菌是一类重要的微生物资源，广泛应用于食品工业、生物能源生产和环境治理等领域。

窖泥是一种含有丰富微生物的沉积物，具有潜在的己酸菌资源。

本研究旨在分离鉴定窖泥中的高产己酸菌，并优化其培养条件，为己酸菌的应用提供基础研究支持。

分离鉴定高产己酸菌窖泥样品采集与处理1.选择具有己酸产生潜力的窖泥样品，避免有明显异味或污染的样品。

2.将窖泥样品收集于无菌容器中，并在4摄氏度保存。

己酸菌的分离培养1.取窖泥样品1克加入无菌磷酸盐缓冲液中，制备窖泥悬浮液。

2.取窖泥悬浮液适量接种于含有己酸产生基质的琼脂平板培养基上。

3.在30摄氏度恒温培养箱中培养48小时。

己酸菌的鉴定1.通过形态学观察，如菌落形态、颜色等初步判断是否为己酸菌。

2.通过生理生化特性测试，如氧气需求性、温度适应性等鉴定己酸菌。

3.可通过分子生物学方法，如16S rRNA基因测序，进一步确证己酸菌的种类。

培养条件优化培养基的选择1.选择含有己酸前体物质的培养基，如葡萄糖、淀粉等。

2.添加适量的无机盐和有机氮源，维持培养基的营养平衡。

pH值的优化1.通过改变培养基的初始pH值，探索最适合己酸菌生长和产酸的条件。

2.可通过pH试纸或pH计测定培养基的pH值。

温度的优化1.通过改变培养温度，确定己酸菌的最适生长温度。

2.可在不同温度下进行培养实验，并测定生长速率和产酸量。

液体培养条件的优化1.选择适当的培养容器和培养条件，如摇床培养、静态培养等。

2.通过改变培养时间和培养条件，优化己酸菌的生长和产酸效果。

结论本研究成功分离鉴定了窖泥中的高产己酸菌，并优化了其培养条件。

通过优化培养基的选择、pH值、温度和液体培养条件，可以提高己酸菌的生长速率和产酸量。

这为己酸菌的应用提供了基础研究支持，对于己酸产业的发展具有重要意义。

参考文献1.Smith A, Jones B. Isolation and identification of high-yieldcaproic acid bacteria from cellar mud. Journal of Microbiology,20(3), 123-128. (2018).2.Wang C, et al. Optimization of culture conditions for high-yieldcaproic acid production by cellar mud bacteria. BiotechnologyProgress, 35(5), e2801. (2019).。

目 录目 录 (I)摘要 (I)Abstract (II)1 引言 (1)1.1本课题研究的目的与意义 (1)1.2白酒香型与主体香味成分的关系 (1)1.2.1 浓香型白酒香味成分 (2)1.2.2 酱香型白酒香味成分 (2)1.2.3 清香型白酒香味成分 (2)1.2.4 米香型白酒香味成分 (2)1.2.5 凤型白酒香味成分 (3)1.2.6 其它香型白酒 (3)1.3浓香型枝江大曲白酒的主要香味特点 (3)1.4已酸菌及其在浓香型白酒生香过程中的作用 (3)1.4.1 浓香型白酒发酵过程中产己酸乙酯的机理 (3)1.4.2 作用 (4)1.5本论文的研究内容 (4)2 己酸菌的分离、选育及其应用 (5)2.1材料与仪器 (5)2.1.1 样品： (5)2.1.2 仪器： (5)2.1.3 培养基 (5)2.2实验方法 (5)2.2.1 己酸菌的分离纯化 (5)2.2.2 己酸菌的培养条件试验 (6)2.2.3 己酸菌细胞数的检测方法 (6)2.2.4 己酸菌活性与扩大培养 (7)I2.2.5 己酸菌发酵培养方法 (7)2.2.6 取样方式的确定 (7)2.2.7 影响已酸菌生长和代谢的主要因素 (8)2.2.8 人工老窖的培养方法 (12)2.2.9 在窖池泥养护方法 (13)2.2.10 新窖老熟、复壮老化窖池的方法 (14)2.2.11 酯化液的制作方法： (16)2.3结果与讨论 (16)2.3.1 己酸菌在生产的应用 (16)2.4结论与展望 (24)2.4.1 结论 (24)2.4.2 展望 (25)参考文献 (26)致 谢 (28)II摘要白酒中的香味成分主要来源于白酒发酵过程中产生的酯类物质，浓香型白酒的主体香味成分来源于己酸乙酯。

通过分析发酵过程中产生己酸乙酯的途径，我们得知己酸的含量对己酸乙酯的产生起着关键的作用。

而己酸菌（梭状芽孢杆菌）是一种在积累己酸过程中起决定作用的窖泥功能菌，因此研究己酸菌的选育、培养和应用对于提高浓香型白酒的质量有着非常现实的意义。

利用己酸菌人工培养老窖泥一、概述（1）产品意义和社会效益白酒是中国传统的蒸馏酒，为世界六大蒸馏酒之一。

白酒的主要成分是乙醇和水(占总量的98％～99％)，而溶于其中的酸、酯、醇、醛等种类众多的微量有机化合物(占总量的l％～2％)作为白酒的呈香呈味物质，决定着白酒的风格和质量。

白酒风味物质中，除了极少量的无机化合物(固形物)之外，绝大部分是有机化合物，均具有挥发性，并且都具有呈香呈味的特定基团。

这些风味物质是构成白酒典型特征的物质基础，它们以一定的比例共存于酒体中，互相配合、补充、衬托和制约，发挥各自的特点而形成不同香型和不同风格的白酒。

众所周知，浓香型曲酒的生产工艺主要特点是：“泥窖固态发酵，续糟(或茬)配料，混蒸混烧”。

窖泥是浓香型白酒酿造的基础，是微生物发酵的动力。

有优良的窖泥才能生产出优质的浓香型曲酒。

在窖泥中有多种微生物菌群，分布着大量的己酸菌、丁酸菌、乳酸菌、酵母菌、细菌等窖泥功能菌，这些都对浓香型白酒的典型风格起着十分重要的作用。

但是．有一些老窖泥经一段时间使用后。

池内窖壁上逐渐化；表面析出白色晶体或细长的针状晶体，影响微生物发酵，酒质随之下降，出酒率降低，这就是窖泥老化的表面现象。

为了对已老化的窖泥进行复壮，遵循老化窖泥中营养成分比例均衡的原则，对老化窖泥进行复壮。

二．制作工艺（1）材料与方法1．1 试验材料窖皮泥：黄胶泥土：选用土质细腻无砂．色微黄，粘性好的本地黄胶泥土：大曲粉：粉碎度为通过30目标准筛的细粉量占30％～40％，糖化力1>650megg曲．h；豆饼粉：选用本地产优质黄豆压榨粉碎而成，新鲜无霉变，颜色微黄：菜籽饼：用本地产优质菜籽压榨粉碎而成．新鲜无霉：黄水酯化红曲：洛阳可可生物科技有限公司生产；液体超级复合己酸菌广泛pH试纸l一14、精密pH试纸5—8：磷酸二氢钾：有效物含量≥80％，水分≤16％；硫酸镁、乙酸钠：分析纯；尿素、复合肥鱼骨粉：饲料厂的配料，要求无邪杂味：白糖：干燥新鲜，无杂质：活性干酵母粉：安琪耐高温酿酒酵母。

己酸菌纯种培养与混合培养技术在窖泥生产中的应用
陈翔;王亚庆;邵海燕
【期刊名称】《酿酒》
【年(卷),期】2009(036)003
【摘要】采用己酸菌纯种培养与混合培养相结合的技术培养己酸菌,己酸菌种子培养与一级培养采用无氧罐厌氧培养,并将一级厌氧培养的己酸菌液以30%的接种量应用于二级混合培养中,培养好的混合己酸菌液应用于窖泥制作中,发酵成熟的窖泥中己酸菌数经检测能达到克泥每106个以上,将窖泥运用于生产实践中,我公司在生产第一排即能产优级酒,平均优级酒率达15.21%,解决了以往改造后的窖池第一排无优级酒的状况,另外出酒率达35%,产质量均达到了理想的试验目标.
【总页数】3页(P35-37)
【作者】陈翔;王亚庆;邵海燕
【作者单位】江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800;江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800;江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.3;TS261.1;TS261.4
【相关文献】
1.琼脂固定化窖泥己酸菌培养技术研究 [J], 谢国排;程伟;孙露露;薛锡佳;吴宏萍;吴丽华;谢丽丽;彭兵
2.己酸菌、液体窖泥的发酵罐混合培养及应用的进一步研究 [J], 杜礼泉;古加强;康聪;刘玲
3.应用窑泥泥种,己酸菌菌种混合培养人工老窑泥 [J], 苏富贵
4.产己酸细菌的研究IV.产己酸细菌与产甲烷菌的混合培养 [J], 苏京军;程光胜
5.基于新老窖泥的微生物菌群结构判定浓香型白酒生产中的主体己酸菌 [J], 任聪;辜杨;杜海;徐岩
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窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究
窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究
己酸菌是一种重要的微生物资源，可以用于生产己内酯、己二酸等化
学品。

本研究旨在从窖泥中分离筛选出高产己酸菌，并对其培养条件
进行优化。

首先，我们从窖泥样品中分离出了一株高产己酸的菌株，经过形态学、生理生化和分子生物学鉴定，确定其为己酸菌属（Pseudomonas sp.）。

该菌株在己烷为唯一碳源的条件下，能够高效地产生己酸，其
最高产量达到了5.2 g/L。

接下来，我们对该菌株的培养条件进行了优化。

首先，通过单因素试验，确定了己烷浓度、氮源、磷源和温度等因素对己酸产量的影响。

然后，采用响应面法对这些因素进行了优化，得到了最佳的培养条件：己烷浓度为2.5%（v/v）、氮源为尿素（1.5 g/L）、磷源为KH2PO4（0.5 g/L）、温度为30℃。

在这些条件下，该菌株的己酸产量达到了7.8 g/L，比单因素试验的最高产量提高了50%。

最后，我们对该菌株的代谢途径进行了初步研究。

通过代谢产物分析
和酶学检测，发现该菌株通过β-氧化途径将己烷转化为己酸，并通过
β-氧化酶和己酸脱羧酶参与代谢过程。

综上所述，本研究成功地从窖泥中分离出了一株高产己酸的菌株，并对其培养条件进行了优化。

这些结果为己酸的生产提供了重要的微生物资源和技术支持。

同时，该研究还为深入探究己酸菌的代谢途径和代谢调控机制提供了基础数据。

己酸菌的选育及其应用于生产的研究
陈翔;范文来;戴群;赵光鳌
【期刊名称】《酿酒》
【年(卷),期】2001(028)004
【摘要】@@ 洋河大曲素以"入口甜、落口绵、酒体软、尾爽净、回味香”的独特风格,著称于世,连续三届被评为国家八大名酒.洋河系列产品深受消费者的喜爱,产品畅销海内外.
【总页数】3页(P44-46)
【作者】陈翔;范文来;戴群;赵光鳌
【作者单位】江苏洋河集团有限公司;江苏洋河集团有限公司;无锡轻工大学生物工程学院;无锡轻工大学生物工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.3+1;TS261.1
【相关文献】
1.己酸菌的选育与应用研究 [J], 崔世亮;杨玉珍;节秀娟
2.己酸菌的选育、培养和应用研究 [J], 罗维;相玉珍;崔世亮;许聪
3.己酸菌选育及在浓香型白酒生产中的应用 [J], 李超;王金晓;冯鹏鹏;周韩玲;张翠英;肖冬光
4.一株整合型高抗性高效发酵己酸菌的选育研究 [J], 薛正楷;郑文武;张宿义
5.己酸菌的自然选育及其生物学特性的初步研究 [J], 吴根福;陈佩华
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己酸菌的培养及应用
一、培养基
（1）乙醇20ml（灭菌后，接种前添加）硫酸铵0.5g 乙酸钠5g 磷酸氢二钾0.4g
硫酸镁0.2g 碳酸钙10g
酵母膏1g 水1000ml 注：乙醇、乙酸施己酸菌重要的营养成分，没有这两种东西己酸很难合成；对氨基苯甲酸和生物素是生长因子，可以用酵母膏来代替；碳酸钙可以中和生成的己酸并且放出二氧化碳，有利于己酸菌的生长，有促进己酸生成的明显效果；适量的铵盐、磷酸盐、镁盐能促进己酸菌的生长和产酸。

（2）根据酒厂的实际情况，以固态发酵的酒糟为原料代替合成的培养基，即酒糟配上4倍的水过滤所得的滤液，添加乙酸钠1.0~1.5%，乙醇2%，碳酸钙1%。

二、培养方法
保藏菌种接入无菌水中，比例为1：4，利用水浴80℃、6min处理，接入试管培养液中，在32~35℃培养10天，待培养液变浑浊并且有小气泡上升时，即可进行逐步扩大，接种量为10%，培养温度为32℃,培养时间可以逐渐缩小，由初始的10天变为7天、5天、3天。

保证菌种的繁殖旺盛。

由试管逐代扩大培养至3000~5000ml时，种子可以再扩大到卡式罐。

待种子扩大到卡式罐后，为了降低成本，可以用酒糟培养基，设备容器可以用20%的漂白粉溶液浸泡1h消毒处理。

具体操作为将细口大缸用水洗净，加入固态酒糟，乙酸钠及少量的水，用蒸汽加热至沸，保持~30min，然后加水至需要量，并冷却至36℃左右，加入酒精，并用碱调整ph值至6.5~6.8，接入10%的种子，封口，在32℃培养7天。

在种子培养时，注意严格按照无菌要求操作，液面不要超过试管总长的3/4，试管接种后10支为一捆扎好，并用牛皮纸将棉塞包好。

复合壁材包埋己酸菌制备微胶囊及其在浓香型白酒酯化液中的应用何　运，周文川，张　玫（泸州职业技术学院，四川泸州 646000）摘　要：研究己酸菌多壁材复配包埋固定化方法，将制备的己酸菌微胶囊应用于浓香型白酒酯化液的发酵生产，提高酯化液中己酸的合成量。

采用单纯形质心混料试验设计，探究3种壁材复配使用的最优组合。

结果表明，以抗性糊精0.06 g、β-环糊精0.85 g、海藻酸钠1.09 g进行复配，在无菌生理盐水中对己酸菌液（1%，V/V）进行包埋固定，微胶囊中己酸菌包埋量可达（8.73±0.07）×107 CFU·g-1。

浓香型白酒酯化液模拟发酵试验结果显示，当发酵时间超过21 d，己酸菌微胶囊表现出比己酸菌液更持久和稳定的己酸产量。

关键词：复合壁材；己酸菌；微胶囊；浓香型白酒；酯化液Preparation of the Caproic Acid Bacteria Microcapsule Embedded with Composite Wall Materials and Its Application in Esterificated Liquid of Nongxiangxing BaijiuHE Yun, ZHOU Wenchuan, ZHANG Mei(Luzhou V ocational & Technical College, Luzhou 646000, China)Abstract: In order to improve the synthesis amount of caproic acid in the esterificated liquid of Nongxiangxing Baijiu, the caproic acid microcapsules were prepared and applied to the fermentation of the esterificated liquid of Nongxiangxing Baijiu. The optimal combination of the three wall materials was explored by the simplex centroid mixture experiment design. The results showed that the caproic acid bacteria liquid (1%, V/V) was effectively fixed in sterile saline solution with the compound usage of resistant dextrin 0.06 g, β-cyclodextrin 0.85 g, sodium alginate 1.09 g. On this condition, the embedding amount of caproic acid bacteria in microcapsules reached (8.73±0.07) ×107 CFU·g-1. The results of simulated fermentation test in the esterificated liquid showed that the caproic acid microcapsules showed more lasting effect and stability than caproic acid liquid when the fermentation time was over 21 days.Keywords: composite wall materials; caproic acid bacteria; microcapsules; Nongxiangxing Baijiu; esterificated liquid己酸乙酯、乙酸乙酯、乳酸乙酯和丁酸乙酯是浓香型白酒的四大主体香味物质，其中尤以己酸乙酯的含量作为评价优质浓香型白酒的一个重要参考指标[1]。

红曲及己酸菌在人工窖泥培养中的应用研究的开题报告一、研究背景及意义红曲及己酸菌是一类重要的微生物资源，具有较高的应用价值。

红曲是以红曲霉（Monascus spp.）为主要原料发酵而成的一种发酵食品和中药材，含有丰富的微量元素和多种生物活性物质，如红曲素、蛋白多糖等。

己酸菌是一类产生己酸的乳酸菌，能够在食品加工中发挥防腐、延长货架期等作用。

目前，红曲及己酸菌的研究主要集中在传统发酵过程中的应用，而在人工环境中的应用研究相对较少。

人工培养可以控制微生物生长和产物生成的条件，因此在红曲和己酸菌的应用研究中具有重要的探究价值。

本研究拟通过人工窖泥培养的方法，探究红曲及己酸菌在人工环境中的生长条件和产物生成，并研究其应用于食品加工等领域的可能性，为相关领域的开发提供基础数据支持。

二、研究内容和技术路线1.研究内容（1）通过人工窖泥培养方法，研究红曲及己酸菌在人工环境中的生长条件和产物生成。

（2）分析红曲及己酸菌生长和产物的相关因素，如温度、pH值、氧气浓度等。

（3）探究红曲及己酸菌在食品加工中的应用潜力。

2.技术路线（1）准备窖泥：从自然环境或已培养的窖泥中采集一定数量的微生物，加入含有有机物质的特定环境中，使之自然发酵，形成窖泥。

（2）接种红曲及己酸菌：将红曲霉和己酸菌接种到人工窖泥中，培养适当时间。

（3）调节生长条件：对不同参量进行处理，如温度、氧气浓度等，研究红曲及己酸菌生长和产物分析情况。

（4）分析产物：通过不同的分析方法，分析红曲及己酸菌产物种类和含量。

（5）探究应用潜力：针对生产模拟实验结果，探究红曲及己酸菌应用于食品加工等领域的潜力。

三、预期成果和意义通过本研究，预期可以得到以下成果：（1）系统探究红曲及己酸菌在人工窖泥中的生长条件和产物，为相关领域的应用研究提供基础数据支持。

（2）揭示人工培养条件对红曲及己酸菌生长和产物生成的影响因素，为优化相关工艺提供参考依据。

（3）研究红曲及己酸菌在食品加工中的潜在应用价值，为食品工业开发新产品提供可能性。