第四章、细胞生物学的研究技术
（简单了解，考试题目较简单）
一显微镜
1普通显微镜（light microscope）: 主要用于染色标本的观察
2相差显微镜（phase contrast microscope）: 用于观察培养的活细胞(无色的细胞)倒置相差显微镜适用于观察体外培养的活细胞的结构和活动
3微分干涉差显微镜(DIC显微镜)：适用于活细胞之类的无色透明标本的观察，广泛应用于各
种细胞工程中的显微操作
4暗视野显微镜：适用于无色透明标本的观察（活细胞），但不可以观察到细胞的内部结构5激光扫描共聚焦显微镜：荧光检测、细胞结构的三维重建；、微操作、定点破坏培养物中的
某些细胞，实现对某些特定细胞的保留
6荧光显微镜：检测细胞表面或内部特定的抗原
二．亚显微结构的观察
1电子显微镜（electron microscope）：透射电镜TEM用于观察和研究细胞内部细微结构；扫描电镜SEM用于观察标本表面精细的三维形态结构；高压电镜2扫描探针显微镜：扫描隧道显微镜;原子力显微镜
三.细胞的分离与培养
（1）细胞的分离：利用物理性质不同（沉降和离心）；利用不同类型细胞与玻璃或塑料的黏附能力不同；利用抗体特异性结合的特性；采用带有荧光染料的特异性抗体来标记悬液中的某些特定细胞，然后采用流式细胞仪将被标记的细胞分离出来（悬液：用蛋白质水解酶处理组织块，并加入一定量的乙二胺四乙酸EDTA以结合溶液中的Ca2+，再通过轻微振荡使组织解散）
（2）细胞的培养（cell culture）:从组织分离出来特定的细胞在一定条件进行培养，使之能够继续生存生长以至增殖的一种方法，分为原代培养和传代培养
细胞在体外生长的条件：培养基；支持物；其他（CO2浓度、适宜的温度、PH）
A原代培养：由起始实验材料所进行的细胞培养
B对已有的细胞（原代培养所得的培养物或已有的培养物）进行继续培养
C细胞系：通过原代培养所得的细胞培养物（可以含有原代培养所用的起始实验材料的所含细胞）
D细胞株（cell strain）：由单一类型的细胞所组成的细胞系
四．细胞融合（cell fusion）:是指两个或两个以上的细胞相互接触并且合并而形成一个细胞（基因型相同的细胞形成融合称为同核融合，基因型不同的细胞形成的融合称为并核融合）;细胞融合的方法：生物诱导法，化学诱导法，物理诱导法
五．细胞连接（cell junction）:
A封闭连接occluding junction（又称紧密连接tight junction）
B锚定连接anchoring junction:与肌动蛋白相连的锚定连接（隔状连接、黏合带、黏合斑）；中
间丝相连的锚定连接（桥粒、半桥粒）
C通讯连接：间隙连接、化学突触、胞间连丝
★第五章、细胞膜及其表面
（重点内容）、
第一节、细胞膜的分子结构和特性
（一）膜的化学组成
（1）膜脂
1、磷脂（了解分类）
A、磷脂酰胆碱（含量最多），也称为卵磷脂
B、磷脂酰乙醇胺（含量其次）
C、磷脂酰丝氨酸
D、磷脂酰肌酶
E、鞘磷脂
2、胆固醇（知道胆固醇的作用：a、提高脂双层的力学稳定性
b、调节脂双层的流动性
c、降低水溶性物质的通透性
3、糖脂（含有一个或者几个糖基的脂类，存在于膜的非细胞质表面，糖基暴露于细胞表面，
并且存在于所有细胞膜中）
【注意】（膜脂的特点：一头亲水，一头疏水的兼性分子或者称为双亲酶分子，其中亲水的一头为极性头，疏水的一头为非极性头）
（2）、膜蛋白（membrane proteins）
跨膜蛋白（transmembrane proteins）
膜周边蛋白（peripheral protein）分布在膜的内表面，为水溶性的蛋白质
脂瞄定蛋白（lipid-anchoral protein）位于膜的两侧
（作用：有机械支持的作用，也可以作为载体蛋白、受体，抗原、酶在运输物质、信号传导、免疫反应、细胞连接）
（3）膜糖（只有真核细胞才有，主要分布在细胞膜的外表面）
细胞被（糖萼）：在大多数真核细胞的表面，富含糖类的周边区，主要包括细胞膜连接的糖蛋白与糖脂的寡糖侧链和膜蛋白聚糖上的多聚糖。（作用：保护细胞表面，
与外界联系，信息交流，细胞识别）
（二）、膜的分子结构（蛋白质-脂质-蛋白质）
A、片层结构模型
B、单位膜模型
※C、液态嵌镶模型
（1）优点：强调膜的动态性和蛋白质分子的嵌镶关系
（2）缺点：不能说明具有流动性的质膜怎么样保持摸的相对完整性和稳定性
（3）内容（重点）：
A、流动的脂质双分子层构成了膜的骨架
B、膜蛋白嵌镶或者附着在脂质双分子层中
C、糖分子分布于膜的外表面
※（三）、膜的理化特性
1、不对称性：膜的内外两层在结构和功能上有很大的差异
A、膜蛋白的不对称分布
B、膜脂的不对称分布
2、流动性
A、膜脂的流动性 B.膜蛋白的流动性
膜脂分子的旋转运动膜蛋白分子的侧向扩散运动
膜脂分子的翻转运动
膜脂分子的弯曲运动膜蛋白分子的旋转运动
膜脂分子的伸缩震荡运动
膜脂分子的旋转异构
膜脂分子侧向扩散
3、影响膜脂流动性的因素
脂肪酸链的长度和不饱和度；胆固醇与磷脂的比值；卵磷脂与鞘林子的比值；膜蛋白的影响；其他因素（温度、PH、离子强度、金属离子）
二、细胞膜的跨膜运输（1）、小分子和离子的穿膜运输与细胞膜有关的物质运输活动主要有两种方式（2）、大分子和颗粒的膜泡运输
载体蛋白:改变构想(主动，被动运输)
(1)膜转运蛋白通道蛋白:形成通道(被动运输)
※(2)运输方式
A.被动运输(passive transport):顺浓度梯度,转运蛋白
○1简单扩散(simple diffuction):脂溶性物质(如苯,醇,类固醇激素及O
2,N
2
等
○2离子通道扩散电压门控通道(受膜电压控制)
配体门控通道(受化学物质控制) (Na+,K+,Ca2+等极性很强的水化离子)
机械门控通道
○3易化扩散(facilitated diffuction):凭借载体蛋白的帮助穿过细胞膜,但不耗细胞的代谢能,顺浓度梯度转运(非脂溶性的小分子,极性分子,离子或亲水性的物质[如糖,氨基酸,核苷酸,金属离子等)
B.主动运输
○1离子泵
(1)钠泵:是一种蛋白质(Na+-K+ATP酶),
在细胞膜内侧,有Na+,Mg2+存在下,ATP酶被Na+激活,将ATP分解为ADP和高能磷酸根.酶磷酸化,改变构想的ATP酶,在膜外侧有K+存在时,与K+亲和力大,与之结合,发生去磷酸作用,同时酶又
恢复到原来的构象,将移至膜内释放
意义:a.维持细胞的渗透压,保持细胞的体积 b.为葡萄糖协同运输泵提供了驱动力 c.维持细胞的静息电位
(2)钙泵(Ca2+ATP酶)
C.伴随运输(协同运输):由钠泵(或H+泵)与载体蛋白协同作用,靠间接消耗ATP所完成
